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一种益生菌发酵玉米须的组合物及其制备方法和应用.pdf

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一种 益生菌 发酵 玉米须 组合 及其 制备 方法 应用
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摘要
申请专利号:

太阳城集团CN201610354987.6

申请日:

20160526

公开号:

CN106039050A

公开日:

20161026

当前法律状态:

有效性:

审查中

法律详情:
IPC分类号: A61K36/899,A61K47/02,A61K47/26,A61P3/10,A61P3/06,A61P7/10,A61P29/00,A61P1/16,A61P1/10,A23L33/00 主分类号: A61K36/899,A61K47/02,A61K47/26,A61P3/10,A61P3/06,A61P7/10,A61P29/00,A61P1/16,A61P1/10,A23L33/00
申请人: 三株福尔制药有限公司
发明人: 吴炳新,孙筱林,陆继臣,褚新红
地址: 251402 山东省济南市济阳县济北开发区孙耿工业园富强大街2号
优先权: CN201610354987A
专利代理机构: 代理人:
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法律状态
申请(专利)号:

CN201610354987.6

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法律状态太阳城集团日:

法律状态类型:

摘要

本发明公开了一种益生菌发酵玉米须的组合物及其制备方法,将玉米须烘干粉碎后,经浸泡、益生菌发酵、加入甜味剂制得。玉米须经过益生菌发酵后,获得较高含量的玉米须总皂苷和较低分子量的玉米须多糖,可起到降血糖、降血脂、消肿利尿、清热解毒、平肝利胆、改善便秘等效果。本发明的益生菌发酵玉米须的组合物具有口感易于接受、不刺激胃肠道,同时由于含有益生菌菌体及其代谢产物,能够调理胃肠道环境,增加了对药物的吸收。

权利要求书

1.一种益生菌发酵玉米须的组合物,其特征在于,将玉米须烘干粉碎后,经浸泡、益生菌发酵、加入甜味剂制得,其制备方法步骤如下:A..取玉米须烘干,粉碎,过65~100目筛,加入药材重量15倍的水,加入亚硒酸钠、六水三氯化铬、磷酸氢二钾、磷酸二氢钾,浸泡1.0小时,调pH值为7.0,115℃灭菌50分钟;B.当温度降至39℃时,先接入预培养好的一种体积比为0.5~1.0%的双歧杆菌菌液,培养16小时后,再接入两种体积比各为0.5~1.0%的乳杆菌菌液,37℃培养至发酵液pH值为4.0时,用无菌的氢氧化钠调整发酵液pH值为5.0,继续发酵至pH值为4.0,将发酵温度调至25℃,继续培养24小时,结束发酵;C.将发酵液离心,离心上清液备用;药渣加入8倍量的75%乙醇,加热回流提取1小时,滤过,滤液减压回收乙醇,醇提液与离心上清液合并,继续减压浓缩至60℃下相对密度1.01~1.05,得玉米须发酵提取液;D.将玉米须发酵提取液中加入阿拉伯糖、塔格糖、三氯蔗糖,混合均匀,定容,过滤后,115℃,灭菌20分钟,即得益生菌发酵玉米须的组合物;所述的玉米须在发酵玉米须的组合物中的重量g/体积mL比为15~25%。2.根据权利要求1所述的益生菌发酵玉米须的组合物,其特征在于,所述的玉米须在发酵玉米须的组合物中的重量g/体积mL比为20%。3.根据权利要求1或2所述的益生菌发酵玉米须的组合物,其特征在于,所述的亚硒酸钠在益生菌发酵玉米须的组合物中的含量为0.70µg/mL;所述的六水三氯化铬在益生菌发酵玉米须的组合物中的含量为1.55µg/mL;所述的磷酸氢二钾在益生菌发酵玉米须的组合物中的含量为1mg/mL;所述的磷酸二氢钾在益生菌发酵玉米须的组合物中的含量为1mg/mL。4.根据权利要求1或2所述的益生菌发酵玉米须的组合物,其特征在于,所述的双歧杆菌选自短双歧杆菌、长双歧杆菌或青春双歧杆菌;所述的乳杆菌选自嗜酸乳杆菌、德氏乳杆菌、植物乳杆菌、唾液乳杆菌或干酪乳杆菌。5.根据权利要求1或2所述的益生菌发酵玉米须的组合物,其特征在于,所述的阿拉伯糖和塔格糖的添加量均为重量g/体积mL比1~3%;所述的三氯蔗糖的添加量为重量g/体积mL比0.015%。6.权利要求1-5任一项所述的益生菌发酵玉米须的组合物的制备方法,其特征在于,步骤如下:A..取玉米须烘干,粉碎,过65~100目筛,加入药材重量15倍的水,加入亚硒酸钠、六水三氯化铬、磷酸氢二钾、磷酸二氢钾,浸泡1.0小时,调pH值为7.0,115℃灭菌50分钟;B.当温度降至39℃时,先接入预培养好的一种体积比为0.5~1.0%的双歧杆菌菌液,培养16小时后,再接入两种体积比各为0.5~1.0%的乳杆菌菌液,37℃培养至发酵液pH值为4.0时,用无菌的氢氧化钠调整发酵液pH值为5.0,继续发酵至pH值为4.0,将发酵温度调至25℃,继续培养24小时,结束发酵;C.将发酵液离心,离心上清液备用;药渣加入8倍量的75%乙醇,加热回流提取1小时,滤过,滤液减压回收乙醇,醇提液与离心上清液合并,继续减压浓缩至60℃下相对密度1.01~1.05,得玉米须发酵提取液;D.将玉米须发酵提取液中加入阿拉伯糖、塔格糖、三氯蔗糖,混合均匀,定容,过滤后,115℃,灭菌20分钟,即得益生菌发酵玉米须的组合物。7.权利要求1-5任一项所述的益生菌发酵玉米须的组合物在制备用于降血糖、降血脂、消肿利尿、清热解毒、平肝利胆、改善便秘的药品、保健品中的应用。

