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新型噻唑类衍生物在治疗炎性肠病中的应用.pdf

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新型 噻唑 衍生物 治疗 炎性肠病 中的 应用
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摘要
申请专利号:

CN201610329012.8

申请日:

20160517

公开号:

太阳城集团CN107375279A

公开日:

20171124

当前法律状态:

有效性:

审查中

法律详情:
IPC分类号: A61K31/426,A61P1/00,A61P1/04 主分类号: A61K31/426,A61P1/00,A61P1/04
申请人: 华东理工大学
发明人: 李洪林,赵振江,王蕊,徐玉芳,王婉琦,杨迎芳
地址: 200237 上海市徐汇区梅陇路130号
优先权: CN201610329012A
专利代理机构: 上海一平知识产权代理有限公司 代理人: 崔佳佳;马莉华
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法律状态
申请(专利)号:

太阳城集团CN201610329012.8

授权太阳城集团号:

法律状态太阳城集团日:

法律状态类型:

摘要

太阳城集团本发明涉及新型噻唑类衍生物在治疗溃疡性结肠炎以及制备治疗溃疡性结肠炎的药物中的应用。具体而言,本发明涉及下式I所示的化合物、含有下式I化合物的药物组合物在治疗溃疡性结肠炎以及制备治疗溃疡性结肠炎的药物中的用途:

权利要求书

1.式I所示化合物或其药学上可接受的盐在制备治疗炎性肠病的药物中的用途:式中,R选自:H、取代或未取代的C1-C6烷基、C3-C6环烷基;独立R独立选自:H、卤素、取代或未取代的C1-C6烷基、取代或未取代的C1-C6烷氧基、CN、NO、羟基、NRR;R、R可独立选自H或C1-C6烷基R选自:H、取代或未取代的C1-C6烷基;R选自:H、卤素;m为0~4的整数;n为0~5的整数。2.如权利要求1所述的用途,其特征在于,所述炎性肠病是溃疡性结肠炎或克罗恩病;优选溃疡性结肠炎。3.如权利要求1或2所述的用途,其特征在于,在式I中,R选自:H、取代或未取代的C1-C6烷基;R选自:H、卤素、取代或未取代的C1-C6烷基、取代或未取代的C1-C6烷氧基;R选自:H、取代或未取代的C1-C6烷基;R选自:H、卤素;m为0~2的整数;n为0~2的整数。4.如权利要求3所述的用途,其特征在于,所述化合物如式II所示:式中,R选自:H、取代或未取代的C1-C3烷基;R和R独立选自:H、卤素、取代或未取代的C1-C3烷基;R选自:H、取代或未取代的C1-C3烷基;R、R和R独立选自:H、卤素。5.如权利要求1或2所述的用途,其特征在于,式I所示化合物或其药学上可接受的盐是选自下组的化合物或其药学上可接受的盐:6.如权利要求5所述的用途,其特征在于,所述化合物是选自下组的化合物:7.如权利要求6所述的用途,其特征在于,所述化合物是选自下组的化合物:8.一种药物组合物在制备用于治疗炎性肠病的药物中的用途,其特征在于,所述药物组合物含有权利要求1-7中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐,以及药学上可接受的载体或赋形剂。9.一种药物组合物,其特征在于,所述药物组合物用于治疗炎性肠病并且含有权利要求1-7中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐,以及药学上可接受的载体或赋形剂。10.一种治疗炎性肠病的方法,所述方法包括将权利要求1-7中任一项所述的化合物或权利要求9所述的药物组合物给予需要治疗炎性肠病的对象。

说明书

技术领域

太阳城集团本发明涉及药物化学领域;具体地说,本发明涉及新型的噻唑类衍生物在制备治疗溃疡性结肠炎的药物以及在治疗炎性肠病,特别是溃疡性结肠炎中的应用。

背景技术

太阳城集团溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)又称慢性非特异性溃疡性结肠炎,是一种原因不明的肠道粘膜的慢性炎症和溃疡性病变,以累及直肠粘膜、乙状结肠粘膜为主,也可逆行至左半结肠、右半结肠,甚至侵犯到全结肠和末端回肠,与克罗恩病(crohn disease,CD)共称为炎性肠病(inflammatory bowel disease,IBD)。其临床表现主要是腹泻、粘液脓血便、腹痛。病情轻重不等,多呈反复发作的慢性病程。本病可以发生在任何年龄,多见于20-40岁,亦可见于儿童或老年。男女发病率无显著差别。病理特点是粘膜的弥漫性炎症,固有膜内弥漫性淋巴细胞、浆细胞、单核细胞等炎细胞浸润,活动期有大量中性粒细胞和嗜酸性粒细胞浸润,可发生隐窝炎和隐窝脓肿。早在上个世纪,临床医生就对溃疡性结肠炎有所了解,大多数学者认为溃疡性结肠炎是由多因素相互作用所致,主要包括感染、免疫、遗传、环境及精神心理等因素。然而迄今为止,对该病的特异性致病因素和发病机制尚未明确。多年来治疗方法无明显进展,疗效也不令人满意。

目前,针对溃疡性结肠炎的药物并不多,主要有氨基水杨酸、柳氮磺胺吡啶、奥萨拉秦、美沙拉秦,还有免疫抑制剂和激素类药物。尽管这些药物具有一定治疗效果,但也产生了严重的副作用。因此,溃疡性结肠炎被认为是严重影响人们生活质量,且极难治愈的疾病,其特效药物研发受到世界范围内医药公司重视。

因此,本领域急需寻找新型的、更高效、更安全以及成药性更好的溃疡性结肠炎治疗药物。

发明内容

太阳城集团本发明的目的在于提供新型的、更高效、更安全的具备炎性肠病,特别是溃疡性结肠炎抑制活性的化合物,以便用作溃疡性结肠炎的治疗药物。

太阳城集团在第一方面,本发明提供式I所示化合物或其药学上可接受的盐在制备治疗炎性肠病的药物中的用途:

式中,

R1选自:H、取代或未取代的C1-C6烷基、C3-C6环烷基;独立

太阳城集团R2独立选自:H、卤素、取代或未取代的C1-C6烷基、取代或未取代的C1-C6烷氧基、CN、NO2、羟基、NRaRb;

Ra、Rb可独立选自H或C1-C6烷基

R3选自:H、取代或未取代的C1-C6烷基;

R4选自:H、卤素;

m为0~4的整数;

太阳城集团n为0~5的整数。

太阳城集团在具体的实施方式中,所述炎性肠病是溃疡性结肠炎或克罗恩病;优选溃疡性结肠炎。

在具体的实施方式中,式I中,R1选自:H、取代或未取代的C1-C6烷基;R2选自:H、卤素、取代或未取代的C1-C6烷基、取代或未取代的C1-C6烷氧基;R3选自:H、取代或未取代的C1-C6烷基;R4选自:H、卤素;m为0~2的整数;n为0~2的整数。

在具体的实施方式中,所述化合物如式II所示:

式中,

R1选自:H、取代或未取代的C1-C3烷基;

太阳城集团R5和R6独立选自:H、卤素、取代或未取代的C1-C3烷基;

R3选自:H、取代或未取代的C1-C3烷基;

R7、R8和R9独立选自:H、卤素。

在具体的实施方式中,式I所示化合物或其药学上可接受的盐是选自下组的化合物或其药学上可接受的盐:

太阳城集团在具体的实施方式中,所述化合物是选自下组的化合物:

在具体的实施方式中,所述化合物是选自下组的化合物:

在第二方面,本发明提供一种药物组合物在制备用于治疗炎性肠病的药物中的用途,所述药物组合物含有本发明第一方面所述的化合物或其药学上可接受的盐,以及药学上可接受的载体或赋形剂。

在优选的实施方式中,所述炎性肠病包括但不限于溃疡性结肠炎或克罗恩病;优选溃疡性结肠炎。

在第三方面,本发明提供一种药物组合物,所述药物组合物用于治疗炎性肠病并且含有本发明第一方面所述的化合物或其药学上可接受的盐,以及药学上可接受的载体或赋形剂。

太阳城集团在优选的实施方式中,所述炎性肠病包括但不限于溃疡性结肠炎或克罗恩病;优选溃疡性结肠炎。

在优选的实施方式中,所述药物组合物是适于口服的剂型,包括但不限于片剂、溶液剂、混悬液、胶囊剂、颗粒剂、粉剂。

太阳城集团在第四方面,本发明提供一种治疗炎性肠病的方法,所述方法包括将本发明第一方面所述的化合物或本发明第三方面所述的药物组合物给予需要治疗炎性肠病的对象。

太阳城集团在优选的实施方式中,所述炎性肠病包括但不限于溃疡性结肠炎或克罗恩病;优选溃疡性结肠炎。

太阳城集团应理解,在本发明范围内中,本发明的上述各技术特征和在下文(如实施例)中具体描述的各技术特征之间都可以互相组合,从而构成新的或优选的技术方案。限于篇幅,在此不再一一累述。

具体实施方式

发明人经过广泛而深入的研究,出乎意料地发现了一系列具备较好的溃疡性结肠炎治疗效果的噻唑类衍生物,它们的结构骨架完全不同于文献报道过的溃疡性结肠炎治疗药物(例如,氨基水杨酸、柳氮磺胺吡啶、奥萨拉秦、美沙拉秦)。并且这些化合物经实验动物验证显示出显著的溃疡性结肠炎治疗活性。在此基础上完成了本发明。

术语定义

太阳城集团本文中涉及到的一些基团定义如下:

太阳城集团本文中,“烷基”是指碳链长度为1-10个碳原子的饱和的支链或直链烷基,优选的烷基包括长2-8个碳原子、1-6个、1-4个碳原子、1-3个碳原子不等的烷基。烷基的例子包括但不限于甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、庚基等。烷基可以被1个或多个取代基取代,例如被卤素或卤代烷基取代。例如,烷基可以是被1-4个氟原子取代的烷基,例如三氟甲基,或者烷基可以是被氟代烷基取代的烷基。

太阳城集团本文中,“环烷基”是指含有脂环结构的饱和烷基,例如,C3-C6环烷基。在具体的实施方式中,所述环烷基包括但不限于:环丙基、环丁基、环戊基或环己基。本文所述的环烷基可以是取代或未取代的,包括但不限于被一个或多个卤素原子,例如氟原子取代。

本文中,“氨基”是指结构式为“NRxRy”的基团,其中,Rx和Ry可独立选自H或C1-C3烷基或C1-C3卤代烷基。在具体的实施方式中,本文所述的“氨基”是指NH2。

太阳城集团在本文中,“卤素”是指氟、氯、溴和碘。在优选的实施方式中,卤素是氯或氟;更优选氟。

本发明的化合物

本发明人出乎意料地发现了一系列结构骨架全新的具备较好的炎性肠病,特别是溃疡性结肠炎治疗效果的噻唑类衍生物。这些化合物在动物实验中显示出显著的溃疡性结肠炎治疗活性。

在具体的实施方式中,本发明的化合物是式I所示化合物或其药学上可接受的盐:

式中,

太阳城集团R1选自:H、取代或未取代的C1-C6烷基、C3-C6环烷基;独立

太阳城集团R2独立选自:H、卤素、取代或未取代的C1-C6烷基、取代或未取代的C1-C6烷氧基、CN、NO2、羟基、NRaRb;

