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一种毛坝大木漆的组织培养快繁方法.pdf

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一种 大木 组织培养 方法
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摘要
申请专利号:

太阳城集团CN201610023590.9

申请日:

20160114

公开号:

CN105660398A

公开日:

20160615

当前法律状态:

有效性:

有效

法律详情:
IPC分类号: A01H4/00 主分类号: A01H4/00
申请人: 湖北省林业科学研究院
发明人: 杨柳,杨志斌,陈曦,杜叶云,洪克俭,辜忠春
地址: 430075 湖北省武汉市东湖新技术开发区森林大道枫林路39号
优先权: CN201610023590A
专利代理机构: 武汉帅丞知识产权代理有限公司 代理人: 朱必武;周瑾
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法律状态
申请(专利)号:

太阳城集团CN201610023590.9

授权太阳城集团号:

法律状态太阳城集团日:

法律状态类型:

摘要

本发明涉及一种毛坝大木漆的组织培养快繁方法。本发明选取5年生优良毛坝大木漆的新鲜腋芽和顶芽作为外植体培养材料,经过消毒、诱导培养、增殖培养、生根培养、炼苗与移栽等步骤,通过组培快繁技术对毛坝大木漆进行快速繁殖,以每10个毛坝大木漆外植体计算,繁殖系数为6.5,增殖周期为30天计算,除去污染耗损,其年繁殖量达到275万个以上,有效解决了毛坝大木漆数量稀少的问题,实现大面积快速繁殖的需求。且本发明通过准确选择采摘外植体的太阳城集团及树龄,提高了不定芽的诱导分化率,使其分化率达到85%以上。另外,本发明最终外植体的褐化率低于8%,污染率低于2%,采用闭盖炼苗的方式及合理的基质配比大大提高了幼苗的成活率,使成活率保持在90%以上。

权利要求书

太阳城集团1.一种毛坝大木漆的组织培养快繁方法,其特征在于:所述方法包括如下步骤:(1)外植体的取材:每年5月上旬采摘5年生优良毛坝大木漆的新鲜腋芽和顶芽作为培养材料;(2)消毒过程:将采摘的枝条去除叶片,用灭菌软毛刷清刷植株表面,去除污染物,用流水冲洗2h,再用无菌水冲洗3~5遍后,剪切成带有腋芽或顶芽的小段放置于无菌培养皿中,快速移至超净工作台内进行消毒,在无菌条件下用75%的乙醇浸泡25s后,放入含有0.01~0.015%的吐温-80的0.1%升汞消毒液中,轻轻搅动10min,再用无菌水冲洗5~8次后,将外植体置于消毒滤纸上吸干水分后备用;(3)诱导培养:将腋芽及顶芽接触消毒液的伤口部分切除3~4mm,竖插于诱导培养基上,置于温度为24±2℃条件下进行暗培养,培养1~2天再转入新配制的诱导培养基内,反复3次后放置于光照强度为1800lx,光照太阳城集团为11~12小时/天的条件下光照培养20~25天,待长出3~4cm新芽即可;(4)增殖培养:将新芽从外植体上切下,其保留高度为2~3cm、2~3个叶片,将其竖插于增殖培养基上,置于温度为24±2℃,光照强度为1800lx,光照太阳城集团为10小时/天的条件下培养25~30天,待腋芽基部出现直径1~2cm愈伤组织且生出5~8个3~4cm的不定芽时,再将不定芽切下,在相同条件下放置到相同配方的增殖培养基中进行转接,即可使毛坝大木漆进行快速扩繁,其增殖倍数为6~8倍;(5)生根培养:将2~3cm高的增殖苗竖插于生根培养基上,置于温度为24±2℃,光照强度为1800lx,光照太阳城集团为11~12小时/天的条件下培养25~30天,待株高达到3~4cm,根长1~2cm、大于4条生根数/株,即得到毛坝大木漆的生根苗,以待移栽;(6)炼苗与移栽:将生根瓶苗放置于自然光照条件下,室温24±2℃的温棚中进行闭盖炼苗,7天后取出生根苗,将根部的培养基清洗干净,用80%百菌清浸根5min后,移栽至基质配比为泥炭土:珍珠岩=3:2的塑料篮中,淋足定根水,保持小环境相对湿度80%以上,7天后可逐步降低相对湿度,保持基质湿润,控制遮光率在60%~70%,温度26±2℃,15~20天后将成活的小苗移栽到基质相同、杯口直径为10cm的可降解无纺纸育苗袋中,养护2~3个月,苗高达30cm左右移至苗圃地培育成苗。2.根据权利要求1所述的一种毛坝大木漆的组织培养快繁方法,其特征在于:步骤(3)所述的诱导培养基的配方为:B5+1.0mg/L6-BA+0.1mg/LNAA+30.0g/L蔗糖+5.0g/L活性炭+7.0g/L琼脂+0.5g/L青霉素,PH值为5.8~6.0。3.根据权利要求1所述的一种毛坝大木漆的组织培养快繁方法,其特征在于:步骤(4)所述增殖培养基配方为:MS+1.0mg/L6-BA+0.5mg/LNAA+30.0g/L蔗糖+5.0g/L活性炭+7.0g/L琼脂,pH为5.8~6.0,其中,所述增殖培养基配方MS中NHNO浓度为标准培养基的1/2。4.根据权利要求1所述的一种毛坝大木漆的组织培养快繁方法,其特征在于:步骤(5)所述生根培养基配方为:1/2MS+0.5mg/LIBA+0.5mg/LNAA+30g/L蔗糖+5.0g/L活性炭+7.0g/L琼脂,pH为5.8~6.0。