说明书

技术领域

本发明涉及益生菌与玉米须共同发酵制备的发酵组合物以及在功能保健品或者药品领域中的应用,属于生物发酵技术领域。

技术背景

玉米须(StigmaMaydis)为玉米的花柱和柱头,最早药用记载见于1476年的《滇南木草》,为《中华人民共和国卫生部药材标准》1985版(一部)收录的常用药材品种,我国卫监督函〔2012〕306号文批复,玉米须作为普通食品管理。从20世纪20年代起,国内外学者便对玉米须的化学成分开始了研究,发现玉米须中含有多糖类、生物碱类、黄酮类、皂苷类、苦味糖苷、甾醇类、多聚戊糖、挥发性物质、氨基酸、矿物质元素等多种化学成分,具有抗菌、抗肿瘤、降血糖、血脂、利尿、降压、增强免疫等功效。

玉米须多糖主要由葡萄糖、半乳糖、阿拉伯糖、半乳糖醛酸、甘露糖和木糖所组成。玉米须多糖能够明显降低四氧嘧啶及肾上腺素所造成的高血糖小鼠的血糖水平,并能增加小鼠体内肝糖原含量;玉米须多糖能够增强小鼠体液免疫和细胞免疫功能,可显著增加小鼠抗体生成脾细胞数,促进巨噬细胞合成NO、提高巨噬细胞吞噬指数,提高环磷酰胺所致免疫功能低下小鼠的胸腺指数及胸腺DNA含量;玉米须多糖对肝癌SMMC-7721细胞的生长具有一定的抑制作用,诱导癌细胞凋亡,其抑制作用呈剂量及太阳城集团依赖性;玉米须多糖还具有利胆保肝、解热利尿的作用。多糖的提取主要是水提方法。

