太阳城集团

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一种组培金线莲培养基及其制备方法和应用.pdf

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一种 组培金线莲 培养基 及其 制备 方法 应用
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摘要
申请专利号:

CN201610055520.1

申请日:

20160127

公开号:

太阳城集团CN105660401A

公开日:

20160615

当前法律状态:

有效性:

有效

法律详情:
IPC分类号: A01H4/00 主分类号: A01H4/00
申请人: 漳州市萌得尔农业科技有限公司
发明人: 潘裕添,陈金妹,黄家福,潘晓明,詹杏熔
地址: 363111 福建省漳州市龙海市程溪镇改革166号
优先权: CN201610055520A
专利代理机构: 福州智理专利代理有限公司 代理人: 康永辉
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法律状态
申请(专利)号:

太阳城集团CN201610055520.1

授权太阳城集团号:

法律状态太阳城集团日:

法律状态类型:

摘要

太阳城集团本发明涉及一种组培金线莲培养基及其制备方法和应用,一种组培金线莲培养基,每1000ml所述的组培金线莲培养基包括0*MS~1*MS基本培养基母液、10~1000μL食用菌罐藏加工预煮液、10~50g蔗糖、50~250g香蕉、6g~8g琼脂、1.0g~2.0g活性炭,余量为蒸馏水,本发明的优点在于:解决了食用菌罐藏加工过程中所产生的工业废水的排放问题,使食用菌加工企业达到废水零排放,减少污水处理成本;本发明的培养基能促进组培金线莲生根发芽,还能缩短组培金线莲生长周期,食用菌罐藏加工预煮液的使用减少了人工合成激素在组培金线莲中的应用,使组培金线莲成为一种绿色有机食品。

权利要求书

1.一种组培金线莲培养基,包括香蕉、蔗糖、琼脂以及活性炭,其特征在于:它还包括0*MS~1*MS培养基母液以及食用菌罐藏加工预煮液;每1000ml所述的组培金线莲培养基包括0*MS~1*MS基本培养基母液、10~1000μL食用菌罐藏加工预煮液、10~50g蔗糖、50~250g香蕉、6g~8g琼脂、1.0g~2.0g活性炭,余量为蒸馏水,其中0*MS表示不加入基本培养基母液。2.根据权利要求1所述的组培金线莲培养基的制备,其特征在于:每1000毫升的有机培养基制备步骤如下:(1)制备食用菌罐藏加工预煮液,并量取10~1000μL的食用菌罐藏加工预煮液待用;(2)按照配制0*MS~1*MS基本培养基所需的各种母液的体积,量取MS大量元素母液、MS微量元素母液、MS铁盐母液以及MS有机物母液待用;(3)将步骤(1)中量取的食用菌罐藏加工预煮液与步骤(2)中量取的MS培养基母液进行混合后溶解于蒸馏水中;(4)称取50~250g香蕉以及1.0g~2.0g活性炭,并将香蕉碾成泥后加入步骤(3)中所得的溶液中,搅拌混匀,之后加入称好的活性炭,搅拌均匀;(5)在烧杯中加入200~300mL的蒸馏水,将蒸馏水加热至80~90℃后加入称好的6g~8g琼脂,边搅拌边加热至沸腾后琼脂溶解,待琼脂溶解之后,继续加入称好的10~50g蔗糖,边搅拌边加热至蔗糖溶解,然后将得到的琼脂与蔗糖的混合溶液加入步骤(4)所得的混合溶液中,搅拌均匀后加蒸馏水定容至1000毫升并加入酸碱调节剂将PH值调至5.0-6.0;(6)将步骤(5)所得到的培养基分装于组培瓶中,进行高温高压灭菌,之后冷却凝固即可。3.根据权利要求2所述的组培金线莲培养基的制备,其特征在于:所述食用菌罐藏加工预煮液的制备方法如下:a.收集食用菌罐藏加工过程中所产生的工业废水;b.将收集来的食用菌罐藏加工过程中所产生的工业废水进行离心,离心机的转速控制在11500-12500rpm之间,离心温度为15-25℃,离心太阳城集团为10-20min,离心之后取上清液;c.将所得的上清液利用降膜蒸发器,降膜蒸发浓缩,得浓缩液;d.在浓缩液中添加变性剂,对浓缩液进行变性,其中所述的变性剂为80~100%的乙醇,且所加入的乙醇与浓缩液的体积比为2:1~6:1;e.对变性后的浓缩液进行过滤,收集滤液;f.将滤液进行旋转蒸发除去乙醇;g.将旋转蒸发后所得的溶液利用5-10K的滤膜进行切向流过滤,收集滤出液;h.将步骤g中所得的滤出液进行旋转蒸发浓缩,浓缩至溶液折光率达到35~55%即可。4.根据权利要求2所述的组培金线莲的有机培养基的制备,其特征在于:步骤(5)中所述的酸碱调节剂为0.1-0.5mol/L的NaOH溶液或0.1-0.5mol/L的HCl溶液。5.根据权利要求2所述的组培金线莲培养基的制备,其特征在于:步骤(6)中高温高压灭菌的温度控制在121-125℃,压力控制在111-115千帕,灭菌太阳城集团为15-20分钟。6.根据权利要求1所述的组培金线莲培养基的应用,其特征在于:用于培育金线莲。

