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一种人参叶芽诱导培养基及培养方法.pdf

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一种 人参 叶芽 诱导 培养基 培养 方法
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摘要
申请专利号:

CN201610011309.X

申请日:

20160109

公开号:

太阳城集团CN105660393A

公开日:

20160615

当前法律状态:

有效性:

失效

法律详情:
IPC分类号: A01H4/00 主分类号: A01H4/00
申请人: 佛山市金蓝领教育科技有限公司
发明人: 何志铿
地址: 528000 广东省佛山市禅城区同华东一路40号二层之八
优先权: CN201610011309A
专利代理机构: 代理人:
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法律状态
申请(专利)号:

太阳城集团CN201610011309.X

授权太阳城集团号:

法律状态太阳城集团日:

法律状态类型:

摘要

太阳城集团本发明提供一种人参叶芽诱导培养基和培养方法,属于人参组织培养技术领域,培养基以MS培养基为基础培养基,并添加有2ip(异戊烯腺嘌呤)、NAA(萘乙酸)、PVP(聚乙烯吡咯烷酮)、琼脂粉、白砂糖,培养方法包括外植体处理、接种、暗培养和常规培养四个步骤,本发明提供的人参叶芽诱导培养基及培养方法具有诱导率高、褐化率低的优点。

权利要求书

太阳城集团1.一种人参叶芽诱导培养基,其特征在于,其以MS培养基为基础培养基,并添加有2ip(异戊烯腺嘌呤)、NAA(萘乙酸)、PVP(聚乙烯吡咯烷酮)、琼脂粉、白砂糖。2.根据权利要求1所述的一种人参叶芽诱导培养基,其特征在于,2ip(异戊烯腺嘌呤)的浓度为2-8mg/L,NAA(萘乙酸)的浓度为0.6-1.0mg/L、PVP(聚乙烯吡咯烷酮)的浓度为0.6-1.5mg/L、琼脂粉的浓度为8-12g/L、白砂糖的浓度为25-35g/L。3.根据权利要求1所述的一种人参叶芽诱导培养基,其特征在于,2ip(异戊烯腺嘌呤)的浓度为4-6mg/L,NAA(萘乙酸)的浓度为0.7-0.9mg/L、PVP(聚乙烯吡咯烷酮)的浓度为0.9-1.2mg/L、琼脂粉的浓度为9-11g/L、白砂糖的浓度为28-32g/L。4.根据权利要求1至3其中之一所述的一种人参叶芽诱导培养基,其特征在于,所述的人参叶芽诱导培养基的pH值为5.5-6.5。5.根据权利要求4所述的一种人参叶芽诱导培养基,其特征在于,所述的人参叶芽诱导培养基的pH值为5.8。6.一种人参叶芽诱导培养方法,其特征在于,其包括以下步骤:S10外植体处理:从生长健康的人参母株上采集正常生长的叶芽作为外植体,进行外植体消毒,切块;S20接种:将步骤S10中取得的外植体块接种到人参叶芽诱导培养基中,每块外植体相互间隔1-1.5厘米;S30暗培养:将步骤S20接种完毕的人参外植体块置于黑暗环境中培养2-3天,培养温度为23-27℃;S40常规培养:暗培养结束后将人参外植体块置于人工气候箱中进行培养,培养条件如下,光照太阳城集团为12/12小时(光照/黑暗),光照强度为1800-2200lux,培养温度为23-27℃。7.根据权利要求6所述的一种人参叶芽诱导培养方法,其特征在于,所述的步骤S10还包括以下子步骤:步骤S11消毒:将采集回来的花芽用自来水冲洗干净,用浓度为74-76%酒精浸泡30秒,取出,用无菌水冲洗3-4次,再使用浓度为0.1-0.12%的升汞液浸泡5-10分钟,浸泡期间不断轻轻摇晃,在用无菌水冲洗3-4次;步骤S12外植体切块:将与升汞液接触的伤口部分切除,并将剩下部分切成3-5毫米见方的外植体块。

说明书

技术领域

太阳城集团本发明属于人参组织培养技术领域,特别是涉及一种人参叶芽诱导培养基,还涉及一种人参叶芽诱导培养方法。

背景技术

人参是被子植物门双子叶植物纲离瓣花亚纲五加科,多年生草本植物,生长于密林,多分布于黑龙江、吉林、辽宁和河北北部深山中,含有10多种人参皂甙,以及人参快醇、多种氨基酸和维生素,是名贵的中草药材。

人参的快速繁殖多采用组织培养技术,然而现有的组织培养技术外植体诱导率低,已不能满足日常生产、科研以及物种保护的要求。

发明内容

基于现有技术存在上述问题,本发明提供一种人参叶芽诱导培养基,其以MS培养基为基础培养基,并添加有2ip(异戊烯腺嘌呤)、NAA(萘乙酸)、PVP(聚乙烯吡咯烷酮)、琼脂粉、白砂糖,还提供一种人参叶芽诱导培养诱导培养方法,其包括外植体处理、接种、暗培养和常规培养四个步骤,本发明提供的人参叶芽诱导培养基及培养方法具有诱导率高、褐化率低的优点。

太阳城集团一种人参叶芽诱导培养基,其以MS培养基为基础培养基,并添加有2ip(异戊烯腺嘌呤)、NAA(萘乙酸)、PVP(聚乙烯吡咯烷酮)、琼脂粉、白砂糖,2ip(异戊烯腺嘌呤)可以促进细胞分裂分化,配合NAA(萘乙酸)可以更好地诱导叶芽形成愈伤组织,PVP(聚乙烯吡咯烷酮)是酚类物质的专一性吸附剂,吸附人参叶芽分泌的酚类物质,可以抑制褐化。