玉米须黄酮类化合物具有多种生物活性,其中最重要的是其抗氧化活性。黄酮类化合物的抗氧化活性主要表现在减少自由基的产生和清除自由基两方面,且其清除自由基的能力与其药理活性密切相关。研究发现玉米须黄酮能明显提高病鼠超氧化物歧化酶(SOD)活力,减少脂质过氧化物丙二醛(MDA)的产生,通过抗氧化作用,减轻四氧嘧啶对胰岛ß细胞损伤,或促进已损伤的ß细胞的修复,增强胰岛的分泌功能,从而减轻高血糖反应,并可通过改善血液循环降低糖尿病合并心肌缺血大鼠血糖水平。玉米须总黄酮还改善缺血心肌代谢、稳定细胞膜结构,降低药物性心肌缺血的发生率。黄酮提取的方法主要有:热水提取法、碱性水溶液提取法、甲醇提取法、丙酮提取法。

研究发现玉米须总皂苷有较好的降糖活性,能降低正常小鼠血糖水平,对肾上腺素、四氧嘧啶、链尿佐菌素所致小鼠高血糖模型也有较好的降糖作用,并且对胰岛损伤有较好的改善作用。皂苷一般可溶于水,易溶于热水、稀醇,难溶于乙醚、苯、氯仿等亲脂性有机溶剂,在含水丁醇或戊醇中溶解度较好,并且都能与水分层。

太阳城集团由于玉米须使用安全,临床使用广泛,推动了对玉米须有效成分提取和应用的研究。中国专利CN200410092087.6公开了一种治疗糖尿病的药物包括玉米须总黄酮或者玉米须总皂苷或者玉米须粗多糖。中国专利200910112201.X公开了一种改善玉米须风味的方法。中国专利CN201310676099.2公开了一种提取玉米须黄酮的方法,包括超微粉碎和闪式提取方法。中国专利CN201410266447.3公开了一种利用纤维素酶、淀粉酶、果胶酶提取玉米须总皂苷的方法。中国专利CN200810050578.2公开了一种在玉米须提取液中添加木糖醇、苹果酸、柠檬酸等制备的饮品。中国专利CN200910189137.5公开了一种利用酿酒酵母发酵玉米须应用于烟草领域的方法。以上研究和有关文献主要涉及利用有关设备或者有机溶剂以及相关酶类进行玉米须化学成分的提取,药理作用,抗氧化活性的研究,并没有利用人体益生菌发酵技术,来提高玉米须活性成分和功效的有关研究。

发明内容

太阳城集团本发明的一个目的是提供一种益生菌发酵玉米须的组合物,玉米须烘干粉碎后,经浸泡、益生菌发酵、加入甜味剂制得,其制备方法步骤如下:

太阳城集团A.取玉米须烘干,粉碎,过65~100目筛,加入药材重量15倍的水,加入亚硒酸钠、六水三氯化铬、磷酸氢二钾、磷酸二氢钾,浸泡1.0小时,调pH值为7.0,115℃灭菌50分钟;

B.当温度降至39℃时,先接入预培养好的一种体积比为0.5~1.0%的双歧杆菌菌液,培养16小时后,再接入两种体积比各为0.5~1.0%的乳杆菌菌液, 37℃培养至发酵液pH值为4.0时,用无菌的氢氧化钠调整发酵液pH值为5.0,继续发酵至pH值为4.0,将发酵温度调至25℃,继续培养24小时,结束发酵;

C.将发酵液离心,离心上清液备用;药渣加入8倍量的75%乙醇,加热回流提取1小时,滤过,滤液减压回收乙醇,醇提液与离心上清液合并,继续减压浓缩至60℃下相对密度1.01~1.05,得玉米须发酵提取液;

太阳城集团D.将玉米须发酵提取液中加入阿拉伯糖、塔格糖、三氯蔗糖,阿拉伯糖、塔格糖添加量重量g/体积mL比均为1~3%;三氯蔗糖添加量重量g/体积mL比为0.015%,混合均匀,定容,过滤后,115℃,灭菌20分钟,即得益生菌发酵玉米须的组合物。

