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治疗经前期综合征的中药五类复方新药及其制备方法.pdf

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治疗 前期 综合征 中药 复方 新药 及其 制备 方法
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摘要
申请专利号:

CN200410024505.8

申请日:

20040719

公开号:

CN1596941A

公开日:

20050323

当前法律状态:

有效性:

有效

法律详情:
IPC分类号: A61K35/78,A61K9/48,A61P15/00 主分类号: A61K35/78,A61K9/48,A61P15/00
申请人: 乔明琦,张惠云
发明人: 乔明琦,张惠云
地址: 250014山东省济南市市中区环山路山东中医药大学二宿舍
优先权: CN200410024505A
专利代理机构: 济南泉城专利商标事务所 代理人: 李桂存
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法律状态
申请(专利)号:

CN200410024505.8

授权太阳城集团号:

法律状态太阳城集团日:

法律状态类型:

摘要

太阳城集团本发明涉及一种治疗经前期综合征的纯中药五类复方新药及其制备方法。本发明的复方药物,由下述原料和/或可药用辅料制得,白芍、丹皮、香附。制备方法包括以下步骤:白芍乙醇浸泡提取,树脂柱吸附、洗脱,得白芍提取物;牡丹皮水蒸汽蒸馏;接收液冷藏,滤过,结晶,得牡丹皮提取物;香附加热提取挥发油,加β-环糊精得香附挥发油β-环糊精包合物。本发明治疗经前期综合征的中药五类复方新药,具有疗效显著、药味少、纯度高、副作用小的优点。本发明药物的制备方法具有提取率高、纯度高、操作简单,适合工业化生产。

权利要求书

太阳城集团1.一种治疗经前期综合征的中药五类复方新药,其特征在于:由下述原料和/或可药用辅料制得,白芍、丹皮、香附。2.根据权利要求1所述的治疗经前期综合征的中药五类复方新药,其特征在于:所述原料的重量组分为:白芍1200~1800份丹皮1200~1800份香附1200~1800份。3.根据权利要求2所述的治疗经前期综合征的中药五类复方新药,其特征在于:所述原料的重量组分为:白芍1500份丹皮1500份香附1500份。4.根据权利要求1、2或3任一项所述的治疗经前期综合征的中药五类复方新药,其特征在于:所述复方药物的剂型为胶囊。5.根据权利要求4所述的治疗经前期综合征的中药五类复方新药,其特征在于:胶囊是由所述原料的提取物制成,所述提取物的成分为:a:白芍提取物中芍药苷的含量大于30.0%,白芍提取物中白芍总苷的含量大于52.0%;b:牡丹皮提取物中丹皮酚的含量大于90%;c:香附提取物中挥发油的含量大于6.0%。6.根据权利要求5所述的治疗经前期综合征的中药五类复方新药,其特征在于:所述的药用辅料为碳酸氢钙,碳酸氢钙的用量与白芍提取物、牡丹皮提取物和香附挥发油β-环糊精包合物总量重量比为1∶1-3。7.一种权利要求4所述治疗经前期综合征的中药五类复方新药的制备方法,其特征在于:包括以下步骤:a:白芍提取物的制备方法:取白芍饮片,加8倍量70%乙醇浸泡过夜,加热回流提取二次,每次3小时,合并提取液,滤过,滤液回收乙醇,浓缩至相对密度为1.12的浓缩液,加水稀释,通过已经处理好的大孔树脂柱,加水洗涤后,用40%乙醇洗脱,收集洗脱液,回收乙醇,浓缩至干,真空干燥,粉碎,过筛,即得白芍提取物;b:牡丹皮提取物的制备方法:取牡丹皮颗粒,加入药材12倍量的水,加入1%药材量的氯化钠,水蒸汽蒸馏4小时;接收液冷藏,滤过,得结晶;母液再加入1%氯化钠,加热重蒸馏,收集母液1/3体积的蒸馏液,冰箱中冷藏,滤过,合并两次结晶,低温干燥,粉碎,过筛,得牡丹皮提取物;c:取香附药材粗粉,加6倍量的水,浸泡过夜,加热提取挥发油8小时,得油水混合物,再用30-60℃的石油醚萃取,石油醚萃取层回收石油醚,得挥发油;称取挥发油12倍量的β-环糊精,加β-环糊精2倍量的50%乙醇,研磨成糊状,缓慢滴加挥发油,加完后,继续研磨,过滤,低温干燥,粉碎,过筛,即得香附挥发油β-环糊精包合物;d:取以上白芍提取物、牡丹皮提取物和香附挥发油β-环糊精包合物,加入一定量碳酸氢钙混合均匀,过筛,分装于胶囊中,即得。

