太阳城集团

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一种疏风解毒胶囊及其气相色谱检测方法与制药用途.pdf

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一种 解毒 胶囊 及其 色谱 检测 方法 制药 用途
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摘要
申请专利号:

太阳城集团CN201710695503.9

申请日:

20170815

公开号:

CN107397903A

公开日:

20171128

当前法律状态:

有效性:

有效

法律详情:
IPC分类号: A61K36/899,A61K9/48,A61P17/18,A61P17/16,G01N30/02,G01N30/06 主分类号: A61K36/899,A61K9/48,A61P17/18,A61P17/16,G01N30/02,G01N30/06
申请人: 安徽济人药业有限公司
发明人: 朱强,曹勇,李文军,孙永城,李翔宇,左成彬,葛德助
地址: 236800 安徽省亳州市谯城区药都路1799号安徽济人药业有限公司
优先权: CN201710695503A
专利代理机构: 北京律和信知识产权代理事务所(普通合伙) 代理人: 项荣;李婷
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法律状态
申请(专利)号:

太阳城集团CN201710695503.9

授权太阳城集团号:

法律状态太阳城集团日:

法律状态类型:

摘要

太阳城集团本发明涉及中药领域,具体涉及一种疏风解毒胶囊及其气相色谱检测方法与制药用途。该疏风解毒胶囊是由以下重量份的药味原料制成:虎杖5重量份、连翘4重量份、板蓝根4重量份、柴胡4重量份、败酱草4重量份、马鞭草4重量份、芦根3重量份、甘草2重量份。本发明提供了采用气相色谱法同时测定疏风解毒胶囊活性成分含量的方法,本发明还提供了疏风解毒胶囊的制药新用途。