太阳城集团本发明所述的益生菌发酵玉米须的组合物中各成分的含量为:

玉米须:重量g/体积mL比为 15~25%;

太阳城集团亚硒酸钠:0.70µg/mL;

太阳城集团六水三氯化铬:1.55µg/mL;

磷酸氢二钾:1mg/mL;

磷酸二氢钾:1mg/mL。

玉米须 ,为禾本科植物玉蜀黍Zea mays L.的花柱和柱头。全国大部分地均产。夏、秋果实成孰时收集,除去杂质。鲜用或晒干生用。味甘、淡,性平。归膀胱、肝、胆经。

优选的,所述的益生菌发酵玉米须的组合物中玉米须的重量g/体积mL比为20%。

所述的双歧杆菌选自短双歧杆菌、长双歧杆菌或青春双歧杆菌;所述的乳杆菌选自嗜酸乳杆菌、德氏乳杆菌、植物乳杆菌、唾液乳杆菌或干酪乳杆菌。

太阳城集团本发明的另一个目的是提供本发明的益生菌发酵玉米须的组合物在制备用于降血糖、降血脂、消肿利尿、清热解毒、平肝利胆、改善便秘等药品、保健品中的应用。玉米须经过益生菌发酵后,获得较高含量的玉米须总皂苷和较低分子量的玉米须多糖,添加医药上可接受的添加剂,制得的发酵组合物,达到利尿、降糖、降脂、改善便秘等效果。

有益效果:

太阳城集团本发明的益生菌发酵中药组合物具有口感易于接受、不刺激胃肠道,同时由于含有益生菌菌体及其代谢产物,能够调理胃肠道环境,增加了对药物的吸收。

太阳城集团肠道益生菌参与了人体的生理、生化、病理和药理过程。因此,益生菌发酵玉米须组合物可以调理机体的肠道健康,增强机体对药物成分的吸收。

为了揭示益生菌发酵对玉米须成分的分子化学修饰作用,通过基础实验研究证实,经过益生菌发酵代谢转化,发酵玉米须组合物中低分子量玉米须多糖明显增加、玉米须总皂苷含量明显高于未发酵的玉米须组合物。

为检测本发明的发酵玉米须组合物降血糖效果,实验观察了发酵玉米须组合物与未发酵玉米须组合物对大鼠高血糖模型的空腹血糖的影响。结果表明,与模型组、未发酵玉米须组合物比较,本发明的发酵玉米须组合物,可以显著性的降低大鼠的空腹血糖、有明显的降低血糖的作用,具有显著性差异。

太阳城集团为了检测本发明的发酵玉米须组合物改善便秘的效果,实验观察了发酵玉米须组合物与未发酵组合物对小鼠的小肠墨汁推进率实验,实验结果表明,模型对照组与空白对照组相比,小鼠的小肠墨汁推进率明显降低(p< 0.01),说明造模成功;与模型对照组相比,未发酵高剂量及发酵组合物高、中剂量组小鼠的小肠墨汁推进率均显著性升高。说明玉米须达到一定剂量本身具有一定功效,并且发酵组合物中剂量开始起效;发酵组合物中、高剂量组与未发酵中、高剂量组之间有显著性差异(p< 0.05)。说明玉米须经益生菌发酵处理后改善便秘功效明显增强。

本发明模拟正常人的肠道微生态环境,利用在人体内分布广泛并且作用确切的多种肠道益生菌与本发明使用的玉米须一起发酵,以实现益生菌对他们的修饰。经与益生菌共同发酵处理后,玉米须总皂苷、低分子量多糖含量明显提高,其降血糖活性、改善便秘的作用得到了显著提高和改善。