说明书



(一)所属技术领域

本发明涉及一种治疗经前期综合征的纯中药五类复方新药及其制备方法。

(二)背景技术

太阳城集团目前,治疗经前期综合征的西药较少,效果不理想,而且有一定的副作用。 治疗经前期综征的中药,一般处方较大,生产工艺复杂。如公开号为1220163、 专利名称为“治疗经前期紧张的药物”的中国专利,它由柴胡、枳壳、合欢皮、 郁金、香附、青皮、路路通、橘核、当归、白芍、川芎、茯苓、大腹皮、甘草十 四味中药按一定比例组成,属于中药六类新制剂,由于其药方组成多,制备复杂, 疗效不稳定,不利于工业化生产。

(三)发明内容

本发明为了克服以上技术的不足,提供了一种治疗经前期综合征疗效显著、 药味少、纯度高、质量可控的五类复方新药,以及上述药物的制备方法。

太阳城集团本发明是通过以下措施来实现的:

本发明的复方新药,由下述原料和/或可药用辅料制得,白芍、丹皮、香附。

本发明的复方药物,所述原料的较佳重量组分为:

白芍1200~1800份

丹皮1200~1800份

太阳城集团香附1200~1800份。

本发明的复方新药,所述原料的最佳重量组分为:

白芍1500份

丹皮1500份

香附1500份。

太阳城集团本发明的复方新药,剂型最好为胶囊。所述胶囊是由上述原料的提取物制成, 所述提取物的成分为:

a:白芍提取物中芍药苷的含量大于30.0%,白芍提取物中白芍总苷的含量大 于52.0%;

太阳城集团b:牡丹皮提取物中丹皮酚的含量大于90%;

c:香附提取物中挥发油的含量大于6.0%。

上述胶囊剂型,药用辅料为碳酸氢钙,碳酸氢钙的用量与白芍提取物、牡丹 皮提取物和香附挥发油β-环糊精包合物总量重量比为1∶1-3。

上述胶囊剂型的制备方法,包括以下步骤:

a:白芍提取物的制备方法:取白芍饮片,加8倍量70%乙醇浸泡过夜,加热 回流提取二次,每次3小时,合并提取液,滤过,滤液回收乙醇,浓缩至相对密 度为1.12的浓缩液,加水稀释,通过已经处理好的大孔树脂柱,加水洗涤后, 用40%乙醇洗脱,收集洗脱液,回收乙醇,浓缩至干,真空干燥,粉碎,过筛, 即得白芍提取物;

b:牡丹皮提取物的制备方法:取牡丹皮颗粒,加入药材12倍量的水,加入 1%药材量的氯化钠,水蒸汽蒸馏4小时;接收液冷藏,滤过,得结晶;母液再加 入1%氯化钠,加热重蒸馏,收集母液1/3体积的蒸馏液,冰箱中冷藏,滤过,合 并两次结晶,低温干燥,粉碎,过筛,得牡丹皮提取物;

太阳城集团c:取香附药材粗粉,加6倍量的水,浸泡过夜,加热提取挥发油8小时,得 油水混合物,再用30-60℃的石油醚萃取,石油醚萃取层回收石油醚,得挥发油; 称取挥发油12倍量的β-环糊精,加β-环糊精2倍量的50%乙醇,研磨成糊状,缓 慢滴加挥发油,加完后,继续研磨,过滤,低温干燥,粉碎,过筛,即得香附挥 发油β-环糊精包合物;

d:取以上白芍提取物、牡丹皮提取物和香附挥发油β-环糊精包合物,加入 一定量碳酸氢钙混合均匀,过筛,分装于胶囊中,即得。

下面为本发明药物的药效学试验结果

一.本发明药物镇痛、镇静及其对离体子宫收缩的影响

1.实验材料

本发明药物(1g相当于生药29.47g),由江苏省药物研究所植化室提供,批 号:20010604-5;逍遥丸(浓缩丸),河南省宛西制药股份有限公司产品,批号: 20010707。用前用0.5%CMC-Na配成相应浓度的混悬液,实验中所用剂量除体外 实验外,其余按生药量计。体外实验中本发明药物用量按粉末量计。

经前平颗粒,江苏扬子江药业集团公司产品,批号:010221。用前用0.5% CMC-Na配成相应浓度的混悬液,实验中所用剂量按颗粒量计。

太阳城集团缩宫素注射液(催产素注射液),泰州生物化学制药厂产品,批号:990620-2。 己烯雌酚注射液,上海第九制药厂产品,批号:980605。甲基硫酸新斯的明(注 射液),上海信谊药厂产品,批号:980202_17。阿托品,进口分装。

其他试剂均为市售分析纯。

2.方法与结果

2.1实验方法

2.1.1离体子宫实验(体外灌流法)