说明书

技术领域

太阳城集团本发明涉及一种组培金线莲培养基及其制备方法和应用。

背景技术

金线莲(Anoectochilusroxburghii(Wall.)Lindl)是兰科开唇兰属地生型多年生草本植物,在我国主要分布于亚热带地区,即福建、广东、广西、浙江、江西、海南、云南、四川、贵州以及西藏南部等省区。金线莲是我国传统的珍贵药材,可全草入药,味甘微苦、性平微寒,具有清热解毒、润肺止咳和祛风利湿等功效,因此受到医药行业的广泛重视。由于野生资源日趋枯竭,金线莲已被列为福建省濒危药用植物加以保护。但其种子在自然条件下萌发率极低,所以利用人工繁殖对其进行抢救性的保存。目前金线莲的人工繁殖主要是靠组织培养育苗后进行大田移栽,组织培养的金线莲大都是利用植物生长激素进行调节促进其生长,然而利用生长激素来调节金线莲组织培养的传统方法是不可持续性发展的,存在成本高,影响食品安全等诸多问题,加之,在如今高速的社会发展下,绿色有机食品逐渐成为主流产品,原有的金线莲组织培养基以及培养方法,已经跟不上人们对绿色食品追求的脚步了。因此,有必要研究出一种绿色环保、无公害且能加速金线莲生长的培养基来培育金线莲,以便于达到促进金线莲快速繁殖的目的,来满足广大的市场需求,同时又能够使培育出的金线莲达到绿色有机的要求。

发明内容

太阳城集团本发明的目的在于提供一种环保、无公害且能加速金线莲生长的组培金线莲培养基及其制备方法和应用。

太阳城集团本发明的目的通过如下技术方案实现:一种组培金线莲培养基,包括香蕉、蔗糖、琼脂以及活性炭,它还包括0*MS~1*MS培养基母液以及食用菌罐藏加工预煮液;每1000ml所述的组培金线莲培养基包括0*MS~1*MS基本培养基母液、10~1000μL食用菌罐藏加工预煮液、10~50g蔗糖、50~250g香蕉、6g~8g琼脂、1.0g~2.0g活性炭,余量为蒸馏水,其中0*MS表示不加入基本培养基母液。

所述的组培金线莲培养基的制备,每1000毫升的有机培养基制备步骤如下:

太阳城集团(1)制备食用菌罐藏加工预煮液,并量取10~1000μL的食用菌罐藏加工预煮液待用;

太阳城集团(2)按照配制0*MS~1*MS基本培养基所需的各种母液的体积,量取MS大量元素母液、MS微量元素母液、MS铁盐母液以及MS有机物母液待用;

太阳城集团(3)将步骤(1)中量取的食用菌罐藏加工预煮液与步骤(2)中量取的MS培养基母液进行混合后溶解于蒸馏水中;

(4)称取50~250g香蕉以及1.0g~2.0g活性炭,并将香蕉碾成泥后加入步骤(3)中所得的溶液中,搅拌混匀,之后加入称好的活性炭,搅拌均匀;

(5)在烧杯中加入200~300mL的蒸馏水,将蒸馏水加热至80~90℃后加入称好的6g~8g琼脂,边搅拌边加热至沸腾后琼脂溶解,待琼脂溶解之后,继续加入称好的10~50g蔗糖,边搅拌边加热至蔗糖溶解,然后将得到的琼脂与蔗糖的混合溶液加入步骤(4)所得的混合溶液中,搅拌均匀后加蒸馏水定容至1000毫升并加入酸碱调节剂将PH值调至5.0-6.0;

(6)将步骤(5)所得到的培养基分装于组培瓶中,进行高温高压灭菌,之后冷却凝固即可。

所述食用菌罐藏加工预煮液的制备方法如下:

太阳城集团a.收集食用菌罐藏加工过程中所产生的工业废水;

太阳城集团b.将收集来的食用菌罐藏加工过程中所产生的工业废水进行离心,离心机的转速控制在11500-12500rpm之间,离心温度为15-25℃,离心太阳城集团为10-20min,离心之后取上清液;

c.将所得的上清液利用降膜蒸发器,降膜蒸发浓缩,得浓缩液;

太阳城集团d.在浓缩液中添加变性剂,对浓缩液进行变性,其中所述的变性剂为80~100%的乙醇,且所加入的乙醇与浓缩液的体积比为2:1~6:1;

e.对变性后的浓缩液进行过滤,收集滤液;

f.将滤液进行旋转蒸发除去乙醇;

g.将旋转蒸发后所得的溶液利用5-10K的滤膜进行切向流过滤,收集滤出液;