权利要求书

1.一种疏风解毒胶囊,其特征在于,该疏风解毒胶囊是由以下重量份的药味原料制成:虎杖5重量份、连翘4重量份、板蓝根4重量份、柴胡4重量份、败酱草4重量份、马鞭草4重量份、芦根3重量份、甘草2重量份。2.一种疏风解毒胶囊的制备方法,该疏风解毒胶囊是由以下重量份的药味原料制成:虎杖5重量份、连翘4重量份、板蓝根4重量份、柴胡4重量份、败酱草4重量份、马鞭草4重量份、芦根3重量份、甘草2重量份,其特征在于,该疏风解毒胶囊是采用如下方法制备的:S1:取虎杖、板蓝根粉碎成粗颗粒,加5倍量70%乙醇加热回流提取2h,滤过;药渣再加3倍量70%乙醇加热回流提取1h,滤过,滤液合并,回收乙醇并减压浓缩至60℃下相对密度1.35~1.40的稠膏,备用;S2:取连翘、柴胡加7倍量的水,加热回流提取挥发油4h,分取分层的挥发油,备用;药渣和药液粗滤,滤液离心分离,上清液和药渣分别保存备用;S3:取败酱草、马鞭草、芦根、甘草与S2步骤得到的连翘、柴胡提取挥发油后的药渣合并,加水煎煮提取二次,第一次加18倍量水提取2h,第二次加12倍量水提取1h,粗滤,滤液离心分离,两次提取的上清液与S2步骤得到的连翘、柴胡提取挥发油后的上清液合并,减压浓缩至60℃下相对密度1.35~1.40的稠膏,备用;S4:取糊精、微粉硅胶,混匀,加入到上述S1步骤得到的醇提浓缩稠膏与S3步骤得到的水提浓缩稠膏中,充分搅拌均匀,铺层,真空干燥,粉碎,加入糊精,喷入S2步骤得到的挥发油,过筛,混匀,装入胶囊,即得。3.一种疏风解毒胶囊的检测方法,该疏风解毒胶囊是由以下重量份的药味原料制成:虎杖5重量份、连翘4重量份、板蓝根4重量份、柴胡4重量份、败酱草4重量份、马鞭草4重量份、芦根3重量份、甘草2重量份,该疏风解毒胶囊是采用如下方法制备的:S1:取虎杖、板蓝根粉碎成粗颗粒,加5倍量70%乙醇加热回流提取2h,滤过;药渣再加3倍量70%乙醇加热回流提取1h,滤过,滤液合并,回收乙醇并减压浓缩至60℃下相对密度1.35~1.40的稠膏,备用;S2:取连翘、柴胡加7倍量的水,加热回流提取挥发油4h,分取分层的挥发油,备用;药渣和药液粗滤,滤液离心分离,上清液和药渣分别保存备用;S3:取败酱草、马鞭草、芦根、甘草与S2步骤得到的连翘、柴胡提取挥发油后药渣合并,加水煎煮提取二次,第一次加18倍量水提取2h,第二次加12倍量水提取1h,粗滤,滤液离心分离,两次提取的上清液与S2步骤得到的连翘、柴胡提取挥发油后的上清液合并,减压浓缩至60℃下相对密度1.35~1.40的稠膏,备用;S4:取糊精、微粉硅胶,混匀,加入到上述S1步骤得到的醇提浓缩稠膏与S3步骤得到的水提浓缩稠膏中,充分搅拌均匀,铺层,真空干燥,粉碎,加入糊精,喷入S2步骤得到的挥发油,过筛,混匀,装入胶囊,即得;其特征在于,采用气相色谱法同时测定疏风解毒胶囊中对伞花烃、玛索依内酯的含量,其检测方法的步骤如下:(1)色谱条件:聚乙二醇20000毛细管柱,规格:30m×0.25mm,0.25μm;FID检测器;程序升温初始温度210℃,保持20min,以100℃·min的速率升温至260℃,保持10min;进样口温度为280℃;检测器温度为290~310℃;载气N;分流进样,分流比45~55:1;(2)供试品溶液的制备:取本品内容物,研细,精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加入比例为5:10:85的乙腈-0.05mol/L磷酸二氢钠溶液-乙酸乙酯混合溶液,称定质量,超声处理20~40min,放冷,再称定质量,用比例为5:10:85的乙腈-0.05mol/L磷酸二氢钠溶液-乙酸乙酯混合溶液补足减失的质量,摇匀,滤过,取续滤液,作为供试品溶液;(3)对照品溶液的制备:取对伞花烃对照品、玛索依内酯对照品,精密称定,加比例为5:10:85的乙腈-0.05mol/L磷酸二氢钠溶液-乙酸乙酯混合溶液分别制成含对伞花烃、玛索依内酯的混合溶液,作为对照品溶液;(4)测定:精密吸取供试品溶液、对照品溶液各5~20μL,注入气相色谱仪,测定。4.如权利要求3所述的疏风解毒胶囊的检测方法,其特征在于,采用气相色谱法同时测定疏风解毒胶囊中对伞花烃、玛索依内酯的含量,其检测方法的步骤如下:(1)色谱条件:聚乙二醇20000毛细管柱,规格:30m×0.25mm,0.25μm;FID检测器;程序升温初始温度210℃,保持20min,以100℃·min的速率升温至260℃,保持10min;进样口温度为280℃;检测器温度为300℃;载气N;分流进样,分流比50:1;(2)供试品溶液的制备:取本品内容物,研细,取2g,精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加入比例为5:10:85的乙腈-0.05mol/L磷酸二氢钠溶液-乙酸乙酯混合溶液25mL,称定质量,超声处理30min,放冷,再称定质量,用比例为5:10:85的乙腈-0.05mol/L磷酸二氢钠溶液-乙酸乙酯混合溶液补足减失的质量,摇匀,滤过,取续滤液,作为供试品溶液;(3)对照品溶液的制备:取对伞花烃对照品、玛索依内酯对照品,精密称定,加比例为5:10:85的乙腈-0.05mol/L磷酸二氢钠溶液-乙酸乙酯混合溶液分别制成每1mL含0.5mg对伞花烃、0.5mg玛索依内酯的混合溶液,作为对照品溶液;(4)测定:精密吸取供试品溶液、对照品溶液各10μL,注入气相色谱仪,测定。5.一种疏风解毒胶囊在制备治疗皮肤光老化药物中的应用,其特征在于,该疏风解毒胶囊是由以下重量份的药味原料制成:虎杖5重量份、连翘4重量份、板蓝根4重量份、柴胡4重量份、败酱草4重量份、马鞭草4重量份、芦根3重量份、甘草2重量份,该疏风解毒胶囊是采用如下方法制备的:S1:取虎杖、板蓝根粉碎成粗颗粒,加5倍量70%乙醇加热回流提取2h,滤过;药渣再加3倍量70%乙醇加热回流提取1h,滤过,滤液合并,回收乙醇并减压浓缩至60℃下相对密度1.35~1.40的稠膏,备用;S2:取连翘、柴胡加7倍量的水,加热回流提取挥发油4h,分取分层的挥发油,备用;药渣和药液粗滤,滤液离心分离,上清液和药渣分别保存备用;S3:取败酱草、马鞭草、芦根、甘草与S2步骤得到的连翘、柴胡提取挥发油后药渣合并,加水煎煮提取二次,第一次加18倍量水提取2h,第二次加12倍量水提取1h,粗滤,滤液离心分离,两次提取的上清液与S2步骤得到的连翘、柴胡提取挥发油后的上清液合并,减压浓缩至60℃下相对密度1.35~1.40的稠膏,备用;S4:取糊精、微粉硅胶,混匀,加入到上述S1步骤得到的醇提浓缩稠膏与S3步骤得到的水提浓缩稠膏中,充分搅拌均匀,铺层,真空干燥,粉碎,加入糊精,喷入S2步骤得到的挥发油,过筛,混匀,装入胶囊,即得;采用气相色谱法同时测定疏风解毒胶囊中对伞花烃、玛索依内酯的含量,其检测方法的步骤如下:(1)色谱条件:聚乙二醇20000毛细管柱,规格:30m×0.25mm,0.25μm;FID检测器;程序升温初始温度210℃,保持20min,以100℃·min的速率升温至260℃,保持10min;进样口温度为280℃;检测器温度为300℃;载气N;分流进样,分流比50:1;(2)供试品溶液的制备:取本品内容物,研细,取2g,精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加入比例为5:10:85的乙腈-0.05mol/L磷酸二氢钠溶液-乙酸乙酯混合溶液25mL,称定质量,超声处理30min,放冷,再称定质量,用比例为5:10:85的乙腈-0.05mol/L磷酸二氢钠溶液-乙酸乙酯混合溶液补足减失的质量,摇匀,滤过,取续滤液,作为供试品溶液;(3)对照品溶液的制备:取对伞花烃对照品、玛索依内酯对照品,精密称定,加比例为5:10:85的乙腈-0.05mol/L磷酸二氢钠溶液-乙酸乙酯混合溶液分别制成每1mL含0.5mg对伞花烃、0.5mg玛索依内酯的混合溶液,作为对照品溶液;(4)测定:精密吸取供试品溶液、对照品溶液各10μL,注入气相色谱仪,测定。