Ra、Rb可独立选自H或C1-C6烷基

R3选自:H、取代或未取代的C1-C6烷基;

R4选自:H、卤素;

m为0~4的整数;

太阳城集团n为0~5的整数。

太阳城集团在优选的实施方式中,R1选自:H、取代或未取代的C1-C6烷基;R2选自:H、卤素(优选F)、取代(优选F取代的)或未取代的C1-C6烷基(优选C1-C3烷基)、取代或未取代的C1-C6烷氧基;R3选自:H、取代或未取代的C1-C6烷基(优选C1-C3烷基);R4选自:H、卤素(优选Cl);m为0~2的整数;n为0~2的整数。

在进一步优选的实施方式中,本发明的化合物如式II所示:

式中,

太阳城集团R1选自:H、取代或未取代的C1-C3烷基;

R5和R6独立选自:H、卤素、取代(优选F取代的)或未取代的C1-C3烷基(优选甲基);

R3选自:H、取代或未取代的C1-C3烷基;

R7、R8和R9独立选自:H、卤素(优选Cl)。

在上述化合物的基础上,本发明进一步提供一种药物组合物,该组合物含有治疗有效量的本发明化合物或其药学上可接受的盐,以及药学上可接受的载体或赋形剂。

本发明化合物的药学上可接受的盐的例子包括但不限于无机和有机酸盐,例如盐酸盐、氢溴酸盐、硫酸盐、柠檬酸盐、乳酸盐、酒石酸盐、马来酸盐、富马酸盐、扁桃酸盐和草酸盐;以及与碱例如钠羟基、三(羟基甲基)胺基甲烷(TRIS,胺丁三醇)和N-甲基葡糖胺形成的无机和有机碱盐。

虽然每个人的需求各不相同,本领域技术人员可确定本发明药物组合物中每种活性成分的最佳剂量。一般情况下,本发明的化合物或其药学上可接受的盐,对哺乳动物每天口服给药,药量按照约0.0025到50毫克/公斤体重。但最好是每公斤口服给药约0.01到10毫克。例如,单位口服剂量可以包括约0.01到50毫克,最好是约0.1到10毫克的本发明化合物。单位剂量可给予一次或多次,每天为一片或多片,每片含有约0.1到50毫克,合宜地约0.25到10毫克的本发明化合物或其溶剂化物。

本发明的药物组合物可被配制成适合各种给药途径的制剂形式,包括但不限于被配制成用于肠外,皮下,静脉,肌肉,腹腔内,透皮,口腔,鞘内,颅内,鼻腔或外用途径给药的形式,用于治疗肿瘤和其他疾病。给药量是有效地改善或消除一个或多个病症的药量。对于特定疾病的治疗,有效量是足以改善或以某些方式减轻与疾病有关的症状的药量。这样的药量可作为单一剂量施用,或者可依据有效的治疗方案给药。给药量也许可治愈疾病,但是给药通常是为了改善疾病的症状。一般需要反复给药来实现所需的症状改善。药的剂量将根据病人的年龄,健康与体重,并行治疗的种类,治疗的频率,以及所需治疗效益来决定。

太阳城集团本发明的药物制剂可以给予任何哺乳动物,只要他们能获得本发明化合物的治疗效果。在这些哺乳动物中最为重要的是人类。本发明的化合物或其药物组合物可用于治疗溃疡性结肠炎。

本发明的药物制剂可用已知的方式制造。例如,由传统的混合,制粒,制锭,溶解,或冷冻干燥过程制造。制造口服制剂时,可结合固体辅料和活性化合物,选择性研磨混合物。如果需要或必要时加入适量助剂后,加工颗粒混合物,获得片剂或锭剂芯。

合适的辅料特别是填料,例如糖类如乳糖或蔗糖,甘露醇或山梨醇;纤维素制剂或钙磷酸盐,例如磷酸三钙或磷酸氢钙;以及粘结剂,例如淀粉糊,包括玉米淀粉,小麦淀粉,大米淀粉,马铃薯淀粉,明胶,黄芪胶,甲基纤维素,羟丙基甲基纤维素,羧甲基纤维素钠,或聚乙烯吡咯烷酮。如果需要,可增加崩解剂,比如上面提到的淀粉,以及羧甲基淀粉,交联聚乙烯吡咯烷酮,琼脂,或褐藻酸或其盐,如海藻酸钠。辅助剂特别是流动调节剂和润滑剂,例如,硅石,滑石,硬脂酸盐类,如镁硬脂酸钙,硬脂酸或聚乙二醇。如果需要,可以給锭剂核芯提供可以抵抗胃液的合适包衣。为此,可以应用浓缩糖类溶液。此类溶液可以含有阿拉伯树胶,滑石,聚乙烯吡咯烷酮,聚乙二醇和/或二氧化钛,漆溶液和合适的有机溶剂或溶剂混合物。为了制备耐胃液的包衣,可使用适当的纤维素溶液,例如醋酸纤维素邻苯二甲酸或羟丙基甲基纤维素邻苯二甲酸。可向药片或锭剂核芯的包衣加入染料或色素。例如,用于识别或为了表征活性成分剂量的组合。

太阳城集团因此,本发明还提供一种治疗溃疡性结肠炎的方法,该方法包括给予需要治疗的对象以本发明的化合物或包含本发明化合物的药物组合物。

给药方法包括但不限于本领域周知的各种给药方法,可根据患者的实际情况加以确定。这些方法包括但不限于肠外、皮下、静脉、肌肉、腹腔内、透皮、口腔、鞘内、颅内、鼻腔或外用途径给药。

