太阳城集团

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吡唑 衍生物
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摘要
申请专利号:

太阳城集团CN201280027873.0

申请日:

20120606

公开号:

CN103596567A

公开日:

20140219

当前法律状态:

有效性:

有效

法律详情:
IPC分类号: A61K31/4245,C07D413/12,C07D413/14,A61P25/00 主分类号: A61K31/4245,C07D413/12,C07D413/14,A61P25/00
申请人: 霍夫曼-拉罗奇有限公司
发明人: 吉多·加利,塞德里克·盖拉马拉,罗杰·诺克罗斯,菲利普·普天利格纳
地址: 瑞士巴塞尔
优先权: 11169217.4
专利代理机构: 中科专利商标代理有限责任公司 代理人: 贺卫国;柳春琦
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法律状态
申请(专利)号:

太阳城集团CN201280027873.0

授权太阳城集团号:

法律状态太阳城集团日:

法律状态类型:

摘要

太阳城集团本发明涉及下式的化合物,其中R1是氢或苯基,任选被卤素,CN或低级烷氧基或由卤素取代的低级烷氧基取代;R2是氢或低级烷基;R3是氢或低级烷基,或是苯基,其任选被一个或多个取代基取代,所述取代基选自卤素,氰基或由卤素取代的低级烷氧基,或是吡啶基,其任选被卤素或由卤素取代的低级烷基取代,或是嘧啶基,其任选被由卤素取代的低级烷基取代,或是吡嗪基,其任选被卤素,氰基或由卤素取代的低级烷基取代;R4是氢,低级烷基或苯基;Z是键,-CH2-或-O-;或其药学上合适的酸加成盐。现在发现式IA和IB化合物对痕量胺相关受体(TAAR),尤其是TAARl具有良好的亲和性。该化合物可以用于治疗抑郁症、焦虑症、双相型障碍、注意缺陷多动障碍(ADHD)、应激相关障碍、精神病性精神障碍如精神分裂症、神经病如帕金森病、神经变性疾病如阿尔茨海默病、癫痫、偏头痛、高血压、精神药物滥用和代谢性疾病如进食障碍、糖尿病、糖尿病并发症、肥胖症、异常脂肪血症、能量消耗和同化障碍、体温稳态紊乱和功能障碍、睡眠和昼夜节律障碍以及心血管疾病。

权利要求书

1.一种下式化合物其中R是氢或苯基,其任选被卤素,CN或低级烷氧基或由卤素取代的低级烷氧基取代;R是氢或低级烷基;R是氢或低级烷基或是苯基,其任选被一个或多个取代基取代,所述取代基选自卤素,氰基或由卤素取代的低级烷氧基,或是吡啶基,其任选被卤素或由卤素取代的低级烷基取代,或是嘧啶基,其任选被由卤素取代的低级烷基取代,或是吡嗪基,其任选被卤素,氰基或由卤素取代的低级烷基取代;R是氢,低级烷基或苯基;Z是键,-CH-或-O-;或其药学上合适的酸加成盐。2.根据权利要求1的式IA-1化合物,其中R是氢,卤素,CN或低级烷氧基或由卤素取代的低级烷氧基;R是氢或低级烷基;R是氢或低级烷基;Z是键,-CH-或-O-;n是1或2;如果n=2,则各个R可以彼此独立地定义;或其药学上合适的酸加成盐。3.根据权利要求1或2中任一项的式IA-1化合物,其中所述化合物为:(S)-N-(4-(吗啉-2-基)苯基)-5-苯基-1H-吡唑-3-甲酰胺,(S)-1-甲基-N-(4-(吗啉-2-基)苯基)-5-苯基-1H-吡唑-3-甲酰胺,(S)-5-(3-氰基苯基)-N-(4-(吗啉-2-基)苯基)-1H-吡唑-3-甲酰胺,(S)-5-(3-氰基苯基)-4-甲基-N-(4-(吗啉-2-基)苯基)-1H-吡唑-3-甲酰胺,(S)-5-(5-氰基-2-氟苯基)-N-(4-(吗啉-2-基)苯基)-1H-吡唑-3-甲酰胺,(S)-5-(3-氰基-4-氟苯基)-N-(4-(吗啉-2-基)苯基)-1H-吡唑-3-甲酰胺,或(S)-5-(3-(二氟甲氧基)苯基)-1-乙基-N-(4-(吗啉-2-基)苯基)-1H-吡唑-3-甲酰胺。4.根据权利要求1的式IB-1化合物,其中R是氢,卤素,CN或低级烷氧基或由卤素取代的低级烷氧基;R是氢或低级烷基;R是氢或低级烷基;Z是键,-CH-或-O-;n是1或2;如果n=2,则各个R可以彼此独立地定义;或其药学上合适的酸加成盐。5.根据权利要求1或4中任一项的式IB-1化合物,其中所述化合物为:(S)-3-(3-氯苯基)-N-(4-(吗啉-2-基)苯基)-1H-吡唑-5-甲酰胺,(S)-3-(4-氟苯基)-N-(4-(吗啉-2-基)苯基)-1H-吡唑-5-甲酰胺,(S)-3-(3-甲氧基苯基)-N-(4-(吗啉-2-基)苯基)-1H-吡唑-5-甲酰胺,(S)-1-甲基-N-(4-(吗啉-2-基)苯基)-3-苯基-1H-吡唑-5-甲酰胺,(S)-4-甲基-N-(4-(吗啉-2-基)苯基)-3-苯基-1H-吡唑-5-甲酰胺,(S)-3-(4-甲氧基苯基)-N-(4-(吗啉-2-基)苯基)-1H-吡唑-5-甲酰胺,(S)-3-(2-氟苯基)-N-(4-(吗啉-2-基)苯基)-1H-吡唑-5-甲酰胺,(S)-3-(2-甲氧基苯基)-N-(4-(吗啉-2-基)苯基)-1H-吡唑-5-甲酰胺,(S)-3-(2-氯苯基)-N-(4-(吗啉-2-基)苯基)-1H-吡唑-5-甲酰胺,(S)-3-(3,4-二甲氧基苯基)-N-(4-(吗啉-2-基)苯基)-1H-吡唑-5-甲酰胺,(R)-3-(4-氯苯基)-N-(4-(吗啉-2-基)苯基)-1H-吡唑-5-甲酰胺,(R)-3-(2-氯苯基)-N-(4-(吗啉-2-基)苯基)-1H-吡唑-5-甲酰胺,(S)-3-(4-氯苯基)-N-(4-(吗啉-2-基)苯基)-1H-吡唑-5-甲酰胺,(R)-3-(3-氯苯基)-N-(4-(吗啉-2-基)苯基)-1H-吡唑-5-甲酰胺,(R)-3-(3-甲氧基苯基)-N-(4-(吗啉-2-基)苯基)-1H-吡唑-5-甲酰胺,(S)-3-(3-氯苯基)-1-甲基-N-(4-(吗啉-2-基)苯基)-1H-吡唑-5-甲酰胺,(R)-1-甲基-N-(4-(吗啉-2-基)苯基)-3-苯基-1H-吡唑-5-甲酰胺,(S)-3-(4-氰基苯基)-1-甲基-N-(4-(吗啉-2-基)苯基)-1H-吡唑-5-甲酰胺,(S)-3-(4-氟苯基)-1-甲基-N-(4-(吗啉-2-基)苯基)-1H-吡唑-5-甲酰胺,(S)-3-(3-甲氧基苯基)-1-甲基-N-(4-(吗啉-2-基)苯基)-1H-吡唑-5-甲酰胺,(S)-3-(3-氰基苯基)-1-甲基-N-(4-(吗啉-2-基)苯基)-1H-吡唑-5-甲酰胺,(S)-3-(3-氰基苯基)-1-乙基-N-(4-(吗啉-2-基)苯基)-1H-吡唑-5-甲酰胺,(S)-3-(4-氰基苯基)-1-乙基-N-(4-(吗啉-2-基)苯基)-1H-吡唑-5-甲酰胺,(S)-3-(3-氰基苯基)-N-(4-(哌啶-3-基)苯基)-1H-吡唑-5-甲酰胺,(R)-3-(3-氰基苯基)-N-(4-(哌啶-3-基)苯基)-1H-吡唑-5-甲酰胺,(外消旋)3-(3-氰基苯基)-N-(4-(吡咯烷-3-基)苯基)-1H-吡唑-5-甲酰胺,(S)-3-(3-(二氟甲氧基)苯基)-N-(4-(吗啉-2-基)苯基)-1H-吡唑-5-甲酰胺,(S)-3-(3-(二氟甲氧基)苯基)-1-乙基-N-(4-(吗啉-2-基)苯基)-1H-吡唑-5-甲酰胺,(S)-3-(3-氰基-2-氟苯基)-N-(4-(吗啉-2-基)苯基)-1H-吡唑-5-甲酰胺,或(S)-3-(3-(二氟甲氧基)苯基)-1-甲基-N-(4-(吗啉-2-基)苯基)-1H-吡唑-5-甲酰胺。6.根据权利要求1的式IA-2化合物,R是氢;R是氢或低级烷基;R是苯基,其任选被一个或多个取代基取代,所述取代基选自卤素,氰基或由卤素取代的低级烷氧基,或是吡啶基,其任选被卤素或由卤素取代的低级烷基取代,或是嘧啶基,其任选被由卤素取代的低级烷基取代,或是吡嗪基,其任选被卤素,氰基或由卤素取代的低级烷基取代;Z是键,-CH-或-O-;或其药学上合适的酸加成盐。7.根据权利要求1或6中任一项的式IA-2化合物,其中所述化合物是:(S)-1-(4-氟苯基)-N-(4-(吗啉-2-基)苯基)-1H-吡唑-3-甲酰胺,(R)-1-(4-氟苯基)-N-(4-(吗啉-2-基)苯基)-1H-吡唑-3-甲酰胺,(S)-1-(5-氯吡啶-2-基)-N-(4-(吗啉-2-基)苯基)-1H-吡唑-3-甲酰胺,(S)-N-(4-(吗啉-2-基)苯基)-1-(5-(三氟甲基)吡啶-2-基)-1H-吡唑-3-甲酰胺,(S)-1-(4-氰基苯基)-N-(4-(吗啉-2-基)苯基)-1H-吡唑-3-甲酰胺,(R)-N-(4-(吗啉-2-基)苯基)-1-(5-(三氟甲基)吡啶-2-基)-1H-吡唑-3-甲酰胺,(S)-1-(4-(二氟甲氧基)苯基)-N-(4-(吗啉-2-基)苯基)-1H-吡唑-3-甲酰胺,(R)-1-(4-(二氟甲氧基)苯基)-N-(4-(吗啉-2-基)苯基)-1H-吡唑-3-甲酰胺,(S)-N-(4-(吗啉-2-基)苯基)-1-(5-(三氟甲基)嘧啶-2-基)-1H-吡唑-3-甲酰胺,(S)-1-(6-氯吡嗪-2-基)-N-(4-(吗啉-2-基)苯基)-1H-吡唑-3-甲酰胺,(S)-1-(3-氯吡嗪-2-基)-N-(4-(吗啉-2-基)苯基)-1H-吡唑-3-甲酰胺,(S)-1-(5-氯吡嗪-2-基)-N-(4-(吗啉-2-基)苯基)-1H-吡唑-3-甲酰胺,(S)-N-(4-(吗啉-2-基)苯基)-1-(6-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-1H-吡唑-3-甲酰胺,(S)-N-(4-(吗啉-2-基)苯基)-1-(6-(三氟甲基)吡嗪-2-基)-1H-吡唑-3-甲酰胺,(S)-1-(5-氰基吡嗪-2-基)-N-(4-(吗啉-2-基)苯基)-1H-吡唑-3-甲酰胺,或(S)-N-(4-(吗啉-2-基)苯基)-1-(2-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-1H-吡唑-3-甲酰胺。8.根据权利要求1的式IB-2化合物,其中R是氢;R是氢或低级烷基;R是氢,低级烷基或苯基;Z是键,-CH-或-O-;或其药学上合适的酸加成盐。9.权利要求1或8中任一项的化合物,其中所述化合物是:(S)-N-(4-(吗啉-2-基)苯基)-1-苯基-1H-吡唑-5-甲酰胺。10.一种制备如权利要求1-9中任一项所限定的式IA或IB化合物的方法,所述方法包括:a)从下式化合物断裂掉N-保护基团,成为下式化合物,其中PG是选自-C(O)O-叔丁基的N-保护基团,并且其他定义如权利要求1中所述,并且如果需要,将所获得的化合物转化为药用酸加成盐。11.通过根据权利要求10所述的方法制备的根据权利要求1-9中任一项的化合物。12.一种药物组合物,所述药物组合物包含根据权利要求1-9中任一项所述的化合物和药用载体和/或辅药。13.一种药物组合物,所述药物组合物包含根据权利要求1-9中任一项所述的化合物和药用载体和/或辅药,所述药物组合物用于治疗抑郁症、焦虑症、双相型障碍、注意缺陷多动障碍(ADHD)、应激相关障碍、精神病性精神障碍、精神分裂症、神经病、帕金森病、神经变性疾病、阿尔茨海默病、癫痫、偏头痛、高血压、精神药物滥用、代谢性疾病、进食障碍、糖尿病、糖尿病并发症、肥胖症、异常脂肪血症、能量消耗和同化障碍、体温稳态紊乱和功能障碍、睡眠和昼夜节律障碍,以及心血管疾病。14.根据权利要求1-9中任一项所述的化合物,所述化合物作为治疗活性物质使用。15.根据权利要求1-9中任一项所述的化合物,所述化合物作为治疗活性物质用于治疗抑郁症、焦虑症、双相型障碍、注意缺陷多动障碍(ADHD)、应激相关障碍、精神病性精神障碍、精神分裂症、神经病、帕金森病、神经变性疾病、阿尔茨海默病、癫痫、偏头痛、高血压、精神药物滥用、代谢性疾病、进食障碍、糖尿病、糖尿病并发症、肥胖症、异常脂肪血症、能量消耗和同化障碍、体温稳态紊乱和功能障碍、睡眠和昼夜节律障碍,以及心血管疾病。16.根据权利要求1-9中任一项所述的化合物用于制备药物的用途,所述药物用于治疗性和/或预防性治疗抑郁症、焦虑症、双相型障碍、注意缺陷多动障碍(ADHD)、应激相关障碍、精神病性精神障碍、精神分裂症、神经病、帕金森病、神经变性疾病、阿尔茨海默病、癫痫、偏头痛、高血压、精神药物滥用、代谢性疾病、进食障碍、糖尿病、糖尿病并发症、肥胖症、异常脂肪血症、能量消耗和同化障碍、体温稳态紊乱和功能障碍、睡眠和昼夜节律障碍,以及心血管疾病。17.如上所述的本发明。