太阳城集团h.将步骤g中所得的滤出液进行旋转蒸发浓缩,浓缩至溶液折光率达到35~55%即可。

步骤(5)中所述的酸碱调节剂为0.1-0.5mol/L的NaOH溶液或0.1-0.5mol/L的HCl溶液。

步骤(6)中高温高压灭菌的温度控制在121-125℃,压力控制在111-115千帕,灭菌太阳城集团为15-20分钟。

太阳城集团所述的组培金线莲培养基的应用,将组培金线莲培养基用于培育金线莲。较之现有技术而言,本发明的优点在于:1)食用菌罐藏加工过程中所产生的工业废水往往会富含一些营养物质如氨基酸、矿物质、糖类等,如果将这些废水经处理后在排放,不仅需要昂贵的污水处理成本,而且造成了一定的资源浪费。本发明将食用菌罐藏加工过程中所产生的工业废水进行处理后,得到食用菌罐藏加工预煮液,将其与MS培养基母液及其他添加物复配制成培金线莲培养基,将食用菌罐藏加工过程中所产生的工业废水变废为宝、解决了食用菌罐藏加工过程中所产生的工业废水的排放问题,使食用菌加工企业达到废水零排放,减少其污水处理成本;2)本发明将食用菌罐藏加工过程中所产生的工业废水进行处理后所得的食用菌罐藏加工预煮液,来取代传统植物生长调节剂,即能为金线莲提供除MS培养基以外的营养,同时能促进组培金线莲生根发芽,还能缩短组培金线莲生长周期,食用菌罐藏加工预煮液的使用减少了人工合成激素在组培金线莲中的应用,使组培金线莲成为一种绿色有机食品;3)本发明制备组培金线莲培养基的原料易得且价格低廉;4)本发明制备组培金线莲培养基的制备方法简单,适用于工业化生产;5)本发明制得的组培金线莲培养基具有良好的抑菌效果,使得在培育金线莲的培养基中无需加入杀菌剂,进一步保证了金线莲的品质。

具体实施方式

下面结合实施例对本发明内容进行详细说明:

实施例一:MS母液的配制

1.MS大量元素母液(20X)称取20升量溶解在1L蒸馏水中。

2.MS微量元素母液(200X)

太阳城集团称取200升量溶解在1L蒸馏水中。

太阳城集团3.MS铁盐母液(200X)

称取200升量溶解在1L蒸馏水中。

4.MS有机物母液(200X)

称取200升量溶解在1L蒸馏水中。

实施例二:组培金线莲培养基的制备

太阳城集团1L组培金线莲培养基(1)1/2*MS+250μL的食用菌罐藏加工预煮液+30g蔗糖+100g香蕉+7g琼脂+1.5g活性炭、(2)MS+1000μL的食用菌罐藏加工预煮液+50g蔗糖+250g香蕉+8g琼脂+2.0g活性炭、(3)1/4*MS+10μL的食用菌罐藏加工预煮液+10g蔗糖+50g香蕉+6g琼脂+1.0g活性炭的具体制备方法如下:

1.1L组培金线莲的有机培养基(1/2*MS+250μL的食用菌罐藏加工预煮液+30g蔗糖+100g香蕉+7g琼脂+1.5g活性炭)的制备,每1000毫升的有机培养基制备步骤如下:

(1)制备食用菌罐藏加工预煮液,并量取250μL的食用菌罐藏加工预煮液待用;

(2)按照配制1/2*MS基本培养基所需的各种母液的体积,依次量取:

MS大量元素母液25mL

太阳城集团MS微量元素母液2.5mL

太阳城集团MS铁盐母液2.5mL

MS有机物母液2.5mL待用;

(3)将步骤(1)中量取的食用菌罐藏加工预煮液与步骤(2)中量取的MS培养基母液进行混合后溶解于蒸馏水中;

(4)称取100g香蕉以及1.5g活性炭,并将香蕉碾成泥后加入步骤(3)中所得的溶液中,搅拌混匀,之后加入称好的活性炭,搅拌均匀;

太阳城集团(5)在烧杯中加入200mL的蒸馏水,将蒸馏水加热至80℃后加入称好的7g琼脂,边搅拌边加热至沸腾后琼脂溶解,待琼脂溶解之后,继续加入称好的30g蔗糖,边搅拌边加热至蔗糖溶解,然后将得到的琼脂与蔗糖的混合溶液加入步骤(4)所得的混合溶液中,搅拌均匀后加蒸馏水定容至1000毫升并加入0.1mol/L的NaOH将PH值调至5.0;

(6)将步骤(5)所得到的培养基分装于组培瓶中,进行高温高压灭菌,之后冷却凝固即可,其中高温高压灭菌温度控制在121℃,压力控制在111千帕,灭菌太阳城集团为15分钟。

