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一种杉木正冠组培苗继代芽培育方法.pdf

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一种 杉木 正冠组培苗继代芽 培育 方法
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摘要
申请专利号:

CN201410439694.9

申请日:

20140901

公开号:

CN104145824B

公开日:

20160224

当前法律状态:

有效性:

有效

法律详情:
IPC分类号: A01H4/00 主分类号: A01H4/00
申请人: 广西壮族自治区林业科学研究院
发明人: 吴幼媚,蔡玲,戴春香,黄金使,韦颖文,王以红
地址: 530002 广西壮族自治区南宁市西乡塘区邕武路23号
优先权: CN201410439694A
专利代理机构: 广西南宁汇博专利代理有限公司 代理人: 邹超贤
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法律状态
申请(专利)号:

CN201410439694.9

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法律状态太阳城集团日:

法律状态类型:

摘要

本发明公开的一种杉木正冠组培苗继代芽培育方法,是以杉木优良无性系当年生嫩枝为外植体,通过灭菌消毒组培获取繁殖芽,将繁殖芽接种于包括1/2MS,6-BA1.0mg/L和IBA0.5mg/L的增殖培养基内诱导丛生芽发生,选择繁殖芽基部萌发、生长健壮的继代芽扦插于常用的生根培养基上,炼苗,移栽,杉木苗高15~30cm时出圃造林。使用本方法,杉木继代芽增殖系数高,达4~6,繁殖速度快、育苗量大、可以在短期内批量生产遗传稳定性高、组培苗正冠率100%,生根率高达96%以上的组培继代芽,能适应我国杉木储备基地建设发展对良种种苗的需要,具有较好的经济效益、社会效益和生态效益。

权利要求书

1.一种杉木正冠组培苗继代芽培育方法,其特征在于:包括获取外植体、继代芽增殖培养、生根苗培养、生根苗移栽和出圃工序,通过获取消毒灭菌后的外植体,依次接种于初始培养基和增殖培养基后获得正冠组培苗,对正冠组培苗进行不定根诱导生根后移栽,出圃,具体操作步骤如下:(1)获取外植体:选择优良的无性系嫁接杉木幼树当年生的嫩枝为外植体;将消毒灭菌后的外植体接种到初始培养基内,获取繁殖芽;所述的初始培养基是以2/3MS为基本培养基,添加6-BA1.0mg/L、IBA0.5mg/L和ZT0.2mg/L;其中2/3MS基本培养基中的Ca(NO)含量为150mg/L,NaSO含量为50mg/L;(2)继代芽增殖培养:将长1.5~3cm的繁殖芽接种到增殖培养基内,诱导继代芽;待繁殖芽基部萌发出2~3个长0.3~0.5cm的继代芽时进行转接;每次转接,将繁殖芽逐渐剪短至0.3~0.5cm;取剪短后的繁殖芽基部萌发扦插生根用的继代芽,获得正冠组培苗;所述的增殖培养基是以1/2MS为基本培养基,添加6-BA0.8mg/L、IBA0.4mg/L和ZT0.1mg/L;其中1/2MS基本培养基中的Ca(NO)含量为150mg/L;(3)生根苗培养:在正冠组培苗中选择繁殖芽基部萌发、生长健壮的继代芽扦插于常用的生根培养基上,在温度25~30℃,2000~7000Lx光照条件下进行不定根诱导,培养10~15d后开始生根,25~30d根长0.4~0.6cm时,获得生根苗,将生根苗转到炼苗室炼苗;(4)生根苗移栽:炼苗20~30d,待根系由白色转变成灰白色时,将生根苗进行移栽,移栽时先将生根苗置于清水中漂洗,洗净根部的培养基,晾干根系的表面水分,将生根苗栽入装有红心土与椰糠的混合基质容器中培养;(5)出圃:在容器中的生根苗进行培养8~10月,杉木苗高15~30cm时出圃造林。2.根据权利要求1所述的一种杉木正冠组培苗继代芽培育方法,其特征在于:步骤(1)对外植体消毒灭菌的方法为:剪除外植体上的叶片,在洗洁精溶液中用毛刷轻轻刷洗,放入质量浓度为0.1%的新吉尔灭中浸泡40~50min,再用纯净水冲洗3~5遍,将外植体剪切成1~2cm的长茎段;在超净工作台用体积浓度75%的乙醇对剪切后的外植体消毒10s,然后将外植体置于10~30mg/L的抗坏血酸中浸泡5~12min;最后用无菌水冲洗3~4遍。3.根据权利要求2所述的一种杉木正冠组培苗继代芽培育方法,其特征在于:步骤(1)中对外植体进行消毒灭菌,当外植体属于幼嫩茎尖处时,置于10mg/L的抗坏血酸中浸泡5min;当外植体属于半木质化茎段时,置于30mg/L的抗坏血酸中浸泡8min;当外植体属于木质化茎段时,置于30mg/L的抗坏血酸中浸泡12min。4.根据权利要求1所述的一种杉木正冠组培苗继代芽培育方法,所述的增殖培养基用500ml的三角瓶分装,每瓶70ml,用棉球封口,再用牛皮纸包扎棉球和瓶口,在120℃和1.1kg.cm条件下,用高压蒸汽灭菌锅灭菌15min。5.根据权利要求1所述的一种杉木正冠组培苗继代芽培育方法,其特征在于:步骤(2)中所述的继代芽增殖培养控制光照2000~7000Lx,温度25~30℃。6.根据权利要求1所述的一种杉木正冠组培苗继代芽培育方法,其特征在于:步骤(4)中所述的混合基质是按红心土与椰糠的体积比为3:1的比例混合。