太阳城集团本发明也包括本发明化合物在制备治疗溃疡性结肠炎的药物中的用途。

此外,本领域技术人员基于本领域的公知常识和本发明的内容可以知晓,本发明化合物因其中所含的羧基而能形成盐或酯,进而可以形成前药。

本发明的优点

1.本发明首次发现了一系列结构全新的具备较好的溃疡性结肠炎治疗效果的噻唑类衍生物;

2.本发明的化合物是高效、低毒的溃疡性结肠炎治疗剂,从而具备很重要的学术价值与现实意义。

太阳城集团以下结合具体实施案例对本发明的技术方案进一步描述,但以下实施例不构成对本发明的限制,所有依据本发明的原理和技术手段采用的各种施用方法,均属于本发明范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法,通常按照常规条件,或按照制造厂商所建议的条件。除非另外说明,否则百分比和份数按重量计算。

实施例1:

太阳城集团(E)-4-(2-氯苯基)-2-[1-甲基-2-(2-羧基苄叉基)肼基]噻唑1

2-甲基氨基硫脲(1-1)

太阳城集团称取2.5g(17.3mmol)甲基肼硫酸盐于250ml单口瓶中,加入100ml乙醇,搅拌下加入1.6g(20.8mmol)硫氰酸铵,加热至回流,反应72h后,将反应液冷至室温,抽滤,滤液旋干硅胶柱层析(DCM/MeOH=40:1),分第二个副产物,得白色粉末状固体0.63g,产率34.2%。1H NMR(400MHz,DMSO-d6,ppm)δ7.36(s,2H),4.89(s,2H),3.41(s,3H).GC-MS(EI)calcd for C2H7N3S[M]+105.0,found 105.0.

太阳城集团2-甲基-1-(2-羧基苄差基)氨基硫脲(1-2)

太阳城集团称取80mg(0.76mmol)化合物(1)于50ml单口瓶中,加入20ml乙醇,搅拌下加入邻羧基苯甲醛114mg(0.76mmol),加热至回流,TLC监测反应至原料转化完全,将反应液冷至室温,旋干溶剂,硅胶柱层析(DCM/MeOH=120:1),得白色粉末状固体100mg,产率56%。1H NMR(400MHz,DMSO-d6,ppm)δ13.36(br,1H),8.56(s,1H),8.51(s,1H),8.31(d,J=7.8Hz,1H),8.25(s,1H),7.88(d,J=8Hz,1H),7.59(t,J=7.2Hz,1H),7.50(t,J=7.2Hz,1H),3.77(s,3H).LC-MS(ESI)calcd for C10H12N3O2S[M+H]+238.1,found 238.1.

(E)-4-(2-氯苯基)-2-[1-甲基-2-(2-羧基苄叉基)肼基]噻唑1

称取100mg(0.42mmol)化合物(2)于50ml单口瓶中,加入10ml乙醇,搅拌下加入65μL(0.42mmol)2’-氯-2-溴苯乙酮,升温至回流,TLC跟踪反应至原料转化完全,将反应液冷至室温,旋干溶剂,硅胶柱层析(DCM/MeOH=120:1),得黄色粉末状固体106mg,产率67.9%,Mp.210.4-212.0℃。1H NMR(400MHz,DMSO-d6,ppm)δ13.30(s,1H),8.62(s,1H),8.02(d,J=7.6Hz,1H),7.98–7.90(m,2H),7.66 (t,J=7.6Hz,1H),7.56–7.49(m,2H),7.47(s,1H),7.43(td,J1=7.4Hz,J2=1.2Hz,1H),7.36(td,J1=7.6Hz,J2=1.6Hz,1H),3.68(s,3H).13C NMR(125MHz,DMSO-d6,ppm)δ168.98,168.57,147.11,136.94,135.17,133.42,132.48,131.51,131.09,130.98,130.75,130.16,129.45,129.19,127.63,126.51,111.41,32.88.HRMS(ESI)calcd for C18H15N3O2SCl[M+H]+372.0574,found 372.0575.

采取类似的方法,本发明人利用相应的起始材料进一步合成了以下化合物:

太阳城集团(E)-4-(2-氯苯基)-2-[1-乙基-2-(2-羧基苄叉基)肼基]噻唑2

Mp.203.3-204.1℃.1H NMR(500MHz,DMSO-d6,ppm)δ13.32(br,1H),8.64(s,1H),7.98–7.91(m,3H),7.66(t,J=7.5Hz,1H),7.56–7.46(m,2H),7.45–7.39(m,2H),7.34(t,J=6.8Hz,1H),4.32(q,J=6.8Hz,2H),1.27(t,J=7.0Hz,3H).13C NMR(125MHz,DMSO-d6,ppm)δ168.56,168.36,147.34,137.00,135.42,133.53,132.50,131.53,131.12,130.92,130.72,130.22,129.42,129.19,127.62,126.62,111.22,40.38,10.33.HRMS(ESI)calcd for C19H17N3O2SCl[M+H]+386.0730,found 386.0728.

(E)-4-(2-氯苯基)-2-[1-丙基-2-(2-羧基苄叉基)肼基]噻唑3

Mp.172.6-173.4℃.1H NMR(400MHz,DMSO-d6,ppm)δ13.35(br,1H),8.65(s,1H),7.98(d,J=8.0Hz,1H),7.95-7.92(m,2H),7.67(t,J=7.2Hz,1H),7.54(d,J=8.0Hz,1H),7.5(t,J=7.6Hz,1H),7.45-7.42(m,2H),7.36(t,J1=7.6Hz,J2=1.6Hz,1H),4.25(t,J=7.2Hz,2H),1.82-1.73(m,2H),0.97(t,J=7.4Hz,1H).13C NMR(100MHz,DMSO-d6,ppm)δ168.54,168.22 146.95,136.63,134.96,133.17,132.11,131.10,130.74,130.55,130.34,129.82,129.04,128.80,127.26,126.09,110.77,46.31,17.98,11.17.HRMS(ESI)calcd for C20H19N3O2SCl[M+H]+400.0887,found 400.0879.