说明书

技术领域

太阳城集团本发明涉及中药领域,具体涉及一种疏风解毒胶囊及其气相色谱检测方法与制药用途。

背景技术

太阳城集团疏风解毒胶囊,是本专利申请人安徽济人药业有限公司的独家产品,批准文号为:国药准字Z2009004,规格:每粒装0.52g。该品种是根据我国著名老中医向楚贤的祖传密方,原名“祛毒散”,研制的中药新药,由虎杖、连翘、败酱草、柴胡、马鞭草、板蓝根、芦根、甘草等药味组成。具有疏风清热,解毒利咽之功,用于治疗急性上呼吸道感染属风热证,症见发热,恶风,咽痛,头痛,鼻塞,流浊涕,咳嗽等,临床应用多年,疗效确切。本品被列为卫生部《甲型H1N1流感诊疗方案》(2009年第二版、第三版、2010年版)治疗风热犯卫首选中成药、《流行性感冒诊断与治疗指南(2011年版)》、国家中医药管理局《外感发热(上呼吸道感染)诊疗方案》和《时行感冒(甲型H1N1流感)诊疗方案》推荐用药,并纳入2009年版国家医保目录。本品为本专利申请人安徽济人药业的拳头产品,是年产值、年销售额均过亿的中药大品种。2011年获得国家现代中药高技术产业发展专项支持,先后荣获“国家重点新产品”、“安徽省自主创新产品”、“呼吸系统疾病类中药十强”等一系列荣誉称号。

太阳城集团作为中药大品种,本专利申请人安徽济人药业有限公司对疏风解毒胶囊进行了系统性的研究,在研究中意外发现,疏风解毒胶囊对皮肤光老化具有意料不到的突出的治疗效果,在深入研究中发现,对伞花烃、玛索依内酯是其抗皮肤光老化的主要活性成分,但是,目前没有对疏风解毒胶囊中对伞花烃、玛索依内酯进行含量测定的方法,申请人和发明人对此进行了反复的研究,遂得到了本发明的技术方案。

本项目得到了国家科学技术部科技型中小企业技术创新基金的重点支持,项目名称:疏风解毒胶囊,项目类型:重点项目,立项代码:10C26213404286,批准文号:国科发计字[2010]543号。

发明内容

太阳城集团基于背景技术存在的技术问题,本发明提出了一种疏风解毒胶囊及其制备方法与检测方法及制药用途。

太阳城集团本发明的目的是提供一种疏风解毒胶囊药物及其制备方法。

本发明的另一目的是提供疏风解毒胶囊的药物检测方法。

太阳城集团本发明还提供了疏风解毒胶囊的新的制药用途。

太阳城集团本发明的目的是通过以下方式实现的:

太阳城集团一种疏风解毒胶囊,是由以下重量份的药味原料制成:虎杖5重量份、连翘4重量份、板蓝根4重量份、柴胡4重量份、败酱草4重量份、马鞭草4重量份、芦根3重量份、甘草2重量份。

太阳城集团该疏风解毒胶囊是由以下重量份的药味原料制成:虎杖5重量份、连翘4重量份、板蓝根4重量份、柴胡4重量份、败酱草4重量份、马鞭草4重量份、芦根3重量份、甘草2重量份,该疏风解毒胶囊是采用如下方法制备的:

太阳城集团S1:取虎杖、板蓝根粉碎成粗颗粒,加5倍量70%乙醇加热回流提取2h,滤过;药渣再加3倍量70%乙醇加热回流提取1h,滤过,滤液合并,回收乙醇并减压浓缩至60℃下相对密度1.35~1.40的稠膏,备用;

S2:取连翘、柴胡加7倍量的水,加热回流提取挥发油4h,分取分层的挥发油,备用;药渣和药液粗滤,滤液离心分离,上清液和药渣分别保存备用;

S3:取败酱草、马鞭草、芦根、甘草与S2步骤得到的连翘、柴胡提取挥发油后的药渣合并,加水煎煮提取二次,第一次加18倍量水提取2h,第二次加12倍量水提取1h,粗滤,滤液离心分离,两次提取的上清液与S2步骤得到的连翘、柴胡提取挥发油后的上清液合并,减压浓缩至60℃下相对密度1.35~1.40的稠膏,备用;

太阳城集团S4:取糊精、微粉硅胶,混匀,加入到上述S1步骤得到的醇提浓缩稠膏与S3步骤得到的水提浓缩稠膏中,充分搅拌均匀,铺层,真空干燥,粉碎,加入糊精,喷入S2步骤得到的挥发油,过筛,混匀,装入胶囊,即得。

太阳城集团一种疏风解毒胶囊的检测方法,该疏风解毒胶囊是由以下重量份的药味原料制成:虎杖5重量份、连翘4重量份、板蓝根4重量份、柴胡4重量份、败酱草4重量份、马鞭草4重量份、芦根3重量份、甘草2重量份,该疏风解毒胶囊是采用如下方法制备的:

S1:取虎杖、板蓝根粉碎成粗颗粒,加5倍量70%乙醇加热回流提取2h,滤过;药渣再加3倍量70%乙醇加热回流提取1h,滤过,滤液合并,回收乙醇并减压浓缩至60℃下相对密度1.35~1.40的稠膏,备用;

