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发酵大豆提取物在制备防治老年痴呆有关疾病药物和保健品中的应用.pdf

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发酵 大豆 提取物 制备 防治 老年痴呆 有关 疾病 药物 保健品 中的 应用
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摘要
申请专利号:

CN201510110271.7

申请日:

20150313

公开号:

CN106138169A

公开日:

20161123

当前法律状态:

有效性:

审查中

法律详情:
IPC分类号: A61K36/48,A61P25/28,A23L1/29 主分类号: A61K36/48,A61P25/28,A23L1/29
申请人: 中国人民解放军军事医学科学院放射与辐射医学研究所
发明人: 董俊兴,田瑛,何轩辉,刘士军,陈恒文,李彬,汪琼,陈立
地址: 100850 北京市海淀区太平路27号
优先权: CN201510110271A
专利代理机构: 代理人:
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法律状态
申请(专利)号:

CN201510110271.7

授权太阳城集团号:

法律状态太阳城集团日:

法律状态类型:

摘要

本发明提供了发酵大豆提取物在制备防治老年痴呆有关疾病的药物和保健品中的应用,所述的发酵大豆提取物含有含量达到70%以上的甘油酯类成分。本发明提供了发酵大豆提取物的新用途,将已申请专利(申请号201510007348.8)太阳城集团发酵大豆提取物仅作为防治辐射损伤有关疾病扩大到现今防治老年痴呆有关疾病的用途,增加其发明应用范围。实验证明,本发明的发酵大豆提取物在转基因秀丽线虫模型上显示出抗老年痴呆的作用,可用于制备抗老年痴呆药物及保健品。

权利要求书

太阳城集团1.一种发酵大豆提取物在制备用于预防或治疗与老年痴呆有关疾病的药物或保健品中的应用,所述的发酵大豆提取物含有含量达到70%以上的甘油酯类成分。2.根据权利要求1所述的应用,其特征在于:所述疾病为阿尔茨海默病、血管性痴呆或以阿尔茨海默病或血管性痴呆为主的混合性痴呆。3.根据权利要求1或2所述的应用,其特征在于:所述甘油酯类成分含量达到85%以上。4.根据权利要求3所述的应用,其特征在于:甘油二酯类成分为所述甘油酯类成分中的标志性组分之一,且所述标志性组分甘油二酯类成分含量达到10%以上。5.根据权利要求3所述的应用,其特征在于:所述发酵大豆提取物采用超临界CO萃取技术制备得到,所述方法包括以下步骤:①将发酵大豆粉碎,得到发酵大豆粉;②将步骤①得到的发酵大豆粉通过超临界CO萃取,制备得发酵大豆提取物。6.根据权利要求5所述的应用,其特征在于:步骤①中所述的发酵大豆在粉碎前被干燥至水分含量不高于15%。7.根据权利要求6所述的应用,其特征在于:步骤②中所述超临界CO萃取制备的条件是萃取温度为25~55℃,萃取压力为20~40MPa。

说明书

技术领域

本发明涉及医药技术领域,具体涉及发酵大豆提取物在制备防治老年痴呆有关疾病药物和保健品中的应用。

背景技术

老年性痴呆是指发生在老年期的各种痴呆综合征,包括阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease,AD)、血管性痴呆(Vascular dementia,VD)、混合性痴呆及其他痴呆,前两种为其主要类型,占所有痴呆的90%。截止2013年底,全球痴呆患者已超过4400万,预计到2050年将突破1.35亿人,其中发展中国家的患者占到总人数的62%。我国已经进入到老龄化社会,预计到2050年患者人数将超过2000万,成为世界上AD患病人口最多、增长速度最快的地区。世界卫生组织和阿尔茨海默病协会已经呼吁全球将AD视为重要的公众健康问题。