(E)-4-(2-氯苯基)-2-[1-异丙基-2-(2-羧基苄叉基)肼基]噻唑4

Mp.185.4-187.0℃.1H NMR(400MHz,DMSO-d6,ppm)δ13.35(br,1H),8.91(s,1H),7.99(d,J=8.0Hz,1H),7.95-7.92(m,2H),7.67(t,J=7.6Hz,1H),7.54(d,J=8.0Hz,1H),7.52(t,J=7.6Hz,1H),7.46-7.42(m,2H),7.36(td,J1=7.6Hz,J2=1.6Hz,1H),5.22-5.11(m,1H),1.57(d,J=6.8Hz,6H).13C NMR(100MHz,DMSO-d6,ppm)δ168.22,168.21,146.90,137.32,135.23,133.14,132.07,131.06,130.64,130.58,130.39,129.88,128.97,128.78,127.28,125.91,111.12,49.61,18.07,18.07.HRMS(ESI)calcd for C20H19N3O2SCl[M+H]+400.0887,found 400.0885.

(E)-4-(2-氯苯基)-2-[1-(2-丁基)-2-(2-羧基苄叉基)肼基]噻唑5

太阳城集团Mp.170.5-170.6℃.1H NMR(400MHz,DMSO-d6,ppm)δ13.32(br,1H),8.91(s,1H),7.99(d,J=8.0Hz,1H),7.95-7.90(m,2H),7.67(t,J1=7.6Hz,1H),7.55-7.48(m,2H),7.46-7.42(m,2H),7.36(td,J1=7.6Hz,J2=1.6Hz,1H),5.00-4.93(m,1H),2.35-2.24(m,1H),1.92-1.81(m,1H),1.54(d,J=6.8Hz,3H),0.88(t,J=7.2Hz,3H). 13C NMR(100MHz,DMSO-d6,ppm)δ168.66,168.19,146.97,137.03,135.24,133.19,132.13,131.04,130.67,130.58,130.39,129.70,128.98,128.77,127.29,125.91,111.04,55.67,25.26,16.33,11.14.HRMS(ESI)calcd for C21H21N3O2SCl[M+H]+414.1043,found 414.1029.

(E)-4-(2-氯苯基)-2-[1-(2-戊基)-2-(2-羧基苄叉基)肼基]噻唑6

Mp.146.7-147.0℃.1H NMR(400MHz,DMSO-d6,ppm)δ13.35(br,1H),8.91(s,1H),7.98(d,J=7.6Hz,1H),7.94(d,J=8.0Hz,1H),7.91(dd,J1=7.6Hz,J2=1.6Hz,1H),7.67(t,J=7.6Hz,1H),7.53(d,J=8.0Hz,1H),7.49(t,J=7.6Hz,1H),7.46-7.42(m,2H),7.36(td,J1=7.6Hz,J2=1.6Hz,1H),5.14-5.06(m,1H),2.34-2.25(m,1H),1.82-1.73(m,1H),1.53(d,J=6.8Hz,3H),1.34-1.24(m,2H),0.89(t,J=7.4Hz,1H).13C NMR(100MHz,DMSO-d6,ppm)δ168.68,168.20,146.98,137.04,135.30,133.20,132.14,131.00,130.68,130.59,130.40,129.68,128.99,127.30,125.90,111.09,53.81,34.20,19.46,16.46,13.60.HRMS(ESI)calcd for C22H23N3O2SCl[M+H]+428.1200,found 428.1193.

太阳城集团(E)-4-(2-氯苯基)-2-[1-羟乙基-2-(2-羧基苄叉基)肼基]噻唑7

Mp.187.9-188.9℃.1H NMR(400MHz,DMSO-d6,ppm)δ13.24(br,1H),8.75(s,1H),7.98-7.01(m,3H),7.66(t,J=7.6Hz,1H),7.54(d,J=8.0Hz,1H),7.49(t,J=7.6Hz,1H),7.45-7.41(m,2H),7.36(td,J1=7.6Hz,J2=1.6Hz,1H),4.35(t,J=6.4Hz,2H),3.76(t,J=6.4Hz,2H).13C NMR(100MHz,DMSO-d6,ppm)δ168.64,168.23,146.87,136.89,134.91,133.15,131.99,131.19,130.71,130.46,130.32,130.16,129.04,128.79,127.22,126.28,110.78,56.24,47.46.HRMS(ESI)calcd for C19H17N3O3SCl[M+H]+402.0679,found 402.0678.

(E)-4-(2-氯苯基)-2-[1-甲基-2-(4-三氟甲基-2-羧基苄叉基)肼基]噻唑8

Mp.209.3-210.7℃.1H NMR(400MHz,DMSO-d6,ppm)δ14.02(br,1H),8.66(s,1H),8.21(d,J=8.0Hz,1H),8.17(s,1H),8.02(d,J=8.0Hz,1H),7.95(d,J=7.6Hz,1H),7.56-7.53(m,2H),7.43(t,J=7.6Hz,1H),7.37(t,J=7.6Hz,1H),3.70(s,3H). 13C NMR(100MHz,DMSO-d6,ppm)δ168.33,167.17,146.79,138.38,135.01,132.91,131.12,130.70,130.37,129.14,128.57,128.25,128.20,127.26,127.04,125.10,122.40,111.51,32.68.HRMS(ESI)calcd for C19H14N3O2SClF3[M+H]+440.0447,found440.0433.