SD大鼠于实验前48hr sc己烯雌酚0.1mg/kg,人工造成动情期,提高子宫 对药物的敏感性。实验时用戊巴比妥钠50mg/kg ip使大鼠深度麻醉后,迅速打开 腹腔,轻轻剥离子宫周围脂肪组织,穿线结扎阴道端及子宫体上部,使之离体, 立即置于盛有洛氏液的玻璃平皿中,小心清除残留的结缔组织和脂肪。将子宫阴 道端结扎线固定于盛有洛氏液的浴槽底部,子宫上部连线与十六道生理药理记录 仪的换能器相连。恒温水浴的工作温度在35℃左右,并不断向工作液中通入O2 (60-80个气泡/分)。记录一段正常曲线后,加入不同药物,记录给药后30分钟 收缩曲线,观察给药前后子宫收缩的频率、幅度和子宫活动力(频率×幅度)。

太阳城集团正常收缩的子宫平滑肌加入催产素后(10mu/ml)后,收缩频率明显增加, 子宫活动力明显增强,约10分钟达到高峰,随后稳定在这一水平,40分钟后逐 渐消退。选择在催产素作用15分钟后加入待测药品,记录给药后30分钟收缩曲 线,观察给药前后子宫收缩的频率、幅度和子宫活动力(频率×幅度)。

2.1.2小鼠镇静实验(光电管法)

太阳城集团将一束光线照射到对侧的光电管上,动物活动一次遮断光线一次,引起电流 改变一次,则计数器记录一次。记录小鼠5min内活动次数,作为观测指标。

2.1.3小鼠镇痛实验(扭体法)

将0.6%醋酸溶液注入小鼠腹腔内,引起深部的、大面积而较持久的疼痛刺激, 致使小白鼠产生“扭体”反应(腹部内凹、躯干与后腿伸张、臀部高起)。观察给 予醋酸溶液15分钟内各小鼠发生“扭体”反应的次数,作为测试指标

太阳城集团2.1.4小鼠小肠推进实验

太阳城集团实验前一日给小鼠禁食,用卡红与10%阿拉伯胶制成1%悬液,按0.1ml/10g 剂量给予小鼠灌胃,20min后脱颈椎处死,立即剖腹,将消化管自贲门至直肠末 端完整地摘出。不加牵引地平铺开来,测其全长并记录红色的前沿到贲门的距离, 计算其与胃肠道全长的百分比。

2.2统计与检验

所有数据均用平均值±标准差(X±SD)表示,实验结果均用T-test检验。

2.3实验结果

太阳城集团2.3.1本发明药物对正常大鼠离体子宫平滑肌的影响

按离体子宫实验方法制做大鼠离体子宫标本,待其活动平稳后将待测药物本 发明药物粉末混悬液和阳性对照药经前平颗粒混悬液分别加入灌流槽,使本发明 药物的终浓度分别为0.02,0.05,0.10mg/ml;经前平颗粒为0.40mg/ml。记录给 药后30min子宫活动情况,观察并比较给药前后子宫活动的变化。结果见表1,2, 3。

太阳城集团由表1可见,本发明药物三种浓度(0.02、0.05、0.1mg/ml)及经前平颗粒 (0.4mg/ml)均能明显减少大鼠正常子宫平滑肌的收缩频率。

由表2可见,本发明药物0.05和0.10mg/ml及经前平颗粒0.4mg/ml可明显 降低正常子宫平滑肌的收缩幅度。

太阳城集团由表3可见,本发明药物各浓度对正常子宫平滑肌的收缩力均有不同程度的 抑制作用。

太阳城集团2.3.2本发明药物对催产素所致大鼠离体子宫收缩增强的影响

太阳城集团按离体子宫实验方法制做大鼠离体子宫标本,待其活动平稳后记录一段正常 曲线,而后加入催产素注射液(10mu/ml),造成子宫平滑肌活动性增强,15min 后分别加入待测药本发明药物混悬液和经前平颗粒混悬液。记录给药后30min内 子宫活动情况,观察并比较给药前后子宫活动的变化。结果见表4,5,6。

从表4-6可看出,正常子宫平滑肌在给予催产素注射液10mu/ml后,收缩频 率和幅度及收缩力均显著增加。

太阳城集团由表4可见,本发明药物0.05、0.2mg/ml和经前平颗粒0.8mg/ml能较明显 减少子宫平滑肌大幅度增加的收缩频率。

由表5可见,本发明药物0.2mg/ml和经前平颗粒0.8mg/ml可明显降低催产 素所致子宫平滑肌上升的收缩幅度。

由表6可见,本发明药物各剂量均能在不同程度上抑制催产素所致的子宫平 滑肌过高的收缩力。

太阳城集团2.3.3本发明药物对正常小鼠自发活动的影响

太阳城集团昆明种小鼠随机分为空白对照组,本发明药物低、中、高剂量组,逍遥丸组 和经前平颗粒组,分别灌胃给予空白溶媒,本发明药物2.5g/kg、5g/kg、10g/kg, 逍遥丸12g/kg和经前平颗粒30g/kg。每天1次,连续3天。末次给药后1hr将 小鼠置于程控自主活动箱中先待其适应3min后记录其5min内活动次数,结果见 表7。