说明书

技术领域

本发明属于植物无性快繁技术领域,尤其是涉及一种杉木正冠组培苗继代芽培育方法。

背景技术

杉木(CunninghamiaLanceolata)属杉科(Taxodiaceae),杉木属(Cunninghamia)。是我国特有的速生商品材树种,生长快,材质好。木材纹理通直,结构均匀,不翘不裂。材质轻韧,强度适中,质量系数高。具香味,材中含有“杉脑”,能抗虫耐腐,加工容易。广泛用于建筑、家具、器具、造船等各方面。

我国既是一个木材生产大国,又是一个木材消费大国。天然林保护工程实施以后,木材供需矛盾进一步加剧,木材供需缺口逐年增加。预计到2015年,我国生产建设用木材需求量约为4.8亿m3,缺口将达1.9亿m3。如果按照近10年我国木材消费平均年增长率3.71%计算,到2020年我国木材消费总量将达到6.78亿m3,供需矛盾有增无减。

无性系林业生产力高,在国内外许多研究和造林实践广泛证实。1990年开始,广西林科院和区林业技术推广总站等单位,分别在融安县西山林场等十多单位推广杉木优良无性系造林,以杉木良种(融水白云康杉)实生苗作对照。1997年测定分析,在初选参试的927个无性系中有230个无性系表现较为优良,其木材总平均比对照增益45.1%;最优的无性系89个,材积总平均比对照增益53.5%;较优的无性系141个,材积总平均比对照增益39.9%。而杉木优良无性系比杉木家系的增益还高12.5%~37.5%。筛选出的优良无性系增产效果显著,应用前景广阔。南京林业大学、福建省林业科学研究院和广西林科院已成功地将杉木优良无性系以组培工厂化育苗方式扩繁,推进了杉木良种的应用进程,因此,杉木良种繁育,特别是组培快繁前景看好。

太阳城集团中国专利201110195928.6的一种杉木组织培养方法。本发明所述培养方法采用开放式组织培养,采用的抑制剂菌杀果、代森锰锌和次氯酸钠中的一种或几种。该方法,在不影响组培效果的同时,能够将污染率降低到可接受的范围,在抑菌剂的作用下,使杉木组织培养脱离严格无菌的操作环境,在自然、开放的有菌环境中进行植物的组织培养,从根本上简化组培环节,降低组培成本。

太阳城集团中国专利200810070456.X一种杉木组织培养生根方法。本发明提供了一种杉木组织培养生根方法,切去杉木增殖继代小苗,接种于杉木生根培养基进行组织培养生根,杉木生根培养基由改良MS培养基、ABT1#0.4~0.8mg/L、IBA0.1~0.5mg/L和根太阳稀释液2~6ml/L组成。采用上述杉木生根培养基后,杉木的生根太阳城集团缩短至16~22天,经22天培养后,杉木的生根率达到96%,苗木生长速度快,使得育苗成本降低,实现杉木产业化生产。

太阳城集团杉木具有一定的遗传保守性,主干上的不定芽有明显的形态极性(这就是顶端优势),长出的枝条能形成直立的主干。一旦断顶截干后,顶芽与侧芽之间失去了平衡,相应地受活跃的顶端分生组织抑制的侧芽就大量的萌发。自然状态下,断稍后萌芽位置效应效果见表1。