S2:取连翘、柴胡加7倍量的水,加热回流提取挥发油4h,分取分层的挥发油,备用;药渣和药液粗滤,滤液离心分离,上清液和药渣分别保存备用;

S3:取败酱草、马鞭草、芦根、甘草与S2步骤得到的连翘、柴胡提取挥发油后药渣合并,加水煎煮提取二次,第一次加18倍量水提取2h,第二次加12倍量水提取1h,粗滤,滤液离心分离,两次提取的上清液与S2步骤得到的连翘、柴胡提取挥发油后的上清液合并,减压浓缩至60℃下相对密度1.35~1.40的稠膏,备用;

S4:取糊精、微粉硅胶,混匀,加入到上述S1步骤得到的醇提浓缩稠膏与S3步骤得到的水提浓缩稠膏中,充分搅拌均匀,铺层,真空干燥,粉碎,加入糊精,喷入S2步骤得到的挥发油,过筛,混匀,装入胶囊,即得;

太阳城集团采用气相色谱法同时测定疏风解毒胶囊中对伞花烃、玛索依内酯的含量,其检测方法的步骤如下:

(1)色谱条件:聚乙二醇20000毛细管柱,规格:30m×0.25mm,0.25μm;FID检测器;程序升温初始温度210℃,保持20min,以100℃·min-1的速率升温至260℃,保持10min;进样口温度为280℃;检测器温度为290~310℃;载气N2;分流进样,分流比45~55:1;

(2)供试品溶液的制备:取本品内容物,研细,精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加入比例为5:10:85的乙腈-0.05mol/L磷酸二氢钠溶液-乙酸乙酯混合溶液,称定质量,超声处理20~40min,放冷,再称定质量,用比例为5:10:85的乙腈-0.05mol/L磷酸二氢钠溶液-乙酸乙酯混合溶液补足减失的质量,摇匀,滤过,取续滤液,作为供试品溶液;

(3)对照品溶液的制备:取对伞花烃对照品、玛索依内酯对照品,精密称定,加比例为5:10:85的乙腈-0.05mol/L磷酸二氢钠溶液-乙酸乙酯混合溶液分别制成含对伞花烃、玛索依内酯的混合溶液,作为对照品溶液;

太阳城集团(4)测定:精密吸取供试品溶液、对照品溶液各5~20μL,注入气相色谱仪,测定。

太阳城集团所述的疏风解毒胶囊的检测方法,采用气相色谱法同时测定疏风解毒胶囊中对伞花烃、玛索依内酯的含量,其检测方法的优选步骤如下:

太阳城集团(1)色谱条件:聚乙二醇20000毛细管柱,规格:30m×0.25mm,0.25μm;FID检测器;程序升温初始温度210℃,保持20min,以100℃·min-1的速率升温至260℃,保持10min;进样口温度为280℃;检测器温度为300℃;载气N2;分流进样,分流比50:1;

太阳城集团(2)供试品溶液的制备:取本品内容物,研细,取2g,精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加入比例为5:10:85的乙腈-0.05mol/L磷酸二氢钠溶液-乙酸乙酯混合溶液25mL,称定质量,超声处理30min,放冷,再称定质量,用比例为5:10:85的乙腈-0.05mol/L磷酸二氢钠溶液-乙酸乙酯混合溶液补足减失的质量,摇匀,滤过,取续滤液,作为供试品溶液;

太阳城集团(3)对照品溶液的制备:取对伞花烃对照品、玛索依内酯对照品,精密称定,加比例为5:10:85的乙腈-0.05mol/L磷酸二氢钠溶液-乙酸乙酯混合溶液分别制成每1mL含0.5mg对伞花烃、0.5mg玛索依内酯的混合溶液,作为对照品溶液;

(4)测定:精密吸取供试品溶液、对照品溶液各10μL,注入气相色谱仪,测定。

太阳城集团一种疏风解毒胶囊在制备治疗皮肤光老化药物中的应用,该疏风解毒胶囊是由以下重量份的药味原料制成:虎杖5重量份、连翘4重量份、板蓝根4重量份、柴胡4重量份、败酱草4重量份、马鞭草4重量份、芦根3重量份、甘草2重量份,该疏风解毒胶囊是采用如下方法制备的:

S1:取虎杖、板蓝根粉碎成粗颗粒,加5倍量70%乙醇加热回流提取2h,滤过;药渣再加3倍量70%乙醇加热回流提取1h,滤过,滤液合并,回收乙醇并减压浓缩至60℃下相对密度1.35~1.40的稠膏,备用;

S2:取连翘、柴胡加7倍量的水,加热回流提取挥发油4h,分取分层的挥发油,备用;药渣和药液粗滤,滤液离心分离,上清液和药渣分别保存备用;

太阳城集团S3:取败酱草、马鞭草、芦根、甘草与S2步骤得到的连翘、柴胡提取挥发油后药渣合并,加水煎煮提取二次,第一次加18倍量水提取2h,第二次加12倍量水提取1h,粗滤,滤液离心分离,两次提取的上清液与S2步骤得到的连翘、柴胡提取挥发油后的上清液合并,减压浓缩至60℃下相对密度1.35~1.40的稠膏,备用;

S4:取糊精、微粉硅胶,混匀,加入到上述S1步骤得到的醇提浓缩稠膏与S3步骤得到的水提浓缩稠膏中,充分搅拌均匀,铺层,真空干燥,粉碎,加入糊精,喷入S2步骤得到的挥发油,过筛,混匀,装入胶囊,即得;