太阳城集团由表7可见,逍遥丸和经前平颗粒及本发明药物10g/kg对正常小鼠自发活 动均有明显的抑制作用。

太阳城集团2.3.4本发明药物对醋酸所致小鼠扭体反应的影响

昆明种小鼠随机分组及给药同2.2.3,末次给药后1hr每鼠ip0.6%醋酸 0.2ml/只,记录15min内各鼠由醋酸引起的扭体反应次数。

太阳城集团由表8可见,本发明药物5g/kg和10g/kg可明显减少醋酸所致小鼠扭体反 应的次数,效果与逍遥丸和经前平颗粒相似。

2.3.5本发明药物对新斯的明所致小鼠肠蠕动增强的影响

昆明种小鼠随机分为空白对照组,新斯的明对照组、本发明药物低、中、高 剂量组,逍遥丸组,经前平颗粒组和阿托品对照组。空白对照组和新斯的明组均 灌胃给予空白溶媒,其余组依次给予本发明药物2.5g/kg、5g/kg、10g/kg,逍遥 丸12g/kg和经前平颗粒30g/kg。每天1次,连续3天。阿托品于实验前一次性 灌胃给药10mg/kg。末次给药30min后ip硫酸新斯的明0.1mg/kg,20min后ig 1% 卡红混悬液0.1ml/10g,20min后脱颈椎处死小鼠,剖腹取全肠进行测量计算,结 果见表9。

由表9可见,白香丹三个剂量对新斯的明所致小鼠肠蠕动增强均有显著的抑 制作用。

表1.本发明药物对正常大鼠离体子宫平滑肌收缩频率的影响(次/10min)( X±SD) 组别     浓度   (mg/ml)     n     给药前                          给药后     10′     20′     30′ 经前平颗粒   0.40     6     5.5±1.8     3.2±2.3     3.0±1.9*     4.2+1.5 本发明药物   0.02     6     6.2±1.7     4.5±1.9     4.2±.1.9     3.8±1.8*   0.05     6     6.5±0.8     4.8±1.9     4.3±1.6*     4.3±1.2**   0.10     6     7.2±1.0     5.3±1.6*     4.3±1.9**     5.5±1.4*

*p<0.05,**p<0.01,与自身给药前相比。

太阳城集团表2.本发明药物对正常大鼠离体子宫平滑肌收缩幅度的影响(g)( X±SD) 组别     浓度   (mg/ml)    n         给药前                           给药后     10′     20′     30′ 经前平 颗粒   0.40   6     4.573±1.178     3.566±1.222     2.080±1.378**     2.814±0.871** 本发明 药物   0.02   6     3.094±0.928     2.435±1.82     2.226±1.319     2.230±1.034   0.05   6     5.006±0.669     4.91±0.955     3.496±1.499*     3.551±1.248*   0.10   6     5.466±1.295     4.002±1.665     3.876±1.801     2.959±2.034*

*p<0.05,**p<0.01,与自身给药前相比。

表3.本发明药物对正常大鼠离体子宫平滑肌活动力的影响(频率×幅度)( X±SD) 组别     浓度   (mg/ml)   n       给药前                           给药后     10′     20′     30′ 经前平颗粒   0.40   6     24.83±10.29     9.93±6.40*     7.30±5.23**     11.18±3.69* 本发明药物   0.02   6     18.22±3.73     10.94±5.58*     8.99±5.69**     7.76±2.90***   0.05   6     32.76±7.26     20.02±9.49*     14.01±6.88***     14.29±2.92***   0.10   6     39.61±12.92     20.31±9.75*     14.09±2.37***     15.13±9.51**

*p<0.05,**p<0.01,***p<0.001,与自身给药前相比。

表4.本发明药物对催产素模型离体子宫平滑肌收缩频率的影响(次/10min)( X±SD)   组别    浓度   (mg/ml   )    n       给药前 给催产素 (10mu/ml )                       给药后     10′     20′     30′   经前平颗   粒   0.80    10     0.5±1*** 7.3±1.9     5.3±2.1*     4.7±2.3*     3.6±2.0***   本发明药   物   0.05    8     1.5±2.8*** 10.3±2.4     8.0±2.3     7.4±2.7*     7.0±2.6*   0.10    8     0.5±1.1*** 10.3±2.1     8.9±2.1     8.3±2.7     8.0±2.4   0.20    8     1.0±2.8*** 7.5±1.9     5.3±2.4     3.9±3.2**     2.3±2.8**