其中,食用菌罐藏加工预煮液的制备方法如下:

a.收集食用菌罐藏加工过程中所产生的工业废水;

太阳城集团b.将收集来的食用菌罐藏加工过程中所产生的工业废水进行离心,离心机的转速控制在11500rpm,离心温度为15℃,离心太阳城集团为10min,离心之后取上清液;

c.将所得的上清液利用降膜蒸发器,降膜蒸发浓缩,得浓缩液;

太阳城集团d.在浓缩液中添加变性剂,对浓缩液进行变性,其中所述的变性剂为80%的乙醇,且所加入的乙醇与浓缩液的体积比为2:1;

太阳城集团e.对变性后的浓缩液进行过滤,收集滤液;

f.将滤液进行旋转蒸发除去乙醇;

g.将旋转蒸发后所得的溶液利用5K的滤膜进行切向流过滤,收集滤出液;

太阳城集团h.将步骤g中所得的滤出液进行旋转蒸发浓缩,浓缩至溶液折光率达到35%即可。

2.1L组培金线莲的有机培养基(MS+1000μL的食用菌罐藏加工预煮液+50g蔗糖+250g香蕉+8g琼脂+2.0g活性炭)的制备,每1000毫升的有机培养基制备步骤如下:

(1)制备食用菌罐藏加工预煮液,并量取1000μL的食用菌罐藏加工预煮液待用;

太阳城集团(2)按照配制1*MS基本培养基所需的各种母液的体积,依次量取:

MS大量元素母液50mL

太阳城集团MS微量元素母液5mL

MS铁盐母液5mL

MS有机物母液5mL待用;

(3)将步骤(1)中量取的食用菌罐藏加工预煮液与步骤(2)中量取的MS培养基母液进行混合后溶解于蒸馏水中;

太阳城集团(4)称取250g香蕉以及2.0g活性炭,并将香蕉碾成泥后加入步骤(3)中所得的溶液中,搅拌混匀,之后加入称好的活性炭,搅拌均匀;

(5)在烧杯中加入300mL的蒸馏水,将蒸馏水加热至90℃后加入称好的8g琼脂,边搅拌边加热至沸腾后琼脂溶解,待琼脂溶解之后,继续加入称好的50g蔗糖,边搅拌边加热至蔗糖溶解,然后将得到的琼脂与蔗糖的混合溶液加入步骤(4)所得的混合溶液中,搅拌均匀后加蒸馏水定容至1000毫升并加入0.5mol/L的NaOH将PH值调至6.0;

太阳城集团(6)将步骤(5)所得到的培养基分装于组培瓶中,进行高温高压灭菌,之后冷却凝固即可,其中高温高压灭菌温度控制在125℃,压力控制在115千帕,灭菌太阳城集团为20分钟。

太阳城集团其中,食用菌罐藏加工预煮液的制备方法如下:

太阳城集团a.收集食用菌罐藏加工过程中所产生的工业废水;

b.将收集来的食用菌罐藏加工过程中所产生的工业废水进行离心,离心机的转速控制在12000rpm,离心温度为20℃,离心太阳城集团为15min,离心之后取上清液;

c.将所得的上清液利用降膜蒸发器,降膜蒸发浓缩,得浓缩液;

d.在浓缩液中添加变性剂,对浓缩液进行变性,其中所述的变性剂为80%的乙醇,且所加入的乙醇与浓缩液的体积比为3:1;

e.对变性后的浓缩液进行过滤,收集滤液;

太阳城集团f.将滤液进行旋转蒸发除去乙醇;

g.将旋转蒸发后所得的溶液利用8K的滤膜进行切向流过滤,收集滤出液;

h.将步骤g中所得的滤出液进行旋转蒸发浓缩,浓缩至溶液折光率达到50%即可。

太阳城集团3.1L组培金线莲的有机培养基(1/4*MS+10μL的食用菌罐藏加工预煮液+10g蔗糖+50g香蕉+6g琼脂+1.0g活性炭)的制备,每10毫升的有机培养基制备步骤如下:

(1)制备食用菌罐藏加工预煮液,并量取10μL的食用菌罐藏加工预煮液待用;

太阳城集团(2)按照配制1/4*MS基本培养基所需的各种母液的体积,依次量取:

MS大量元素母液12.5mL

太阳城集团MS微量元素母液1.25mL

MS铁盐母液1.25mL

太阳城集团MS有机物母液1.25mL待用;

太阳城集团(3)将步骤(1)中量取的食用菌罐藏加工预煮液与步骤(2)中量取的MS培养基母液进行混合后溶解于蒸馏水中;

(4)称取50g香蕉以及1.0g活性炭,并将香蕉碾成泥后加入步骤(3)中所得的溶液中,搅拌混匀,之后加入称好的活性炭,搅拌均匀;

