太阳城集团

  • / 6
  • 下载费用:30 金币  

一种芒属植物五节芒体胚组培快速繁殖方法.pdf

关 键 词:
一种 植物 五节 芒体胚组培 快速 繁殖 方法
  专利查询网所有资源均是用户自行上传分享,仅供网友学习交流,未经上传用户书面授权,请勿作他用。
摘要
申请专利号:

CN201010589905.9

申请日:

20101215

公开号:

太阳城集团CN102090338B

公开日:

20121121

当前法律状态:

有效性:

有效

法律详情:
IPC分类号: A01H4/00 主分类号: A01H4/00
申请人: 湖北光芒能源植物有限公司
发明人: 刁英,胡中立,赵玲玲,胡晖,胡小虎,周发松
地址: 430074 湖北省武汉市武汉东湖开发区珞瑜路加州阳光3栋2单元0203号
优先权: CN201010589905A
专利代理机构: 武汉宇晨专利事务所 代理人: 王敏锋
PDF完整版下载: PDF下载
法律状态
申请(专利)号:

太阳城集团CN201010589905.9

授权太阳城集团号:

法律状态太阳城集团日:

法律状态类型:

摘要

太阳城集团本发明公开了一种芒属植物五节芒体胚组培快速繁殖方法,其步骤是:A、幼穗选取:选取处于颍花原基形成期的幼穗;B、用初代培养基进行初代诱导:剪成小段,用酒精消毒,用氯化汞浸泡,冲洗,接种在初代诱导培养基上;C、用生苗培养基对生苗继代培养:所获得的胚性愈伤在继代培养基上继代生苗,继代,增殖系数,每天光照;D、用生根诱导培养基进行生根诱导:所生幼苗在生根诱导培养基上诱导生根,培养,每天光照;E、驯化移栽:在温室内,组培苗移栽到由蛭石组成的驯化苗圃中驯化,每天定期给幼苗喷施驯化培养液和清水,移栽到苗圃中,获得五节芒幼苗。方法易行,操作简便,繁殖系数大,到的愈伤繁殖率高,约为100%。

权利要求书

1.一种芒属植物五节芒体胚组培快速繁殖方法,其步骤是:A、幼穗选取:选取处于颍花原基形成期的幼穗;B、用初代诱导培养基进行初代诱导:将其剪成2-3厘米小段,先用75%体积比的酒精消毒30-35s,然后用0.1%质量体积比的氯化汞浸泡3-5分钟,再用无菌水冲洗3-5次,将其接种在幼穗的初代诱导培养基上,经过30-35天的初代诱导,获得胚性愈伤,培养条件为24-28℃,每天光照14-16小时,光强为2000LX,初代诱导培养基为:A:MS培养基附加激动素KT 1-5mg/L,萘乙酸NAA 0.1-0.5mg/L,蔗糖30g/L,PhytagelR 3g/L;或B:MS培养基附加激动素KT 1-7mg/L,萘乙酸NAA 0.1-0.5mg/L,6水氯化镁MgCl·6HO 800mg/L,蔗糖30g/L,PhytagelR 3g/L;采用A、B中的任何一种初代诱导培养基都能诱导出胚性愈伤组织,生长9-11天在幼穗基部开始岀愈,为白色或淡黄色松散愈伤;C、用生苗培养基对生苗继代培养:所获得的胚性愈伤在生苗培养基上继代生苗,25-30天继代一次,增殖系数为5-6,培养条件为24-28℃,每天光照14-16小时,光强为2000LX,生苗培养基配方为:A:MS培养基附加激动素KT 1-2mg/L,萘乙酸NAA 0.1-0.3mg/L,蔗糖30g/L,活性炭3-8g/L,PhytagelR 3g/L;或B:MS培养基附加激动素KT 1-2mg/L,萘乙酸NAA 0.1-0.3mg/L,6水氯化镁MgCl·6HO 800mg/L,蔗糖30g/L,活性炭3-8g/L,PhytagelR 3g/L;将胚性愈伤转到A、B中任何一种生苗培养基之后2-4天,愈伤开始转绿,6-8天开始分化出芽,9-11天形成小幼苗;D、用生根诱导培养基进行生根诱导:所生幼苗在生根诱导培养基上诱导生根,培养25-30天,培养条件为24-28℃,每天光照14-16小时,光强为2000LX,生根诱导培养基为:A:1/2MS培养基附加激动素KT2-3mg/L,萘乙酸NAA 0.1-0.5mg/L,蔗糖30g/L,PhytagelR3g/L;或B:MS培养基附加激动素KT 2-3mg/L,萘乙酸NAA 0.1-0.3mg/L,蔗糖30g/L,活性炭3-8g/L,PhytagelR3g/L;长到10-15厘米的幼苗转到A、B中任意一种生根诱导培养基上,4-6天幼苗分化出白色或黄色的根;E、驯化移栽:在温室内,将生长健壮的、株高在10-15厘米的组培苗移栽到由蛭石组成的驯化苗圃中驯化,每天定期给幼苗喷施驯化培养液和清水,15-20d后,移栽到苗圃中,温室条件为15℃-25℃,照明使用卤光,每天光照14-16小时,光照强度为2000LX,获得五节芒幼苗。