*p<0.05,**p<0.01,***p<0.001,与给催产素后相比。

太阳城集团表5.本发明药物对催产素模型离体子宫平滑肌收缩幅度的影响(g)( X±SD) 组别     浓度     (mg/m     l)   n         给药前   给催产素   (10mu/ml)                           给药后     10′     20′     30′ 经前 平颗 粒     0.80   10 0.151±0.330***   4.634±3.215     2.922±2.296     2.371±2.268     2.020±2.471* 本发 明药 物     0.05   8 0.244±0.461***   4.160±2.546     3.575±2.214     3.183±2.144     2.729±2.035     0.10   8 0.255±0.537**   4.627±2.484     3.131±1.812     3.156±2.013     2.590±1.771     0.20   8 0.041±0.109***   5.001±2.788     3.476±1.368     2.305±2.166*     1.268±1.610**

太阳城集团*p<0.05,**p<0.01,***p<0.001,与给催产素后相比。

太阳城集团表6.本发明药物对催产素模型离体子宫平滑肌收缩力的影响(频率×幅度)( X±SD)   组别 浓度 (mg/ ml)   n       给药前   给催产素   (10mu/ml)                            给药后   10′   20′   30′   经前平   颗粒 0.80   10   0.36±0.76*  33.69±27.24   14.47±13.77   12.15±13.71*  10.26±14.25*  本发明   药物 0.05   8   1.42±2.64***   41.29±24.91   26.76±15.19   21.84±15.75   17.05±11.73* 0.10   8   0.24±0.49***   48.49±27.68   28.70±18.43*   27.02±18.11   21.97±15.78* 0.20   8   0.29±0.811**   37.55±28.18   18.86±13.59   11.95±15.14*   4.26±6.26**

*p<0.05,**p<0.01,***p<0.001,与给催产素后相比。

表7.本发明药物对正常小鼠自发活动的影响(次/5min)( X±SD)     组别     剂量(g/kg)     n     自发活动数     空白对照     -     10     255.8±35.8     逍遥丸     12     10     174.0±57.5**     经前平颗粒     30     10     194.6±48.1**     本发明药物     2.5     10     250.8±85.0     5     10     247.8±77.0     10     10     199.1±41.0**

太阳城集团**p<0.01,与空白对照组比较。

表8.本发明药物对醋酸所致小鼠扭体反应的影响(次/15min)( X±SD)     组别     剂量(g/kg)     n     扭体次数     阴性对照     -     10     31.0±8.2     逍遥丸     12     10     19.0±11.0*     经前平颗粒     30     10     16.9±9.0**     本发明药物     2.5     10     31.9±15.7     5     10     17.2±8.1**     10     10     13.6±1.7**

太阳城集团p<0.05,**p<0.01,与阴性对照组相比较。

表9.本发明药物对新斯的明所致小肠蠕动增强的影响( X±SD)     组别     剂量(g/kg)     n     推进率(%)     空白对照     -     12     69.34±9.71**     新斯的明     1×10-4     10     83.94±11.85     阿托品     0.01     12     60.88±9.35***     逍遥丸     12     10     46.05±5.47**     经前平颗粒     30     10     42.46±9.80***     本发明药物     2.5     10     44.72±4.83***     5     10     44.84±5.38***     10     10     56.76±8.72***

太阳城集团**p<0.01,***p<0.001,与新斯的明组相比较。

3.结论:

经前小腹胀痛是经前期综合征的主要症状,如并发痛经则症状更为突出,其 机理与腹腔内脏平滑肌收缩失常有关。本发明药物可显著抑制大鼠正常离体子宫 和催产素作用后的子宫的收缩频率、幅度及收缩力,说明其不仅可降低催产素引 起的过高的子宫平滑肌紧张性,而且对正常子宫平滑肌活动力亦有较明显的抑制 作用。另外,本发明药物对新斯的明所引起的小肠蠕动的增强也有明显的抑制作 用;对醋酸所致小鼠扭体反应也有明显改善作用。但对正常小鼠小肠推进率无明 显影响。由此可见本发明药物解痉止痛功效的药效学基础可能在于其对腹腔内脏 平滑肌过高的紧张性的缓解作用。

除痛疼外,情绪的异常改变是经前期综合征的又一主要症状,主要表现为情 绪激动,烦躁易怒等。本实验通过对小鼠镇静实验的观察,发现本发明药物10g/kg 可显著减少正常小鼠的自发活动。由此可见,本发明药物不仅具有止痛作用,还 具有一定的镇静作用。这可能也是其治疗经前期综合征的药效学基础之一。

