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一种川贝母种子超低温保存方法.pdf

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一种 川贝母 种子 超低温 保存 方法
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摘要
申请专利号:

太阳城集团CN201711305652.6

申请日:

20171210

公开号:

CN107836447A

公开日:

20180327

当前法律状态:

有效性:

审查中

法律详情:
IPC分类号: A01N3/00,A01C1/00 主分类号: A01N3/00,A01C1/00
申请人: 长沙爱扬医药科技有限公司
发明人: 罗婵
地址: 410205 湖南省长沙市长沙高新开发区尖山路39号长沙中电软件园总部大楼6楼601室
优先权: CN201711305652A
专利代理机构: 代理人:
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法律状态
申请(专利)号:

太阳城集团CN201711305652.6

授权太阳城集团号:

法律状态太阳城集团日:

法律状态类型:

摘要

本发明提供一种川贝母种子超低温保存方法,包括步骤以下:川贝母种子用A试剂处理,处理20~50min后,取出处理过的川贝母种子;处理过的川贝母种子放入装有B试剂的冻存管中,室温温育15~35min,再将其放入梯度降温盒中;将带有川贝母种子的梯度降温盒放入低温冰箱中,使其降温盒的温度在‐35℃~‐60℃,降温速度为‐1℃/min,然后取出降温盒,马上将此降温盒放入液氮中,进行液氮低温保存备用。

权利要求书

1.一种川贝母种子超低温保存方法,包括步骤以下:(1)室温下将川贝母种子用A试剂处理,处理20~50min后,取出处理过的川贝母种子;(2)处理过的川贝母种子放入装有B试剂的冻存管中,室温温育15~35min,再将其放入梯度降温盒中;(3)将带有川贝母种子的梯度降温盒放入低温冰箱中,使其降温盒的温度在‐35℃~‐60℃,降温速度为‐1℃/min,然后取出降温盒,马上将此降温盒放入液氮中,进行液氮低温保存备用。2.根据权利要求1的方法,其中步骤(1)所述A试剂是指B5液体培养液,还包含有1.5~2.5mol/L甘油和1~1.5mol/L二甲基亚砜。3.根据权利要求1的方法,其中所述A试剂优选110~121℃高压蒸汽灭菌15min以上,冷却至室温放置。4.根据权利要求1的方法,其中步骤(2)所述梯度降温盒中含有100%甘油或异丙醇,可以重复使用。5.根据权利要求1的方法,其中步骤(2)所述B试剂是指B5液体培养液,还包含有2.6~3.6mol/L甘油、1.6~2mol/L二甲基亚砜和0.45~0.75mol/L蔗糖。6.根据权利要求1的方法,其中所述B试剂优选110~121℃高压蒸汽灭菌15min以上,冷却至室温放置。7.根据权利要求1的方法,其中步骤(3)所述低温冰箱的温度要求一般在‐70℃以下。8.根据权利要求1的方法,其中所保存的川贝母种子进行解冻时,若室温超过20℃,将冻存管从液氮中取出,直接利用室温自然解冻;若室温低于20℃,将冻存管从液氮中取出,并置于20~24℃水浴箱中解冻,解冻完后,取出冻存管中川贝母种子,再用自来水或者蒸馏水洗涤3~5次,清洗后川贝母种子直接用于培养。

说明书

技术领域

太阳城集团本发明涉及一种川贝母种子的超低温保存方法,属于种质资源保存的技术领域。

背景技术

川贝母又称川贝母母、暗紫贝母、甘肃贝母、梭砂贝母的干燥鳞茎。多年生草本,高15~25cm。鳞茎球形或圆锥形。茎直立,无毛,绿色或暗紫色。叶除最下部为对生外,均为互生或近于对生,无柄;叶片线形或线状披针形,长3.6~6.5cm,宽3~7mm,先端急尖。花单生于茎顶;深紫色,略有黄褐色小方格,有叶状苞片1,花被片6,长2.5~2.7cm,外轮3片近长圆形,宽6~9mm,内轮3片倒卵状长圆形,宽10~13mm,蜜腺窝不很明显;雄蕊6,花药近基着,花丝有时密被小乳突;柱头3裂,裂片外展,长0.5~1(~1.5)mm。蒴果长圆形,具6棱,棱上有宽约1mm的窄翅。花期6月,果期8月。生于海拔3200~4500m的草地上。质硬脆,断面白色,富粉性。气微,味微苦。