具体实施方式

太阳城集团以下将参照实施例对本发明进行进一步的描述,但不应看作对本发明的限制。

实施例1:益生菌发酵玉米须的组合物A的制备

玉米须烘干,粉碎,过65目筛,称取玉米须粉20g,加入药材重量15倍的水、亚硒酸钠70µg、六水三氯化铬155µg、磷酸氢二钾100mg、磷酸二氢钾100mg,浸泡1.0小时,调pH值为7.0,115℃灭菌50分钟;温度降至39℃时,接入预培养好的短双歧杆菌(AS 1.2213)菌液,接种量为1%(体积/体积),37℃培养16小时后、再接入嗜酸乳杆菌(AS 1.1854)菌液、植物乳杆菌(AS 1.19)菌液,接种量均为0.5%(体积/体积)。37℃继续培养至发酵液pH值4.0时,用无菌的氢氧化钠调整发酵液pH值为5.0,继续发酵至pH值为4.0,将发酵温度调至25℃,继续培养24小时,结束发酵。离心取上清液,备用。将沉淀加入8倍药渣重量的75%乙醇,加热回流提取1小时,滤过,滤液减压回收乙醇,醇提液与发酵离心上清液合并,并减压浓缩至相对密度为1.01~1.05(60℃),分别加入重量体积比为2%的塔格糖、重量体积比为2%的阿拉伯糖、重量体积比为0.015%的三氯蔗糖,混合均匀,最后定容至100mL,过滤后,115℃,灭菌20分钟,即得发酵玉米须的组合物A。

实施例2:益生菌发酵玉米须的组合物B的制备

玉米须烘干,粉碎,过80目筛,称取玉米须粉15g,加入药材重量15倍的水、亚硒酸钠70µg、六水三氯化铬155µg、磷酸氢二钾100mg、磷酸二氢钾100mg,浸泡1.0小时,调pH值为7.0,115℃灭菌50分钟;温度降至39℃时,接入预培养好的长双歧杆菌长亚种(AS 1.5014)菌液,接种量为1%(体积/体积),37℃培养16小时后,再接入德氏乳杆菌(AS1.1480)、鼠李糖乳杆菌(AS1.22)菌液,接种量均为0.5%(体积/体积)。37℃继续培养至发酵液pH值4.0时,用无菌的氢氧化钠调整发酵液pH值为5.0,继续发酵至pH值为4.0,将发酵温度调至25℃,继续培养24小时,结束发酵。离心取上清液,备用。将沉淀加入8倍药渣重量的75%乙醇,加热回流提取1小时,滤过,滤液减压回收乙醇,醇提液与发酵离心上清液合并,并减压浓缩至相对密度为1.01~1.05(60℃),分别加入重量体积比为1.5%的塔格糖、重量体积比为2.5%的阿拉伯糖、重量体积比为0.015%的三氯蔗糖,混合均匀,最后定容至100mL,过滤后,115℃,灭菌20分钟,即得发酵玉米须的组合物B。

实施例3:益生菌发酵玉米须的组合物C的制备

太阳城集团玉米须烘干,粉碎,过100目筛,称取玉米须粉25g,加入药材重量15倍的水、亚硒酸钠70µg、六水三氯化铬155µg、磷酸氢二钾100mg、磷酸二氢钾100mg,浸泡1.0小时,调pH值为7.0,115℃灭菌50分钟;温度降至39℃时,接入预培养好的青春双歧杆菌(AS 1.2190)菌液,接种量为1%(体积/体积),37℃培养16小时后、再接入唾液乳杆菌唾液亚种(AS 1.1881)菌液、干酪乳杆菌(AS 1.29)菌液,接种量均为0.5%(体积/体积)。37℃继续培养至发酵液pH值4.0时,用无菌的氢氧化钠调整发酵液pH值为5.0,继续发酵至pH值为4.0,将发酵温度调至25℃,继续培养24小时,结束发酵。离心取上清液,备用。将沉淀加入8倍药渣重量的75%乙醇,加热回流提取1小时,滤过,滤液减压回收乙醇,醇提液与发酵离心上清液合并,并减压浓缩至相对密度为1.01~1.05(60℃),分别加入重量体积比为3%的塔格糖、重量体积比为1.0%的阿拉伯糖、重量体积比为0.015%的三氯蔗糖,混合均匀,最后定容至100mL,过滤后,115℃,灭菌20分钟,即得发酵玉米须的组合物C。