(E)-4-(2-氯苯基)-2-[1-甲基-2-(4-甲基-2-羧基苄叉基)肼基]噻唑9

Mp.231.3-232.5℃.1H NMR(400MHz,DMSO-d6,ppm)δ13.30(br,1H),8.59(s,1H),7.96(d,J=7.6Hz,1H),7.92(d,J=8.0Hz,1H),7.75(s,1H),7.54(d,J=7.6Hz,1H),7.49-7.46(m,2H),7.43(t,J=7.6Hz,1H),7.36(t,J=7.6Hz,1H),3.66(s,3H),2.38(s,3H).13C NMR(100MHz,DMSO-d6,ppm)δ168.60,168.35,146.68,138.54,136.64,133.03,132.70,132.07,131.11,130.86,130.67,130.34,129.83,129.00,127.21,126.04,110.84,32.39,20.69.HRMS(ESI)calcd for C19H17N3O2SCl[M+H]+386.0730,found 386.0738.

(E)-4-(2-氯苯基)-2-[1-甲基-2-(2-羧基-4-氟苄叉基)肼基]噻唑10

Mp.228.6-229.7℃.1H NMR(400MHz,DMSO-d6,ppm)δ13.28(br,1H),8.14(s,1H),7.93(dd,J1=7.6Hz,J2=1.6Hz,1H),7.61(dd,J1=7.0Hz,J2=1.8Hz,1H),7.55-7.49(m,3H),7.44-7.41(m,1H),7.36(td,J1=7.6Hz,J2=1.6Hz,1H),3.68(s,3H).13C NMR(100MHz,DMSO-d6,ppm)δ168.55,168.01,159.74(d,1J=249Hz),146.67,133.68,133.10,131.50,131.12,130.72,130.32,130.10(d,3J=8.8Hz),129.06,127.23,125.53(d,4J=3.1Hz),121.75(d,2J=11.8Hz),118.76(d,2J=22Hz),111.13,32.28.HRMS(ESI)calcd for C18H14N3O2FSCl[M+H]+390.0479,found 390.0475.

(E)-5-甲基-4-苯基-2-[1-甲基-2-(4-甲基-2-羧基苄叉基)肼基]噻唑11

Mp.243.2-245.2℃.1H NMR(400MHz,DMSO-d6,ppm)δ13.24(br,1H),8.54(s,1H),7.91(d,J=8.0Hz,1H),7.73(s,1H),7.64-7.53(m,2H),7.46-7.42(m,3H),7.33(t,J=7.4Hz,1H),3.60(s,3H),2.44(s,3H),2.38(s,3H).13C NMR(100MHz,DMSO-d6,ppm)δ168.35,165.40,145.43,138.33,135.76,135.16,132.68,132.22,130.86,129.62,128.24,128.24,127.85,127.85,127.06,125.89,119.27,31.85,20.68,12.24.HRMS(ESI)calcd for C20H20N3O2S[M+H]+366.1276,found 366.1273.

(E)-5-甲基-4-苯基-2-[1-甲基-2-(2-羧基苄叉基)肼基]噻唑12

太阳城集团Mp.222.7-224.9℃.1H NMR(400MHz,DMSO-d6,ppm)δ13.32(br,1H),8.58(s,1H),8.01(d,J=8.0Hz,1H),7.92(d,J=7.6Hz,1H),7.68-7.63(m,3H),7.50-7.43(m,3H),7.34(t,J=7.4Hz,1H),3.62(s,3H),2.44(s,3H).13C NMR(100MHz,DMSO-d6,ppm)δ168.24,165.36,145.47,135.66,135.13,134.90,131.98,130.58,129.70,128.59,128.25,128.25,127.86,127.86,127.09,125.94,119.44,31.93,12.24.HRMS(ESI)calcd for C19H16N3O2S[M-H]-350.0963,found 350.0951.

(E)-4-(2-氯苯基)-2-[1-甲基-2-(2-羧基苄叉基)肼基]噻唑13

Mp.208.8-209.8℃.1H NMR(400MHz,DMSO-d6,ppm)δ13.46(br,1H),8.60(s,1H),8.01(d,J=8.0Hz,1H),7.92(d,J=8.0Hz,1H),7.64(t,J=7.4Hz,1H),7.56(d,J=7.6Hz,1H),7.49-7.39(m,4H),3.56(s,3H),2.15(s,3H).13C NMR(100MHz,DMSO-d6,ppm)δ168.98,166.46,144.56,136.46,135.29,134.54,133.25,132.50,132.31,131.05,130.72,130.26,130.01,129.09,127.49,126.42,121.85,32.46,12.16.HRMS(ESI)calcd for C19H17N3O2SCl[M+H]+386.0730,found 386.0727.

(E)-5-乙基-4-(2-氯苯基)-2-(2-羧基苄叉肼基)噻唑14

Mp.223.9-223.9℃.1H NMR(500MHz,DMSO-d6,ppm)δ12.57(br,2H),8.79(s,1H),8.01(d,J=8.0Hz,1H),7.88(d,J=8.0Hz,1H),7.62(t,J=7.5Hz,1H),7.56–7.51(m,1H),7.46(t,J=7.5Hz,1H),7.44-7.36(m,3H),2.49(q,J=7.5Hz,1H),1.13(t,J=7.5Hz,3H).13C NMR(125MHz,DMSO-d6,ppm)δ169.28,165.92,144.14,140.84,135.89,135.46,133.99,133.03,133.02,131.46,130.81,130.73,130.60,129.73,128.09,127.73,127.01,20.99,17.25.HRMS(ESI)calcd for C19H17N3O2SCl[M+H]+386.0730,found 386.0729.