太阳城集团种质资源研究的首要任务是收集种质,安全保存种质。目前种质资源保存方式为常温、低温保存川贝母种子两种方式。常温保存中药材种子,每保存5年就需要重新繁种更新,因为植物种子经过5年的保存,活力降低很快,只有50%左右;低温保存中药材种子,在中国,建立了国家中期库和国家种质库,国家中期库保存的温度为4℃左右,相对湿度小于65%,一般设计贮藏种子的寿命为5~10年,国家种质库为种质长期保存库,库中的温度为‐18℃左右,相对湿度小于50%,设计贮藏寿命达20年以上,也就是说种质在长期库中保存,活力同样随着太阳城集团的推移降低,种质20年后一般需要更新繁种,不是永久的保存。

因此,为了安全保存川贝母种质资源,研究探索一种安全而长久保存川贝母种质资源的方法很有意义,它能够减少或者避免种子更新繁种,省时省力,阻断繁种更新的过程中种质间基因漂移等产生种质变异,保证种质的遗传稳定性。

发明内容

本发明的目的是提供一种适合于川贝母种子的超低温保存法,该方法能够补充现在川贝母种质资源保存技术的不足,可以长期安全的保存川贝母种质资源,为川贝母种质资源保存提供一条新的有效的技术途径。

太阳城集团本发明的目的是提供一种川贝母种子超低温保存方法,包括步骤以下:

(1)室温下将川贝母种子用A试剂处理,处理20~50min后,取出处理过的川贝母种子;

太阳城集团(2)处理过的川贝母种子放入装有B试剂的冻存管中,室温温育15~35min,再将其放入梯度降温盒中;

(3)将带有川贝母种子的梯度降温盒放入低温冰箱中,使其降温盒的温度在‐35℃~‐60℃,降温速度为‐1℃/min,然后取出降温盒,马上将此降温盒放入液氮中,进行液氮低温保存备用。

在一个具体方案中,步骤(1)中所述A试剂是指B5液体培养液,还包含有1.5~2.5mol/L甘油和1~1.5mol/L二甲基亚砜。

所述A试剂优选110~121℃高压蒸汽灭菌15min以上,冷却至室温放置。

在一个具体方案中,步骤(2)中所述梯度降温盒中含有100%甘油或异丙醇,可以重复使用。

在一个具体方案中,步骤(2)中所述B试剂是指B5液体培养液,还包含有2.6~3.6mol/L甘油、1.6~2mol/L二甲基亚砜和0.45~0.75mol/L蔗糖。

太阳城集团所述B试剂优选110~121℃高压蒸汽灭菌15min以上,冷却至室温放置。

在一个具体方案中,步骤(3)中所述低温冰箱的温度要求一般在‐70℃以下。

太阳城集团川贝母上述所保存的川贝母种子进行解冻时,若室温超过20℃,将冻存管从液氮中取出,直接利用室温自然解冻;若室温低于20℃,将冻存管从液氮中取出,并置于20~24℃水浴箱中解冻。解冻完后,取出冻存管中川贝母种子,再用自来水或者蒸馏水洗涤3~5次,清洗后川贝母种子直接用于培养。

技术效果

1、本发明进行川贝母超低温保存,工艺简单,稳定性可靠,保存后的川贝母种子的发芽率和鲜种的发芽率无显著性差异,发芽试验结果表明超低温保存后川贝母种子发芽率高达90%以上。