太阳城集团(5)在烧杯中加入250mL的蒸馏水,将蒸馏水加热至85℃后加入称好的6g琼脂,边搅拌边加热至沸腾后琼脂溶解,待琼脂溶解之后,继续加入称好的10g蔗糖,边搅拌边加热至蔗糖溶解,然后将得到的琼脂与蔗糖的混合溶液加入步骤(4)所得的混合溶液中,搅拌均匀后加蒸馏水定容至1000毫升并加入0.1mol/L的HCl将PH值调至5.5;

太阳城集团(6)将步骤(5)所得到的培养基分装于组培瓶中,进行高温高压灭菌,之后冷却凝固即可,其中高温高压灭菌温度控制在122℃,压力控制在113千帕,灭菌太阳城集团为18分钟。

太阳城集团其中,食用菌罐藏加工预煮液的制备方法如下:

太阳城集团a.收集食用菌罐藏加工过程中所产生的工业废水;

b.将收集来的食用菌罐藏加工过程中所产生的工业废水进行离心,离心机的转速控制在12500rpm,离心温度为25℃,离心太阳城集团为20min,离心之后取上清液;

c.将所得的上清液利用降膜蒸发器,降膜蒸发浓缩,得浓缩液;

d.在浓缩液中添加变性剂,对浓缩液进行变性,其中所述的变性剂为80%的乙醇,且所加入的乙醇与浓缩液的体积比为6:1;

太阳城集团e.对变性后的浓缩液进行过滤,收集滤液;

太阳城集团f.将滤液进行旋转蒸发除去乙醇;

太阳城集团g.将旋转蒸发后所得的溶液利用10K的滤膜进行切向流过滤,收集滤出液;

h.将步骤g中所得的滤出液进行旋转蒸发浓缩,浓缩至溶液折光率达到55%即可。

按照上述制备方法或原理,制备以下60组(A1~A20;B1~B20;C1~C20)培养基(每种培养基的体积均为1L):

一、以0*MS,1/4*MS,1/2*MS,MS分为四大组处理,食用菌罐藏加工预煮液的取量分别为0μL,250μL,500μL,1000μL,2000μL,另外蔗糖30g、香蕉100g、琼脂7g、1.5g活性炭。其中0*MS表示未加入基本培养基母液。

(一)0*MS处理

A1:0*MS+0μL蘑菇罐藏预煮液+30g蔗糖+100g香蕉+7g琼脂+1.5g活性炭

A2:0*MS+250μL蘑菇罐藏预煮液+30g蔗糖+100g香蕉+7g琼脂+1.5g活性炭

太阳城集团A3:0*MS+500μL蘑菇罐藏预煮液+30g蔗糖+100g香蕉+7g琼脂+1.5g活性炭

太阳城集团A4:0*MS+1000μL蘑菇罐藏预煮液+30g蔗糖+100g香蕉+7g琼脂+1.5g活性炭

A5:0*MS+2000μL蘑菇罐藏预煮液+30g蔗糖+100g香蕉+7g琼脂+1.5g活性炭

太阳城集团(二)1/4*MS处理

太阳城集团A6:1/4*MS+0μL蘑菇罐藏预煮液+30g蔗糖+100g香蕉+7g琼脂+1.5g活性炭

A7:1/4*MS+250μL蘑菇罐藏预煮液+30g蔗糖+100g香蕉+7g琼脂+1.5g活性炭

A8:1/4*MS+500μL蘑菇罐藏预煮液+30g蔗糖+100g香蕉+7g琼脂+1.5g活性炭

A9:1/4*MS+1000μL蘑菇罐藏预煮液+30g蔗糖+100g香蕉+7g琼脂+1.5g活性炭

太阳城集团A10:1/4*MS+2000μL蘑菇罐藏预煮液+30g蔗糖+100g香蕉+7g琼脂+1.5g活性炭

(三)1/2*MS处理

A11:1/2*MS+0μL蘑菇罐藏预煮液+30g蔗糖+100g香蕉+7g琼脂+1.5g活性炭

A12:1/2*MS+250μL蘑菇罐藏预煮液+30g蔗糖+100g香蕉+7g琼脂+1.5g活性炭

A13:1/2*MS+500μL蘑菇罐藏预煮液+30g蔗糖+100g香蕉+7g琼脂+1.5g活性炭

太阳城集团A14:1/2*MS+1000μL蘑菇罐藏预煮液+30g蔗糖+100g香蕉+7g琼脂+1.5g活性炭

太阳城集团A15:1/2*MS+2000μL蘑菇罐藏预煮液+30g蔗糖+100g香蕉+7g琼脂+1.5g活性炭

(四)MS处理

太阳城集团A16:MS+0μL蘑菇罐藏预煮液+30g蔗糖+100g香蕉+7g琼脂+1.5g活性炭

太阳城集团A17:MS+250μL蘑菇罐藏预煮液+30g蔗糖+100g香蕉+7g琼脂+1.5g活性炭

A18:MS+500μL蘑菇罐藏预煮液+30g蔗糖+100g香蕉+7g琼脂+1.5g活性炭

A19:MS+1000μL蘑菇罐藏预煮液+30g蔗糖+100g香蕉+7g琼脂+1.5g活性炭

太阳城集团A20:MS+2000μL蘑菇罐藏预煮液+30g蔗糖+100g香蕉+7g琼脂+1.5g活性炭

二、以0*MS,1/4*MS,1/2*MS,MS分为四大组处理,食用菌罐藏加工预煮液的取量分别为0μL,250μL,500μL,1000μL,2000μL,另外蔗糖10g、香蕉50g、琼脂6g、活性炭1.0g。