(E)-5-甲基-4-(2-氯苯基)-2-(2-羧基苄叉肼基)噻唑15

Mp.217.6-217.8℃.1H NMR(400MHz,DMSO-d6,ppm)δ12.7(br,2H),8.77(s,1H),7.99(d,J=7.6Hz,1H),7.87(d,J=7.2Hz,1H),7.62(t,J=7.4Hz,1H),7.562-7.543(m,1H),7.481-7.397(m,4H),2.14(s,3H).13C NMR(125MHz,DMSO-d6,ppm)δ168.65,165.18,144.49,140.16,135.25,134.56,133.21,132.46,130.83,130.14,130.03,129.11,127.45,126.37,119.49,12.15.HRMS(ESI)calcd for C18H15N3O2SCl[M+H]+372.0574,found 372.0569.

太阳城集团(E)-4-(2-氯苯基)-2-(2-羧基苄叉肼基)噻唑16

太阳城集团Mp.200.2-200.9℃.1H NMR(400MHz,DMSO-d6,ppm)δ13.2(br,1H),12.4(br,1H),8.82(s,1H),8.00(d,J=7.6Hz,1H),7.89-7.86(m,2H),7.64(t,J=7.4Hz, 1H),7.53(dd,J1=7.6Hz,J2=1.2Hz,1H),7.49(td,J1=7.6Hz,J2=1.2Hz,1H),7.42(td,J1=7.6Hz,J2=1.2Hz,1H),7.36(m,2H).13C NMR(100MHz,DMSO-d6,ppm)δ168.63,167.77,147.63,140.76,135.08,133.71,132.43,131.54,131.23,130.83,130.83,130.26,129.47,129.28,127.69,126.47,109.26.HRMS(ESI)calcd for C17H13N3O2SCl[M+H]+358.0417,found 358.0417.

(E)-5-甲基-4-苯基-2-(2-羧基苄叉肼基)噻唑17

太阳城集团Mp.215.9-216.0℃.1H NMR(400MHz,DMSO-d6,ppm)δ12.7(br,2H),8.77(s,1H),7.99(d,J=7.6Hz,1H),7.87(dd,J1=8.0Hz,J2=1.2Hz,1H),7.63-7.59(m,3H),7.48-7.43(m,3H),7.33(t,J=7.2Hz,1H),2.43(s,3H).13C NMR(125MHz,DMSO-d6,ppm)δ168.66,164.72,146.00,140.05,135.64,135.24,132.36,130.83,130.12,129.08,128.73,128.73,128.35,128.35,127.51,126.33,117.61,12.74.HRMS(ESI)calcd for C18H16N3O2S[M+H]+338.0963,found 338.0954.

(E)-4-苯基-2-(2-羧基苄叉肼基)噻唑18

Mp.163.8-165.6℃.1H NMR(400MHz,DMSO-d6,ppm)δ13.45(br,1H),12.49(br,1H),8.81(s,1H),7.99(d,J=7.6Hz,1H),7.87(m,3H),7.63(t,J=7.4Hz,1H),7.47(t,J=7.2Hz,1H),7.41(t,J=7.6Hz,2H),7.33(s,1H),7.30(t,J=7.4Hz,1H).13C NMR(100MHz,DMSO-d6,ppm)δ168.53,168.53,150.97,140.58,135.02,134.99,132.31,130.74,130.15,129.15,128.96,128.96,127.90,126.34,125.90,125.90,104.20.HRMS(ESI)calcd for C18H16N3O2S[M-H]-322.0650,found 322.0656.

(E)-4-(2,5-二氯苯基)-2-[1-甲基-2-(2-羧基苄叉基)肼基]噻唑19

Mp.268.4-269.5℃.1H NMR(400MHz,DMSO-d6,ppm)δ13.31(br,1H),8.63(s,1H),8.02-8.00(m,2H),7.93(d,J=7.2Hz,1H),7.67(t,J=7.6Hz,1H),7.63(s,1H),7.58(d,J=7.6Hz,1H),7.50(t,J=7.2Hz,1H),7.43(dd,J1=7.2Hz,J2=2.8Hz,1H),3.68(s,3H).13C NMR(100MHz,DMSO-d6,ppm)δ168.68,168.15,145.13,136.79,134.70,134.21,132.14,132.06,131.85,130.59,130.17,129.76,129.20,128.84,128.58, 126.13,112.31,32.49.HRMS(ESI)calcd for C18H14N3O2SCl2[M+H]+406.0184,found406.0187.

(E)-4-苯基-2-[1-甲基-2-(2-羧基苄叉基)肼基]噻唑20

Mp.205.6-206.8℃.1H NMR(400MHz,DMSO-d6,ppm)δ13.31(br,1H),8.62(s,1H),8.02(d,J=7.6Hz,1H),7.94-7.91(m,3H),7.66(t,J=7.2Hz,1H),7.49(t,J=7.2Hz,1H),7.45-7.40(m,3H),7.31(t,J=7.2Hz,1H),3.71(s,3H).13C NMR(100MHz,DMSO-d6,ppm)δ169.45,168.20,150.18,136.35,134.80,134.49,132.07,130.60,129.71,128.76,128.56,128.56,127.59,126.09,125.54,125.54,105.97,32.51.HRMS(ESI)calcd for C18H16N3O2S[M+H]+338.0963,found 338.0963.

太阳城集团(E)-4-(3-氯苯基)-2-[1-甲基-2-(2-羧基苄叉基)肼基]噻唑21

Mp.244.7-245.4℃.1H NMR(400MHz,DMSO-d6,ppm)δ13.32(br,1H),8.63(s,1H),8.01(d,J=7.6Hz,1H),7.97(s,1H),7.93(d,J=7.6Hz,1H),7.88(d,J=8.0Hz,1H),7.66(t,J=7.6Hz,1H),7.61(s,1H),7.50(t,J=7.6Hz,1H),7.45(t,J=7.6Hz,1H),7.37(d,J=8.0Hz,1H),3.71(s,3H).13C NMR(100MHz,DMSO-d6,ppm)δ169.57,168.18,148.56,136.64,136.50,134.72,133.48,132.06,130.59,130.44,129.76,128.81,127.28,126.12,125.16,124.05,107.56,32.52.HRMS(ESI)calcd for C18H15N3O2SCl[M+H]+372.0574,found 372.0574.