2、本发明具有长期、有效、安全保存川贝母种子,是川贝母种质资源长期保存的最有效方法。

具体实施方式

下面,本发明将用实施例进行进一步的说明,但是它并不限于这些实施例的任何一个或类似实例。

实施例1

太阳城集团取某地当年收获的川贝母,自然晒干,将含水量10.5%左右的川贝母种子用含有2.35mol/L甘油和1.25mol/L二甲基亚砜的B5液体培养液处理,处理20min后,取出处理过的川贝母种子,再放入含有3.2mol/L甘油、1.65mol/L二甲基亚砜和0.65mol/L蔗糖的B5液体培养液的冻存管中,室温温育30min,再将其放入梯度降温盒中;川贝母将梯度降温盒放进‐70℃低温冰箱进行梯度降温,使其降温盒的温度在‐50℃,降温速度为‐1℃/min,然后取出降温盒,马上将此降温盒放入液氮中,进行液氮低温保存6年后,将冻存管从液氮中取出,放置室温在23℃,直接利用室温自然解冻,解冻完后,取出冻存管中川贝母种子,再用自来水或者蒸馏水洗涤4次,清洗后川贝母种子直接用于发芽实验,经测试发芽率达到97.48%。

对照实施例1

太阳城集团取某地当年收获的川贝母,自然晒干,将含水量10.5%左右的川贝母种子用含有2.35mol/L甘油的B5液体培养液处理,处理20min后,取出处理过的川贝母种子,再放入含有3.2mol/L甘油、1.65mol/L二甲基亚砜和0.65mol/L蔗糖的B5液体培养液的冻存管中,再将其放入梯度降温盒中;将梯度降温盒放进‐70℃低温冰箱进行梯度降温,使其降温盒的温度在‐50℃,降温速度为‐1℃/min,然后取出降温盒,马上将此降温盒放入液氮中,进行液氮低温保存6年后,将冻存管从液氮中取出,放置室温在23℃,直接利用室温自然解冻,解冻完后,取出冻存管中川贝母种子,再用自来水或者蒸馏水洗涤4次,清洗后川贝母种子直接用于发芽实验,经测试发芽率达到84.62%。

对照实施例2

取某地当年收获的川贝母,自然晒干,将含水量10.5%左右的川贝母种子用含有2.35mol/L甘油和1.25mol/L二甲基亚砜的B5液体培养液处理,处理20min后,取出处理过的川贝母种子,再放入含有3.2mol/L甘油、1.65mol/L二甲基亚砜和0.65mol/L蔗糖的B5液体培养液的冻存管中,室温温育30min,再将其放入在‐5℃左右低温冰箱保存6年后,将冻存管从液氮中取出,放置室温在23℃左右,直接利用室温自然解冻,解冻完后,取出冻存管中川贝母种子,再用自来水或者蒸馏水洗涤4次,清洗后川贝母种子直接用于发芽实验,经测试发芽率达到38.61%。而取新鲜川贝母1~5℃下低温保存6年后,用于发芽实验,经测试川贝母未能发芽。

实施例2

太阳城集团取某地当年收获的川贝母,自然晒干,将含水量6%左右的川贝母种子用含有2.4mol/L甘油和1.45mol/L二甲基亚砜的B5液体培养液处理,处理30min后,取出处理过的川贝母种子,再放入含有3.3mol/L甘油、1.75mol/L二甲基亚砜和0.55mol/L蔗糖的B5液体培养液的冻存管中,室温温育20min,再将其放入梯度降温盒中;将梯度降温盒放进‐80℃低温冰箱进行梯度降温,使其降温盒的温度在‐55℃左右,降温速度为‐1℃/min,然后取出降温盒,马上将此降温盒放入液氮中,进行液氮低温保存8年后,将冻存管从液氮中取出,放置室温在23℃左右,直接利用室温自然解冻,解冻完后,取出冻存管中川贝母种子,再用自来水或者蒸馏水洗涤4次,清洗后川贝母种子直接用于发芽实验,经测试发芽率达到97.24%。

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