二.本发明药物对经前期综合征肝气逆证猕猴模型外显行为变化及内分泌激素与 神经递质指标的影响

1.本实验采用经前期综合征肝气逆证弥猴模型观察本发明药物对该模型引起的内 分泌紊乱的治疗作用,同时观察其对血清及尿中各类激素的影响。

实验动物:雌性青年猕猴(24只),恒河猴种,体重4.0-5.0kg,由中科院 上海实验动物中心提供。

太阳城集团将24只猕猴随机分为6组,每4只一组。第一组作为正常对照组;第二组为 造模空白组,取猕猴月经周期的中间一天开始造模(此时约为排卵期,性皮肿最 明显)。将雌猴赶入压缩笼,挤压,以猕猴稍能活动为限,每天连续挤压7h,挤 压造模7天(不挤压时猕猴仍在压缩笼里),同时以监视仪监视其表情行为变化, 并录像拍照。造模7天后将猕猴放出压缩笼。第三组在造模同时给予经前平颗粒, 剂量0.4g颗粒/kg,用温水冲开后1.5ml/kg,经口灌服。另外三组在造模同时分 别给予本发明药物大(2.25g/kg)、中(1.35g/kg)、小剂量(0.45g/kg)。给药时 间为每天上午挤压喂食前,每日一次,连续7天。在造模后的各期,同样以监视 仪监视其表情行为变化,并录像拍照。

对各猴在不同期属分别取血,收集尿样。取血尿时期月经后7-10天,排卵 后5-7天,经前期3-5天,月经期1-2天。后肢静脉取血4ml,放入离心机以3000rpm 离心20min,取血清。以放射免疫法测定血清和尿中催乳素(PRL)、雌二醇(E2)、 孕酮(P)含量;以毛细管电泳法测血清及尿样中5-羟色胺(5-HT)、多巴胺(DA)、 肾上腺素(E)、去甲肾上腺素(NE)的含量。

2.实验结果

2.1造模给药后猕猴表情行为变化

在挤压造模给药期间(黄体期),猕猴性皮肤及表情行为变化与给药前模型 对照组猕猴稍见差异,在放回原笼后至月经来潮以前的一段太阳城集团(经前期)其表 情行为却有明显差异,具体表现在:给药后其活动量较给药前及造模对照组明显 减少,攻击性明显下降,叫声减少,表现较为安静,同未造模前表现相似,情况 改善以造模给药大、中剂量组为佳,造模给药小剂量组及阳性给药组次之,结果 见表10。

太阳城集团表10 给药后不同期属猕猴表情行为

太阳城集团2.2血清及尿中神经递质及激素含量检测结果

太阳城集团肝气逆证猕猴模型血清及尿中雌二醇(E2)、孕酮(P)含量显著降低,泌乳 素(PRL)水平明显升高;血清及尿中5-羟色胺(5-HT)含量升高,血清中多巴 胺(DA)和肾上腺素(E)水平均无显著性差异;血中去甲肾上腺素(NE)水平均 较正常组高。本发明药物对造模刺激所致模型猕猴雌二醇、孕酮水平的降低和对 泌乳素水平的升高,具有良好的纠正和调节作用。能够使其恢复或接近正常水平。 对造模刺激所致模型猕猴5-HT水平升高、NE水平升高,具有良好的纠正和调节 作用。能够使其恢复或接近正常水平。

本发明药物对模型猕猴5-HT水平升高、NE水平升高,具有良好的纠正和调 节作用。能够使其恢复或接近正常水平。说明本发明药物对经前期综合征肝气逆 证所引起的单胺类神经逆质含量改变具有针对性的治疗作用。

太阳城集团以上表明,本发明药物对经前期综合征肝气逆证猕猴模型“病征表现”,呈现 良好治疗作用,能够显著改善、消除造模猕猴经前烦躁易怒等临床症状和体征。 本发明药物对经前期综合征肝气逆证模型猕猴雌二醇、孕酮水平的降低和对泌乳 素水平的升高,具有良好的纠正和调节作用,能够使其恢复或接近正常水平。说 明本发明药物对经前期综合征肝气逆证所引起的性激素及其调节激素水平改变具 有针对性的纠正作用。

三.毒理学研究:

1.急性毒性试验:小鼠一次口服本发明药物的LD50为大于10g/kg;小鼠腹 腔注射本发明药物的LD50为57.8(54.2-61.7)mg/kg。

太阳城集团2.一般药理试验:昆明种小鼠口服本发明药物,小鼠行为、活动无异常,动 物5min内的自发活动数无显著差异。健康杂种犬,在麻醉情况下灌胃给予本发明 药物,各太阳城集团点采样测定结果表明,本发明药物大、小剂量对麻醉犬心电图各项 指标、心率和呼吸系统均无显著影响。

太阳城集团3.长期毒性试验:对本发明药物进行大鼠长期毒性试验。实验结果表明, 大鼠连续26周口服本发明药物的安全剂量为291mg/kg以上。对本发明药物进行 犬长期毒性试验。本实验结果表明,犬连续26周口服本发明药物的安全剂量为 146mg/kg以上。

综上所述,本发明治疗经前期综合征的中药五类复方新药,具有疗效显著、 作用稳定可靠、携代服用方便的优点。本发明药物的制备方法具有提取率高、纯 度高、质量可控性强,适合工业化生产的优点。