太阳城集团采用气相色谱法同时测定疏风解毒胶囊中对伞花烃、玛索依内酯的含量,其检测方法的步骤如下:

(1)色谱条件:聚乙二醇20000毛细管柱,规格:30m×0.25mm,0.25μm;FID检测器;程序升温初始温度210℃,保持20min,以100℃·min-1的速率升温至260℃,保持10min;进样口温度为280℃;检测器温度为300℃;载气N2;分流进样,分流比50:1;

太阳城集团(2)供试品溶液的制备:取本品内容物,研细,取2g,精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加入比例为5:10:85的乙腈-0.05mol/L磷酸二氢钠溶液-乙酸乙酯混合溶液25mL,称定质量,超声处理30min,放冷,再称定质量,用比例为5:10:85的乙腈-0.05mol/L磷酸二氢钠溶液-乙酸乙酯混合溶液补足减失的质量,摇匀,滤过,取续滤液,作为供试品溶液;

(3)对照品溶液的制备:取对伞花烃对照品、玛索依内酯对照品,精密称定,加比例为5:10:85的乙腈-0.05mol/L磷酸二氢钠溶液-乙酸乙酯混合溶液分别制成每1mL含0.5mg对伞花烃、0.5mg玛索依内酯的混合溶液,作为对照品溶液;

(4)测定:精密吸取供试品溶液、对照品溶液各10μL,注入气相色谱仪,测定。

以下实验研究用于验证本发明的技术方案的技术内容和技术效果,但并不限制本发明的保护范围。

实验一:气相色谱法测定疏风解毒胶囊中对伞花烃和玛索依内酯的含量

1仪器与试药

1.1仪器

岛津GC-2010气相色谱仪;DS10260超声波清洗机,由上海生析超声仪器有限公司制造。

1.2试药

对伞花烃对照品,由上海宝曼生物科技有限公司生产,批号100215-201508;玛索依内酯对照品,由上海田源生物技术有限公司生产,批号120516-201511;乙酸乙酯(分析纯),由山东茂军化工科技有限公司生产,批号20150218-6;

太阳城集团疏风解毒胶囊,在本发明中称之为“本品”,由安徽济人药业有限公司生产,处方与制备工艺如下:

太阳城集团处方:虎杖450g、连翘360g、板蓝根360g、柴胡360g、败酱草360g、马鞭草360g、芦根270g、甘草180g;

制备方法:S1:取虎杖、板蓝根粉碎成粗颗粒,加5倍量70%乙醇加热回流提取2h,滤过;药渣再加3倍量70%乙醇加热回流提取1h,滤过,滤液合并,回收乙醇并减压浓缩至60℃下相对密度1.35~1.40的稠膏,备用;

太阳城集团S2:取连翘、柴胡加7倍量的水,加热回流提取挥发油4h,分取分层的挥发油,备用;药渣和药液粗滤,滤液离心分离,上清液和药渣分别保存备用;

S3:取败酱草、马鞭草、芦根、甘草与S2步骤得到的连翘、柴胡提取挥发油后的药渣合并,加水煎煮提取二次,第一次加18倍量水提取2h,第二次加12倍量水提取1h,粗滤,滤液离心分离,两次提取的上清液与S2步骤得到的连翘、柴胡提取挥发油后的上清液合并,减压浓缩至60℃下相对密度1.35~1.40的稠膏,备用;

太阳城集团S4:取糊精、微粉硅胶,混匀,加入到上述S1步骤得到的醇提浓缩稠膏与S3步骤得到的水提浓缩稠膏中,充分搅拌均匀,铺层,真空干燥,粉碎,加入糊精,喷入S2步骤得到的挥发油,过筛,混匀,装入胶囊,制成1000粒,即得。

2方法与结果

2.1色谱条件

聚乙二醇20000毛细管柱,规格:30m×0.25mm,0.25μm;FID检测器;程序升温初始温度210℃,保持20min,以100℃·min-1的速率升温至260℃,保持10min;进样口温度为280℃;检测器温度为300℃;载气N2;分流进样,分流比50:1。

2.2溶液制备

2.2.1供试品溶液的制备

取本品内容物,研细,取2g,精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加入比例为5:10:85的乙腈-0.05mol/L磷酸二氢钠溶液-乙酸乙酯混合溶液25mL,称定质量,超声处理30min,放冷,再称定质量,用比例为5:10:85的乙腈-0.05mol/L磷酸二氢钠溶液-乙酸乙酯混合溶液补足减失的质量,摇匀,滤过,取续滤液,作为供试品溶液。

2.2.2对照品溶液的制备

取对伞花烃对照品、玛索依内酯对照品,精密称定,加比例为5:10:85的乙腈-0.05mol/L磷酸二氢钠溶液-乙酸乙酯混合溶液分别制成每1mL含0.5mg对伞花烃、0.5mg玛索依内酯的混合溶液,作为对照品溶液。

2.2.3阴性对照溶液的制备

取本药处方中除连翘、柴胡外的其他药物,按疏风解毒胶囊的制备工艺制备,再按2.2.1项下方法制成阴性对照溶液。

2.3方法学考察

太阳城集团2.3.1标准曲线及线性关系考察

太阳城集团精密吸取对照品溶液1、2、3、4、5mL,加比例为5:10:85的乙腈-0.05mol/L磷酸二氢钠溶液-乙酸乙酯混合溶液稀释至10mL,分别精密吸取1μL,注入气相色谱仪,以峰面积(Y)对对照品溶液质量浓度(X)进行线性回归,得出回归方程:

太阳城集团对伞花烃:Y=519.63X-826.47(r=0.9989,n=5)

太阳城集团玛索依内酯:Y=628.46X+129.64(r=0.9995,n=5)

太阳城集团结果表明对伞花烃质量浓度的线性范围为35.69~212.54mg·L-1,玛索依内酯质量浓度的线性范围为46.89~228.65mg·L-1。

2.3.2专属性试验

太阳城集团分别精密吸取对照品溶液、供试品溶液和阴性对照溶液注入色谱仪,测定。结果阴性对照溶液在与对照品主峰的保留太阳城集团相同位置处无色谱峰,证明此方法具有一定的专属性。色谱图见附图1、附图2、附图3。

2.3.3精密度试验

取同一份对照品溶液,连续进样6次,测定峰面积。对伞花烃的RSD为1.24%(n=6),玛索依内酯的RSD为1.35%(n=6),表面系统精密度良好。

2.3.4重复性试验

太阳城集团取同一批疏风解毒胶囊(批号20160123),按样品制备方法制备6份,同法制成供试品溶液,测定峰面积并计算对伞花烃和玛索依内酯的含量。

太阳城集团结果对伞花烃的平均含量为1.42mg·g-1,RSD为1.28%(n=6),玛索依内酯的平均含量为1.58mg·g-1,RSD为1.46%(n=6)。

2.3.5回收率试验精

太阳城集团密称取已知含量的样品(批号20160123)2g,精密加入对伞花烃对照品溶液和玛索依内酯对照品,按2.2项下方法制备供试品溶液6份,依法测定峰面积并计算含量和回收率,结果见表1和表2。

表1对伞花烃加样回收试验(n=6)

表2玛索依内酯加样回收试验(n=6)

2.4样品含量测定

按拟定方法测定了3批样品,结果样品中对伞花烃、玛索依内酯的含量见表3。

表3三批样品中对伞花烃、玛索依内酯的含量(mg·g-1)

太阳城集团实验二:对延缓皮肤光老化的药效学实验研究

太阳城集团本研究采用紫外线模拟日光照射诱发小鼠皮肤光老化模型,观察疏风解毒胶囊对其皮肤衰老有关指标的影响。

1材料

1.1动物

太阳城集团昆明种小鼠,SPF级,雌雄各半,体质量(20±2)g,由安徽中医药大学实验动物中心提供,动物生产许可证号:SCXK(皖)2012-2013。给予标准食物,自由饮水,保持光照和避光循环饲养(12/12h);实验开始前保持室内饲养1周。

1.2药品和试剂

1.2试药

1.2.1疏风解毒胶囊:处方:虎杖450g、连翘360g、板蓝根360g、柴胡360g、败酱草360g、马鞭草360g、芦根270g、甘草180g;

制备方法:

S1:取虎杖、板蓝根粉碎成粗颗粒,加5倍量70%乙醇加热回流提取2h,滤过;药渣再加3倍量70%乙醇加热回流提取1h,滤过,滤液合并,回收乙醇并减压浓缩至60℃下相对密度1.35~1.40的稠膏,备用;

S2:取连翘、柴胡加7倍量的水,加热回流提取挥发油4h,分取分层的挥发油,备用;药渣和药液粗滤,滤液离心分离,上清液和药渣分别保存备用;

S3:取败酱草、马鞭草、芦根、甘草与S2步骤得到的连翘、柴胡提取挥发油后的药渣合并,加水煎煮提取二次,第一次加18倍量水提取2h,第二次加12倍量水提取1h,粗滤,滤液离心分离,两次提取的上清液与S2步骤得到的连翘、柴胡提取挥发油后的上清液合并,减压浓缩至60℃下相对密度1.35~1.40的稠膏,备用;

太阳城集团S4:取糊精、微粉硅胶,混匀,加入到上述S1步骤得到的醇提浓缩稠膏与S3步骤得到的水提浓缩稠膏中,充分搅拌均匀,铺层,真空干燥,粉碎,加入糊精,喷入S2步骤得到的挥发油,过筛,混匀,装入胶囊,制成1000粒,即得。

1.2.2受试药物甲:处方:虎杖450g、连翘360g、板蓝根360g、柴胡360g、败酱草360g、马鞭草360g、芦根270g、甘草180g;制备方法:取干燥的虎杖450g、连翘360g、板蓝根360g、柴胡360g、败酱草360g、马鞭草360g、芦根270g、甘草180g,加水20000mL,煎煮3次,每次2小时,合并水提取液,滤过,得水提取液,加热浓缩,得水提取浓缩液,干燥,得受试药物甲。

1.2.3受试药物乙:处方:虎杖450g、连翘360g、板蓝根360g、柴胡360g、败酱草360g、马鞭草360g、芦根270g、甘草180g;制备方法:取干燥的虎杖450g、连翘360g、板蓝根360g、柴胡360g、败酱草360g、马鞭草360g、芦根270g、甘草180g,加95%的乙醇溶液20000mL,回流提取3次,每次2小时,合并乙醇提取液,滤过,滤液回收乙醇,浓缩,得乙醇提取浓缩液,干燥,得受试药物乙。

太阳城集团1.2.4受试药物丙:处方:虎杖450g、连翘360g、板蓝根360g、柴胡360g、败酱草360g、马鞭草360g、芦根270g、甘草180g;

制备方法:

S1:取虎杖、板蓝根粉碎成粗颗粒,加5倍量70%乙醇加热回流提取2h,滤过;药渣再加3倍量70%乙醇加热回流提取1h,滤过,滤液合并,回收乙醇并减压浓缩至60℃下相对密度1.35~1.40的稠膏,备用;

太阳城集团S2:取连翘、柴胡、败酱草、马鞭草、芦根、甘草,加水煎煮提取二次,第一次加18倍量水提取2h,第二次加12倍量水提取1h,粗滤,滤液离心分离,两次提取的上清液合并,减压浓缩至60℃下相对密度1.35~1.40的稠膏,备用;

S3:取糊精、微粉硅胶,混匀,加入到上述S1步骤得到的醇提浓缩稠膏与S2步骤得到的水提浓缩稠膏中,充分搅拌均匀,铺层,真空干燥,粉碎,装入胶囊,制成1000粒,即得。得受试药物丙。

1.2.5SOD测定试剂盒、MDA测定试剂盒、羟脯氨酸测定试剂盒均由上海索宝生物科技有限公司提供。

1.3主要仪器

太阳城集团SPT-ZWJ-12型紫外线强度测定仪,由东莞市科讯精密仪器有限公司制造;紫外灯管,由江门市型动派光电科技有限公司制造,型号:80WUVA灯和160WUVB灯;JJ-2组织捣碎匀浆机,由武汉格莱莫检测设备有限公司制造;TU-1810型紫外可见光分光光度计,由北京普析通用仪器有限责任公司制造。

2方法

2.1动物分组与给药

随机分为6组,分别如下:

(1)空白对照组(即正常组):不进行紫外照射且不给药;

(2)蒸馏水灌胃组(模型组):紫外照射并灌胃等量蒸馏水;

(3)疏风解毒胶囊组(80mg/kg):紫外照射并灌胃疏风解毒胶囊水溶液;

(4)受试药物甲组(80mg/kg):紫外照射并灌胃受试药物甲水溶液;

(5)受试药物乙组(80mg/kg):紫外照射并灌胃受试药物乙水溶液;

(6)受试药物丙组(80mg/kg):紫外照射并灌胃受试药物丙水溶液;

太阳城集团灌胃组小鼠在进行紫外线照射前20min给药。

2.2造模

除正常对照组外,其余各组小鼠以10%Na2S溶液取背部正中皮肤脱毛,暴露2.5cm×2.5cm大小皮肤。模拟UV照射。照射光源:UVA灯80W,UVB灯160W。光源在距离小鼠约30cm处进行照射。第1周每天照射2次,每次0.5h,第2周起每天照射3次,每次20min,持续照射至累计照射剂量达到UVA 320SJ/cm2,UVB 7.5J/cm2。

2.3取材

太阳城集团第8周末次照射后,脱须椎处死小鼠,取脱毛部位皮肤约1cm2,拟作羟脯氨酸含量检测;另取脱毛部位皮肤1cm2,以20%福尔马林溶液固定,拟作成纤维细胞计数;取余脱毛背部皮肤0.1g左右,拟作MDA和SOD检测。

2.4成纤维细胞计数

取福尔马林溶液固定的皮肤组织切片,HE染色,显微镜下计成纤维细胞数(以每片计算1000个细胞,确定其中成纤维细胞日)。

2.5羟脯氨酸含量检测

太阳城集团精确称取0.050g皮肤组织,加入90~100℃水解液中水解40min,离心l0min,取上清液。严格按羟脯氨酸测定试剂盒操作说明检测。

太阳城集团2.6MDA、SOD含量检测

以预冷生理盐水漂洗所取0.1g左右的皮肤组织,除去结缔组织和皮下脂肪,滤纸拭干,称重,将组织剪碎后倒入内切式匀浆管中,量取9倍该皮肤组织重量的预冷生理盐水,先取少量倒入装有组织块匀浆器中,冰水中匀浆15min,然后倒入剩余生理盐水,制成10%组织匀浆。将10%组织匀浆以3000r/min离心l0min取上清液备用。严格按MDA、SOD试剂盒操作说明检测。

2.7统计学方法

结果以均数±标准差表示,用SPSS10.0软件进行方差分析及组间检验。

3结果

3.1小鼠皮肤状态观察

太阳城集团(1)正常组小鼠皮肤表而光滑有弹性,纹理清楚,无皱纹。

(2)模型组小鼠皮肤表而有明显红斑,失去弹性和光泽,表皮角化、粗糙伴脱屑,有深的褶皱。

(3)疏风解毒胶囊量组小鼠皮肤皱纹已不明显,无明显红斑,纹理清楚,无皱纹,无脱屑,已接近正常组小鼠皮肤。

(4)受试药物甲组小鼠皮肤上述表现较模型组有良性逆转,红斑减少,局部皮肤凹凸不平,有脱屑,有皱纹。

(5)受试药物乙组小鼠皮肤上述表现较模型组有良性逆转,红斑减少,局部皮肤凹凸不平,有脱屑,有皱纹。

(6)受试药物丙组小鼠皮肤上述表现较模型组有良性逆转,红斑减少,局部皮肤凹凸不平,有脱屑,有皱纹。

3.2对小鼠皮肤成纤维细胞数目的影响

太阳城集团实验结果见表4。与正常组比较,模型组皮肤成纤维细胞数目显著降低(P<0.01)。疏风解毒胶囊组与模型组相比,皮肤成纤维细胞数明显升高,有显著性差异(P<0.05);受试药物甲组和受试药物乙组,与模型组相比,皮肤成纤维细胞数没有升高;受试药物丙组与模型组相比,皮肤成纤维细胞数略有升高,但无显著性差异。

