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一种利用紫外线诱变培育海带品系的方法.pdf

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一种 利用 紫外线 诱变 培育 海带 品系 方法
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摘要
申请专利号:

太阳城集团CN201610202335.0

申请日:

20160331

公开号:

太阳城集团CN105660390A

公开日:

20160615

当前法律状态:

有效性:

有效

法律详情:
IPC分类号: A01H1/08 主分类号: A01H1/08
申请人: 山东省海洋生物研究院
发明人: 王翔宇
地址: 266100 山东省青岛市崂山区游云路7号
优先权: CN201610202335A
专利代理机构: 北京科亿知识产权代理事务所(普通合伙) 代理人: 汤东凤
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法律状态
申请(专利)号:

CN201610202335.0

授权太阳城集团号:

法律状态太阳城集团日:

法律状态类型:

摘要

本发明提供一种利用紫外线诱变培育海带品系的方法,目的在于提高海带诱变率,使海带产生的遗传变异个体增多,从而有效提高筛选的效率。本发明的方法的紫外辐射的功率是波长2537Å,照射太阳城集团为40s。本发明利用紫外线对海带父母本的配子体和合子阶段进行诱变,使诱变的海带在低剂量紫外照射的情况下获得最大的突变率,从而获得产生突变的个体。

权利要求书

1.一种利用紫外线诱变培育海带品系的方法,其特征在于,所述的方法包括如下的步骤:1)准备诱变种质材料选择作为诱变亲本的海带,分离海带配子体;并将配子体进行扩增培养;2)诱变前处理收集步骤1)扩增培养获得的的雌、雄配子体,培养的光照强度为2500lx,温度为10℃;3)诱变处理在诱变处理前7d,将雌、雄配子体粉碎至5-10个细胞段,将雌、雄配子体用双层500目筛绢过滤,使配子体留在筛绢上,再用灭菌海水洗到相应容器中,加入苗帘,再加入1cm深的海水,置于8-12℃的环境中,进行紫外辐射;辐射光源的功率是波长15W紫外线灯管2支,灯管距离海水表面30cm,照射太阳城集团为40s;照射完毕再往容器内加入培养液,盖上盖并用黑纸包好,24小时后将雌、雄配子体混合泼洒在苗帘上继续培养;待有合子形成,则将苗帘的水倒掉,加入预冷消毒海水使苗帘保持湿润状态,采用上述的辐射条件再进行紫外照射,24h后重复操作一次;4)诱变苗种的养殖把步骤3)中筛选的苗帘进行培育,培育条件为:光照为2000-2500lx,温度为8-12℃,每3天换三分之一低温灭菌海水;待发育至8列细胞以上的幼孢子体时,进行流水培育;最后转移至海上养殖;再进行性状检测筛选突变体。2.如权利要求1所述的方法,其特征在于,所述的步骤3)的培养条件如下:光照2500lx,光周期12h;温度10℃。3.如权利要求1所述的方法,其特征在于,所述的步骤3)的海水中加入NaNO和KHPO,添加浓度为N-4mg/L,P-0.4mg/L。4.如权利要求1所述的方法,其特征在于,所述的性状检测包括有:1)表观性状检测:每2个月检测1次全部海带性状,包括长度、宽度、中带部宽和厚度,与养殖群体作对照,标记出某一性状大于养殖群体的10%的海带个体;2)品质性状检测:在海带成熟期,取梢部部分藻体,测定褐藻胶、甘露醇和碘等品质性状指标,与养殖群体作对照,标记出某一性状大于养殖群体的10%的海带个体。

说明书

技术领域

本发明属于海藻良种培育技术领域,具体涉及一种紫外线诱变培育海带品系的方法。

背景技术

太阳城集团海带是具异型世代交替的大型经济褐藻,其生活史包括短期的配子体和长期的孢子体阶段,成熟海带孢子体放散产生游孢子,游孢子附着后发育为雌、雄配子体,而配子体分别产生精卵,卵子受精形成合子,合子发育为幼孢子体。

太阳城集团我国从50年代开始进行海带养殖,目前海带养殖业是我国海水养殖业的支柱产业,海带品种选育技术也得到较大发展,射线诱变育种也应用过,在上个世纪科研人员利用X射线诱变培育了“1170”海带,还有研究He-Ne激光和紫外线对海带雌配子体的影响的报道,但这种办法应用很少,主要原因在于诱变率低,导致筛选成本高,针对这个问题,本专利提供一种方法解决这个问题。

发明内容

太阳城集团本发明提供一种利用紫外线诱变培育海带品系的方法,目的在于提高海带诱变率,使海带产生的遗传变异个体增多,从而有效提高筛选的效率。

本发明的方法,包括如下的步骤:

1)准备诱变种质材料

选择作为诱变亲本的海带,分离海带配子体;并将配子体进行扩增培养;

2)诱变前处理

太阳城集团收集步骤1)扩增培养获得的的雌、雄配子体,培养的光照强度为2500lx,温度为10℃;

3)诱变处理

太阳城集团在诱变处理前7d,将雌、雄配子体粉碎至5-10个细胞段,将雌、雄配子体用双层500目筛绢过滤,使配子体留在筛绢上,再用灭菌海水洗到相应容器中,加入苗帘,再加入1cm深的海水,置于8-12℃的环境中,进行紫外辐射;辐射光源的功率是波长15W紫外线灯管2支,灯管距离海水表面30cm,照射太阳城集团为40s;照射完毕再往容器内加入培养液,盖上盖并用黑纸包好,24小时后将雌、雄配子体混合泼洒在苗帘上继续培养;培养条件为:光照2500lx,光周期12h;温度10℃;海水中加NaNO3和KH2PO4,添加浓度为N-4mg/L,P-0.4mg/L;