(一)0*MS处理

B1:0*MS+0μL蘑菇罐藏预煮液+10g蔗糖+50g香蕉+6g琼脂+1.0g活性炭

B2:0*MS+250μL蘑菇罐藏预煮液+10g蔗糖+50g香蕉+6g琼脂+1.0g活性炭

B3:0*MS+500μL蘑菇罐藏预煮液+10g蔗糖+50g香蕉+6g琼脂+1.0g活性炭

太阳城集团B4:0*MS+1000μL蘑菇罐藏预煮液+10g蔗糖+50g香蕉+6g琼脂+1.0g活性炭

太阳城集团B5:0*MS+2000μL蘑菇罐藏预煮液+10g蔗糖+50g香蕉+6g琼脂+1.0g活性炭

太阳城集团(二)1/4*MS处理

太阳城集团B6:1/4*MS+0μL蘑菇罐藏预煮液+10g蔗糖+50g香蕉+6g琼脂+1.0g活性炭

太阳城集团B7:1/4*MS+250μL蘑菇罐藏预煮液+10g蔗糖+50g香蕉+6g琼脂+1.0g活性炭

太阳城集团B8:1/4*MS+500μL蘑菇罐藏预煮液+10g蔗糖+50g香蕉+6g琼脂+1.0g活性炭

B9:1/4*MS+1000μL蘑菇罐藏预煮液+10g蔗糖+50g香蕉+6g琼脂+1.0g活性炭

太阳城集团B10:1/4*MS+2000μL蘑菇罐藏预煮液+10g蔗糖+50g香蕉+6g琼脂+1.0g活性炭

太阳城集团(三)1/2*MS处理

B11:1/2*MS+0μL蘑菇罐藏预煮液+10g蔗糖+50g香蕉+6g琼脂+1.0g活性炭

太阳城集团B12:1/2*MS+250μL蘑菇罐藏预煮液+10g蔗糖+50g香蕉+6g琼脂+1.0g活性炭

太阳城集团B13:1/2*MS+500μL蘑菇罐藏预煮液+10g蔗糖+50g香蕉+6g琼脂+1.0g活性炭

B14:1/2*MS+1000μL蘑菇罐藏预煮液+10g蔗糖+50g香蕉+6g琼脂+1.0g活性炭

B15:1/2*MS+2000μL蘑菇罐藏预煮液+10g蔗糖+50g香蕉+6g琼脂+1.0g活性炭

(四)MS处理

太阳城集团B16:MS+0μL蘑菇罐藏预煮液+10g蔗糖+50g香蕉+6g琼脂+1.0g活性炭

B17:MS+250μL蘑菇罐藏预煮液+10g蔗糖+50g香蕉+6g琼脂+1.0g活性炭

B18:MS+500μL蘑菇罐藏预煮液+10g蔗糖+50g香蕉+6g琼脂+1.0g活性炭

B19:MS+1000μL蘑菇罐藏预煮液+10g蔗糖+50g香蕉+6g琼脂+10g活性炭

B20:MS+2000μL蘑菇罐藏预煮液+10g蔗糖+50g香蕉+6g琼脂+1.0g活性炭

三、以0*MS,1/4*MS,1/2*MS,MS分为四大组处理,食用菌罐藏加工预煮液的取量分别为0μL,250μL,500μL,1000μL,2000μL,另外蔗糖50g、香蕉250g、琼脂8g、2.0g活性炭。