说明书

技术领域

本发明涉及农业生物技术中植物组织培养的方法,特别涉及一种毛坝大木漆的组织培养快繁方法。

背景技术

生漆是从漆树之韧皮层内割流出来的油包水乳白色液体,是漆树的一种生理分泌物。生漆为我国特产可再生资源,也是历史悠久的传统土特产品,产量占世界总量的80%以上。湖北是我国产漆大省,毛坝漆在特定的气候和海拔条件下形成,上世纪1954年,周恩来总理授牌“坝漆名冠全球”,毛坝漆为此成为了名扬全国乃至全球的传统品牌。毛坝生漆以漆质浓厚,色泽光亮,气味芬芳,含水量少,附着力强,燥性好,漆酚率高达80%以上而蜚声海内外,产品远销日本、法国、美国、德国、英国、香港等几十个国家和地区。而毛坝大木漆为野生漆树品种在生产中,普遍采用种子育苗和埋根育苗的方式栽培。由于漆树属异花授粉的经济树种,用种子繁殖会产生较大分化,其优良品种的遗传特性难以保持;采用埋根育苗,除极少数可能产生芽变外,具有稳定不易退化的特点,且成苗率低,繁殖速度慢,对漆树优良品种和优良单株受到了限制。而组培快繁技术,能很好保证漆树优良品种和单株遗传稳定性,并能满足大规模的繁殖要求,现有技术中有太阳城集团组培快繁技术应用于漆树繁殖方面的报道,例如,申请号为201410311305.4的专利公开了一种小木漆高效快速扩繁方法,包括(1)外植体的选择与消毒(2)启动培养(3)增殖培养(4)生根培养(5)炼苗与移栽步骤,采用对优良小木漆优良单株进行组织培养的方法,可使其繁殖系数达到4~5倍,每10个有效小木漆腋芽,按繁殖系数为4.5,增殖周期为45天计算,除去污染损耗,其年繁殖量仍将达到175万个以上,有效解决了小木漆快速繁殖的问题,使得优良无性系材料能够大面积推广,但该发明增殖周期较长,繁殖系数较低,且培养的小木漆易污染、褐化,损耗率高,不适合毛坝大木漆的组织培养快速繁殖。另外,申请号为201410540495.7的专利申请公开了一种漆树再生植株的快速繁殖方法,包括漆树叶片的消毒、愈伤组织的诱导、愈伤组织的分化、生根诱导、炼苗移栽等步骤,但该发明选用漆树叶片为外植体来避免褐化现象,会导致诱导分化率不高。

发明内容

太阳城集团本发明的目的在于克服现有技术的缺点,提供一种毛坝大木漆的组织培养快繁方法,本发明方法打破了毛坝大木漆树种野生繁殖的模式,解决了毛坝大木漆存活率、繁殖率低、数量稀少的技术问题,实现了毛坝大木漆大面积快速繁殖的需求。

太阳城集团为了实现本发明的目的,本发明采用如下的技术方案:

太阳城集团一种毛坝大木漆的组织培养快繁方法,所述方法包括如下步骤:

(1)外植体的取材:于每年5月上旬采摘5年生优良毛坝大木漆的新鲜腋芽和顶芽作为培养材料;

(2)消毒过程:将采摘的枝条去除叶片,用灭菌软毛刷清刷植株表面,去除污染物,用流水冲洗2h,再用无菌水冲洗3~5遍后,剪切成带有腋芽或顶芽的小段放置于无菌培养皿中,快速移至超净工作台内进行消毒,在无菌条件下用75%的乙醇浸泡25s后,放入含有0.01~0.015%的吐温-80的0.1%升汞消毒液中,轻轻搅动10min,再用无菌水冲洗5~8次后,将外植体置于消毒滤纸上吸干水分后备用;