表1杉木断稍后萌芽情况表

太阳城集团备注:摘自洪昌端,1994年“杉木带皮芽接是提高接穗利用率和接株正冠率的好方法”

太阳城集团表1显示,杉木位置效应显著,倾斜型萌芽条最低也占58.3%,高者占92.7%。但杉木的年龄和位置效应并不是一成不变,通过人为因素采取适当的措施,可以纠正杉木偏冠问题。

发明内容

为了克服现有技术的不足,提供一种能够解决杉木组织苗偏冠的问题,开发杉木优良无性系高效正冠组培快繁技术的杉木正冠组培苗继代芽的培育方法。

太阳城集团为了实现上述目的,本发明的技术方案如下:

一种杉木正冠组培苗继代芽培育方法,包括获取外植体、正冠组培苗继代芽培养、生根苗培养、生根苗移栽和出圃工序,通过获取消毒灭菌后的外植体,依次接种于初始培养基和增殖培养基后获得正冠组培苗,对正冠组培苗进行不定根诱导生根后移栽,出圃,具体操作步骤如下:

(1)获取外植体:选择优良的无性系嫁接杉木幼树当年生的嫩枝为外植体;将消毒灭菌后的外植体接种到初始培养基内,获取繁殖芽;

太阳城集团(2)继代芽增殖培养:将长1.5~3cm的繁殖芽接种到增殖培养基内,诱导继代芽;待繁殖芽基部萌发出2~3个长0.3~0.5cm的继代芽时进行转接;每次转接,将繁殖芽逐渐剪短至0.3~0.5cm;取剪短后的繁殖芽基部萌发扦插生根用的继代芽,获得正冠组培苗;

太阳城集团(3)生根苗培养:在正冠组培苗中选择繁殖芽基部萌发、生长健壮的继代芽扦插于常用的生根培养基上,在温度25~30℃,2000~7000Lx光照条件下进行不定根诱导,培养10~15d后开始生根,25~30d根长0.4~0.6cm时,获得生根苗,将生根苗转到炼苗室炼苗;

(4)生根苗移栽:炼苗20~30d,待根系由白色转变成灰白色时,将生根苗进行移栽,移栽时先将生根苗置于清水中漂洗,洗净根部的培养基,晾干根系的表面水分,将生根苗栽入装有红心土与椰糠的混合基质容器中培养;

太阳城集团(5)出圃:在容器中的生根苗进行培养8~10月,杉木苗高15~30cm时出圃造林。

以上步骤(1)所述的外植体消毒灭菌的方法为:剪除外植体上的叶片,在洗洁精溶液中用毛刷轻轻刷洗,放入质量浓度为0.1%的新吉尔灭中浸泡40~50min,再用纯净水冲洗3~5遍,将外植体剪切成1~2cm的长茎段;在超净工作台用体积浓度75%的乙醇对剪切后的外植体消毒10s,然后将外植体置于10~30mg/L的抗坏血酸中浸泡5~12min;最后用无菌水冲洗3~4遍。

太阳城集团以上步骤(1)中对外植体进行消毒灭菌,当外植体属于幼嫩茎尖处时,置于10mg/L的抗坏血酸中浸泡5min;当外植体属于半木质化茎段时,置于30mg/L的抗坏血酸中浸泡8min;当外植体属于木质化茎段时,置于30mg/L的抗坏血酸中浸泡12min。

以上步骤(1)所述的初始培养基是以2/3MS为基本培养基,还包括6-BA1.0mg/L、IBA0.5mg/L和ZT0.2mg/L;其中2/3MS基本培养基中的Ca(NO3)2含量为150mg/L,Na2SO4含量为50mg/L。

太阳城集团以上步骤(2)中所述的增殖培养基是以1/2MS为基本培养基,还包括6-BA0.8mg/L、IBA0.4mg/L和ZT0.1mg/L;其中1/2MS基本培养基中的Ca(NO3)2含量为150mg/L。

太阳城集团以上所述的增殖培养基用500ml的三角瓶分装,每瓶70ml,用棉球封口,再用牛皮纸包扎棉球和瓶口,在120℃和1.1kg.cm2条件下,用高压蒸汽灭菌锅灭菌15min。

以上步骤(2)中所述的继代增殖培养控制光照2000~7000Lx,温度25~30℃。

太阳城集团以上步骤(4)中所述的混合基质是按红心土与椰糠的体积比为3:1的比例混合。

相对于现有技术,本发明具有的优点和有益效果如下:

1、本发明利用植物顶端优势原理,即植物顶芽合成的生物素向下运输,大量积累在侧芽部位,并且侧芽对生长素的敏感程度比顶芽强,所以就会抑制侧芽的生长,表现为顶芽优先生长而侧芽受到抑制。一旦顶端优势被解除,顶芽和侧芽内源激素失去了平衡,侧芽细胞分裂素增加,受顶端分生组织抑制的侧芽就大量萌发,使芽幼态化。选择繁殖芽基部萌发的大量增殖继代壮芽作为微插繁殖材料,既克服继代芽的年龄效应,也解除了位置效应,培育正冠组培苗。

2、本发明以杉木优良无性系当年生嫩枝为外植体,通过灭菌消毒获取无菌繁殖体,将外植体接种于初始培养基和增殖培养基后诱导继代芽;每次转接仅留基部萌生的丛芽,其它芽全部除掉,繁殖芽条逐渐剪短;选择长0.3~0.5cm基部萌发,高1.5~3cm,2/3叶片浓绿色,叶面光亮的芽扦插生根,获取正冠组培苗;使用本方法,继代芽增殖系数高,达4~6,繁殖速度快、育苗量大、可以在短期内批量生产遗传稳定性高、组培苗正冠率达100%,生根率高达96%以上的继代芽。能适应我国林木储备基地建设发展对良种种苗的需要。

3、本发明的杉木正冠组培苗继代芽的培育方法,材料易得,成本低,操作简单,扩繁快,繁殖系数高,获得正冠杉木苗木数量大,具有较好的经济效益、社会效益和生态效益。

附图说明

图1为常规方法培育得到的偏冠杉木组培苗。

图2为本发明培育得到的正冠杉木组培苗。

具体实施方式

下面结合具体实施例对本发明做进一步说明。

实施例1:

太阳城集团一种杉木正冠组培苗继代芽培育方法,选择优良的无性系嫁接杉木幼树当年生的嫩枝为外植体。剪除外植体上的叶片,在洗洁精溶液中用毛刷轻轻刷洗,放入质量浓度为0.1%的新吉尔灭中浸泡40min,再用纯净水冲洗3~5遍,将外植体剪切成1~2cm的长茎段,在超净工作台用体积浓度75%的乙醇对剪切后的外植体消毒10s。当外植体属于幼嫩茎尖处时,将消毒后的外植体置于10mg/L的抗坏血酸中浸泡5min进行灭菌;当外植体属于半木质化茎段时,将消毒后的外植体置于30mg/L的抗坏血酸中浸泡8min进行灭菌;当外植体属于木质化茎段时,将消毒后的外植体置于30mg/L的抗坏血酸中浸泡12min进行灭菌。然后将消毒灭菌后的外植体接种到初始培养基内。所述的初始培养基是以2/3MS为基本培养基,还包括6-BA1.0mg/L、IBA0.5mg/L和ZT0.2mg/L;其中2/3MS基本培养基中的Ca(NO3)2含量为150mg/L,Na2SO4含量为50mg/L。外植体在初始培养基内培养获取繁殖芽。将长1.5~3cm的繁殖芽接种到增殖培养基内,诱导继代芽。所述的增殖培养基是以1/2MS为基本培养基,还包括6-BA0.8mg/L、IBA0.4mg/L和ZT0.1mg/L;其中1/2MS基本培养基中的Ca(NO3)2含量为150mg/L。增殖培养基用500ml的三角瓶分装,每瓶70ml,用棉球封口,再用牛皮纸包扎棉球和瓶口,在120℃和1.1kg.cm2条件下,用高压蒸汽灭菌锅灭菌15min。继代增殖培养过程中,控制光照2000~3000Lx,温度30℃。

太阳城集团待繁殖芽基部萌发出2~3个长0.3~0.5cm的继代芽时进行转接。每次转接,将繁殖芽逐渐剪短至0.3~0.5cm;取剪短后的繁殖芽基部萌发扦插生根用的继代芽,即为正冠组培苗;在正冠组培苗中选择繁殖芽基部萌发、生长健壮的继代芽扦插于常用的生根培养基上,在温度30℃,2000~3000Lx光照条件下进行不定根诱导,培养10~12d后开始生根,25~28d根长0.4~0.5cm时,获得生根苗,将生根苗转到炼苗室炼苗。炼苗20~25d,待根系由白色转变成灰白色时,将生根苗进行移栽。移栽时先将生根苗置于清水中漂洗,洗净根部的培养基,晾干根系的表面水分,将生根苗栽入装有红心土与椰糠的混合基质容器中培养,红心土与椰糠按体积比为3:1的比例混合。在容器中的生根苗进行培养8月,杉木苗高15~20cm时出圃造林。