太阳城集团3.3对小鼠皮肤SOD、MDA的影响

实验结果见表4。与正常组比较,模型组皮肤SOD活性显著降低(P<0.01),MDA水平显著升高(P<0.01)。疏风解毒胶囊组与模型组相比,皮肤SOD活性均明显升高(分别P<0.01)、MDA含量显著降低(P<0.01);受试药物甲组和受试药物乙组,与模型组相比,皮肤SOD活性略几乎没有升高,MDA含量几乎没有降低;受试药物丙组与模型组相比,皮肤SOD活性略有升高,但不明显,MDA含量略有降低,但无显著性差异。

3.4对小鼠皮肤羟脯氨酸含量的影响

太阳城集团实验结果见表4。与正常组比较,模型组皮肤羟脯氨酸含量显著下降(P<0.01)。疏风解毒胶囊组与模型组相比,皮肤羟脯氨酸含量明显升高(P<0.05);受试药物甲组和受试药物乙组,与模型组相比,皮肤羟脯氨酸含量几乎没有升高;受试药物丙组与模型组相比,皮肤羟脯氨酸含量略有升高,但无显著性差异。

太阳城集团表4对小鼠皮肤成纤维细胞数目、SOD、MDA、羟脯氨酸含量影响(n=10)

注:与模型组比较*P<0.05,**P<0.01

4结论

疏风解毒胶囊可明显增强光老化小鼠皮肤组织SOD活性,降低MDA含量,表明疏风解毒胶囊可增强皮肤组织的抗氧化能力,降低皮肤组织自由基含量,使自由基对成纤维细胞损害减轻,发挥延缓皮肤光老化的作用。

附图说明:

图1为对伞花烃对照品、玛索依内酯对照品气相色谱图;

图2为疏风解毒胶囊气相色谱图;

图3为阴性对照品气相色谱图。

具体实施方式

下面结合具体实施例对本发明作进一步解说。

太阳城集团实施例1:疏风解毒胶囊

处方:虎杖450g、连翘360g、板蓝根360g、柴胡360g、败酱草360g、马鞭草360g、芦根270g、甘草180g;

制备方法:

S1:取虎杖、板蓝根粉碎成粗颗粒,加5倍量70%乙醇加热回流提取2h,滤过;药渣再加3倍量70%乙醇加热回流提取1h,滤过,滤液合并,回收乙醇并减压浓缩至60℃下相对密度1.35~1.40的稠膏,备用;

S2:取连翘、柴胡加7倍量的水,加热回流提取挥发油4h,分取分层的挥发油,备用;药渣和药液粗滤,滤液离心分离,上清液和药渣分别保存备用;

S3:取败酱草、马鞭草、芦根、甘草与S2步骤得到的连翘、柴胡提取挥发油后的药渣合并,加水煎煮提取二次,第一次加18倍量水提取2h,第二次加12倍量水提取1h,粗滤,滤液离心分离,两次提取的上清液与S2步骤得到的连翘、柴胡提取挥发油后的上清液合并,减压浓缩至60℃下相对密度1.35~1.40的稠膏,备用;

S4:取糊精、微粉硅胶,混匀,加入到上述S1步骤得到的醇提浓缩稠膏与S3步骤得到的水提浓缩稠膏中,充分搅拌均匀,铺层,真空干燥,粉碎,加入糊精,喷入S2步骤得到的挥发油,过筛,混匀,装入胶囊,制成1000粒,即得。

太阳城集团采用气相色谱法同时测定疏风解毒胶囊中对伞花烃、玛索依内酯的含量,其检测方法的步骤如下:

(1)色谱条件:聚乙二醇20000毛细管柱,规格:30m×0.25mm,0.25μm;FID检测器;程序升温初始温度210℃,保持20min,以100℃·min-1的速率升温至260℃,保持10min;进样口温度为280℃;检测器温度为300℃;载气N2;分流进样,分流比50:1;

(2)供试品溶液的制备:取本品内容物,研细,取2g,精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加入比例为5:10:85的乙腈-0.05mol/L磷酸二氢钠溶液-乙酸乙酯混合溶液25mL,称定质量,超声处理30min,放冷,再称定质量,用比例为5:10:85的乙腈-0.05mol/L磷酸二氢钠溶液-乙酸乙酯混合溶液补足减失的质量,摇匀,滤过,取续滤液,作为供试品溶液;

太阳城集团(3)对照品溶液的制备:取对伞花烃对照品、玛索依内酯对照品,精密称定,加比例为5:10:85的乙腈-0.05mol/L磷酸二氢钠溶液-乙酸乙酯混合溶液分别制成每1mL含0.5mg对伞花烃、0.5mg玛索依内酯的混合溶液,作为对照品溶液;

(4)测定:精密吸取供试品溶液、对照品溶液各10μL,注入气相色谱仪,测定;

(5)测定结果:本品中对伞花烃的含量为1.46mg·g-1、玛索依内酯的含量为1.57mg·g-1。

以上所述,仅为本发明较佳的具体实施方式,但本发明的保护范围并不局限于此,任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内,根据本发明的技术方案及其发明构思加以等同替换或改变,都应涵盖在本发明的保护范围之内。

太阳城集团本文
本文标题:一种疏风解毒胶囊及其气相色谱检测方法与制药用途.pdf
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