(四)具体实施方式

实施例1:

a:白芍提取物的制备方法:取白芍饮片1200g,加9600毫升70%乙醇浸泡 过夜,加热回流提取二次,每次3小时,合并提取液,滤过,滤液回收乙醇,浓 缩至相对密度为1.12的浓缩液,加水稀释成至每1mL相当于原药材1g的药液 1200mL,通过已经处理好的D101大孔树脂柱(样品与树脂的比为1∶1.2(v/v)), 上样后,静置1小时,加水洗脱至Molish反应为阴性(体积约为12000毫升)后, 加入12000毫升40%乙醇洗脱,收集洗脱液,回收乙醇,浓缩至干,40℃真空干 燥,粉碎,过60目筛,即得白芍提取物约48g;

太阳城集团b:牡丹皮提取物的制备方法:取牡丹皮粗粉1200g,加入14400毫升水浸泡 过夜,加入12g氯化钠,通入水蒸汽,蒸馏8小时;接收液冷藏,滤过,得结晶; 母液再加入12g氯化钠,加热重蒸馏,收集母液1/3体积的蒸馏液,冰箱中冷藏, 滤过,合并两次结晶,粉碎,过60目筛,得牡丹皮提取物约9.72g;

太阳城集团c:附挥发油及其β-环糊精包合物的制备方法:取香附药材颗粒(Φ0.25± 0.1cm)1200g,加7200毫升的水,浸泡过夜,加热提取挥发油8小时,收集挥发 油约6毫升,加72gβ-环糊精(g),再加144毫升50%乙醇,研磨成糊状,缓慢 滴加挥发油,加完后,继续研磨60分钟,过滤,40℃干燥,粉碎,过60目筛, 即得香附挥发油β-环糊精包合物约67.2g;

太阳城集团d:取以上白芍提取物、牡丹皮提取物和香附挥发油β-环糊精包合物,加 入碳酸氢钙约125g使总量达250g,混合均匀,过60目筛,分装于1000粒胶囊 中,即得。

实施例2:

a:白芍提取物的制备方法:取白芍饮片1800g,加14400毫升70%乙醇浸泡 过夜,加热回流提取二次,每次3小时,合并提取液,滤过,滤液回收乙醇,浓 缩至相对密度为1.12的浓缩液,加水稀释成至每1mL相当于原药材1g的药液1800 毫升,通过已经处理好的D101大孔树脂柱(样品与树脂的比为1∶1.2(v/v)), 上样后,静置1小时,加水洗脱至Molish反应为阴性(体积约为18000毫升)后, 加入18000毫升40%乙醇洗脱,收集洗脱液,回收乙醇,浓缩至干,40℃真空干 燥,粉碎,过60目筛,即得白芍提取物约为72g;

太阳城集团b:牡丹皮提取物的制备方法:取牡丹皮粗粉1800g,加入21600毫升的水浸 泡过夜,加入18g氯化钠,通入水蒸汽,蒸馏8小时;接收液冷藏,滤过,得结 晶;母液再加入18g氯化钠,加热重蒸馏,收集母液1/3体积的蒸馏液,冰箱中 冷藏,滤过,合并两次结晶,粉碎,过60目筛,得牡丹皮提取物约14.6g;

c:附挥发油及其β-环糊精包合物的制备方法:取香附药材颗粒(Φ0.25± 0.1cm)1800g,加10800毫升的水,浸泡过夜,加热提取挥发油8小时,收集挥 发油9毫升,加108gβ-环糊精(g),再加216毫升50%乙醇,研磨成糊状,缓慢 滴加挥发油,加完后,继续研磨60分钟,过滤,40℃干燥,粉碎,过60目筛, 即得香附挥发油β-环糊精包合物约101g;

d:取以上白芍提取物、牡丹皮提取物和香附挥发油β-环糊精包合物,加 入碳酸氢钙约62g使总量达250g,混合均匀,过60目筛,分装于1000粒胶囊中, 即得。

实施例3:

a:白芍提取物的制备方法:取白芍饮片1500g,加12000毫升70%乙醇浸泡 过夜,加热回流提取二次,每次3小时,合并提取液,滤过,滤液回收乙醇,浓 缩至相对密度为1.12的浓缩液,加水稀释成至每1mL相当于原药材1g的药液1500 毫升,通过已经处理好的D101大孔树脂柱(样品与树脂的比为1∶1.2(v/v)), 上样后,静置1小时,加水洗脱至Molish反应为阴性(体积约为15000毫升)后, 加入15000毫升40%乙醇洗脱,收集洗脱液,回收乙醇,浓缩至干,40℃真空干 燥,粉碎,过60目筛,即得白芍提取物约60g;

b:牡丹皮提取物的制备方法:取牡丹皮粗粉1500g,加入18000毫升水浸泡 过夜,加入15g氯化钠,通入水蒸汽,蒸馏8小时;接收液冷藏,滤过,得结晶; 母液再加入15g氯化钠,加热重蒸馏,收集母液1/3体积的蒸馏液,冰箱中冷藏, 滤过,合并两次结晶,粉碎,过60目筛,得牡丹皮提取物约12g;