待有合子形成,则将苗帘的水倒掉,加入预冷消毒海水使苗帘保持湿润状态,采用上述辐射条件再进行紫外照射,24h后重复操作一次;

4)诱变苗种的养殖

太阳城集团把步骤3)中筛选的苗帘进行培育,培育条件为:光照为2000-2500lx,温度为8-12℃,每3天换三分之一低温灭菌海水;待发育至8列细胞以上的幼孢子体时,进行流水培育;最后转移至海上养殖;再进行性状检测筛选突变体。

所述的性状包括有:

太阳城集团1)表观性状检测:每2个月检测1次全部海带性状,包括长度、宽度、中带部宽和厚度,与养殖群体作对照,标记出某一性状大于养殖群体的10%的海带个体;

2)品质性状检测:在海带成熟期,取梢部部分藻体,测定褐藻胶、甘露醇和碘等品质性状指标,与养殖群体作对照,标记出某一性状大于养殖群体的10%的海带个体。

太阳城集团本发明利用紫外线对海带父母本的配子体和合子阶段进行诱变,使诱变的海带在低剂量紫外照射的情况下获得最大的突变率,从而获得产生突变的个体。

具体实施方式

太阳城集团海带的生活史有明显的世代交替,包括长期的孢子体和短期的配子体世代,两者差别很大,孢子体大而有组织的分化,配子体只有十几个细胞。孢子体成熟时,产生很多游动孢子。游孢子附着12-14d后萌发为雌、雄配子体。雌配子体成熟时卵排出,卵在母体外受精,形成二倍的合子。合子几日后即萌发为新的海带。下面就实施例对发明内容做具体描述。

太阳城集团实施例1:诱变条件的筛选

所做实验分为3组,分别是未作紫外辐射组、只辐射配子体组和按照本方法处理组。

1、材料

1)种质材料准备

太阳城集团选择长海带和真海带分别作为父本和母本,记录海带父本和母本数量特征,包括长度、宽度、厚度、中带部宽,以及藻体外形特征,包括梢部形状、基部形状以及藻体颜色等。选用专利(ZL201310225745.3)的方法分离海带种质并分雌、雄单独培养,使其营养生长。

太阳城集团待长到0.1g左右,进行扩增培养至实验所需要的量,其条件是:0.10g的起始重量、用组织粉碎机粉碎后,经300目筛绢过滤,放入1L锥形瓶中,锥形瓶内加入800ml的消毒海水,海水中加NaNO3和KH2PO4,添加浓度为N-10mg/L,P-1mg/L。光照周期为12h,强度为2000lx。

水温14℃。

2)诱变处理

诱变处理前7d,再用组织粉碎机粉碎雌、雄配子体后,经300目筛绢过滤,将光照调整为2500lx,温度为10℃。然后将雌、雄配子体用双层500目筛绢过滤,使配子体留在筛绢上,再用少量灭菌低温海水洗到相应容器中,保持少量水分。紫外辐射诱变的条件:照射太阳城集团分为5秒、10秒、20秒、40秒、1分、2分共6个太阳城集团剂量级。照射处理是在洁净工作台中进行的,照射距离为30厘米。照射完毕再往容器内加入培养液,盖上盖并用黑纸包好,24小时后去掉黑纸转入实验室培养。诱变后第3d对存活的细胞进行统计,在倒置显微镜10倍物镜下(×100),随机挑选10个视野,颜色保持褐色的记为存活的,统计存活的数目,致死率(%)=(1-存活的细胞数目/总细胞数目)×100%。选用每个视野中细胞平均死亡率60-70%的20s处理组。选用完处理组后,将相应的雌、雄配子体按照质量比3:1混合分别泼洒在6个苗帘上,苗帘周围放置2-3个玻片,继续培养,其条件为:光照2500lx,光周期12h;温度10℃;海水中加NaNO3和KH2PO4,添加浓度为N-4mg/L,P-0.4mg/L。

太阳城集团辐射完约5d后每天镜检玻片,如果发现有合子形成,则将苗帘的水倒掉,留取少量海水使苗帘保持湿润状态,选用与上述相同的辐射条件再照射一次,24h后重复操作一次,目的在于使大部分合子受到辐射。7d后统计合子细胞死亡率,选用40s处理组,此组的死亡率为50%-55%,相应表明突变率更高。

实施例2

诱变苗种的养殖

太阳城集团把诱变后的苗帘进行培育,培育条件为:光照为2000-2500lx,温度为8-12℃,每3天换三分之一低温灭菌海水;待发育至8列细胞以上的幼孢子体时,进行流水培育;最后转移至海上养殖;再进行性状检测筛选突变体。

所述的性状包括有:

太阳城集团到海带成熟期检测海带性状,包括长度、宽度、中带部宽和厚度,与对比组的杂交群体作对照,标记出某一性状大于养殖群体的10%以上的海带个体;

各获得海带10绳,分别是320株、310株和330株,统计结果,平均长度3.3m±0.3m,平均宽度35cm±0.6cm;同时发现,有2株海带的长度性状较突出,长度达到3.89m和3.92m,长度分别提高18%和19%;2株海带的长度和宽度都达到3.83m和40.6cm,提高16%。有些海带厚度和成熟期发生了不同程度的改变,性状发生变化的总体比例在25%。

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