说明书

本发明涉及下式化合物,

其中

R1是氢或苯基,其任选被卤素,CN或低级烷氧基或由卤素取代的低级烷氧基取代;

R2是氢或低级烷基;

太阳城集团R3是氢或低级烷基或是

太阳城集团苯基,其任选被一个或多个取代基取代,所述取代基选自卤素,氰基或由卤素取代的低级烷氧基,或是

吡啶基,其任选被卤素或由卤素取代的低级烷基取代,或是

太阳城集团嘧啶基,其任选被由卤素取代的低级烷基取代,或是

吡嗪基,其任选被卤素,氰基或由卤素取代的低级烷基取代;

R4是氢,低级烷基或苯基;

Z是键,-CH2-或-O-;

太阳城集团或其药学上合适的酸加成盐。

太阳城集团本发明包括所有的外消旋混合物,所有它们相应的对映体和/或旋光异构体。此外,本发明还包括式IA和IB化合物的所有互变异构形式。

太阳城集团现在发现式IA和IB化合物对痕量胺相关受体(TAAR),尤其是TAAR1具有良好的亲和性。化合物可以用于以下各项的治疗:抑郁症、焦虑症、双相型障碍、注意缺陷多动障碍(ADHD)、应激相关障碍、精神病性精神障碍如精神分裂症、神经病如帕金森病、神经变性疾病如阿尔茨海默病、癫痫、偏头痛、高血压、精神药物滥用和代谢性疾病如进食障碍、糖尿病、糖尿病并发症、肥胖症、异常脂肪血症、能量消耗和同化障碍、体温稳态紊乱和功能障碍、睡眠和昼夜节律障碍、以及心血管疾病。

对于可以结合至肾上腺素受体的化合物报道的一些生理效应(即心血管效应、低血压、镇静诱导)(WO02/076950,WO97/12874或EP0717037)在用于治疗如上所述的中枢神经系统疾病的药物的情况下可能被认为是不适宜的副作用。因此,适宜的是获得与肾上腺素受体比较对于TAAR1受体具有选择性的药物。本发明的目标物对TAAR1受体显示超过肾上腺素受体的选择性,尤其是与人类和大鼠α1和α2肾上腺素受体比较的良好选择性。

经典的生物胺(血清素,去甲肾上腺素,肾上腺素,多巴胺,组胺)在中枢和外周神经系统中作为神经传递介质发挥重要的作用[1]。它们的合成和储存,以及它们在释放后的降解和再吸收被严格的调节。已知生物胺水平的不平衡在很多病理情况下是造成改变的脑功能的原因[2-5]。第二类的内源胺化合物,即通常所说的痕量胺(TA)与经典的生物胺在结构、新陈代谢和亚细胞定位方面显著地重叠。TA包括p-酪胺、β-苯基乙胺、色胺和章鱼胺,并且它们在哺乳动物神经系统中以通常比经典的生物胺低的水平存在[6]。

太阳城集团它们的调节异常与多种精神病学疾病相关,如精神分裂症和抑郁症[7],以及其他情况如注意缺陷多动障碍、偏头痛、帕金森病、精神药物滥用和进食障碍[8,9]。

太阳城集团长期以来,TA特异性受体仅被猜测是基于人类和其他哺乳动物的CNS中解剖学上离散的高亲和性TA结合部位[10,11]。因此,TA的药理学作用被认为是经由众所周知的经典生物胺的机制通过如下而介导:或者通过引起它们的释放、抑制它们的再吸收或通过与它们的受体体系“交叉反应”[9,12,13]。随着近来GPCR新家族的数个成员,即痕量胺相关受体(TAAR)的识别,该观点明显地改变[7,14]。在人类中存在9种TAAR基因(包括3种拟基因)并且在小鼠中存在16种基因(包括1种拟基因)。TAAR基因不含有内含子(有一个例外,TAAR2含有1个内含子)并且在相同的染色体节段上位于彼此相连的位置。受体基因的系统发育关系,与深入的GPCR药效团相似性比较和药理学数据一致,提出这些受体形成三个不同的亚族[7,14]。TAAR1在人类与啮齿类之间高度保留的四种基因(TAAR1-4)的第一亚类中。TA经由Gα活化TAAR1。TA的调节异常显示有助于多种疾病的病因学,所述多种疾病如抑郁症、精神病性精神障碍、注意缺陷多动障碍、精神药物滥用、帕金森病、偏头痛、进食障碍和代谢性疾病,并且因此TAAR1配体对于这些疾病的治疗具有很高的潜在可能。

太阳城集团因此,对于增加太阳城集团痕量胺相关受体的知识存在广泛的兴趣。

所使用的参考文献:

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2Wong,M.L.和Licinio,J.(2001)Research and treatment approaches to depression.Nat.Rev.Neurosci.2,343-351;

3Carlsson,A.等(2001)Interactions between monoamines,glutamate,and GABA in schizophrenia:new evidence.Annu.Rev.Pharmacol.Toxicol.41,237-260;

太阳城集团4Tuite,P.和Riss,J.(2003)Recent developments in the pharmacological treatment of Parkinson′s disease.Expert Opin.Investig.Drugs12,1335-1352;

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7Lindemann,L.和Hoener,M.(2005)A renaissance in trace amines inspired by a novel GPCR family.Trends in Pharmacol.Sci.26,274-281;

太阳城集团8Branchek,T.A.和Blackburn,T.P.(2003)Trace amine receptors as targets for novel therapeutics:legend,myth and fact.Curr.Opin.Pharmacol.3,90-97;

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太阳城集团10Mousseau,D.D.和Butterworth,R.F.(1995)A high-affinity[3H]tryptamine binding site in human brain.Prog.Brain Res.106,285-291;

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12Dyck,L.E.(1989)Release of some endogenous trace amines from rat striatal slices in the presence and absence of a monoamine oxidase inhibitor.Life Sci.44,1149-1156;

13Parker,E.M.和Cubeddu,L.X.(1988)Comparative effects of amphetamine,phenylethylamine and related drugs on dopamine efflux,dopamine uptake and mazindol binding.J.Pharmacol.Exp.Ther.245,199-210;

14Lindemann,L.等(2005)Trace amine associated receptors form structurally and functionally distinct subfamilies of novel G protein-coupled receptors.Genomics85,372-385。

太阳城集团本发明的目标是式IA和IB的新化合物和它们的药用盐,它们用于制备药物的用途,所述药物用于治疗与痕量胺相关受体的生物学功能相关的病症,它们的制备,以及基于根据本发明的化合物的用于病症的控制或预防中的药物,所述病症如抑郁症、焦虑症、双相型障碍、注意缺陷多动障碍、应激相关障碍、精神病性精神障碍如精神分裂症、神经病如帕金森病、神经变性疾病如阿尔茨海默病、癫痫、偏头痛、精神药物滥用和代谢性疾病如进食障碍、糖尿病、糖尿病并发症、肥胖症、异常脂肪血症、能量消耗和同化障碍、体温稳态紊乱和功能障碍、睡眠和昼夜节律障碍、以及心血管疾病。

太阳城集团使用本发明的化合物的优选适应证是抑郁症、精神病性精神障碍、帕金森病、焦虑症和注意缺陷多动障碍(ADHD)和糖尿病。

如本文所使用的,术语“低级烷基”表示含有1至7个碳原子的饱和直链或支链基团,例如,甲基、乙基、丙基、异丙基、正丁基、异丁基、2-丁基、叔丁基等。优选的烷基是具有1-4个碳原子的基团。

如本文所使用的,术语“低级烷氧基”表示其中烷基残基如上面所定义并且其经由氧原子连接的基团。

太阳城集团术语″卤素″表示氯,碘,氟和溴。

如本文所使用的,术语″由卤素取代的低级烷氧基″表示如上定义的烷氧基,并且其中至少一个氢原子被卤素代替。

术语“药用酸加成盐”包括与无机和有机酸的盐,所述无机和有机酸如盐酸、硝酸、硫酸、磷酸、柠檬酸、甲酸、富马酸、马来酸、乙酸、琥珀酸、酒石酸、甲磺酸、对甲苯磺酸等。

太阳城集团本发明的一个实施方案是式IA-1化合物,

其中

R是氢,卤素,CN或低级烷氧基或由卤素取代的低级烷氧基;

R2是氢或低级烷基;

太阳城集团R3是氢或低级烷基;

Z是键,-CH2-或-O-;

n是1或2;如果n=2,则各个R可以彼此独立地定义;

或其药学上合适的酸加成盐,例如以下化合物:

太阳城集团或其药学上合适的酸加成盐,例如以下化合物:

太阳城集团(S)-N-(4-(吗啉-2-基)苯基)-5-苯基-1H-吡唑-3-甲酰胺

(S)-1-甲基-N-(4-(吗啉-2-基)苯基)-5-苯基-1H-吡唑-3-甲酰胺

(S)-5-(3-氰基苯基)-N-(4-(吗啉-2-基)苯基)-1H-吡唑-3-甲酰胺

(S)-5-(3-氰基苯基)-4-甲基-N-(4-(吗啉-2-基)苯基)-1H-吡唑-3-甲酰胺

(S)-5-(5-氰基-2-氟苯基)-N-(4-(吗啉-2-基)苯基)-1H-吡唑-3-甲酰胺

(S)-5-(3-氰基-4-氟苯基)-N-(4-(吗啉-2-基)苯基)-1H-吡唑-3-甲酰胺或

太阳城集团(S)-5-(3-(二氟甲氧基)苯基)-1-乙基-N-(4-(吗啉-2-基)苯基)-1H-吡唑-3-甲酰胺.

本发明的另一实施方案是式IB-1化合物,

其中

R是氢,卤素,CN或低级烷氧基或由卤素取代的低级烷氧基;

太阳城集团R2是氢或低级烷基;

太阳城集团R4是氢或低级烷基;

Z是键,-CH2-或-O-;

n是1或2;如果n=2,则各个R可以彼此独立地定义;

或其药学上合适的酸加成盐,例如以下化合物:

太阳城集团(S)-3-(3-氯苯基)-N-(4-(吗啉-2-基)苯基)-1H-吡唑-5-甲酰胺

太阳城集团(S)-3-(4-氟苯基)-N-(4-(吗啉-2-基)苯基)-1H-吡唑-5-甲酰胺

太阳城集团(S)-3-(3-甲氧基苯基)-N-(4-(吗啉-2-基)苯基)-1H-吡唑-5-甲酰胺

太阳城集团(S)-1-甲基-N-(4-(吗啉-2-基)苯基)-3-苯基-1H-吡唑-5-甲酰胺

太阳城集团(S)-4-甲基-N-(4-(吗啉-2-基)苯基)-3-苯基-1H-吡唑-5-甲酰胺

太阳城集团(S)-3-(4-甲氧基苯基)-N-(4-(吗啉-2-基)苯基)-1H-吡唑-5-甲酰胺

(S)-3-(2-氟苯基)-N-(4-(吗啉-2-基)苯基)-1H-吡唑-5-甲酰胺

(S)-3-(2-甲氧基苯基)-N-(4-(吗啉-2-基)苯基)-1H-吡唑-5-甲酰胺

(S)-3-(2-氯苯基)-N-(4-(吗啉-2-基)苯基)-1H-吡唑-5-甲酰胺

太阳城集团(S)-3-(3,4-二甲氧基苯基)-N-(4-(吗啉-2-基)苯基)-1H-吡唑-5-甲酰胺

太阳城集团(R)-3-(4-氯苯基)-N-(4-(吗啉-2-基)苯基)-1H-吡唑-5-甲酰胺

太阳城集团(R)-3-(2-氯苯基)-N-(4-(吗啉-2-基)苯基)-1H-吡唑-5-甲酰胺

(S)-3-(4-氯苯基)-N-(4-(吗啉-2-基)苯基)-1H-吡唑-5-甲酰胺

(R)-3-(3-氯苯基)-N-(4-(吗啉-2-基)苯基)-1H-吡唑-5-甲酰胺

太阳城集团(R)-3-(3-甲氧基苯基)-N-(4-(吗啉-2-基)苯基)-1H-吡唑-5-甲酰胺

太阳城集团(S)-3-(3-氯苯基)-1-甲基-N-(4-(吗啉-2-基)苯基)-1H-吡唑-5-甲酰胺

太阳城集团(R)-1-甲基-N-(4-(吗啉-2-基)苯基)-3-苯基-1H-吡唑-5-甲酰胺

(S)-3-(4-氰基苯基)-1-甲基-N-(4-(吗啉-2-基)苯基)-1H-吡唑-5-甲酰胺

太阳城集团(S)-3-(4-氟苯基)-1-甲基-N-(4-(吗啉-2-基)苯基)-1H-吡唑-5-甲酰胺

太阳城集团(S)-3-(3-甲氧基苯基)-1-甲基-N-(4-(吗啉-2-基)苯基)-1H-吡唑-5-甲酰胺

(S)-3-(3-氰基苯基)-1-甲基-N-(4-(吗啉-2-基)苯基)-1H-吡唑-5-甲酰胺

太阳城集团(S)-3-(3-氰基苯基)-1-乙基-N-(4-(吗啉-2-基)苯基)-1H-吡唑-5-甲酰胺

太阳城集团(S)-3-(4-氰基苯基)-1-乙基-N-(4-(吗啉-2-基)苯基)-1H-吡唑-5-甲酰胺

(S)-3-(3-氰基苯基)-N-(4-(哌啶-3-基)苯基)-1H-吡唑-5-甲酰胺

太阳城集团(R)-3-(3-氰基苯基)-N-(4-(哌啶-3-基)苯基)-1H-吡唑-5-甲酰胺

(外消旋)3-(3-氰基苯基)-N-(4-(吡咯烷-3-基)苯基)-1H-吡唑-5-甲酰胺

(S)-3-(3-(二氟甲氧基)苯基)-N-(4-(吗啉-2-基)苯基)-1H-吡唑-5-甲酰胺

(S)-3-(3-(二氟甲氧基)苯基)-1-乙基-N-(4-(吗啉-2-基)苯基)-1H-吡唑-5-甲酰胺

(S)-3-(3-氰基-2-氟苯基)-N-(4-(吗啉-2-基)苯基)-1H-吡唑-5-甲酰胺或

(S)-3-(3-(二氟甲氧基)苯基)-1-甲基-N-(4-(吗啉-2-基)苯基)-1H-吡唑-5-甲酰胺。

本发明的一个实施方案是式IA-2化合物,

R1是氢

太阳城集团R2是氢或低级烷基;

太阳城集团R3是苯基,其任选被一个或多个取代基取代,所述取代基选自卤素,氰基或由卤素取代的低级烷氧基,或是

太阳城集团吡啶基,其任选被卤素或由卤素取代的低级烷基取代,或是

嘧啶基,其任选被由卤素取代的低级烷基取代,或是

太阳城集团吡嗪基,其任选被卤素,氰基或由卤素取代的低级烷基取代;

太阳城集团Z是键,-CH2-或-O-;

或其药学上合适的酸加成盐,例如以下化合物:

(S)-1-(4-氟苯基)-N-(4-(吗啉-2-基)苯基)-1H-吡唑-3-甲酰胺

(R)-1-(4-氟苯基)-N-(4-(吗啉-2-基)苯基)-1H-吡唑-3-甲酰胺

太阳城集团(S)-1-(5-氯吡啶-2-基)-N-(4-(吗啉-2-基)苯基)-1H-吡唑-3-甲酰胺

(S)-N-(4-(吗啉-2-基)苯基)-1-(5-(三氟甲基)吡啶-2-基)-1H-吡唑-3-甲酰胺

太阳城集团(S)-1-(4-氰基苯基)-N-(4-(吗啉-2-基)苯基)-1H-吡唑-3-甲酰胺

太阳城集团(R)-N-(4-(吗啉-2-基)苯基)-1-(5-(三氟甲基)吡啶-2-基)-1H-吡唑-3-甲酰胺

(S)-1-(4-(二氟甲氧基)苯基)-N-(4-(吗啉-2-基)苯基)-1H-吡唑-3-甲酰胺

太阳城集团(R)-1-(4-(二氟甲氧基)苯基)-N-(4-(吗啉-2-基)苯基)-1H-吡唑-3-甲酰胺

太阳城集团(S)-N-(4-(吗啉-2-基)苯基)-1-(5-(三氟甲基)嘧啶-2-基)-1H-吡唑-3-甲酰胺

太阳城集团(S)-1-(6-氯吡嗪-2-基)-N-(4-(吗啉-2-基)苯基)-1H-吡唑-3-甲酰胺

太阳城集团(S)-1-(3-氯吡嗪-2-基)-N-(4-(吗啉-2-基)苯基)-1H-吡唑-3-甲酰胺

太阳城集团(S)-1-(5-氯吡嗪-2-基)-N-(4-(吗啉-2-基)苯基)-1H-吡唑-3-甲酰胺

太阳城集团(S)-N-(4-(吗啉-2-基)苯基)-1-(6-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-1H-吡唑-3-甲酰胺

(S)-N-(4-(吗啉-2-基)苯基)-1-(6-(三氟甲基)吡嗪-2-基)-1H-吡唑-3-甲酰胺

(S)-1-(5-氰基吡嗪-2-基)-N-(4-(吗啉-2-基)苯基)-1H-吡唑-3-甲酰胺或

(S)-N-(4-(吗啉-2-基)苯基)-1-(2-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-1H-吡唑-3-甲酰胺。

太阳城集团本发明的另一实施方案是式IB-2化合物,

其中

R1是氢;

R2是氢或低级烷基;

太阳城集团R4是氢,低级烷基或苯基;

Z是键,-CH2-或-O-;

或其药学上合适的酸加成盐,例如以下化合物

太阳城集团(S)-N-(4-(吗啉-2-基)苯基)-1-苯基-1H-吡唑-5-甲酰胺。

太阳城集团本发明的式IA和IB化合物及其药用盐可以通过本领域中已知的方法制备,例如,通过下述的方法制备,所述方法包括:

太阳城集团a)从下式化合物断裂掉N-保护基团

成为下式化合物,

太阳城集团其中PG是选自-C(O)O-叔丁基的N-保护基团,并且其他定义如上所述,并且

如果需要,将所获得的化合物转化为药用酸加成盐。

本发明的式IA和IB化合物的制备可以按顺序或会聚合成路线进行。本发明的化合物的合成在下面的方案1至3和对54个具体实施例的描述中示出。用于进行反应和所得产物纯化所需的技能是本领域技术人员已知的。除非相反地指出,在以下方法的描述中使用的取代基和符号具有之前在本文中给出的意义。

太阳城集团更详细地,式IA和IB化合物可以通过下面给出的方法,通过实施例中给出的方法或通过类似的方法制备。用于单独的反应步骤的适当的反应条件是本领域技术人员已知的。反应顺序不限于方案1至3中给出的顺序,然而,根据原材料和它们相应的反应活性,可以自由地改变反应步骤的顺序。原材料是可商购的或可以通过与下面给出的方法相似的方法制备,通过说明书中或实施例中引用的参考文献中描述的方法制备,或通过本领域已知的方法制备。

一般程序

方案1

取代基如上所述。

太阳城集团步骤A:酰胺形成可以如下完成:通过胺2和酰基氯化合物3-A-2之间在卤代溶剂中如二氯甲烷或1,2-二氯乙烷或醚类溶剂如二乙醚,二噁烷,THF,DME或TBME,在有机碱如三乙胺或N,N-二异丙基乙胺存在下的偶联反应。合适的胺2的实例包括N-保护的吗啉衍生物如2-a[CAS1002726-96-6],哌啶衍生物如2-b[CAS875798-79-1],吡咯烷衍生物如2-c[CAS908334-28-1]。

太阳城集团优选的条件是三乙胺在THF中在室温历时18小时。

备选地,酰胺形成可以如下完成:通过胺2和羧酸3-A-1之间在偶联剂如DCC,EDC,TBTU,HBTU或HATU存在下,在有机碱如三乙胺,N,N-二异丙基乙胺或N-甲基吗啉存在下,在卤代溶剂如DMF,二氯甲烷或1,2-二氯乙烷或醚类溶剂如二乙醚,二噁烷,THF,DME或TBME中的偶联反应。

优选的条件是HBTU与N-甲基吗啉在DMF中在60℃历时18小时。

步骤B:BOC N-保护基的除去可以如下进行:用无机酸如HCl,H2SO4或H3PO4或有机酸如CF3COOH,CHCl2COOH,HOAc或对甲苯磺酸,在溶剂如CH2C12,CHCl3,THF,二噁烷,MeOH,EtOH或H2O中,在0至80℃。

太阳城集团优选的条件是HCl在二噁烷中在60℃历时1-20h。

方案2

太阳城集团方法条件与对于方案1所述相同。

方案3

其中

Y是卤素,R2是氢或低级烷基;R3是苯基,其任选被一个或多个取代基取代,所述取代基选自卤素,氰基或由卤素取代的低级烷氧基,或是吡啶基,其任选被卤素或由卤素取代的低级烷基取代,或是嘧啶基,其任选被由卤素取代的低级烷基取代,或是吡嗪基,其任选被卤素,氰基或由卤素取代的低级烷基取代;并且Z是键,-CH2-或-O-;

步骤A:酰胺6的形成可以如下完成:通过胺2和1H-吡唑-3-甲酸5之间使用选择性偶联剂如氯化4-(4,6-二甲氧基-1,3,5-三嗪-2-基)-4-甲基吗啉鎓在溶剂如甲醇,乙醇或异丙醇中在0℃至50℃的温度历时1h至24小时的偶联反应。

太阳城集团优选的条件是使用氯化4-(4,6-二甲氧基-1,3,5-三嗪-2-基)-4-甲基吗啉鎓在甲醇中在0℃历时1h,接着在室温搅拌18小时。

太阳城集团合适的胺2的实例包括N-保护的吗啉衍生物如2-a[CAS1002726-96-6],哌啶衍生物如2-b[CAS875798-79-1],吡咯烷衍生物如2-c[CAS908334-28-1]。

步骤B:C-N键形成可以如下完成:通过在钯或铜催化剂,配体和碱存在下在溶剂如二噁烷,DME,THF,甲苯,DMF和DMSO中贼升高的温度,例如使用钯-催化的Buchwald-Hartwig反应将芳基卤7或杂芳基卤7用吡唑6处理。

太阳城集团优选的条件是,根据van Leeuwen和同事的程序(Tetrahedron.Lett.1999,40,3789-3790)的变化,催化的三(二亚苄基丙酮)二钯氯仿复合物,催化的9,9-二甲基-4,5-双(二苯基膦基)呫吨(xantphos)和碳酸铯在二噁烷中,在100℃加热的密封管中过夜。

太阳城集团在归因于吸电子取代基的存在,优选由于三氟甲基的存在,使芳基卤7或杂芳基卤7活化而利于进行亲核取代的情况下,与吡唑6的偶联可以如下实现:通过使这些化合物在碱如二异丙基乙胺,三乙胺,碳酸钾或氢化钠存在下在溶剂如异丙醇,二噁烷,二甲亚砜,二甲基乙酰胺或二甲基甲酰胺中在50℃至140℃之间的温度反应1小时至24小时。

优选的条件是将6和7的混合物与碳酸钾在二甲基乙酰胺中在120℃加热20小时。

步骤C:酰胺形成可以如下完成:通过胺2和酰基氯化合物8a之间在卤代溶剂如二氯甲烷或1,2-二氯乙烷或醚类溶剂如二乙醚,二噁烷,THF,DME或TBME中,在有机碱如三乙胺或N,N-二异丙基乙胺存在下的偶联反应。

优选的条件是三乙胺在THF中在室温历时18小时。

太阳城集团备选地,酰胺形成可以如下完成:通过胺2和羧酸8b之间在偶联剂如DCC,EDC,TBTU,HBTU或HATU存在下,在有机碱如三乙胺,N,N-二异丙基乙胺或N-甲基吗啉存在下,在卤代溶剂如DMF,二氯甲烷或1,2-二氯乙烷或醚类溶剂如二乙醚,二噁烷,THF,DME或TBME中的偶联反应。

优选的条件是HBTU与N-甲基吗啉在DMF中在60℃历时18小时。

太阳城集团步骤D:BOC N-保护基的除去可以如下进行:用无机酸如HCl,H2SO4或H3PO4或有机酸如CF3COOH,CHCl2COOH,HOAc或对甲苯磺酸,在溶剂如CH2C12,CHCl3,THF,二噁烷,MeOH,EtOH或H2O中在0至80℃。

优选的条件是HCl在二噁烷中在60℃历时1-20h。

太阳城集团与方案3中所述的相同的一般程序可以用于式IB-2化合物的制备。

化合物的分离和纯化

如果需要,本文所描述的化合物和中间体的分离和纯化可以通过任意合适的分离或纯化程序完成,如例如,过滤,萃取,结晶,柱色谱,薄层色谱,厚层色谱,制备型低压或高压液相色谱或这些程序的组合。合适的分离和离析程序的详细描述可以通过参考在下面在本文中的制备和实施例而得到。然而,当然也可以使用其他等价的分离或离析程序。手性的式I化合物的外消旋混合物可以使用手性HPLC分离。