太阳城集团实验例1益生菌发酵玉米须的组合物与未发酵玉米须组合物多糖分子量分布变化

选用实施例制备的发酵玉米须的组合物A,B、C为试验样品,并以同浓度同样方法制备但未经益生菌发酵的玉米须组合物a、b、c为对照。

试验的目的是检验经过益生菌发酵转化后,玉米须多糖分子量分布情况。在多糖的提取实验中,醇沉是多糖分离纯化的第一步操作,而醇沉是依据分子量大小进行分离纯化的。在醇沉浓度较小时,能够沉淀下来的多糖往往是分子量较大的多糖。醇沉浓度不同,多糖分子量的组成和得率不同,通过不同浓度的乙醇沉淀多糖,可以了解多糖分子量的分布范围。

多糖含量测定:按照“NY/T 1676 食用菌中粗多糖含量的测定”规定的方法进行。

分级醇沉:取发酵玉米须的组合物与未发酵组合物样品,离心取上清液各5份,每份1.00ml,乙醇沉淀多糖,最终醇浓度为20% 、40%、60% 、80%和90% ,总体积25ml。将沉淀用蒸馏水溶解,并定容至25ml,按照“NY/T1676 食用菌中粗多糖含量的测定”规定的方法测定各样品多糖含量。

分步醇沉:取发酵玉米须的组合物与未发酵组合物离心上清液各1份,每份1.00ml,分别加乙醇调醇浓度为20% 进行醇沉淀,总体积为25ml,收集沉淀;用蒸馏水溶解并定容至25ml,检测多糖含量。将离心上清液水浴蒸干,用1.0ml蒸馏水溶解后,醇沉,使最终酒精浓度为40%,总体积为25ml。依此类推至醇浓度为90% 进行醇沉,收集沉淀,用蒸馏水溶解并定容至25ml,按照“NY/T1676 食用菌中粗多糖含量的测定”规定的方法测定个样品多糖含量。具体实验结果见表1。

表1玉米须发酵组合物不同酒精浓度多糖含量测定结果

太阳城集团从表1分级醇沉的试验结果中可以看出,发酵玉米须的组合物与未发酵玉米须组合物样品,其分级醇沉的试验结果呈现出基本相同的变化趋势, 即各级醇沉对应的多糖提取率随醇浓度的升高而呈增加的趋势; 当醇浓度为20% ,只能沉淀出少量多糖,随着乙醇浓度的增加,各级醇沉对应的多糖得率随醇浓度的升高而呈增加的趋势。但是在乙醇浓度80%以下时,发酵玉米须的组合物样品多糖含量明显低于未发酵玉米须组合物样品,而在乙醇浓度达到90%时,发酵玉米须的组合物样品多糖含量显著高于未发酵组合物样品,说明发酵玉米须的组合物中的多糖分子量较小,在乙醇浓度较高时,才能够沉淀出来。

分步醇沉实验结果中可以看出,发酵玉米须的组合物样品与未发酵组合物样品,在乙醇浓度为20%时,沉淀出的玉米须多糖较少,酒精浓度为40%和60%时,沉淀出的多糖较多,但是发酵玉米须的组合物样品中多糖的含量低于未发酵组合物样品,说明发酵玉米须的组合物样品分布在20%~60% 醇沉浓度范围的较大分子量的多糖所占比例低于未发酵组合物样品大分子量的多糖含量。在酒精浓度为80%和90%时,沉淀出的多糖较少,但是发酵玉米须的组合物样品多糖的含量高于未发酵组合物样品,说明发酵玉米须的组合物样品分布在80%~90% 醇沉浓度范围的较小分子量的多糖所占比例高于未发酵组合物样品小分子量的多糖含量。