太阳城集团2ip(异戊烯腺嘌呤)的浓度为2-8mg/L,NAA(萘乙酸)的浓度为0.6-1.0mg/L、PVP(聚乙烯吡咯烷酮)的浓度为0.6-1.5mg/L、琼脂粉的浓度为8-12g/L、白砂糖的浓度为25-35g/L。

太阳城集团2ip(异戊烯腺嘌呤)的浓度为4-6mg/L,NAA(萘乙酸)的浓度为0.7-0.9mg/L、PVP(聚乙烯吡咯烷酮)的浓度为0.9-1.2mg/L、琼脂粉的浓度为9-11g/L、白砂糖的浓度为28-32g/L。

人参叶芽诱导培养基的pH值为5.5-76.5。

人参叶芽诱导培养基的pH值为5.8,微酸性的培养环境更适合人参叶芽诱导,也可以抑制酚类物质发生氧化反应,组成人参愈伤组织褐化死亡。

一种人参叶芽诱导培养方法,其包括以下步骤:

S10外植体处理:从生长健康的人参母株上采集正常生长的叶芽作为外植体,进行外植体消毒,切块;

S20接种:将步骤S10中取得的外植体块接种到人参叶芽诱导培养基中,每块外植体相互间隔1-1.5厘米;

太阳城集团S30暗培养:将步骤S20接种完毕的人参外植体块置于黑暗环境中培养2-3天,培养温度为23-27℃;

S40常规培养:暗培养结束后将人参外植体块置于人工气候箱中进行培养,培养条件如下,

太阳城集团光照太阳城集团为12/12小时(光照/黑暗),光照强度为1800-2200lux,培养温度为23-27℃。

步骤S10还包括步骤以下子步骤:

太阳城集团步骤S11消毒:将采集回来的花芽用自来水冲洗干净,用浓度为74-76%酒精浸泡30秒,取出,用无菌水冲洗3-4次,再使用浓度为0.1-0.12%的升汞液浸泡5-10分钟,浸泡期间不断轻轻摇晃,在用无菌水冲洗3-4次;

步骤S12外植体切块:将与升汞液接触的伤口部分切除,并将剩下部分切成3-5毫米见方的外植体块。

具体实施方式

太阳城集团下面结合具体实施例对本发明作进一步描述。

太阳城集团实施例一:配制人参叶芽诱导培养基

根据表1所示的MS培养基配方以及表2所示的人参叶芽诱导培养基配方,制备本发明所述的人参叶芽诱导培养基。

用天平分别称取MS培养基中的各成分以及2ip、NAA、PVP、琼脂粉、白砂糖,置于三角瓶中,加入适量纯化水,搅拌溶解,定容至1000mL,并调节pH值至5.8。将三角瓶封口,置于高压灭菌锅中,于121℃灭菌21min,然后于超净工作台中,将人参叶芽诱导培养基分装至组织培养瓶中,自然冷却,待其凝固后将组织培养瓶封口,备用。

太阳城集团表1MS培养基的成分及其用量。

太阳城集团表2人参叶芽诱导培养基的成分及其用量。

太阳城集团实施例二:本发明所述的人参叶芽诱导培养基的测试

太阳城集团根据表1所示的MS培养基配方以及表3所示的人参叶芽诱导培养基配方,参照实施例一所述的培养基制备方法,分别制备各试验组、对照组的人参叶芽诱导培养基。

表3人参叶芽诱导培养基。

太阳城集团从生长健康的人参母株上采集正常生长的叶芽作为外植体,将采集回来的花芽用自来水冲洗干净,置于超净工作台中,用浓度为75%酒精浸泡30秒,取出,用无菌水冲洗4次,再使用浓度为0.1%的升汞液浸泡8分钟,浸泡期间不断轻轻摇晃,再用无菌水冲洗4次,将与升汞液接触的伤口部分切除,并将剩下部分切成5毫米见方的外植体块。

太阳城集团将外植体块接种到上述制备好的各试验组、对照组的人参叶芽诱导培养基中,每块外植体相互间隔1.2厘米,接种完毕后将人参外植体块置于黑暗环境中培养2天,培养温度为25℃。

暗培养结束后将人参外植体块置于人工气候箱中进行培养,培养条件如下:光照太阳城集团为12/12小时(光照/黑暗),光照强度为2000lux,培养温度为25℃,培养25天后统计诱导率和褐化率,统计结果如表4所示。

太阳城集团表4人参叶芽诱导培养基测试结果。

太阳城集团注:表中综合评分y=诱导率b*0.7-褐化率a*0.3。

由表4的试验结果可知,采用本发明所述的人参叶芽诱导培养基,能够显著提高人参叶芽诱导率,并降低其褐化率。从对照组3和试验组5对比可以看出PVP对人参叶芽诱导组织培养具有一定的抑制褐化的作用,可以将褐化率降低到15%以下;从对照组1、2和试验组5比较可以看出2ip和NAA配合使用比单独使用任何一种具有更好的促进效果;同时从试验结果可以看出PVP的用量超过0.1mg/L后抑制褐化效果不会随着用量增多而增加;2ip和NAA的用量太多不仅不会造成更好的诱导促进效果,反而因用量太多而影响促进诱导作用。

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