太阳城集团 式IA和IB化合物的盐

式IA和IB化合物是碱性的并且可以转化为相应的酸加成盐。该转化通过用至少化学计量的合适的酸处理完成,所述酸如盐酸、氢溴酸、硫酸、硝酸、磷酸等,以及有机酸如乙酸、丙酸、羟基乙酸、丙酮酸、草酸、苹果酸、丙二酸、琥珀酸、马来酸、富马酸、酒石酸、柠檬酸、苯甲酸、肉桂酸、扁桃酸、甲磺酸、乙磺酸、对甲苯磺酸、水杨酸等。典型地,将游离碱溶解在惰性有机溶剂如二乙醚、乙酸乙酯、氯仿、乙醇或甲醇等中,并且将酸加入相似的溶剂中。将温度保持在0℃至50℃之间。所得到的盐自发地沉淀或可以用极性较小的溶剂使其从溶液析出。

太阳城集团碱性的式IA和IB化合物的酸加成盐可以通过用至少化学计量当量的合适的碱如氢氧化钠或氢氧化钾、碳酸钾、碳酸氢钠、氨等处理,转化为相应的游离碱。

实施例1

太阳城集团(S)-N-(4-(吗啉-2-基)苯基)-5-苯基-1H-吡唑-3-甲酰胺盐酸盐

太阳城集团 a)(S)-2-(4-(5-苯基-1H-吡唑-3-甲酰胺基)苯基)吗啉-4-甲酸叔丁酯

太阳城集团在25mL圆底烧瓶中,将(S)-2-(4-氨基苯基)吗啉-4-甲酸叔丁酯(100mg,359μmol,Eq:1.00),3-苯基-1H-吡唑-5-甲酸(87.9mg,467μmol,Eq:1.3)(CAS-1134-49-2),N-甲基吗啉(109mg,118μl,1.08mmol,Eq:3)和HBTU(204mg,539μmol,Eq:1.5)与DMF(3.75m1)合并。将反应混合物在60℃搅拌16.5小时。将混合物倾倒入水(10m1)中并用EtOAc萃取两次。将有机层用盐水洗涤,用MgSO4干燥,过滤并在真空中浓缩。将粗物质通过柱色谱(6g硅胶(63-200A),洗脱剂:庚烷/EtOAc2:1)纯化,给出标题化合物,为白色固体(120mg,74.5%)。MS(ISP):449.5([M+H]+)。

太阳城集团 b)(S)-N-(4-(吗啉-2-基)苯基)-5-苯基-1H-吡唑-3-甲酰胺盐酸盐

太阳城集团向(S)-2-(4-(5-苯基-1H-吡唑-3-甲酰胺基)苯基)吗啉-4-甲酸叔丁酯(120mg,268μmol,Eq:1.00)在二噁烷(0.5ml)中的溶液加入在二噁烷中的4M-HCl(1.00ml,4.01mmol,Eq:15)。将反应混合物在60℃搅拌2h。然后向混合物加入10ml的二噁烷并将悬浮物滤出,用乙醚洗涤并在高真空下干燥,给出目标化合物,为白色固体(82.3mg,79.9%)。MS(ISP):349.2([M+H]+)。

制备(S)-2-(4-氨基苯基)吗啉-4-甲酸叔丁酯:

步骤a)(S)-2-(4-溴苯基)吗啉:

将2.27g(RS)-2-(4-溴-苯基)-吗啉(CAS-1131220-82-0)在Chiralpak IA(8x32em)上使用正庚烷/乙醇(1:11)+0.1%DEA分离。

太阳城集团(S)-2-(4-溴-苯基)-吗啉:收集自7.6min至9.4min。

收率0.97g(42.9%)且97.4%ee

太阳城集团(R)-2-(4-溴-苯基)-吗啉:收集自9.8min至13.9min

收率0.99g(43.6%)且97.4%ee

步骤b)(S)-2-(4-溴苯基)吗啉-4-甲酸叔丁酯

太阳城集团将在THF(360ml)中的(S)-2-(4-溴-苯基)-吗啉(36.3g,150mmol)和N,N-二异丙基乙胺(23.3g,31.4ml,180mmol)用二碳酸二叔丁酯(39.3g,180mmol)处理。将反应混合物在rt搅拌17h,真空中浓缩,用乙酸乙酯稀释,用1M-柠檬酸(2x100ml)洗涤,用硫酸镁干燥,过滤并在真空中浓缩。将粗物质从己烷结晶,得到47.1g(92%)(S)-2-(4-溴苯基)吗啉-4-甲酸叔丁酯,为灰白色固体。MS(ISP):344.1([M+H]+)。

步骤c)(S)-2-(4-(二苯基亚甲基氨基)苯基)吗啉-4-甲酸叔丁酯:

太阳城集团在氩气下将(S)-2-(4-溴苯基)吗啉-4-甲酸叔丁酯(47g,137mmol),二苯基甲亚胺(29.9g,27.6m,165mmol),BINAP(6.41g,10.3mmol)和Pd2(dba)3(3.14g,3.43mmol)溶解在干燥且除气的甲苯(940ml)中并用叔丁醇钠(18.5g,192mmol)处理。将深褐色混合物在90℃搅拌18h。将黄色/褐色反应混合物用甲苯(700ml)稀释,冷却至rt并用水萃取两次。将有机层分离,用硫酸镁干燥并在真空中浓缩。将粗产物用300ml己烷稀释,搅拌1h并滤出,产生橙色固体(68g),将其通过柱色谱(1.3Kg硅胶,20%乙酸乙酯/庚烷)纯化。将合并且浓缩的级分悬浮在己烷中,搅拌17h,滤出并在真空中干燥,获得54.1g(89%)黄色固体。MS(ISP):443.3([M+H]+)。

步骤d)(S)-2-(4-氨基苯基)吗啉-4-甲酸叔丁酯

将(S)-2-(4-(二苯基亚甲基氨基)苯基)吗啉-4-甲酸叔丁酯(54.1g,122mmol),甲酸铵(116g,1.83mol)和Pd/C5%(6.5g,3.06mmol)在甲醇(930ml)中的悬浮液在60℃搅拌2h。将反应混合物过滤并浓缩。将残余物溶解在乙酸乙酯和水中。将有机相用0.5M HCl萃取两次。将合并的水相用2M-NaOH碱化并用DCM萃取两次。将有机相用硫酸镁干燥,过滤并在真空中干燥,获得31.95g灰白色固体。MS(ISP):279.1([M+H]+)。

实施例2

(S)-3-(3-氯苯基)-N-(4-(吗啉-2-基)苯基)-1H-吡唑-5-甲酰胺盐酸盐

太阳城集团类似于实施例1,使用5-(3-氯-苯基)-1H-吡唑-3-甲酸(CAS-595610-50-7)代替5-苯基-1H-吡唑-3-甲酸制备标题化合物。

白色固体。MS(ISP):383.12([M+H]+)。

实施例3

(S)-3-(4-氟苯基)-N-(4-(吗啉-2-基)苯基)-1H-吡唑-5-甲酰胺盐酸盐

类似于实施例1,使用5-(4-氟-苯基)-1H-吡唑-3-甲酸(CAS-870704-22-6)代替5-苯基-1H-吡唑-3-甲酸制备标题化合物。

白色固体。MS(ISP):367.15([M+H]+)。

实施例4

太阳城集团(S)-3-(3-甲氧基苯基)-N-(4-(吗啉-2-基)苯基)-1H-吡唑-5-甲酰胺盐酸盐

太阳城集团类似于实施例1,使用5-(3-甲氧基-苯基)-1H-吡唑-3-甲酸(CAS-834868-54-1)代替5-苯基-1H-吡唑-3-甲酸制备标题化合物。

太阳城集团白色固体。MS(ISP):379.17([M+H]+)。

实施例5

太阳城集团(S)-1-甲基-N-(4-(吗啉-2-基)苯基)-3-苯基-1H-吡唑-5-甲酰胺盐酸盐

太阳城集团类似于实施例1,使用1-甲基-3-苯基-1H-吡唑-5-甲酸(CAS-10250-64-3)代替5-苯基-1H-吡唑-3-甲酸制备标题化合物。

太阳城集团白色固体。MS(ISP):363.18([M+H]+)。

实施例6

太阳城集团(S)-4-甲基-N-(4-(吗啉-2-基)苯基)-3-苯基-1H-吡唑-5-甲酰胺盐酸盐

类似于实施例1,使用4-甲基-5-苯基-2H-吡唑-3-甲酸(CAS-879770-33-9)代替5-苯基-1H-吡唑-3-甲酸制备标题化合物。

太阳城集团灰白色固体。MS(ISP):363.5([M+H]+)。

实施例7

太阳城集团(S)-3-(4-甲氧基苯基)-N-(4-(吗啉-2-基)苯基)-1H-吡唑-5-甲酰胺盐酸盐

太阳城集团类似于实施例1,使用5-(4-甲氧基-苯基)-2H-吡唑-3-甲酸(CAS-27069-16-5)代替5-苯基-1H-吡唑-3-甲酸制备标题化合物。

白色固体。MS(ISP):379.4([M+H]+)。

实施例8

(S)-3-(2-氟苯基)-N-(4-(吗啉-2-基)苯基)-1H-吡唑-5-甲酰胺盐酸盐

太阳城集团类似于实施例1,使用5-(2-氟-苯基)-2H-吡唑-3-甲酸(CAS-859155-87-6)代替3-苯基-1H-吡唑-5-甲酸制备标题化合物。

白色固体。MS(ISP):367.1([M+H]+)。

实施例9

(S)-3-(2-甲氧基苯基)-N-(4-(吗啉-2-基)苯基)-1H-吡唑-5-甲酰胺盐酸盐

类似于实施例1,使用5-(2-甲氧基-苯基)-2H-吡唑-3-甲酸(CAS-834868-54-1)代替3-苯基-1H-吡唑-5-甲酸制备标题化合物。

太阳城集团白色固体。MS(ISP):379.4([M+H]+)。

实施例10

(S)-3-(2-氯苯基)-N-(4-(吗啉-2-基)苯基)-1H-吡唑-5-甲酰胺盐酸盐

类似于实施例1,使用3-(2-氯苯基)-1H-吡唑-5-甲酸(CAS-890621-13-3)代替3-苯基-1H-吡唑-5-甲酸制备标题化合物。

太阳城集团白色固体。MS(ISP):383.2([M+H]+)。

实施例11

(S)-3-(3,4-二甲氧基苯基)-N-(4-(吗啉-2-基)苯基)-1H-吡唑-5-甲酰胺盐酸盐

太阳城集团类似于实施例1,使用5-(3,4-二甲氧基-苯基)-2H-吡唑-3-甲酸(CAS-909857-88-1)代替3-苯基-1H-吡唑-5-甲酸制备标题化合物。

灰白色固体。MS(ISP):409.3([M+H]+)。

实施例12

太阳城集团(R)-3-(4-氯苯基)-N-(4-(吗啉-2-基)苯基)-1H-吡唑-5-甲酰胺盐酸盐

太阳城集团类似于实施例1,使用(R)-2-(4-氨基苯基)吗啉-4-甲酸叔丁酯代替(S)-2-(4-氨基苯基)吗啉-4-甲酸叔丁酯且3-(4-氯苯基)-1H-吡唑-5-甲酸(CAS-54006-63-2)代替3-苯基-1H-吡唑-5-甲酸制备标题化合物。

太阳城集团灰白色固体。MS(ISP):383.1([M+H]+)。

制备(R)-2-(4-氨基苯基)吗啉-4-甲酸叔丁酯:

步骤a)(R)-2-(4-溴苯基)吗啉:

将2.27g(RS)-2-(4-溴-苯基)-吗啉(CAS-1131220-82-0)在Chiralpak IA(8x32em)上使用正庚烷/乙醇(1:11)+0.1%DEA分离。

太阳城集团(S)-2-(4-溴-苯基)-吗啉:收集自7.6min至9.4min。

太阳城集团收率0.97g(42.9%)且97.4%ee

(R)-2-(4-溴-苯基)-吗啉:收集自9.8min至13.9min

收率0.99g(43.6%)且97.4%ee

步骤b)(R)-2-(4-溴苯基)吗啉-4-甲酸叔丁酯:

太阳城集团将在THF(60ml)中的(R)-2-(4-溴苯基)吗啉(6g,24.8mmol)和N,N-二异丙基乙胺(3.84g,5.19ml,29.7mmol)用二碳酸二叔丁酯(6.49g,29.7mmol)处理。将反应混合物在rt搅拌17h,真空中浓缩,用乙酸乙酯稀释,用1M-柠檬酸洗涤,用硫酸镁干燥,过滤并在真空中浓缩。将粗物质从庚烷/乙酸乙酯结晶,得到8.48g(87%)(R)-2-(4-溴苯基)吗啉-4-甲酸叔丁酯,为白色固体。MS(ISP):344.1([M+H]+)。

步骤c)(R)-2-(4-(二苯基亚甲基氨基)苯基)吗啉-4-甲酸叔丁酯:

太阳城集团在氩气下将(R)-2-(4-溴苯基)吗啉-4-甲酸叔丁酯(5.4g,15.8mmol),二苯基甲亚胺(3.43g,3.17ml,18.9mmol),BINAP(737mg,1.18mmol)和Pd2(dba)3(361mg,0.39mmol)溶解在干燥且除气的甲苯(108ml)中并用叔丁醇钠(2.12g,22.1mmol)处理。将深褐色混合物在90℃搅拌18h。将黄色/褐色反应混合物用甲苯(100ml)稀释,冷却至rt并用水萃取两次。将有机层分离,用硫酸镁干燥并在真空中浓缩。将粗产物用50ml己烷稀释,搅拌1h并滤出,产生黄色固体(7.4g),将其通过柱色谱(50g硅胶,5%至15%乙酸乙酯/庚烷)纯化。将合并且浓缩的级分悬浮在己烷中,搅拌17h,滤出并在真空中干燥,获得6.15g(86%)黄色固体。MS(ISP):443.4([M+H]+)。