通过对益生菌发酵玉米须的组合物与未发酵组合物分级醇沉和分步醇沉试验,结果显示,发酵玉米须的组合物样品与未发酵组合物样品比较,多糖分子量分布发生了明显的变化,其大分子量多糖含量明显降低,小分子量多糖含量明显提高。

太阳城集团实验例2 益生菌发酵玉米须的组合物总皂苷的含量测定

太阳城集团皂苷是玉米须中的主要活性成分之一,具有较好的降糖活性,能降低正常小鼠血糖水平,对肾上腺素、四氧嘧啶、链尿佐菌素所致小鼠高血糖模型也有较好的降糖作用,并且对胰岛素损伤有较好的改善作用。为了观察益生菌发酵对玉米须总皂苷含量的影响,利用分光光度法试验了发酵玉米须的组合物与未发酵组合物的总皂苷含量。

太阳城集团总皂苷标准曲线的制备:称取干燥至恒重的人参皂苷Rb1对照品3.0mg,用甲醇溶解并定容至10mL,作为对照品溶液,分别准确移取对照品溶液0.1mL、0.2mL、0.3mL、0.4mL、0.5mL、0.6mL于具塞试管中,挥干溶剂,加入5%香草醛一冰乙酸溶液0.2ml,再加0.8ml的高氯酸,塞盖摇匀,放入6 0℃恒温水浴锅中2 0min,取出后立刻放入冰水浴中静置5min,再加入冰乙酸4ml,摇匀,静置10mi n,空白试管中溶液作为空白对照,在540nm处测定光吸收值,以吸光度为纵坐标,皂苷含量(mg)为横坐标,得总皂苷的回归方程。Y=37.027x-0.0793,R=0.9998

供试品的制备:以实施例制备的发酵玉米须的组合物A、B、C为实验样品,以未发酵的玉米须组合物a、b、c为对照,比较玉米须经过益生菌发酵转化后其总皂苷含量的变化。

太阳城集团各样品取10ml,依次用10mL的乙醚萃取三次,弃去乙醚层,然后用10mL的水饱和的正丁醇萃取4次,保留正丁醇层,回收溶剂,甲醇溶解残留物,定容于10mL的容量瓶中至刻度,得供试品溶液。

检测:精密取供试品溶液10uL于试管中,挥干溶剂,以下操作同标准曲线的制备,在540nm处测定光吸收值,根据回归方程,得出玉米须总皂苷的含量。具体实验结果见表2。

表2玉米须总皂苷的含量

太阳城集团从表2可以看出,经过益生菌发酵玉米须的组合物,根据药材回收率计算,其总皂苷含量明显高于未发酵玉米须组合物总皂苷含量。

太阳城集团实验例3 益生菌发酵玉米须的组合物改善便秘实验

本实施例旨在利用对小鼠小肠推进实验,举例描述按本发明方法制备的发酵玉米须组合物,与未经发酵的玉米须组合物改善便秘的效果比较。

太阳城集团选用实施例制备的发酵玉米须的组合物A,B、C为试验样品,并以同浓度同样方法制备但未经益生菌发酵的玉米须组合物a、b、c为对照。取体重18~22g的雄性小鼠140只,随机分为14组,每组10只,分别为空白对照组、便秘模型对照组、未发酵a、b、c高剂量组、未发酵a、b、c中剂量组、发酵A、B、C高剂量组、发酵A、B、C中剂量组。两个剂量组分别相当于人体推荐量100mL/人/天的20倍、30倍即33.3、50mL/kg.bw/d。分别经口给予受试样品,对照组同样途径给水,每日1次,连续10天。10天后,各组小鼠禁食12小时(期间自由饮水),试验组和模型组分别给予复方地芬诺酯(50mg/kg bw),空白对照组给予蒸馏水,0.5小时后各组小鼠经口给予墨汁,20分钟后立即脱颈椎处死动物,打开腹腔分离肠系膜,完整取出胃喷门至直肠末端段,置于木板上,将小肠自然摆成直线,分别测量从幽门到回盲部和墨汁前沿的距离,计算小肠推进率。