(一)0*MS处理

太阳城集团C1:0*MS+0μL蘑菇罐藏预煮液+50g蔗糖+250g香蕉+8g琼脂+2.0g活性炭

C2:0*MS+250μL蘑菇罐藏预煮液+50g蔗糖+250g香蕉+8g琼脂+2.0g活性炭

太阳城集团C3:0*MS+500μL蘑菇罐藏预煮液+50g蔗糖+250g香蕉+8g琼脂+2.0g活性炭

太阳城集团C4:0*MS+1000μL蘑菇罐藏预煮液+50g蔗糖+250g香蕉+8g琼脂+2.0g活性炭

C5:0*MS+2000μL蘑菇罐藏预煮液+50g蔗糖+250g香蕉+8g琼脂+2.0g活性炭

(二)1/4*MS处理

太阳城集团C6:1/4*MS+0μL蘑菇罐藏预煮液+50g蔗糖+250g香蕉+8g琼脂+2.0g活性炭

C7:1/4*MS+250μL蘑菇罐藏预煮液+50g蔗糖+250g香蕉+8g琼脂+2.0g活性炭

太阳城集团C8:1/4*MS+500μL蘑菇罐藏预煮液+50g蔗糖+250g香蕉+8g琼脂+2.0g活性炭

C9:1/4*MS+1000μL蘑菇罐藏预煮液+50g蔗糖+250g香蕉+8g琼脂+2.0g活性炭

C10:1/4*MS+2000μL蘑菇罐藏预煮液+50g蔗糖+250g香蕉+8g琼脂+2.0g活性炭

太阳城集团(三)1/2*MS处理

太阳城集团C11:1/2*MS+0μL蘑菇罐藏预煮液+50g蔗糖+250g香蕉+8g琼脂+2.0g活性炭

太阳城集团C12:1/2*MS+250μL蘑菇罐藏预煮液+50g蔗糖+250g香蕉+8g琼脂+2.0g活性炭

太阳城集团C13:1/2*MS+500μL蘑菇罐藏预煮液+50g蔗糖+250g香蕉+8g琼脂+2.0g活性炭

太阳城集团C14:1/2*MS+1000μL蘑菇罐藏预煮液+50g蔗糖+250g香蕉+8g琼脂+2.0g活性炭

C15:1/2*MS+2000μL蘑菇罐藏预煮液+50g蔗糖+250g香蕉+8g琼脂+2.0g活性炭

(四)MS处理

太阳城集团C16:MS+0μL蘑菇罐藏预煮液+50g蔗糖+250g香蕉+8g琼脂+2.0g活性炭

太阳城集团C17:MS+250μL蘑菇罐藏预煮液+50g蔗糖+250g香蕉+8g琼脂+2.0g活性炭

C18:MS+500μL蘑菇罐藏预煮液+50g蔗糖+250g香蕉+8g琼脂+2.0g活性炭

太阳城集团C19:MS+1000μL蘑菇罐藏预煮液+50g蔗糖+250g香蕉+8g琼脂+2.0g活性炭

太阳城集团C20:MS+2000μL蘑菇罐藏预煮液+50g蔗糖+250g香蕉+8g琼脂+2.0g活性炭

太阳城集团将上述制得的60组培金线莲培养基(A1~A20;B1~B20;C1~C20)用于金线莲的培育;

太阳城集团一、不同培养基对芽诱导的培养

选取优质的台湾种金线莲无菌材料,在超净台无菌环境下,用剪刀去除根和叶片,将茎干截成长2.5cm带一个节的茎段。接种在A1-A20组培金线莲培养基上,调节PH为5.8。实验共设20个处理,每个处理接6瓶,每瓶接种4个节段。将接好的培养瓶放置在恒温室内,保持室温25±1℃,光照10h/d,光照强度800~1000Lux。每隔一个月对发芽情况度进行统计(分化率=发芽茎段数/接种茎段总数),及时处理发霉的培养瓶,测得的实验结果见表1。

太阳城集团表1不同培养基对茎段发芽的影响

太阳城集团注:表1为接种90d时发芽情况。+表示芽细小,颜色黄绿;++表示芽细小,颜色墨绿;+++表示芽粗壮,颜色墨绿;++++表示芽粗壮,颜色墨绿,有丛芽生长。

从表1数据中的A1-A5培养基培育的金线莲茎段发芽数据可知,当没有加入基本培养基母液时,随着食用菌罐藏加工预煮液浓度的增加,金线莲茎段的发芽总数不断的增加,分化率以及增殖倍数也逐渐增加,可见食用菌罐藏加工预煮液既可以为金线莲茎段发芽提供所需的营养,同时能促进组培金线莲发芽。

A6-A10培养基培育的金线莲茎段发芽数据可知,当加入1/4*MS基本培养基母液后,为金线莲茎段提供了发芽所需要的营养,但是,该营养仍然不能够完全满足金线莲茎段发芽所需,因此随着食用菌罐藏加工预煮液浓度的增加,金线莲茎段的发芽总数不断的增加,分化率以及增殖倍数也逐渐增加,当食用菌罐藏加工预煮液的浓度增加到1000μL/L时,已经能够满足金线莲茎段发芽的营养所需,且也能很好的促进金线莲茎段的发芽,之后如果继续增加食用菌罐藏加工预煮液的浓度,金线莲茎段发芽数反而降低,说明高浓度的食用菌罐藏加工预煮液将会对金线莲茎段的发芽具有一定的抑制作用。

A11-A15培养基培育的金线莲茎段发芽数据可知,当加入1/2*MS基本培养基母液后,已经能够很好的满足金线莲茎段发芽对营养的需求,因此食用菌罐藏加工预煮液的浓度只需达到250μL/L,便能够很好的促进金线莲茎段的发芽,且金线莲茎段的发芽数以及增殖倍数达到最大值,之后如果继续提高食用菌罐藏加工预煮液的浓度,金线莲茎段发芽数反而降低。