步骤d)(R)-2-(4-氨基苯基)吗啉-4-甲酸叔丁酯:

将(R)-2-(4-(二苯基亚甲基氨基)苯基)吗啉-4-甲酸叔丁酯(6g,13.6mmol),甲酸铵(12.8g,203mmol)和Pd/C5%(721mg,0.339mmol)在甲醇(103ml)中的悬浮液在60℃搅拌2h。将反应混合物过滤并浓缩。将残余物溶解在乙酸乙酯和水中。将有机相用0.5M HCl萃取两次。将合并的水相用2M-NaOH碱化并用DCM萃取两次。将有机相用硫酸镁干燥,过滤并在真空中干燥,获得3.04g灰白色固体。MS(ISP):279.1([M+H]+)。

实施例13

(R)-3-(2-氯苯基)-N-(4-(吗啉-2-基)苯基)-1H-吡唑-5-甲酰胺盐酸盐

类似于实施例1,使用(R)-2-(4-氨基苯基)吗啉-4-甲酸叔丁酯(实施例12中制备)代替(S)-2-(4-氨基苯基)吗啉-4-甲酸叔丁酯且3-(2-氯苯基)-1H-吡唑-5-甲酸(CAS-890621-13-3)代替3-苯基-1H-吡唑-5-甲酸制备标题化合物。

浅褐色固体。MS(ISP):383.1([M+H]+)。

实施例14

(S)-3-(4-氯苯基)-N-(4-(吗啉-2-基)苯基)-1H-吡唑-5-甲酰胺盐酸盐

太阳城集团类似于实施例1,使用3-(4-氯苯基)-1H-吡唑-5-甲酸(CAS-54006-63-2)代替3-苯基-1H-吡唑-5-甲酸制备标题化合物。

太阳城集团灰白色固体。MS(ISP):383.1([M+H]+)。

实施例15

(R)-3-(3-氯苯基)-N-(4-(吗啉-2-基)苯基)-1H-吡唑-5-甲酰胺盐酸盐

类似于实施例1,使用(R)-2-(4-氨基苯基)吗啉-4-甲酸叔丁酯(实施例12中制备)代替(S)-2-(4-氨基苯基)吗啉-4-甲酸叔丁酯且3-(3-氯苯基)-1H-吡唑-5-甲酸(CAS-595610-50-7)代替3-苯基-1H-吡唑-5-甲酸制备标题化合物。

白色固体。MS(ISP):383.1([M+H]+)。

实施例16

(R)-3-(3-甲氧基苯基)-N-(4-(吗啉-2-基)苯基)-1H-吡唑-5-甲酰胺盐酸盐

太阳城集团类似于实施例1,使用(R)-2-(4-氨基苯基)吗啉-4-甲酸叔丁酯(实施例12中制备)代替(S)-2-(4-氨基苯基)吗啉-4-甲酸叔丁酯且3-(3-甲氧基苯基)-1H-吡唑-5-甲酸(CAS-890591-64-7)代替3-苯基-1H-吡唑-5-甲酸制备标题化合物。

太阳城集团白色固体。MS(ISP):379.2([M+H]+)。

实施例17

太阳城集团(S)-3-(3-氯苯基)-1-甲基-N-(4-(吗啉-2-基)苯基)-1H-吡唑-5-甲酰胺盐酸盐

太阳城集团类似于实施例1,使用5-(3-氯-苯基)-2-甲基-2H-吡唑-3-甲酸(CAS-93618-32-7)代替3-苯基-1H-吡唑-5-甲酸制备标题化合物。

白色固体。MS(ISP):397.1([M+H]+)。

实施例18

(S)-1-甲基-N-(4-(吗啉-2-基)苯基)-5-苯基-1H-吡唑-3-甲酰胺盐酸盐

太阳城集团类似于实施例1,使用1-甲基-5-苯基-1H-吡唑-3-甲酸(CAS-10199-53-8)代替3-苯基-1H-吡唑-5-甲酸制备标题化合物。

灰白色固体。MS(ISP):363.2([M+H]+)。

实施例19

(R)-1-甲基-N-(4-(吗啉-2-基)苯基)-3-苯基-1H-吡唑-5-甲酰胺盐酸盐

类似于实施例1,使用(R)-2-(4-氨基苯基)吗啉-4-甲酸叔丁酯(实施例12中制备)代替(S)-2-(4-氨基苯基)吗啉-4-甲酸叔丁酯且1-甲基-3-苯基-1H-吡唑-5-甲酸(CAS-10250-64-3)代替3-苯基-1H-吡唑-5-甲酸制备标题化合物。

太阳城集团白色固体。MS(ISP):363.3([M+H]+)。

实施例20

(S)-5-(3-氰基苯基)-N-(4-(吗啉-2-基)苯基)-1H-吡唑-3-甲酰胺盐酸盐

类似于实施例1,使用5-(3-氰基-苯基)-1H-吡唑-3-甲酸(CAS-1242427-10-6)代替3-苯基-1H-吡唑-5-甲酸制备标题化合物。

太阳城集团浅褐色固体。MS(ISP):374.0([M+H]+)。

实施例21

(S)-3-(4-氰基苯基)-1-甲基-N-(4-(吗啉-2-基)苯基)-1H-吡唑-5-甲酰胺盐酸盐

类似于实施例1,使用3-(4-氰基苯基)-1-甲基-1H-吡唑-5-甲酸代替3-苯基-1H-吡唑-5-甲酸制备标题化合物。

太阳城集团浅褐色固体。MS(ISP):388.0([M+H]+)。

制备3-(4-氰基苯基)-1-甲基-1H-吡唑-5-甲酸:

太阳城集团 步骤a)(Z)-4-(4-氰基苯基)-2-羟基-4-氧代丁-2-烯酸乙酯:

在干燥的烧瓶中,在氩气氛下,将钠(317mg,13.8mmol,Eq:1.00)分份加入至乙醇(9.0ml)中。(温度升高至60℃)。将反应混合物在0℃冷却。然后滴加草酸二乙酯(2.01g,1.87ml,13.8mmol,Eq:1.00),接着是在乙醇(3.00ml)中的4-乙酰基苄腈(2g,13.8mmol,Eq:1.00)。出现白色固体。将反应物用机械搅拌器搅拌过夜并通过TLC监控。然后将反应混合物在真空中浓缩。将残余物在0℃冷却并将水加入烧瓶中。将1M HCl加入至该溶液(pH=3),然后将溶液用EtOAc萃取两次。将有机层用20mL盐水洗涤三次。将所得到的有机层用MgSO4干燥,过滤并在真空中浓缩,给出灰白色固体。将该灰白色固体与乙醚在0℃混合。将悬浮液过滤,给出白色固体(2.082g,61.6%)。

太阳城集团 步骤b)3-(4-氰基苯基)-1-甲基-1H-吡唑-5-甲酸乙酯:

在氩气氛下在rt.将(Z)-4-(4-氰基苯基)-2-羟基-4-氧代丁-2-烯酸乙酯(500mg,2.04mmol,Eq:1.00)溶解在乙醇(10ml)中。滴加甲基肼(95.9mg,110μl,2.04mmol,Eq:1.00)(溶液变成黄色)。将溶液在rt搅拌过夜,接着在50℃加热6h,冷却至rt并在真空中浓缩。将残余物直接通过柱色谱(20g)庚烷/EtOAC:9/1纯化,给出预期的吡唑(173mg,33.2%),为白色固体。

MS(ISP):256.3([M+H]+)。

步骤c)3-(4-氰基苯基)-1-甲基-1H-吡唑-5-甲酸:

向3-(4-氰基苯基)-1-甲基-1H-吡唑-5-甲酸乙酯(70mg,274μmol,Eq:1.00)在THF(5ml)和MeOH(1.00ml)中的溶液中加入LiOH1M(548μl,548μmol,Eq:2)。将混合物在rt.搅拌约8h,然后用水和HCl1N处理(pH:3)。将混合物用乙酸乙酯萃取两次。将所得到的有机层合并,用盐水洗涤并用MgSO4干燥,过滤并浓缩,给出期望的化合物(55mg,88.3%),为白色固体。

MS(SP):228.2(M+1)。

实施例22

(S)-3-(4-氟苯基)-1-甲基-N-(4-(吗啉-2-基)苯基)-1H-吡唑-5-甲酰胺盐酸盐

类似于实施例1,使用5-(4-氟-苯基)-2-甲基-1H-吡唑-3-甲酸(CAS-943863-70-5)代替3-苯基-1H-吡唑-5-甲酸制备标题化合物。

浅褐色固体。MS(ISP):381.1([M+H]+)。

实施例23

(S)-3-(3-甲氧基苯基)-1-甲基-N-(4-(吗啉-2-基)苯基)-1H-吡唑-5-甲酰胺盐酸盐

类似于实施例1,使用5-(3-甲氧基-苯基)-2-甲基-1H-吡唑-3-甲酸(CAS-1022575-47-8)代替3-苯基-1H-吡唑-5-甲酸制备标题化合物。

太阳城集团浅褐色固体。MS(ISP):381.1([M+H]+)。

实施例24

(S)-3-(3-氰基苯基)-1-甲基-N-(4-(吗啉-2-基)苯基)-1H-吡唑-5-甲酰胺盐酸盐

太阳城集团类似于实施例1,使用3-(3-氰基苯基)-1-甲基-1H-吡唑-5-甲酸代替3-苯基-1H-吡唑-5-甲酸制备标题化合物。

太阳城集团浅褐色固体。MS(ISP):388.0([M+H]+)。

太阳城集团制备3-(3-氰基苯基)-1-甲基-1H-吡唑-5-甲酸:

类似于3-(4-氰基苯基)-1-甲基-1H-吡唑-5-甲酸,实施例21中所述。

实施例25

太阳城集团(S)-3-(3-氰基苯基)-1-乙基-N-(4-(吗啉-2-基)苯基)-1H-吡唑-5-甲酰胺盐酸盐

太阳城集团类似于实施例1,使用3-(3-氰基苯基)-1-乙基-1H-吡唑-5-甲酸代替3-苯基-1H-吡唑-5-甲酸制备标题化合物。

太阳城集团灰白色固体。MS(ISP):402.1([M+H]+)。

太阳城集团制备3-(3-氰基苯基)-1-乙基-1H-吡唑-5-甲酸:

太阳城集团类似于3-(4-氰基苯基)-1-甲基-1H-吡唑-5-甲酸,实施例21中所述。

实施例26

太阳城集团(S)-3-(4-氰基苯基)-1-乙基-N-(4-(吗啉-2-基)苯基)-1H-吡唑-5-甲酰胺盐酸盐

类似于实施例1,使用3-(4-氰基苯基)-1-乙基-1H-吡唑-5-甲酸代替3-苯基-1H-吡唑-5-甲酸制备标题化合物。

灰白色固体。MS(ISP):402.1([M+H]+)。

太阳城集团制备3-(4-氰基苯基)-1-乙基-1H-吡唑-5-甲酸:

类似于3-(4-氰基苯基)-1-甲基-1H-吡唑-5-甲酸,实施例21中所述。

实施例27

太阳城集团(S)-5-(3-氰基苯基)-4-甲基-N-(4-(吗啉-2-基)苯基)-1H-吡唑-3-甲酰胺盐酸盐

类似于实施例1,使用5-(3-氰基苯基)-4-甲基-1H-吡唑-3-甲酸代替3-苯基-1H-吡唑-5-甲酸制备标题化合物。

太阳城集团褐色固体。MS(ISP):388.1([M+H]+)。

太阳城集团制备5-(3-氰基苯基)-4-甲基-1H-吡唑-3-甲酸:

步骤a)(Z)-4-(3-氰基苯基)-1-乙氧基-3-甲基-1,4-二氧代丁-2-烯-2-酸 锂:

在氩气氛下向在THF中的LiHMDS1M(7.94ml,7.94mmol,Eq:1.00)在Et2O(50ml)中在-78℃的机械搅拌的溶液中滴加3-丙酰基苄腈(1.264g,7.94mmol,Eq:1.00)在Et2O(10.0ml)中的溶液。在将混合物在相同温度搅拌另外45min的太阳城集团后,滴加草酸二乙酯(1.22g,1.13ml,8.34mmol,Eq:1.05)。使反应混合物升温至rt并搅拌3天。形成的沉淀通过过滤收集,用二乙醚洗涤,并在真空下干燥,得到所期望的锂盐,为黄色固体(929mg,44.1%)。

太阳城集团 步骤b)5-(3-氰基苯基)-4-甲基-1H-吡唑-3-甲酸乙酯:

太阳城集团在rt向(Z)-4-(3-氰基苯基)-1-乙氧基-3-甲基-1,4-二氧代丁-2-烯-2-酸锂(400mg,1.51mmol,Eq:1.00)在乙醇(10ml)中的溶液中加入盐酸肼(113mg,1.65mmol,Eq:1.093),给出橙色溶液。将所得到的混合物在相同温度搅拌过夜。1天后将溶剂在减压下除去并向混合物加入盐水。将溶液用AcOEt萃取两次,并将合并的有机层用MgSO4干燥,过滤并浓缩,给出期望的化合物,为黄色胶状物(114mg,26.6%)。

MS(ISP):256.0([M+H]+)。

步骤c)3-(3-氰基苯基)-1-甲基-1H-吡唑-5-甲酸:

向5-(3-氰基苯基)-4-甲基-1H-吡唑-3-甲酸乙酯(100mg,392μmol,Eq:1.00)于在MeOH(1.00ml)中的THF(5ml)中的溶液中加入LiOH1M(2.35ml,2.35mmol,Eq:6)。将混合物搅拌过夜。向残余物加入水和HCl1N(pH:1),将该水相用乙酸乙酯萃取两次,所得到的有机层将合并并用盐水洗涤,用MgSO4干燥,过滤并在真空中浓缩,得到所期望的化合物(52mg,52.6%),为黄色固体。

太阳城集团MS(ISP):228.1(M+1)。

实施例28

太阳城集团(S)-5-(5-氰基-2-氟苯基)-N-(4-(吗啉-2-基)苯基)-1H-吡唑-3-甲酰胺盐酸盐

类似于实施例1,使用5-(5-氰基-2-氟苯基)-1H-吡唑-3-甲酸代替3-苯基-1H-吡唑-5-甲酸制备标题化合物。

褐色固体。MS(ISP):392.0([M+H]+)。

制备5-(5-氰基-2-氟苯基)-1H-吡唑-3-甲酸:

太阳城集团类似于5-(3-氰基苯基)-4-甲基-1H-吡唑-3-甲酸,实施例21中所述。

实施例29

(S)-1-(4-氟苯基)-N-(4-(吗啉-2-基)苯基)-1H-吡唑-3-甲酰胺盐酸盐

类似于实施例1,使用在THF中的1-(4-氟苯基)-1H-吡唑-3-甲酸(CAS-1152535-34-6)代替在DMF中的3-苯基-1H-吡唑-5-甲酸制备标题化合物。

白色固体。MS(ISP):367.0([M+H]+)。

实施例30

(S)-N-(4-(吗啉-2-基)苯基)-1-苯基-1H-吡唑-5-甲酰胺盐酸盐

太阳城集团类似于实施例1,使用1-苯基-1H-吡唑-5-甲酸(CAS-1133-77-3)代替3-苯基-1H-吡唑-5-甲酸制备标题化合物。

白色固体。MS(ISP):349.1([M+H]+)。

实施例3l

(R)-1-(4-氟苯基)-N-(4-(吗啉-2-基)苯基)-1H-吡唑-3-甲酰胺盐酸盐

类似于实施例1,使用(R)-2-(4-氨基苯基)吗啉-4-甲酸叔丁酯代替(S)-2-(4-氨基苯基)吗啉-4-甲酸叔丁酯且1-(4-氟苯基)-1H-吡唑-3-甲酸(CAS-1152535-34-6)代替3-苯基-1H-吡唑-5-甲酸制备标题化合物。

白色固体。MS(ISP):367.0([M+H]+)。

实施例32

太阳城集团(S)-1-(5-氯吡啶-2-基)-N-(4-(吗啉-2-基)苯基)-1H-吡唑-3-甲酰胺盐酸盐

太阳城集团类似于实施例47,在步骤b)中使用2-溴-5-氯吡啶代替2-氯-5-(三氟甲基)嘧啶获得标题化合物。

太阳城集团灰白色固体。MS(ISP):384.2([M+H]+)。

实施例33

太阳城集团(S)-N-(4-(吗啉-2-基)苯基)-1-(5-(三氟甲基)吡啶-2-基)-1H-吡唑-3-甲酰胺盐酸盐

太阳城集团类似于实施例47,在步骤b)中使用2-溴-5-(三氟甲基)吡啶代替2-氯-5-(三氟甲基)嘧啶获得标题化合物。

白色固体。MS(ISP):418.2([M+H]+)。

实施例34

(S)-1-(4-氰基苯基)-N-(4-(吗啉-2-基)苯基)-1H-吡唑-3-甲酰胺盐酸盐

类似于实施例47,在步骤b)中使用2-溴-苄腈代替2-氯-5-(三氟甲基)嘧啶获得标题化合物。

灰白色固体。MS(ISP):374.3([M+H]+)。

实施例35

(R)-N-(4-(吗啉-2-基)苯基)-1-(5-(三氟甲基)吡啶-2-基)-1H-吡唑-3-甲酰胺盐酸盐

太阳城集团类似于实施例1,使用(R)-2-(4-氨基苯基)吗啉-4-甲酸叔丁酯代替(S)-2-(4-氨基苯基)吗啉-4-甲酸叔丁酯且1-(5-三氟甲基-吡啶-2-基)-1H-吡唑-3-甲酸(CAS-1006962-72-6)代替3-苯基-1H-吡唑-5-甲酸制备标题化合物。

白色固体。MS(ISP):418.2([M+H]+)。

实施例36

(S)-3-(3-氰基苯基)-N-(4-(哌啶-3-基)苯基)-1H-吡唑-5-甲酰胺盐酸盐

类似于实施例1,使用5-(3-氰基-苯基)-1H-吡唑-3-甲酸(CAS-1242427-10-6)代替3-苯基-1H-吡唑-5-甲酸制备标题化合物。

太阳城集团白色固体。MS(ISP):372.0([M+H]+)。

实施例37

太阳城集团(R)-3-(3-氰基苯基)-N-(4-(哌啶-3-基)苯基)-1H-吡唑-5-甲酰胺盐酸盐

太阳城集团类似于实施例1,使用(R)-2-(4-氨基苯基)吗啉-4-甲酸叔丁酯代替(S)-2-(4-氨基苯基)吗啉-4-甲酸叔丁酯且5-(3-氰基-苯基)-1H-吡唑-3-甲酸(CAS-1242427-10-6)代替3-苯基-1H-吡唑-5-甲酸制备标题化合物。

白色固体。MS(ISP):372.0([M+H]+)。

实施例38

太阳城集团(外消旋)3-(3-氰基苯基)-N-(4-(吡咯烷-3-基)苯基)-1H-吡唑-5-甲酰胺盐酸盐

太阳城集团类似于实施例1,使用3-(4-氨基-苯基)-吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(CAS-908334-28-1)代替(S)-2-(4-氨基苯基)吗啉-4-甲酸叔丁酯且5-(3-氰基-苯基)-1H-吡唑-3-甲酸(CAS-1242427-10-6)代替3-苯基-1H-吡唑-5-甲酸制备标题化合物。

太阳城集团白色固体。MS(ISP):357.8([M+H]+)。

实施例39

太阳城集团(S)-5-(3-氰基-4-氟苯基)-N-(4-(吗啉-2-基)苯基)-1H-吡唑-3-甲酰胺盐酸盐

类似于实施例1,使用5-(3-氰基-4-氟-苯基)-1H-吡唑-3-甲酸(如以下:a-d所示制备)代替3-苯基-1H-吡唑-5-甲酸制备标题化合物。

太阳城集团白色固体。MS(ISP):392.1([M+H]+)。

太阳城集团制备5-(3-氰基-4-氟-苯基)-1H-吡唑-3-甲酸:

太阳城集团a)(Z)-4-(3-溴-4-氟苯基)-1-乙氧基-1,4-二氧代丁-2-烯-2-酸锂:在-78℃向在THF中的LiHMDS1M机械搅拌的溶液(9.22ml,9.22mmol,Eq:1)中加入Et2O(31.2ml),给出黄色溶液。在氩气氛下向该混合物滴加1-(3-溴-4-氟苯基)乙酮(2g,9.22mmol,Eq:1.00)在Et2O(15.6ml)中的溶液。然后将混合物在相同温度搅拌另外45min的太阳城集团。然后滴加草酸二乙酯(1.41g,1.31ml,9.68mmol,Eq:1.05)。使反应混合物升温至rt并搅拌另外2天。形成的沉淀通过过滤收集,用二乙醚洗涤,并在真空下干燥,得到所期望的锂盐,为浅-黄色固体(2.677g,89.9%)。

b)5-(3-溴-4-氟苯基)-1H-吡唑-3-甲酸乙酯:在rt向(Z)-4-(3-溴-4-氟苯基)-1-乙氧基-1,4-二氧代丁-2-烯-2-酸锂(600mg,1.86mmol,Eq:1.00)在乙醇(25ml)中的溶液中加入肼一水合物(139mg,2.03mmol,Eq:1.093),给出白色悬浮液,1h后悬浮液变成溶液。将所得到的混合物搅拌过夜。1天后反应完全。搅拌后将溶剂在减压下除去并向混合物加入盐水,将溶液用AcOEt萃取两次,并将合并的有机层用Na2SO4干燥,过滤并浓缩,给出5-(3-溴-4-氟苯基)-1H-吡唑-3-甲酸乙酯,为白色固体(460mg,79.1%)。MS(ISP):314.8([M+H]+)。

c)5-(3-氰基-4-氟苯基)-1H-吡唑-3-甲酸乙酯:将5-(3-溴-4-氟苯基)-1H-吡唑-3-甲酸乙酯(300mg,958μmol,Eq:1.00),氰化锌(65.2mg,556μmol,Eq:0.58)和Pd(PPh3)4(111mg,95.8μmol,Eq:0.1)的混合物在160℃在DMF(2ml)(在分子筛上储存)中在微波中加热30mins。将混合物在EtOAc(40mL)和2N NH4OH(40mL)之间分配。将有机相用2N NH4OH萃取,用盐水洗涤,用MgSO4干燥并在真空中浓缩。将粗混合物通过柱色谱(10g)洗脱剂:庚烷/EtOAc:95/5纯化,给出所期望的腈化合物,为白色结晶固体(180mg,72.5%)。MS(ISP):260.0([M+H]+)。

d)5-(3-氰基-4-氟苯基)-1H-吡唑-3-甲酸:向5-(3-氰基-4-氟苯基)-1H-吡唑-3-甲酸乙酯(180mg,694μmol,Eq:1.00)在THF(5.00ml)和MeOH(1ml)中的溶液中加入LiOH1M(4.17ml,4.17mmol,Eq:6)。将混合物搅拌过夜。在加入LiOH后溶液变成橙色。向残余物加入水和HCl1N(pH:1),将该水相用乙酸乙酯萃取两次;将所得到的有机层合并并用盐水洗涤。然后用MgSO4干燥,过滤并浓缩,给出期望的化合物(45mg,22.4%),为白色固体。MS(ISP):232.4([M+H]+)。

实施例40

太阳城集团(S)-3-(3-(二氟甲氧基)苯基)-N-(4-(吗啉-2-基)苯基)-1H-吡唑-5-甲酰胺盐酸盐

太阳城集团类似于实施例1,使用5-(3-二氟甲氧基-苯基)-2H-吡唑-3-甲酸(如以下:a-c所示制备)代替3-苯基-1H-吡唑-5-甲酸制备标题化合物。

太阳城集团白色固体。MS(ISP):415.2([M+H]+)。

制备5-(3-二氟甲氧基-苯基)-2H-吡唑-3-甲酸:

太阳城集团a)5-(3-二氟甲氧基-苯基)-2H-吡唑-3-甲酸甲酯:在rt向(Z)-4-(3-(二氟甲氧基)苯基)-2-羟基-4-氧代丁-2-烯酸甲酯(CAS-832741-03-4)(800mg,2.94mmol,Eq:1.00)在乙醇(20ml)中的溶液中加入盐酸肼(220mg,3.21mmol,Eq:1.093),给出橙色悬浮液。将所得到的混合物在相同温度搅拌过夜。1天后反应完全。搅拌后将溶剂在减压下除去并向混合物加入盐水,将溶液用AcOEt萃取两次,并将合并的有机层用MgSO4干燥,过滤并浓缩,给出期望的化合物,为浅-褐色固体(630mg,79.9%)。MS(ISP):269.0([M+H]+)。

太阳城集团b)5-(3-二氟甲氧基-苯基)-2H-吡唑-3-甲酸:向5-(3-二氟甲氧基-苯基)-2H-吡唑-3-甲酸甲酯(620mg,2.31mmol,Eq:1.00)在THF(10ml)和MeOH(2.00ml)中的溶液中加入LiOH1M(13.9ml,13.9mmol,Eq:6),给出褐色溶液。将混合物搅拌过夜。在加入LiOH后溶液变成。向残余物加入水和HCl1N(pH∶1),将该水相用乙酸乙酯萃取两次,将所得到的有机层合并并用盐水洗涤。然后用MgSO4干燥,过滤并浓缩,给出期望的化合物(510mg,86.8%),为浅-黄色固体。MS(ISP):255.0([M+H]+)。

实施例41

太阳城集团(S)-5-(3-(二氟甲氧基)苯基)-1-乙基-N-(4-(吗啉-2-基)苯基)-1H-吡唑-3-甲酰胺盐酸盐

a)(S)-2-(4-(3-(3-(二氟甲氧基)苯基)-1H-吡唑-5-甲酰胺基)苯基)吗啉-4-甲酸叔丁酯:在25mL圆底烧瓶中,将3-(3-(二氟甲氧基)苯基)-1H-吡唑-5-甲酸(515mg,2.03mmol,Eq:1.1)(制备描述于实施例40中),(S)-2-(4-氨基苯基)吗啉-4-甲酸叔丁酯(513mg,1.84mmol,Eq:1.00)(制备描述于实施例1中),N-甲基吗啉(559mg,608μl,5.53mmol,Eq:3)和HBTU(1.05g,2.76mmol,Eq:1.5)与DMF(2ml)合并,给出黄色溶液。将反应混合物在60℃搅拌过夜。将混合物倾倒入水(10ml)中并用EtOAc萃取两次。将有机层用NaHCO3,盐水洗涤,用MgSO4干燥,过滤并在真空中浓缩,给出褐色粗混合物。将该混合物用庚烷稀释,搅拌15分钟并将悬浮液过滤。将所得到的固体用庚烷洗涤几次,得到所期望的化合物,为褐色固体(550mg,58.0%)。

b)(S)-2-(4-(5-(3-(二氟甲氧基)苯基)-1-乙基-1H-吡唑-3-甲酰胺基)苯基)吗啉-4-甲酸叔丁酯和(S)-2-(4-(3-(3-(二氟甲氧基)苯基)-1-乙基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)苯基)吗啉-4-甲酸叔丁酯:

向(S)-2-(4-(3-(3-(二氟甲氧基)苯基)-1H-吡唑-5-甲酰胺基)苯基)吗啉-4-甲酸叔丁酯(70mg,136μmol,Eq:1.00)和碳酸钾(41.4mg,299μmol,Eq:2.2)在DMF(2ml)中的混合物中加入碘代乙烷(25.5mg,13.2μl,163μmol,Eq:1.2)并在rt搅拌过夜。向所得到的混合物中加入水并将有机相用水和盐水萃取,然后将有机层用MgSO4干燥,滤出并在真空中浓缩,给出粗化合物,为异构体的混合物,将其通过柱色谱(10g-筒)分离,给出:(S)-2-(4-(5-(3-(二氟甲氧基)苯基)-1-乙基-1H-吡唑-3-甲酰胺基)苯基)吗啉-4-甲酸叔丁酯(17mg,23.0%)和(S)-2-(4-(3-(3-(二氟甲氧基)苯基)-1-乙基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)苯基)吗啉-4-甲酸叔丁酯(27mg,36.6%)。

c)(S)-5-(3-(二氟甲氧基)苯基)-1-乙基-N-(4-(吗啉-2-基)苯基)-1H-吡唑-3-甲酰胺盐酸盐:向(S)-2-(4-(5-(3-(二氟甲氧基)苯基)-1-乙基-1H-吡唑-3-甲酰胺基)苯基)吗啉-4-甲酸叔丁酯(17mg)在二噁烷(40.8μl)中的溶液中加入在二噁烷中的4M-HCl(117μl,470μmol,Eq:15)。将反应混合物在60℃搅拌过夜。向混合物中加入2ml的二乙醚并在室温搅拌15min。将混合物过滤并在高真空中浓缩,给出预期的盐酸盐,为白色固体(9mg,60.0%)。MS(ISP):443.1([M+H]+)。

实施例42

(S)-3-(3-(二氟甲氧基)苯基)-1-乙基-N-(4-(吗啉-2-基)苯基)-1H-吡唑-5-甲酰胺盐酸盐

向(S)-2-(4-(3-(3-(二氟甲氧基)苯基)-1-乙基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)苯基)吗啉-4-甲酸叔丁酯(27mg)(实施例41,b)中制备)在二噁烷(40.8μl)中的溶液中加入在二噁烷中的4M-HCl(117μl,470μmol,Eq:15)。将反应混合物在60℃搅拌过夜。向混合物中加入2ml的二乙醚并在室温搅拌15min。将混合物过滤并在高真空中浓缩,给出预期的盐酸盐,为白色固体(15mg,63%)。MS(ISP):443.1([M+H]+)。

实施例43

太阳城集团(S)-3-(3-氰基-2-氟苯基)-N-(4-(吗啉-2-基)苯基)-1H-吡唑-5-甲酰胺盐酸盐

类似于实施例39,使用1-(3-溴-2-氟苯基)乙酮代替1-(3-溴-4-氟苯基)乙酮制备标题化合物。

太阳城集团白色固体。MS(ISP):392.1([M+H]+)。

实施例44

太阳城集团(S)-3-(3-(二氟甲氧基)苯基)-1-甲基-N-(4-(吗啉-2-基)苯基)-1H-吡唑-5-甲酰胺盐酸盐

类似于实施例42,使用甲基碘代替碘代乙烷制备标题化合物。

白色固体。MS(ISP):429.1([M+H]+)。

实施例45

太阳城集团(S)-1-(4-(二氟甲氧基)苯基)-N-(4-(吗啉-2-基)苯基)-1H-吡唑-3-甲酰胺盐酸盐

太阳城集团 a)2-氯-2-(2-(4-(二氟甲氧基)苯基)肼叉)乙酸乙酯

将4-(二氟甲氧基)苯胺(796mg,5mmol)溶解在四氟硼酸(2.38g,1.7ml,13.0mmol)和水(2ml)中。在冷却至0℃后,缓慢加入亚硝酸钠(345mg,5.0mmol)在水(0.75ml)中的溶液。将混合物搅拌30min并将稠密的沉淀物通过过滤收集并用二乙醚(约3ml)洗涤。将浅红色固体溶解在1.5ml的丙酮中并加入5ml的二乙醚。在冷却下搅拌15min后,将白色固体过滤,用二乙醚洗涤并在HV干燥15min,获得四氟硼酸4-二氟甲氧基-重氮苯。

太阳城集团将该重氮盐(851mg,3.3mmol)加入到2-氯-3-氧代丁酸乙酯(494mg,420μl,3mmol)在吡啶(0.8ml)和水(0.8ml)中的溶液中。将非常浓稠的悬浮液在-5℃搅拌30min。将固体过滤,用冰冷的水洗涤并在真空中干燥,获得橙色固体(0.67g,76%)。MS(ISP):293.1([{35Cl}M+H]+),295.2([{37Cl}M+H]+)。

b)1-(4-(二氟甲氧基)苯基)-1H-吡唑-3-甲酸乙酯

将2-氯-2-(2-(4-(二氟甲氧基)苯基)肼叉)乙酸乙酯(585mg,2mmol)溶解在甲苯(4ml)中并加入2,5-降冰片二烯(906mg,1ml,9.83mmol)和三乙胺(587mg,808μl,5.8mmo1)。将反应混合物在70℃搅拌30min并使反应混合物在室温搅拌过夜。将固体滤出并用甲苯洗涤。将有机部分蒸发并将获得的残余物溶解在二甲苯(12ml)中并回流2小时。将溶剂蒸发并将残余物通过柱色谱(50g硅胶,二氯甲烷)纯化,获得387mg(69%)的浅黄色固体。MS(ISP):283.1([M+H]+)。

c)1-(4-(二氟甲氧基)苯基)-1H-吡唑-3-甲酸

向1-(4-(二氟甲氧基)苯基)-1H-吡唑-3-甲酸乙酯(350mg,1.24mmol)在THF(3.1ml),甲醇(1.6ml),水(1.6ml)的混合物中的溶液加入氢氧化锂水合物(89mg,3.72mmo1)。将溶液加热至80℃历时2h。将大部分的有机溶剂在减压下除去。加入碳酸氢钠溶液和乙酸乙酯并将有机层分离。通过加入25%盐酸水溶液使水层成酸性并将混合物用乙酸乙酯萃取2次。将有机层合并,干燥(MgSO4)并蒸发。将产物在真空中干燥并直接用于下一步骤。

d)(S)-2-(4-(1-(4-(二氟甲氧基)苯基)-1H-吡唑-3-甲酰胺基)苯基)吗啉-4- 甲酸叔丁酯

太阳城集团将(S)-2-(4-氨基苯基)吗啉-4-甲酸叔丁酯(110mg,0.39mmol),1-(4-(二氟甲氧基)苯基)-1H-吡唑-3-甲酸(100mg,0.39mmol),HBTU(167mg,0.44mmol)和N-甲基吗啉(119mg,130μl,1.18mmol)与DMF(2ml)合并,给出浅黄色溶液。将反应混合物在50℃搅拌17小时。

将反应混合物倾倒入25ml的水中并用乙酸乙酯萃取两次。将合并的有机层用盐水洗涤,用MgSO4干燥并在真空中浓缩。将粗物质通过急骤色谱(20g硅胶,30至50%在庚烷中的乙酸乙酯)纯化,获得灰白色固体(130mg,64%)。MS(ISP):459.4(100%,[M-tBu+H]+),515.4(5%,[M+H]+)。

e)(S)-1-(4-(二氟甲氧基)苯基)-N-(4-(吗啉-2-基)苯基)-1H-吡唑-3-甲酰 胺盐酸盐

太阳城集团将(S)-2-(4-(1-(4-(二氟甲氧基)苯基)-1H-吡唑-3-甲酰胺基)苯基)吗啉-4-甲酸叔丁酯(130mg,0.25mmol)溶解在二噁烷(0.6m1)中并加入HCl在二噁烷中的溶液(4M,0.12ml,3.8mmol)。将反应混合物在60℃搅拌过夜。冷却后加入乙醚,将固体滤出,用乙醚洗涤并在真空中干燥,得到(S)-1-(4-(二氟甲氧基)苯基)-N-(4-(吗啉-2-基)苯基)-1H-吡唑-3-甲酰胺盐酸盐(90mg,79%),为灰白色固体。MS(ISP):415.4([M+H]+)。

实施例46

(R)-1-(4-(二氟甲氧基)苯基)-N-(4-(吗啉-2-基)苯基)-1H-吡唑-3-甲酰胺盐酸盐

太阳城集团类似于实施例45,在步骤c)中使用(R)-2-(4-氨基苯基)吗啉-4-甲酸叔丁酯代替(S)-2-(4-氨基苯基)吗啉-4-甲酸叔丁酯获得标题化合物。灰白色固体。MS(ISP):415.4([M+H]+)。

实施例47

(S)-N-(4-(吗啉-2-基)苯基)-1-(5-(三氟甲基)嘧啶-2-基)-1H-吡唑-3-甲酰胺盐酸盐

a)(S)-2-(4-(1H-吡唑-3-甲酰胺基)苯基)吗啉-4-甲酸叔丁酯

太阳城集团将1H-吡唑-3-甲酸(560mg,5mmol)溶解在甲醇(62ml)中并加入(S)-2-(4-氨基苯基)吗啉-4-甲酸叔丁酯(1.39g,5mmol)。将溶液冷却至0℃并在1小时内将溶解在5ml甲醇中的氯化4-(4,6-二甲氧基-1,3,5-三嗪-2-基)-4-甲基吗啉鎓(1.8g,6.5mmol)滴加至反应混合物中。将反应混合物在0℃搅拌两小时,然后在室温搅拌过夜。将溶剂蒸发,将残余物溶解在二氯甲烷中并吸附在硅胶上。

太阳城集团将该物质通过急骤色谱(硅胶,20g,30%至50%在庚烷中的EtOAc)纯化,获得白色固体(1.61g;86%),将其用于下一步骤。

太阳城集团 b)(S)-2-(4-(1-(5-(三氟甲基)嘧啶-2-基)-1H-吡唑-3-甲酰胺基)苯基)吗啉 -4-甲酸叔丁酯

将(S)-2-(4-(1H-吡唑-3-甲酰胺基)苯基)吗啉-4-甲酸叔丁酯(33mg,0.089mmol)和2-氯-5-(三氟甲基)嘧啶(16.2mg,0.089mmol)溶解在DMSO(0.7ml)中并加入碳酸钾(24.5mg,0.177mmol)。将反应混合物放在Büchi震动器上在120℃历时20小时。将混合物冷却后,加入水,接着用乙酸乙酯萃取两次。将合并的有机层用MgSO4干燥并蒸发。将粗物质通过急骤色谱(硅胶,5g,25%至50%在庚烷中的EtOAc)纯化,获得灰白色固体(11mg,24%)。MS(ISP):463.1(100%,[M-tBu+H]+),519.3(10%,[M+H]+)。

太阳城集团 c)(S)-N-(4-(吗啉-2-基)苯基)-1-(4-(三氟甲氧基)苯基)-1H-吡唑-4-甲酰 胺盐酸盐

太阳城集团将(S)-2-(4-(1-(5-(三氟甲基)嘧啶-2-基)-1H-吡唑-3-甲酰胺基)苯基)吗啉-4-甲酸叔丁酯(11mg,21.2μmol)溶解在二噁烷(80μL)中并加入HCl在二噁烷中的溶液(79.6μL,318μmol)并将反应混合物在60℃搅拌2小时。冷却后,加入二乙醚并将固体过滤并用二乙醚洗涤,得到(S)-N-(4-(吗啉-2-基)苯基)-1-(4-(三氟甲氧基)苯基)-1H-吡唑-4-甲酰胺盐酸盐(7mg,70%),为灰白色固体。MS(ISP):419.3([M+H]+)。

实施例48

(S)-1-(6-氯吡嗪-2-基)-N-(4-(吗啉-2-基)苯基)-1H-吡唑-3-甲酰胺盐酸盐

类似于实施例47,在步骤b)中使用2,6-二氯吡嗪代替2-氯-5-(三氟甲基)嘧啶获得标题化合物。黄色固体。MS(ISP):385.3([{35Cl}M+H]+),387.3([{37Cl}M+H]+)。([M+H]+)。

实施例49

(S)-1-(3-氯吡嗪-2-基)-N-(4-(吗啉-2-基)苯基)-1H-吡唑-3-甲酰胺盐酸盐

a)(S)-2-(4-(1-(3-氯吡嗪-2-基)-1H-吡唑-3-甲酰胺基)苯基)吗啉-4-甲酸 叔丁酯

将(S)-2-(4-(1H-吡唑-3-甲酰胺基)苯基)吗啉-4-甲酸叔丁酯(90mg,0.24mmol)和2,3-二氯吡嗪(43mg,0.29mmol)溶解在二甲基乙酰胺(2ml)中并加入碳酸钾(67mg,0.48mmol)。将反应混合物放在Büchi震动器上在80℃历时16小时。为了完成反应加入额外量的2,3-二氯吡嗪(10mg)并在120℃继续加热另2h。将混合物冷却后,加入水接着用乙酸乙酯萃取两次。将合并的有机层用MgSO4干燥并蒸发。将粗物质通过急骤色谱(硅胶,10g,25%至50%在庚烷中的EtOAc)纯化,获得灰白色胶状物(48mg,42%)。MS(ISP):429.3(100%,[M-tBu+H]+),485.4(10%,[M+H]+)。