太阳城集团(3)诱导培养:将腋芽及顶芽接触消毒液的伤口部分切除3~4mm,竖插于诱导培养基上,置于温度为24±2℃条件下进行暗培养,培养1~2天再转入新配制的诱导培养基内,反复3次后放置于光照强度为1800lx,光照太阳城集团为11~12小时/天的条件下光照培养20~25天,待长出3~4cm新芽即可;

太阳城集团(4)增殖培养:将新芽从外植体上切下,其保留高度为2~3cm、2~3个叶片,将其竖插于增殖培养基上,置于温度为24±2℃,光照强度为1800lx,光照太阳城集团为10小时/天的条件下培养25~30天,待腋芽基部出现直径1~2cm愈伤组织且生出5~8个3~4cm的不定芽时,再将不定芽切下,在相同条件下放置到相同配方的增殖培养基中进行转接,即可使毛坝大木漆进行快速扩繁,其增殖倍数为6~8倍;

(5)生根培养:将2~3cm高的增殖苗竖插于生根培养基上,置于温度为24±2℃,光照强度为1800lx,光照太阳城集团为11~12小时/天的条件下培养25~30天,待株高达到3~4cm,根长1~2cm、大于4条生根数/株,即得到毛坝大木漆的生根苗,以待移栽;

(6)炼苗与移栽:将生根瓶苗放置于自然光照条件下,室温24±2℃的温棚中进行闭盖炼苗,7天后取出生根苗,将根部的培养基清洗干净,用80%百菌清浸根5min后,移栽至基质配比为泥炭土:珍珠岩=3:2的塑料篮中,淋足定根水,保持小环境相对湿度80%以上,7天后可逐步降低相对湿度,保持基质湿润,控制遮光率在60%~70%,温度26±2℃,15~20天后将成活的小苗移栽到基质相同、杯口直径为10cm的可降解无纺纸育苗袋中,养护2~3个月,苗高达30cm左右移至苗圃地培育成苗。

上述步骤(3)所述的诱导培养基的配方为:B5+1.0mg/L6-BA+0.1mg/LNAA+30.0g/L蔗糖+5.0g/L活性炭+7.0g/L琼脂+0.5g/L青霉素,PH值为5.8~6.0。

太阳城集团上述步骤(4)所述增殖培养基配方为:MS+1.0mg/L6-BA+0.5mg/LNAA+30.0g/L蔗糖+5.0g/L活性炭+7.0g/L琼脂,pH为5.8~6.0,其中,所述增殖培养基配方MS中NH4NO3浓度为标准培养基的1/2。

上述步骤(5)所述生根培养基配方为:1/2MS+0.5mg/LIBA+0.5mg/LNAA+30g/L蔗糖+5.0g/L活性炭+7.0g/L琼脂,pH为5.8~6.0。

与现有技术相比,本发明具有如下的有益效果:

太阳城集团(1)本发明通过组培快繁技术对毛坝大木漆进行快速繁殖,能很好地保证漆树优良品种和单株遗传稳定性,并能在短太阳城集团内满足大规模的繁殖需求,打破该树种野生繁殖的模式达到人工驯化的目的,实现规模化生产,满足市场的需求;

(2)本发明通过准确选择采摘外植体的太阳城集团及树龄,提高了不定芽的诱导分化率,使其分化率达到85%以上;

(3)本发明在诱导培养过程中,选择低NH4+、高NO3-浓度的B5培养基,并通过培养初期反复接种,添加适量的活性炭及青霉素并结合暗培养的方式来大大降低植株的褐化率及污染率,最终使外植体的褐化率低于8%,污染率低于2%,诱导率达到85%以上,成效显著;

(4)本发明在增殖过程中采用养分较高的MS培养基并降低配方中NH4+的含量,即保证增殖培养的养分要求同时也降低了褐化率,选择细胞分裂素6-BA与生长素NAA相结合的配方,使愈伤组织发育良好,丛生芽的增殖系数达到6~8倍;

(5)本发明在生根培养中,选择两种生长素(IBA、NAA)相结合的方式培养,即促使不定根的诱导分化又加快根的生长,使其生根率达到99%以上,平均每株带4~5个根;

(6)本发明在炼苗与移栽过程中,采用闭盖炼苗的方式及合理的基质配比大大提高了幼苗的成活率,使成活率保持在90%以上;