A16-A20培养基培育的金线莲茎段发芽数据可知,当加入MS基本培养基母液后,已经能够很好的满足金线莲茎段发芽对营养的需求,因此食用菌罐藏加工预煮液的浓度只需达到250μL/L,便能够很好的促进金线莲茎段的发芽,但是此时的发芽数不及A12的发芽数。由此可知A12培养基的效果最佳,最能够促进金线莲茎段的发芽。

太阳城集团发明人还将金线莲茎段接种在B1-B20以及C1-C20组培金线莲培养基上,得到的实验数据与表1的大体相同,但是利用B1-B20以及C1-C20组培金线莲培养基培养的金线莲茎段的发芽数仍不及A12培养基所培养的金线莲茎段,由此可知蔗糖、香蕉、琼脂以及活性炭的浓度对金线莲茎段发芽的影响不大。

二、不同培养基对根生长的影响

选取长势良好且长势尽量接近的金线莲苗,在超净台无菌环境下,将苗的基部下端(约2cm长)切去,再转接到A11-A15培养基上,调节PH为5.8。实验共设5个处理,每个处理接种4瓶,每瓶接种6株。将接好的培养瓶放置在恒温室内,保持室温25±1℃,光照10h/d,光照强度1800Lux。培养60d后统计发根数和根生长状况。结果见表2

表2不同培养基对生根的影响

太阳城集团由表2的数据可知,当食用菌罐藏加工预煮液的浓度适中时能够促进金线莲生根,且接种在A12培养基上的组培苗发根条数最多,总数为98条,生根率达到了4.08,实验还发现当食用菌罐藏加工预煮液浓度低时,金线莲苗的根系细长,根毛较多,根颜色为乳白色。当食用菌罐藏加工预煮液浓度达到1500μL/L以上时,根系变得粗壮,根长度伸长慢,根毛减少,跟颜色为黄绿色明显老化,除此之外,金线莲根尖容易坏死影响根的生长。

三、不同培养基对金线莲幼苗生长的影响

选取长势良好且长势尽量接近的台湾种金线莲小苗,在超净台无菌环境下,将小苗接种到A11-A15、B11-B15、C11-C15培养基上,调节PH为5.8。实验共设15个处理,每个处理接种4瓶,每瓶接种6株(同一瓶接种的小苗长势尽量接近)。将接好的培养瓶放置在恒温室内,保持室温25±1℃,光照10~12h/d,光照强度1500~2000Lux。统计生长3个月后的平均株高、平均单株新增叶片数以及平均单株鲜重。

太阳城集团另外,选取长势良好且长势尽量接近的福建种金线莲小苗,在超净台无菌环境下,将小苗接种到A11-A15、B11-B15、C11-C15培养基上,调节PH为5.8。实验共设15个处理,每个处理接种4瓶,每瓶接种6株(同一瓶接种的小苗长势尽量接近)。将接好的培养瓶放置在恒温室内,保持室温25±1℃,光照10~12h/d,光照强度1500~2000Lux。统计生长3个月后的平均株高、平均单株新增叶片数以及平均单株鲜重。实验结果见表3:

表3不同培养基对金线莲幼苗生长的影响

太阳城集团从表3中A12-A15培养基的数据与A11培养基的数据、B12-B15培养基的数据与B11培养基的数据以及C12-C15培养基的数据与C11培养基的数据相比较可知,加有适当浓度的食用菌罐藏加工预煮液的培养基与普通的培养基(不加食用菌罐藏加工预煮液的培养基如A11、B11、C11)相比,加有食用菌罐藏加工预煮液的培养基更能促进金线莲的生长,能明显缩短组培金线莲生长周期,且A12培养基的效果最佳,为最优培养基。另外A11-A15培养基的数据与B11-B15培养基的数据、C11-C15培养基的数据相比可知,蔗糖、香蕉、琼脂以及活性炭的浓度对金线莲的生长有一定的影响,但是影响不大。另外,经观察加有适当浓度的食用菌罐藏加工预煮液的培养基所培育的金线莲相比普通培养基所培育的金线莲植株更茁壮,叶片舒展、厚实,且颜色更鲜艳。

为了验证本发明的培养基是否适合用于其他植物的培养,发明人还将本发明的60组(A1~A20;B1~B20;C1~C20)培养基用于萝卜、花椰菜、西红柿、蓝莓等植物的培育,发现萝卜、花椰菜、西红柿与传统培养基(即不含预煮液的培养基)对比,长势差异不明显,蓝莓与传统培养基对比,长势无差异,说明本发明培养基的使用是有针对性的,并不一定适合所有植物的培育或上述培养基的组分配比关系并不适合其他植物的培育。

太阳城集团本文
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