太阳城集团 b)(S)-1-(3-氯吡嗪-2-基)-N-(4-(吗啉-2-基)苯基)-1H-吡唑-3-甲酰胺盐 酸盐

将(S)-2-(4-(1-(3-氯吡嗪-2-基)-1H-吡唑-3-甲酰胺基)苯基)吗啉-4-甲酸叔丁酯(44mg,90.7μmol)溶解在二噁烷(0.35ml)中并加入HCl在二噁烷中的溶液(340μl,1.36mmol)并将反应混合物在60℃搅拌90min。

将溶剂蒸发并将残余物从乙酸乙酯和乙醇的混合物重结晶,获得浅黄色固体(27mg,70%)。MS(ISP):385.2([{35Cl}M+H]+),387.2([{37Cl}M+H]+)。([M+H]+)。

实施例50

(S)-1-(5-氯吡嗪-2-基)-N-(4-(吗啉-2-基)苯基)-1H-吡唑-3-甲酰胺盐酸盐

太阳城集团类似于实施例49,在步骤a)中使用2,5-二氯吡嗪代替2,3-二氯吡嗪获得标题化合物。灰白色固体。MS(ISP):385.2([{35Cl}M+H]+),387.2([{37Cl}M+H]+)。([M+H]+)。

实施例51

太阳城集团(S)-N-(4-(吗啉-2-基)苯基)-1-(6-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-1H-吡唑-3-甲酰胺盐酸盐

太阳城集团类似于实施例49,在步骤a)中使用4-氯-6-(三氟甲基)嘧啶代替2,3-二氯吡嗪获得标题化合物。白色固体。MS(ISP):419.2([M+H]+)。

实施例52

太阳城集团(S)-N-(4-(吗啉-2-基)苯基)-1-(6-(三氟甲基)吡嗪-2-基)-1H-吡唑-3-甲酰胺盐酸盐

类似于实施例49,在步骤a)中使用2-碘-6-(三氟甲基)吡嗪代替2,3-二氯吡嗪获得标题化合物。浅黄色固体。MS(ISP):419.2([M+H]+)。

实施例53

(S)-1-(5-氰基吡嗪-2-基)-N-(4-(吗啉-2-基)苯基)-1H-吡唑-3-甲酰胺盐酸盐

类似于实施例49,在步骤a)中使用5-溴吡嗪-2-甲腈代替2,3-二氯吡嗪获得标题化合物。浅黄色固体。MS(ISP):376.3([M+H]+)。

实施例54

(S)-N-(4-(吗啉-2-基)苯基)-1-(2-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-1H-吡唑-3-甲酰胺盐酸盐

类似于实施例49,在步骤a)中使用4-氯-2-(三氟甲基)嘧啶代替2,3-二氯吡嗪获得标题化合物。浅绿色固体。MS(ISP):419.2([M+H]+)。

式I化合物和它们的药学上有用的加成盐拥有有价值的药理学特性。具体地,已经发现本发明的化合物对于痕量胺相关受体(TAAR),尤其是TAAR1具有良好的亲和性。

根据在下文中给出的试验研究这些化合物。

材料和方法

TAAR表达质粒和稳定转染的细胞系的构造

太阳城集团为了构造表达质粒,基本上如Lindemann等[14]所述,由基因组DNA扩增人类、大鼠和小鼠TAAR1的编码序列。以1.5mM Mg2+使用扩展高保真PCR体系(Expand High Fidelity PCR System)(Roche Diagnostics),并按照制造商的使用说明将纯化的PCR产物克隆至pCR2.1-TOPO克隆载体(Invitrogen)中。将PCR产物亚克隆至pIRESneo2载体(BD Clontech,Palo Alto,California)中,并且在引入细胞系中之前对表达载体进行序列证实。

基本上如Lindemann等(2005)所述,培养HEK293细胞(ATCC#CRL-1573)。为了产生稳定转染的细胞系,用含有TAAR编码序列的pIRESneo2表达质粒(上面描述)与Lipofectamine2000(Invitrogen)根据制造商的使用说明转染HEK293细胞,并且转染后24小时,用1mg/ml G418(Sigma,Buchs,瑞士)补充培养基。在约10d的培养周期之后,将克隆分离、扩增并用cAMP Biotrak酶免疫测定(EIA)系统(Amersham),按照由制造商提供的非乙酰化EIA程序对其测定对痕量胺(所有化合物购自Sigma)的反应性。将对于15个传代的培养周期显示出稳定的EC50的单克隆细胞系用于所有随后的研究。

针对大鼠TAAR1的放射性配体结合测定

膜制备和放射性配体结合

将稳定表达大鼠TAAR1的HEK-293细胞在含有胎牛血清(10%,在56℃热灭活30min),青霉素/链霉素(1%),和375μg/ml遗传霉素(Gibco)的DMEM高葡萄糖培养基中在37℃和5%CO2保持。使用胰蛋白酶/EDTA将细胞从培养瓶中释放,收获,用冰-冷的PBS(不含Ca2+和Mg2+)洗涤两次,以1’000rpm在4℃成粒5min,冰冻并保存在-80℃。将冰冻的粒状物悬浮在20ml含有10mM EDTA的HEPES-NaOH(20mM,pH7.4)中,并用Polytron(PT6000,Kinematica)以14’000rpm匀质化20s。匀浆以48’000x g在4℃离心30min。之后,去除并弃去上清液,并将粒状物重新悬浮在20ml含有0.1mM EDTA的HEPES-NaOH(20mM,pH7.4)中,使用Polytron(以14’000rpm,20s)。重复此程序,并将最终的粒状物重新悬浮在含有0.1mM EDTA的HEPES-NaOH中,并使用Polytron匀质化。典型地,将2ml膜部分的等分试样保存在-80℃。对于每个新的膜批次,通过饱和曲线确定解离常数(Kd)。TAAR1放射性配体3[H]-(S)-4-[(乙基-苯基-氨基)-甲基]-4,5-二氢-唑-2-基胺(记述在WO2008/098857中)以与计算的Kd值相等的浓度使用,其通常为大约2.3nM,产生约0.2%的该放射性配体的结合,和占总结合的约85%的特异性结合。非特异性结合定义为在10μM的未标记配体的存在下结合的3[H]-(S)-4-[(乙基-苯基-氨基)-甲基]-4,5-二氢-唑-2-基胺的量。所有化合物均以宽的浓度范围(10pM至10μM)一式两份地进行测试。将测试化合物(20μl/孔)转移至96深孔板(TreffLab)中,并加入180μl含有MgCl2(10mM)和CaCl2(2mM)的HEPES-NaOH(20mM,pH7.4)(结合缓冲液),300μl以nM计浓度为3.3xKd的放射性配体3[H]-(S)-4-[(乙基-苯基-氨基)-甲基]-4,5-二氢-唑-2-基胺和500μl膜(以50μg蛋白/ml重新悬浮)。96深孔板在4℃温育1hr。通过经由在聚乙烯亚胺(0.3%)中预浸1hr并用1nl冷的结合缓冲液洗涤3次的Unifilter-96板(Packard Instrument Company)和玻璃滤器GF/C(Perkin Elmer)迅速过滤终止温育。在添加45μl Microscint40(PerkinElmer)后,将Unifilter-96板密封,并在1hr后使用TopCoum微板闪烁计数仪(Packard Instrument Company)计数放射活性。

针对小鼠TAAR1的放射性配体结合测定

太阳城集团 膜制备和放射性配体结合

太阳城集团稳定表达小鼠TAAR1的HEK-293细胞在含有胎牛血清(10%,在56℃热灭活30min),青霉素/链霉素(1%),和375μg/ml遗传霉素(Gibco)的DMEM高葡萄糖培养基中在37℃和5%CO2保持。使用胰蛋白酶/EDTA将细胞从培养瓶中释放,收获,用冰-冷的PBS(不含Ca2+和Mg2+)洗涤两次,以1’000rpm在4℃成粒5min,冰冻并保存在-80℃。将冰冻的粒状物悬浮在20ml含有10mM EDTA的HEPES-NaOH(20mM,pH7.4)中,并用Polytron(PT6000,Kinematica)以14’000rpm匀质化20s。匀浆以48’000x g在4℃离心30min。之后,去除并弃去上清液,并将粒状物重新悬浮在20ml含有0.1mM EDTA的HEPES-NaOH(20mM,pH7.4)中,使用Polytron(以14’000rpm,20s)。重复此程序,并将最终的粒状物重新悬浮在含有0.1mM EDTA的HEPES-NaOH中,并使用Polytron匀质化。典型地,将2ml膜部分的等分试样保存在-80℃。对于每个新的膜批次,通过饱和曲线确定解离常数(Kd)。TAAR1放射性配体3[H]-(S)-4-[(乙基-苯基-氨基)-甲基]-4,5-二氢-唑-2-基胺(记述在WO2008/098857中)以与计算的Kd值相等的浓度使用,其通常为大约0.7nM,产生约0.5%的该放射性配体的结合,和占总结合的约70%的特异性结合。非特异性结合定义为在10μM的未标记配体的存在下结合的3[H]-(S)-4-[(乙基-苯基-氨基)-甲基]-4,5-二氢-唑-2-基胺的量。所有化合物均以宽的浓度范围(10pM至10μM)一式两份地进行测试。将测试化合物(20μl/孔)转移至96深孔板(TreffLab)中,并加入180μl含有MgCl2(10mM)和CaCl2(2mM)的HEPES-NaOH(20mM,pH7.4)(结合缓冲液),300μl以nM计浓度为3.3xKd的放射性配体3[H]-(S)-4-[(乙基-苯基-氨基)-甲基]-4,5-二氢-唑-2-基胺和500μl膜(以60μg蛋白/ml重新悬浮)。96深孔板在4℃温育1hr。通过经由在聚乙烯亚胺(0.3%)中预浸1hr并用1ml冷的结合缓冲液洗涤3次的Unifilter-96板(Packard Instrument Company)和玻璃滤器GF/C(Perkin Elmer)迅速过滤终止温育。在添加45μl Microscint40(PerkinEhner)后,将Unifilter-96板密封,并在1hr后使用TopCount微板闪烁计数仪(Packard Instrument Company)计数放射活性。

太阳城集团如下表中所示,化合物在小鼠或大鼠中对TAARl显示在<0.1μM的范围内的Ki值(μM)。

可以将式IA和IB化合物和式IA和IB化合物的药用盐用作药物,例如以药物制剂的形式。可以将药物制剂口服给药,例如以片剂、包衣片剂、糖锭剂、硬和软明胶胶囊、溶液、乳剂或混悬剂的形式。然而,给药还可以直肠给药,例如以栓剂形式,或者肠胃外给药,例如以注射液形式。

太阳城集团可以用药学上惰性的无机或有机载体加工式IA和IB化合物用于药物制剂的制备。例如,可以使用乳糖、玉米淀粉或其衍生物、滑石、硬脂酸或其盐等,作为用于片剂、包衣片剂、糖锭剂和硬明胶胶囊的那些载体。用于软明胶胶囊的合适载体为,例如,植物油、蜡、脂肪、半固体和液体多元醇等。然而,取决于活性物质的本性,在软明胶胶囊的情况下通常不需要载体。用于制备溶液和糖浆的合适载体为,例如,水、多元醇、甘油、植物油等。用于栓剂的合适载体为,例如,天然或硬化油、蜡、脂肪、半液体或液体多元醇等。

太阳城集团此外,药物制剂可以含有防腐剂、增溶剂、稳定剂、润湿剂、乳化剂、甜味剂、着色剂、调味剂、改变渗透压的盐、缓冲剂、掩蔽剂或者抗氧化剂。它们还可以含有其它的治疗上有价值的物质。

含有式IA和IB化合物或其药用盐以及治疗上惰性的载体的药物也是本发明的目的,同样的是用于它们的制备的方法,所述方法包括将一种或多种式IA和IB化合物和/或药用酸加成盐以及如果需要,一种或多种其他治疗上有价值的物质,与一种或多种治疗上惰性的载体一起得到盖伦制剂给药形式。

太阳城集团根据本发明的最优选的适应证是包含中枢神经系统的病症的那些,例如抑郁症、精神病性精神障碍、帕金森病、焦虑症和注意缺陷多动障碍(ADHD)和糖尿病的治疗或预防。

太阳城集团剂量可以在宽限度内变化并且当然应在每个特定的情况下调整以适应个体的需求。在口服给药的情况下,用于成人的剂量可以在以下范围变化:每天约0.01mg至约1000mg的通式I化合物或相应量的其药用盐。每日的剂量可以作为单次剂量给药或以分开的剂量给药,并且此外,当其被认为需要时也可以超过上限。

片剂制剂(湿法制粒)

制备程序

太阳城集团1.将第1、2、3和4项混合,并用净化水制粒。

太阳城集团2.将颗粒在50℃干燥。

太阳城集团3.使颗粒通过合适的研磨设备。

4.加入第5项并混合三分钟;在合适的压机上压制。

胶囊制剂

制备程序

1.将第1、2和3项在合适的混合器中混合30分钟。

太阳城集团2.加入第4和5项并混合3分钟。

3.填充至合适的胶囊中。

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