说明书

技术领域

    本发明涉及五节芒(Miscanthus floridulu)基于胚性愈伤的组培快繁技术领域,更具体涉及一种芒属植物五节芒体胚组培快速繁殖方法,它适应于以五节芒幼穗为外植体通过愈伤诱导途径获得幼苗,以及增值、生根、驯化与移栽。

背景技术

    国内太阳城集团芒属植物的组培快繁技术,在20世纪90年代就有相关报道,他们分别采用了幼叶、下胚轴、幼根,幼穗作为外植体进行芒属植物的快繁技术,但其岀愈率和分化率都各不相同,以幼穗的繁殖效率最高,但并未获得胚性愈伤。另外,在2005年也有太阳城集团芒属植物组培快繁技术的报道,利用了茎秆扦插技术得到了幼苗,但是这也是利用的器官发生途径,并未得到胚性愈伤。而我们的研究是利用幼穗为外植体得到了胚性愈伤,再继续做分化、移栽等实验。因此可以直接做转基因等相关后续试验,不仅达到了快速高效的目的,同时为五节芒的转基因操作提供了可靠的组培体系。

发明内容

太阳城集团本发明的目的是在于提供了一种芒属植物五节芒体胚组培快速繁殖方法,方法易行,操作简便,繁殖系数大,获得的愈伤繁殖率高,约为100%。

太阳城集团为了实现上述的目的,本发明采用以下技术措施:

中国是芒属植物资源分布的中心,并且五节芒的分布范围较广。五节芒能在荒山、荒坡、丘陵、江河湖滩等无敌贫瘠的地方生长,它不仅适应性非常强,而且可以解决能粮之争的矛盾。五节芒的生长周期短,一般其生长周期在180天左右,光合作用和光形态建成相对较短,收获后不影响生态系统的结构,生物量大,可燃性强,作为能源消耗时可以实现CO2的零排放。鉴于目前全世界范围内的能源危机和国内较少的相关科学研究,科研工作者应该充分利用中国这类优质的草本生物质资源,对这类植物进入深一步的研究。本发明的内容包括以五节芒幼穗为外植体诱导胚性愈伤的初代培养基,生苗继代培养基,以及幼苗的生根诱导培养基。

太阳城集团本发明建立基于胚性愈伤的五节芒组培快繁体系,增值率高(5-6倍),增值稳定,根系健壮,移栽成活率高,是适于商业扩繁五节芒的成熟技术。

太阳城集团一种芒属植物五节芒体胚组培快速繁殖方法,其步骤是:

1、  幼穗选取:选取处于颍花原基形成期的幼穗,幼穗内种子尚未形成,中轴也比较软,还没形成基本的分支。 

太阳城集团2、  用初代培养基进行初代诱导:将其剪成2-3厘米小段,先用75%(体积比,以下相同)酒精消毒(30-35s),然后用0.1%(质量体积比,以下相同)氯化汞浸泡(3-5分钟),再用无菌水冲洗(3-5次),将其接种在幼穗的初代诱导培养基上。经过(30-35天)的初代诱导,获得胚性愈伤。培养条件为24-28℃,每天光照14-16小时(采用人工光源照射),光强为2000LX。初代培养基为以下配方选其一:A:MS培养基附加激动素KT1-5mg/L,萘乙酸NAA0.1-0.5mg/L,蔗糖30g/L, PhytagelR 3g/L或B:MS培养基附加激动素KT1-7mg/L,萘乙酸NAA0.1-0.5mg/L,6水氯化镁MgCl2·6H2O800mg/L,蔗糖30g/L, PhytagelR 3g/L。采用这两种培养基中的任何一种培养基都能诱导出状态良好的胚性愈伤组织,生长9-11天在幼穗基部开始岀愈,愈伤状态良好,为白色或淡黄色松散愈伤。 

太阳城集团3、  用生苗培养基对生苗继代培养:所获得的胚性愈伤在继代培养基上继代生苗,(25-30天)继代一次,增殖系数为5-6。培养条件为24-28℃,每天光照14-16小时(采用人工光源照射),光强为2000LX。生苗培养基配方为以下配方选其一:A:MS培养基附加激动素KT1-2mg/L,萘乙酸NAA0.1-0.3mg/L,蔗糖30g/L,活性炭3-8g/L 。PhytagelR 3g/L或B:MS培养基附加激动素KT1-2mg/L,萘乙酸NAA0.1-0.3mg/L, 6水氯化镁MgCl2·6H2O800mg/L,蔗糖30g/L,活性炭3-8g/L ,PhytagelR 3g/L。将胚性愈伤转到其中任何一种生苗培养基之后2-4天,愈伤开始转绿,6-8天开始分化出芽,9-11天左右即可形成小幼苗。

太阳城集团4、  用生根诱导培养基进行生根诱导:所生幼苗在生根诱导培养基上诱导生根,培养(25-30天),生根率达70%以上。培养条件为24-28℃,每天光照14-16小时(采用人工光源照射),光强为2000LX。生根诱导培养基为以下配方选其一:A:1/2 MS培养基附加激动素KT2-3mg/L,萘乙酸NAA0.1-0.5mg/L,蔗糖30g/L,PhytagelR 3g/L或B:MS培养基附加激动素KT2-3mg/L,萘乙酸NAA0.1-0.3mg/L,蔗糖30g/L,活性炭3-8g/L,PhytagelR3g/L。将长到10-15厘米的幼苗转到任意一种生根培养基上,大概4-6天幼苗就会分化出大量白色或黄色的根,且根系发达。

5、  驯化移栽:在温室内,将生长健壮的、株高在10-15厘米的组培苗移栽到由蛭石组成的驯化苗圃中驯化。每天早上7点定时给幼苗喷施驯化培养液和清水,大约15-20d后,视幼苗长势,即可移栽到苗圃中。温室条件为15℃-25℃,照明使用卤光,光照(14-16小时),光照强度为2000LX。 移栽到苗圃后,幼苗长势良好,生长健壮,根系发达,存活率较高,获得了大量健壮的五节芒幼苗。