太阳城集团目前,老年痴呆的病因尚未明确,针对其已提出众多假说,诞生许多新的治疗策略,然而临床上用于治疗老年痴呆的一线药物仍然是以多奈哌齐为代表的胆碱酯酶抑制剂和美金刚为代表的NMDA受体拮抗剂,新防治药物或保健品的研发成为老年痴呆研究的重点。

发酵大豆是以大豆为发酵基质经微生物作用而制成,酿造酱油、豆酱、豆豉、腐乳、纳豆、味噌和丹贝等都是耳熟能详的发酵大豆食品。在我国发酵大豆药食兼用的历史悠久,作为功能性食品已经成为研究热点。发酵大豆丰富的生理功能体现在抗肿瘤、抗糖尿病、抗氧化、降血压、溶血栓、抗菌等方面(范俊峰,李里特,张艳艳等.传统大豆发酵食品的生理功能.食品科学,2005,26(1):250-254.),这与大豆通过发酵产生的活性成分,特别是新生成的二次代谢产物密切相关。其中,大豆异黄酮、大豆多肽、类黑精、大豆低聚糖、纳豆激酶和豆豉纤溶酶都是发酵大豆中备受关注的功能性成分(Chang TS.Isolation,Bioactivity,and Production of ortho-Hydroxydaidzein and ortho-Hydroxygenistein.Int J Mol Sci,2014,15:5699-5716.邵伟,熊泽,何晓文.发酵大豆多肽及其功能研究.中国酿造,2005,6:23-25.唐传核,彭志英.浅析大豆发酵食品的功能性成分.2000,5:8-10.熊骏,李海燕,柳陈坚.传统大豆发酵食品中大豆低聚糖的生理功能研究.中国微生态学杂志,2010,22(1):77-80.Dabbagh F,Negahdaripour M,Berenjian A et al.Nattokinase:production and application.Appl Microbiol Biotechnol,2014,98:9199-9206.)。

太阳城集团本发明公开的发酵大豆提取物在老年痴呆有关疾病预防和治疗方面的应用未见相关报道。该提取物呈棕黄色油状物,采用超临界CO2萃取技术制备得到,含有含量达到70%以上的甘油酯类成分,与已申请的发明专利(申请号201510007348.8)中提到的发酵大豆提取物相同。本发明提供了该发酵大豆提取物的新用途,扩大其应用范围,有望为老年痴呆有关疾病的防治提供药物和保健品候选。

发明内容

本发明的目的是提供一种发酵大豆提取物在预防或治疗与老年痴呆有关疾病中的应用,主要涉及阿尔茨海默病、血管性痴呆或以阿尔茨海默病或血管性痴呆为主的混合性痴呆。

本发明的第二个目的是提供一种用于预防或治疗与老年痴呆有关疾病的药物和保健品。

本发明的第三个目的是提供发酵大豆提取物的新用途,扩大其应用范围。发明中涉及的发酵大豆提取物与已申请的发明专利(申请号201510007348.8)保护的提取物相同,通过下述方法制备得到:①将发酵大豆粉碎,得到发酵大豆粉;②将步骤①得到的发酵大豆粉通过超临界CO2萃取,制备得发酵大豆提取物。

太阳城集团实验证明,本发明提供的发酵大豆提取物在β淀粉样多肽转基因秀丽线虫模型上能显著抑制其致瘫率,具有抗老年痴呆,特别是阿尔茨海默病的作用。

太阳城集团本发明具有以下优点:在已申请专利的基础上,增加受保护发酵大豆提取物的新用途,扩大其应用范围。该发酵大豆提取物在转基因秀丽线虫模型上在体证明了其具有抗老年痴呆的作用,可能成为预防或治疗与老年痴呆有关疾病的药物和保健品。