实施例2:

太阳城集团一种杉木正冠组培苗继代芽培育方法,选择优良的无性系嫁接杉木幼树当年生的嫩枝为外植体。剪除外植体上的叶片,在洗洁精溶液中用毛刷轻轻刷洗,放入质量浓度为0.1%的新吉尔灭中浸泡45min,再用纯净水冲洗4~5遍,将外植体剪切成1~2cm的长茎段,在超净工作台用体积浓度75%的乙醇对剪切后的外植体消毒10s。当外植体属于幼嫩茎尖处时,将消毒后的外植体置于10mg/L的抗坏血酸中浸泡5min进行灭菌;当外植体属于半木质化茎段时,将消毒后的外植体置于30mg/L的抗坏血酸中浸泡8min进行灭菌;当外植体属于木质化茎段时,将消毒后的外植体置于30mg/L的抗坏血酸中浸泡12min进行灭菌。然后将消毒灭菌后的外植体接种到初始培养基内。所述的初始培养基是以2/3MS为基本培养基,还包括6-BA1.0mg/L、IBA0.5mg/L和ZT0.2mg/L;其中2/3MS基本培养基中的Ca(NO3)2含量为150mg/L,Na2SO4含量为50mg/L。外植体在初始培养基内培养获取繁殖芽。将长1.5~3cm的繁殖芽接种到增殖培养基内,诱导继代芽。所述的增殖培养基是以1/2MS为基本培养基,还包括6-BA0.8mg/L、IBA0.4mg/L和ZT0.1mg/L;其中1/2MS基本培养基中的Ca(NO3)2含量为150mg/L。增殖培养基用500ml的三角瓶分装,每瓶70ml,用棉球封口,再用牛皮纸包扎棉球和瓶口,在120℃和1.1kg.cm2条件下,用高压蒸汽灭菌锅灭菌15min。继代增殖培养过程中,控制光照3000~4000Lx,温度27℃。

太阳城集团待繁殖芽基部萌发出2~3个长0.3~0.5cm的继代芽时进行转接。每次转接,将繁殖芽逐渐剪短至0.3~0.4cm;取剪短后的繁殖芽基部萌发扦插生根用的继代芽,即为正冠组培苗;在正冠组培苗中选择繁殖芽基部萌发、生长健壮的继代芽扦插于常用的生根培养基上,在温度27℃,3000~4000Lx光照条件下进行不定根诱导,培养10~12d后开始生根,25~27d根长0.4~0.5cm时,获得生根苗,将生根苗转到炼苗室炼苗。炼苗20~25d,待根系由白色转变成灰白色时,将生根苗进行移栽。移栽时先将生根苗置于清水中漂洗,洗净根部的培养基,晾干根系的表面水分,将生根苗栽入装有红心土与椰糠的混合基质容器中培养,红心土与椰糠按体积比为3:1的比例混合。在容器中的生根苗进行培养8月,杉木苗高15~20cm时出圃造林。

实施例3:

一种杉木正冠组培苗继代芽培育方法,选择优良的无性系嫁接杉木幼树当年生的嫩枝为外植体。剪除外植体上的叶片,在洗洁精溶液中用毛刷轻轻刷洗,放入质量浓度为0.1%的新吉尔灭中浸泡45min,再用纯净水冲洗4~5遍,将外植体剪切成1~2cm的长茎段,在超净工作台用体积浓度75%的乙醇对剪切后的外植体消毒10s。当外植体属于幼嫩茎尖处时,将消毒后的外植体置于10mg/L的抗坏血酸中浸泡5min进行灭菌;当外植体属于半木质化茎段时,将消毒后的外植体置于30mg/L的抗坏血酸中浸泡8min进行灭菌;当外植体属于木质化茎段时,将消毒后的外植体置于30mg/L的抗坏血酸中浸泡12min进行灭菌。然后将消毒灭菌后的外植体接种到初始培养基内。所述的初始培养基是以2/3MS为基本培养基,还包括6-BA1.0mg/L、IBA0.5mg/L和ZT0.2mg/L;其中2/3MS基本培养基中的Ca(NO3)2含量为150mg/L,Na2SO4含量为50mg/L。外植体在初始培养基内培养获取繁殖芽。将长1.5~3cm的繁殖芽接种到增殖培养基内,诱导继代芽。所述的增殖培养基是以1/2MS为基本培养基,还包括6-BA0.8mg/L、IBA0.4mg/L和ZT0.1mg/L;其中1/2MS基本培养基中的Ca(NO3)2含量为150mg/L。增殖培养基用500ml的三角瓶分装,每瓶70ml,用棉球封口,再用牛皮纸包扎棉球和瓶口,在120℃和1.1kg.cm2条件下,用高压蒸汽灭菌锅灭菌15min。继代增殖培养过程中,控制光照5000~6000Lx,温度28℃。