本方法胚性愈伤出愈率高,愈伤再诱导生苗率高,组培苗驯化移栽后,成活率高,适用于五节芒种苗的产业化生产以及为后续转基因奠定基础。

太阳城集团本发明与现有技术相比,具有以下优点和效果:

a)         本发明消毒方法简单,且效率高,初代污染率几乎为零。

太阳城集团b)        本发明得到的愈伤繁殖率高,约为100%。

太阳城集团c)         本发明一次得到了组培快繁和转基因组培体系,为后续转基因工作打下基础。

附图说明

图1为一种五节芒体胚愈伤示意图。

太阳城集团此图为五节芒以幼穗为外植体又到处的愈伤,从图中可以看到,愈伤组织呈淡黄色或白色,结构松散。

太阳城集团图2为一种五节芒幼苗示意图。

此图为愈伤转入分化培养基上幼苗的生长图,图中可见幼苗长势较好,生命力强,并有根长出。

太阳城集团图3为一种五节芒驯化移栽示意图。

此图为幼苗移栽到加有营养液的蛭石中。

具体实施方式

实施例1:

一种芒属植物五节芒体胚组培快速繁殖方法,其步骤是:

1、  幼穗选取:选取处于颍花原基形成期的幼穗,幼穗内种子尚未形成,中轴也比较软,还没形成基本的分支。 

2、  用初代培养基进行初代诱导:将其剪成2-3厘米小段,先用75%酒精消毒30s,然后用0.1%氯化汞浸泡5分钟,再用无菌水冲洗三次,将其接种在幼穗的初代诱导培养基上。经过35天的初代诱导,获得胚性愈伤。培养条件为25℃,每天光照16个小时,光强为2000LX。诱导初代培养基为:A:MS培养基附加激动素KT1-5mg/L,萘乙酸NAA0.1-0.5mg/L,蔗糖30g/L,,PhytagelR 3g/L。生长10天左右在幼穗基部开始岀愈,愈伤状态良好,为白色或淡黄色松散愈伤。

3、  用生苗培养基对生苗继代培养:所获得的胚性愈伤在继代培养基上继代生苗,30天继代一次,增殖系数为5-6。培养条件为 25℃,每天光照16个小时,光强为2000LX。生苗培养基配方为:A:MS培养基附加激动素KT1-2mg/L,萘乙酸NAA0.1-0.3mg/L,蔗糖30g/L,活性炭3-8g/L ,PhytagelR 3g/L。将胚性愈伤转到其中任何一种生苗培养基之后3天左右,愈伤开始转绿,7天左右开始分化出芽,10天左右即可形成小幼苗。

太阳城集团4、  用生根诱导培养基进行生根诱导:所生幼苗在在生根诱导培养基上诱导生根,培养30天,生根率达70%以上。培养条件为25℃,每天光照16个小时,光强为2000LX。生根诱导培养基为:A:1/2 MS培养基附加激动素KT2-3mg/L,萘乙酸NAA0.1-0.5mg/L,蔗糖30g/L,PhytagelR 3g/L。将长到10-15厘米的幼苗转到生根培养基上,大概5天左右幼苗就会分化出大量白色或黄色的根,且根系发达。

太阳城集团驯化移栽:在温室内,将生长健壮的、株高在5-6厘米的组培苗移栽到由蛭石组成的驯化苗圃中驯化。每天定期给幼苗喷施驯化培养液和清水,大约15d后,视幼苗长势,即可移栽到苗圃中。温室条件20℃,照明使用卤光,光照16小时,光照强度为2000LX。移栽到苗圃后,幼苗长势良好,生长健壮,根系发达,存活率较高,获得了大量健壮的五节芒幼苗。

太阳城集团本文
本文标题:一种芒属植物五节芒体胚组培快速繁殖方法.pdf
链接地址:http://zh228.com/p-7011710.html
太阳城集团我们 - 网站声明 - 网站地图 - 资源地图 - 友情链接 - - 联系我们

copyright@ 2017-2018 zhuanlichaxun.net网站版权所有
经营许可证编号:粤ICP备17046363号-1 
 


收起
展开
葡京赌场|welcome document.write ('');