c:附挥发油及其β-环糊精包合物的制备方法:取香附药材颗粒(Φ0.25± 0.1cm)1500g,加9000毫升的水,浸泡过夜,加热提取挥发油8小时,收集挥发 油7.5mL,加90gβ-环糊精,再加180mL50%乙醇,研磨成糊状,缓慢滴加挥发油, 加完后,继续研磨60分钟,过滤,40℃干燥,粉碎,过60目筛,即得香附挥发 油β-环糊精包合物约84g;

d:取以上白芍提取物、牡丹皮提取物和香附挥发油β-环糊精包合物,加 入碳酸氢钙约94g,使总重量为250g,混合均匀,过60目筛,分装于1000粒胶 囊中,即得。

上述本发明实施例1-3得到的胶囊剂,对各有效成分组分及制剂中有效成分 含量进行测定研究,白芍提取物中芍药苷的含量大于30.0%;白芍提取物中白芍 总苷的含量大于52.0%;牡丹皮提取物中丹皮酚的含量大于90%;香附提取物(包 结物)中挥发油的含量大于6.0%。本制剂每粒含芍药苷不得低于17.5mg;本品每 粒白芍总苷的含量不得低于30.0mg;本品每粒含丹皮酚不得低于10.0mg;本品中 香附挥发油的含量不得低于1.7%,达到中药五类新药的要求。

实施例4:

太阳城集团a:白芍提取物的制备方法:取白芍饮片2500g,加20000毫升70%乙醇浸泡 过夜,加热回流提取二次,每次3小时,合并提取液,滤过,滤液回收乙醇,浓 缩至相对密度为1.12的浓缩液,加水稀释成至每1mL相当于原药材1g的药液 2500mL,通过已经处理好的D101大孔树脂柱(样品与树脂的比为1∶1.2(v/v)), 上样后,静置1小时,加水洗脱至Molish反应为阴性后,加入25000毫升40% 乙醇洗脱,收集洗脱液,回收乙醇,浓缩至干,40℃真空干燥,粉碎,过60目筛, 即得白芍提取物约100g;

太阳城集团b:牡丹皮提取物的制备方法:取牡丹皮粗粉1200g,加入药材14400毫升水 浸泡过夜,加入12g氯化钠,通入水蒸汽,蒸馏8小时;接收液冷藏,滤过,得 结晶;母液再加入12g氯化钠,加热重蒸馏,收集母液1/3体积的蒸馏液,冰箱 中冷藏,滤过,合并两次结晶,粉碎,过60目筛,得牡丹皮提取物约9.72g;

c:附挥发油及其β-环糊精包合物的制备方法:取香附药材颗粒(Φ0.25± 0.1cm)800g,加4800倍量的水,浸泡过夜,加热提取挥发油8小时,收集挥发 油约4毫升,加48gβ-环糊精(g),再加100毫升50%乙醇,研磨成糊状,缓慢 滴加挥发油,加完后,继续研磨60分钟,过滤,40℃干燥,粉碎,过60目筛, 即得香附挥发油β-环糊精包合物约45g;

d:取以上白芍提取物、牡丹皮提取物和香附挥发油β-环糊精包合物,加入一定 量的可压性淀粉使总量达200g,混合均匀,压片,制得1000片成品。

实施例5:

太阳城集团a:白芍提取物的制备方法:取白芍饮片1800g,加14400毫升70%乙醇浸泡 过夜,加热回流提取二次,每次3小时,合并提取液,滤过,滤液回收乙醇,浓 缩至干,40℃真空干燥,粉碎,过60目筛,即得白芍提取物约为250g;

太阳城集团b:牡丹皮提取物的制备方法:取牡丹皮粗粉2400g,加入药材28800毫升水 浸泡过夜,加热回流提取二次,每次5小时,合并提取液,滤过,浓缩至干,40 ℃真空干燥,粉碎,得牡丹皮提取物约为300g;

c:附挥发油及其β-环糊精包合物的制备方法:取香附药材颗粒(Φ0.25± 0.1cm)1200g,加7200倍量的水,浸泡过夜,加热提取挥发油8小时,收集挥发 油约6毫升,加72gβ-环糊精(g),再加144毫升50%乙醇,研磨成糊状,缓慢 滴加挥发油,加完后,继续研磨60分钟,过滤,40℃干燥,粉碎,过60目筛, 即得香附挥发油β-环糊精包合物约67.2g;

太阳城集团d:取以上白芍提取物、牡丹皮提取物和香附挥发油β-环糊精包合物,加入一定 量的糊精混合均匀,制得1000g颗粒剂,按5g/袋装。

太阳城集团本文
本文标题:治疗经前期综合征的中药五类复方新药及其制备方法.pdf
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