太阳城集团待繁殖芽基部萌发出2~3个长0.3~0.5cm的继代芽时进行转接。每次转接,将繁殖芽逐渐剪短至0.4~0.5cm;取剪短后的繁殖芽基部萌发扦插生根用的继代芽,即为正冠组培苗;在正冠组培苗中选择繁殖芽基部萌发、生长健壮的继代芽扦插于常用的生根培养基上,在温度28℃,5000~6000Lx光照条件下进行不定根诱导,培养12~15d后开始生根,27~30d根长0.5~0.6cm时,获得生根苗,将生根苗转到炼苗室炼苗。炼苗25~30d,待根系由白色转变成灰白色时,将生根苗进行移栽。移栽时先将生根苗置于清水中漂洗,洗净根部的培养基,晾干根系的表面水分,将生根苗栽入装有红心土与椰糠的混合基质容器中培养,红心土与椰糠按体积比为3:1的比例混合。在容器中的生根苗进行培养9月,杉木苗高20~25cm时出圃造林。

实施例4:

一种杉木正冠组培苗继代芽培育方法,选择优良的无性系嫁接杉木幼树当年生的嫩枝为外植体。剪除外植体上的叶片,在洗洁精溶液中用毛刷轻轻刷洗,放入质量浓度为0.1%的新吉尔灭中浸泡50min,再用纯净水冲洗4~5遍,将外植体剪切成1~2cm的长茎段,在超净工作台用体积浓度75%的乙醇对剪切后的外植体消毒10s。当外植体属于幼嫩茎尖处时,将消毒后的外植体置于10mg/L的抗坏血酸中浸泡5min进行灭菌;当外植体属于半木质化茎段时,将消毒后的外植体置于30mg/L的抗坏血酸中浸泡8min进行灭菌;当外植体属于木质化茎段时,将消毒后的外植体置于30mg/L的抗坏血酸中浸泡12min进行灭菌。然后将消毒灭菌后的外植体接种到初始培养基内。所述的初始培养基是以2/3MS为基本培养基,还包括6-BA1.0mg/L、IBA0.5mg/L和ZT0.2mg/L;其中2/3MS基本培养基中的Ca(NO3)2含量为150mg/L,Na2SO4含量为50mg/L。外植体在初始培养基内培养获取繁殖芽。将长1.5~3cm的繁殖芽接种到增殖培养基内,诱导继代芽。所述的增殖培养基是以1/2MS为基本培养基,还包括6-BA0.8mg/L、IBA0.4mg/L和ZT0.1mg/L;其中1/2MS基本培养基中的Ca(NO3)2含量为150mg/L。增殖培养基用500ml的三角瓶分装,每瓶70ml,用棉球封口,再用牛皮纸包扎棉球和瓶口,在120℃和1.1kg.cm2条件下,用高压蒸汽灭菌锅灭菌15min。继代增殖培养过程中,控制光照6000~7000Lx,温度25℃。

太阳城集团待繁殖芽基部萌发出2~3个长0.3~0.5cm的继代芽时进行转接。每次转接,将繁殖芽逐渐剪短至0.4~0.5cm;取剪短后的繁殖芽基部萌发扦插生根用的继代芽,即为正冠组培苗;在正冠组培苗中选择繁殖芽基部萌发、生长健壮的继代芽扦插于常用的生根培养基上,在温度25℃,6000~7000Lx光照条件下进行不定根诱导,培养12~15d后开始生根,25~30d根长0.5~0.6cm时,获得生根苗,将生根苗转到炼苗室炼苗。炼苗25~30d,待根系由白色转变成灰白色时,将生根苗进行移栽。移栽时先将生根苗置于清水中漂洗,洗净根部的培养基,晾干根系的表面水分,将生根苗栽入装有红心土与椰糠的混合基质容器中培养,红心土与椰糠按体积比为3:1的比例混合。在容器中的生根苗进行培养10月,杉木苗高20~30cm时出圃造林。

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