附图说明

图1显示发酵大豆提取物对β淀粉样多肽转基因秀丽线虫致瘫率的影响。

具体实施方式

现结合具体的实施例对本发明作详细描述,但本发明的实施不仅限于此。

本发明中使用的发酵大豆为市售产品豆味噌,购自大连松井味噌有限公司,超临界CO2萃取仪的型号为HA120-50-02。

实施例1、发酵大豆提取物的制备

太阳城集团①将豆味噌300g置于鼓风干燥箱内干燥至水分含量8%,然后用粉碎机粉碎豆味噌粉可过20目筛。

太阳城集团②将步骤①得到的豆味噌粉100g置于CO2超临界萃取仪中,萃取温度为55℃,萃取压力为35MPa,萃取太阳城集团为0.5h,制备得发酵大豆提取物13g。

③HPLC-APCI/MS分析确定该方法制备得到的发酵大豆提取物主要为甘油酯类成分,GC确定甘油酯类成分含量为80%,HPLC-ELSD检测,面积归一化法确定甘油二酯类成分含量为18%。

太阳城集团实施例2、发酵大豆提取物的制备

①将豆味噌300g置于鼓风干燥箱内干燥至水分含量11%,然后用粉碎机粉碎豆味噌粉可过20目筛。

②将步骤①得到的豆味噌粉100g置于超临界CO2萃取仪中,萃取温度为35℃,萃取压力为25MPa,萃取太阳城集团为1.5h,制备得发酵大豆提取物14g。

③HPLC-APCI/MS分析确定该方法制备得到的发酵大豆提取物主要为甘油酯类成分,GC确定甘油酯类成分含量为85%,HPLC-ELSD检测,面积归一化法确定甘油二酯类成分含量为12%。

太阳城集团实施例3、发酵大豆提取物的制备

太阳城集团①将豆味噌300g置于鼓风干燥箱内干燥至水分含量15%,然后用粉碎机粉碎豆味噌粉可过20目筛。

②将步骤①得到的豆味噌粉100g置于超临界CO2萃取仪中,萃取温度为45℃,萃取压力为30MPa,萃取太阳城集团为1h,制备得发酵大豆提取物15g。

③HPLC-APCI/MS分析确定该方法制备得到的发酵大豆提取物主要为甘油酯类成分,GC确定甘油酯类成分含量为75%,HPLC-ELSD检测,面积归一化法确定甘油二酯类成分含量为15%。

实施例4、发酵大豆提取物对转基因秀丽线虫模型抗老年痴呆的作用

(一)实验动物

太阳城集团β淀粉样多肽转基因秀丽线虫株系(CL2006)。

(二)实验药物

实施例2中描述的方法制备得到的发酵大豆提取物。

(三)实验方法

1、实验分组及给药

太阳城集团实验分为1个对照组,低(15tg/ml)、中(30μg/ml)、高(60tg/ml)3个剂量给药组,置于20℃生化培养箱中饲养。

将药物母液不同浓度稀释后滴加在NGM培养基表面,超净台内吹干后即可涂OP50菌,供后续饲养线虫及药物筛选使用。

2、秀丽线虫的同步化处理

太阳城集团将食物充足的成虫(约500只)收集在离心管中,用M9Buffer洗涤后,加入虫体裂解缓冲液(0.5M NaOH,0.5%NaClO,M9Buffer)获得虫卵,将卵移入不含有OP50的M9缓冲液中20℃培养16小时以上,使转基因秀丽线虫在饥饿状态下同步发育到幼虫1期(L1),将L1期秀丽线虫移入到含有OP50的NGM培养皿中20℃培养,即可以获得不同日龄的线虫。

3、观察指标

太阳城集团将L1期线虫接种于相应的培养皿中,置于20℃生化培养箱中饲养,在第8天统计线虫的累积非瘫痪率,以致瘫抑制率为考察指标,评价药物抗老年痴呆的作用。

4、实验结果

结果显示发酵大豆提取物给药组能显著地抑制β淀粉样多肽转基因秀丽线虫的致瘫率(图1),其中中剂量(30μg/ml)给药组对转基因秀丽线虫的致瘫抑制率即可达52%,并且显示出剂量依赖关系,由此说明该发酵大豆提取物具有潜在的抗老年痴呆作用。

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