小肠推进率(%)=幽门至墨汁前沿的距离(cm)/幽门到回盲部距离(cm)×100%

实验结果如表3所示:

表3:发酵玉米须组合物与未发酵玉米须组合物对小鼠小肠运动功能的影响

与正常对照组相比,△p< 0.05,△△p< 0.01;与模型对照组相比,*p< 0.05,**p< 0.01

太阳城集团与未发酵同剂量组相比,※p< 0.05。

从本实验结果中可以看出,模型对照组与空白对照组相比,小鼠的小肠墨汁推进率明显降低(p< 0.01),说明造模成功;与模型对照组相比,各组未发酵高剂量及发酵组合物高、中剂量组小鼠的小肠墨汁推进率均显著性升高(p< 0.05-0.01)。说明玉米须达到一定剂量本身具有一定功效,并且发酵的组合物中剂量开始起效;各试验样品发酵的组合物中、高剂量组与未发酵中、高剂量组之间有显著性差异(p< 0.05)。说明玉米须经益生菌发酵处理后改善便秘功效明显增强。

实施例4 益生菌发酵玉米须组合物降血糖实验

本实施例旨在利用大鼠的高血糖模型,举例描述按本发明方法制备益生菌发酵玉米须的组合物降血糖效果。

空腹降血糖实验:选用实施例制备的发酵玉米须的组合物A,B、C为试验样品,并以同浓度同样方法制备但未经益生菌发酵的玉米须组合物a、b、c为对照。强生血糖测定仪测定血糖值。

取体重180±20g的雄性大鼠150只,适应性饲养3天,随机取出10只单独喂养,为空白对照组,其余140只按照60mg/kg的剂量尾静脉注射链尿霉素,48小时后测定空腹血糖,若低于12mmol/L,适量补加注射链尿霉素,6天后禁食3小时,测血糖,血糖值大于15 mmol/L为高血糖模型成功动物。选高血糖模型成功动物130只,按照禁食3小时的血糖水平,随机分为13组,每组10只。分别为高血糖模型组、发酵组合物A、B、C高剂量组、发酵组合物A、B、C中剂量组、未发酵组合物a、b、c高剂量组、未发酵组合物a、b、c中剂量组。高剂量组为人体推荐量的20倍,即每日每只大鼠口服2.9ml(浓缩,相当于原组合物5.8ml);中剂量组为人体推荐量的10倍,即每日每只大鼠口服2.9ml;高血糖模型组和空白对照组给予蒸馏水,连续给药30天后,禁食3小时后测定空腹血糖值,比较各组动物血糖值。具体实验结果见表4。

太阳城集团表4 益生菌发酵玉米须的组合物与未发酵组合物对大鼠空腹血糖实验结果

太阳城集团与空白对照组相比:*p< 0.05;与高血糖模型比:sp< 0.05,与未发酵同剂量组比较:yp<0.05。

给药前:空白对照组与其他组间有显著性差异,各实验组间无显著性差异,说明造模成功。给药四周后,高血糖模型组与发酵A、B、C高剂量组、发酵A、B、C中剂量组、未发酵a、b、c高剂量组、未发酵a、b、c中剂量组、有显著性差异,发酵组A、B高、中剂量组与未发酵a、b高、中剂量组比较,有显著性差异;发酵组C高剂量组与未发酵c高剂量组比较,有显著性差异,说明益生菌发酵玉米须可以提高玉米须的降糖作用。

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本文标题:一种益生菌发酵玉米须的组合物及其制备方法和应用.pdf
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