太阳城集团(7)本发明能有效的解决木本植物在组培过程中褐化、污染等问题,具有保证植株的优良遗传性状,培养过程安全简单,繁殖系数极高,且经济实惠易养护等优点。以每10个毛坝大木漆外植体计算,繁殖系数为6.5,增殖周期为30天计算,除去污染耗损,其年繁殖量达到275万个以上,有效解决了毛坝大木漆数量稀少的问题,实现大面积快速繁殖的需求。

具体实施方式

以下通过实施例形式对本发明的上述内容再作进一步的详细说明,但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实施例,凡基于本发明上述内容所实现的技术均属于本发明的范围。

实施例1

本实施例的实施太阳城集团为2014年,毛坝大木漆的组培快繁在湖北省林业科学研究组培实验室及温室大棚中进行。

本实施例的一种毛坝大木漆的组织培养快繁方法,所述方法包括如下步骤:

(1)外植体的取材:2015年5月上旬采摘5年生优良毛坝大木漆的新鲜腋芽和顶芽作为培养材料;

(2)消毒过程:将采摘的枝条去除叶片,用灭菌软毛刷清刷植株表面,去除污染物,用流水冲洗2h,再用无菌水冲洗3~5遍后,剪切成带有腋芽或顶芽的小段放置于无菌培养皿中,快速移至超净工作台内进行消毒,在无菌条件下用75%的乙醇浸泡25s,再用无菌水冲洗3~5遍后,放入含有0.01~0.015%的吐温-80的0.1%升汞消毒液中,轻轻搅动10min,再用无菌水冲洗5~8遍后,将外植体置于消毒滤纸上吸干水分后备用;

(3)诱导培养:诱导培养基的配方为B5+1.0mg/L6-BA+0.1mg/LNAA+30.0g/L蔗糖+5.0g/L活性炭+7.0g/L琼脂+0.5g/L青霉素,PH值为5.8~6.0;将腋芽及顶芽接触消毒液的伤口部分切除3~4mm,竖插于诱导培养基上,置于温度为24±2℃条件下进行暗培养,培养1~2天再转入新配制的诱导培养基内,反复3次后放置于光照强度为1800lx,光照太阳城集团为11~12小时/天的条件下持续光照培养20~25天,待长出3~4cm新芽即可,经统计该方法最终使外植体的褐化率低于8%,污染率低于2%,诱导率达到85%以上。

(4)增殖培养:增殖培养基配方为:MS(其中NH4NO3份量减半)+1.0mg/L6-BA+0.5mg/LNAA+30.0g/L蔗糖+5.0g/L活性炭+7.0g/L琼脂,pH为5.8~6.0;2014年6月上旬,将丛生芽从外植体上切下,其保留高度为2~3cm、2~3个叶片,将其竖插于增殖培养基上,置于温度为24±2℃,光照强度为1800lx,光照太阳城集团为10小时/天的条件下培养25~30天,待腋芽基部出现直径1~2cm愈伤组织且生出5~8个3~4cm的不定芽时,再将不定芽切下,在相同条件下放置到相同配方的增殖培养基中进行转接,即可使毛坝大木漆进行快速扩繁,其增殖倍数为6.48倍;

(5)生根培养:生根培养基配方为:1/2MS+0.5mg/LIBA+0.5mg/LNAA+30g/L蔗糖+5.0g/L活性炭+7.0g/L琼脂,pH为5.8~6.0;2014年8月上旬,将2~3cm高的增殖苗竖插于生根培养基上,置于温度为24±2℃,光照强度为1800lx,光照太阳城集团为11~12小时/天的条件下培养25~30天,待株高达到3~4cm,根长1~2cm,即得到毛坝大木漆的生根苗,其生根率达到99%以上,平均每株带4~5个根;

(6)炼苗与移栽:2014年9月中旬,将生根瓶苗放置于自然光照条件下,室温24±2℃的温棚中进行闭盖炼苗,7天后取出生根苗,将根部的培养基清洗干净,用80%百菌清浸根5min后,移栽至基质配比为泥炭土:珍珠岩=3:2的塑料篮中,淋足定根水,保持小环境相对湿度80%以上,7天后可逐步降低相对湿度,保持基质湿润,控制遮光率在60%~70%,温度26±2℃,15~20天后将成活的小苗移栽到基质相同、杯口直径为10cm的可降解无纺纸育苗袋中,养护3个月,苗高达30cm左右移至苗圃地培育成苗。经统计该方法使组培苗成活率保持在90%以上。

太阳城集团经实验本申请的外植体的取材方式可以使不定芽的诱导分化率达到85%以上。

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