太阳城集团(E)-5-甲基-4-(2-氯苯基)-2-[1-(2-戊基)-2-(2-羧基苄叉基)肼基]噻唑22

太阳城集团Mp.89.9-90.1℃.1H NMR(400MHz,DMSO-d6,ppm)δ13.29(br,1H),8.85(s,1H),7.98(d,J=8.0Hz,1H),7.92(d,J=7.6Hz,1H),7.65(t,J=7.6Hz,1H),7.56-7.54(m,1H),7.51-7.41(m,4H),5.05-4.96(m,1H),2.29-2.22(m,1H),2.16(s,3H),1.75-1.67(m,1H),1.46(d,J=7.2Hz,3H),1.28-1.23(m,2H),0.87(t,J=7.6Hz,3H).13C NMR(100MHz,DMSO-d6,ppm)δ168.23,166.06,144.08,136.14,135.46,134.09,132.79,132.09,131.93,130.58,129.64,129.60,129.48,128.56,126.95,125.73, 121.62,53.39,34.01,19.41,16.35,13.58,11.52.HRMS(ESI)calcd for C23H25N3O2SCl[M+H]+442.1356,found 442.1354.

太阳城集团(E)-2-((2-(4-(3-甲氧基苯基)噻唑-2-基)亚肼基)甲基)苯甲酸(52)

熔点:167.3-167.9℃.1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ12.80(s,1H),8.82(s,1H),8.00(d,J=8.0Hz,1H),7.88(d,J=7.6Hz,1H),7.62(t,J=7.6Hz,1H),7.49-7.43(m,3H),7.37(s,1H),7.32(t,J=8.0Hz,1H),6.88(dd,J1=8.4Hz,J2=2.0Hz,1H),3.80(s,3H).13C NMR(100MHz,DMSO-d6):168.67,168.52,159.99,150.90,140.75,136.52,135.04,132.36,130.81,130.40,130.12,129.26,126.43,118.41,113.80,111.31,104.71,55.52.HRMS(ESI)calcd for C18H14N3O3S[M-H]-352.0756,found352.0754.Purity:95.56%(tR7.94min).

太阳城集团(E)-2-((2-(4-(3-氨基甲酰基苯基)噻唑-2-基)亚肼基)甲基)苯甲酸(53)

太阳城集团熔点:297.9-298.4℃.1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ12.20(s,1H),8.83(s,1H),8.39(s,1H),8.05(s,1H),8.00(dd,J1=7.2Hz,J2=3.2Hz,2H),7.88(d,J=7.6Hz,1H),7.80(d,J=7.6Hz,1H),7.63(t,J=7.6Hz,1H),7.51-7.46(m,2H),7.41(s,2H).13C NMR(100MHz,DMSO-d6):168.77,168.67,168.44,150.57,140.83,135.19,135.14,135.02,132.40,130.83,130.36,129.31,129.03,128.62,126.91,126.46,125.36,105.00.HRMS(ESI)calcd for C18H15N4O3S[M+H]+367.0865,found 367.0863.Purity:97.89%(tR 7.832min).

太阳城集团(E)-2-((2-(4-(对甲苯基)噻唑-2-基)亚肼基)甲基)苯甲酸(54)

熔点:225.5-226.1℃.1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ12.80(s,1H),8.83(s,1H),8.00(d,J=7.2Hz,1H),7.88(d,J=7.6Hz,1H),7.75(d,J=8.0Hz,2H),7.62(t,J=7.6Hz,1H),7.47(t,J=7.6Hz,1H),7.25(s,1H),7.21(t,J=8.0Hz,2H),2.32(s,3H).13C NMR(100MHz,DMSO-d6):168.73,168.55,151.12,140.69,137.26,135.04,132.50,132.29,130.80,130.56,129.63,129.22,126.39,125.96,103.37,21.27.HRMS (ESI)calcd for C18H14N3O2S[M-H]-336.0807,found 336.0808.Purity:96.31%(tR13.17min).

(E)-2-((2-(4-(2,5-二氯苯基)噻唑-2-基)亚肼基)甲基)苯甲酸(55)

熔点:205.0-206.0℃.1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ12.20(s,1H),8.84(s,1H),7.99(d,J=7.2Hz,1H),7.95(d,J=6.4Hz,1H),7.88(d,J=8.0Hz,1H),7.62(t,J=7.2Hz,1H),7.57(d,J=8.4Hz,1H),7.52(s,1H),7.47(t,J=7.6Hz,1H),7.41(dd,J1=8.8Hz,J2=2.8Hz,1H).13C NMR(100MHz,DMSO-d6):168.67,167.90,146.07,141.15,135.02,134.92,132.65,132.33,132.28,130.82,130.74,130.62,129.74,129.35,129.03,126.46,110.57.HRMS(ESI)calcd for C17H10N3O2SCl2[M-H]-389.9871,found389.9871.Purity:97.66%(tR 9.88min).

太阳城集团(E)-2-((2-(4-(2,5-二氯苯基)噻唑-2-基)亚肼基)甲基)苯甲酸(56)

太阳城集团熔点:238.1-239.4℃.1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ12.80(s,1H),8.87(s,1H),8.40(s,1H),8.04-8.01(m,2H),7.96-7.89(m,4H),7.64(t,J=7.6Hz,1H),7.54-7.46(m,4H).13C NMR(100MHz,DMSO-d6):168.75,168.68,151.02,140.83,135.07,133.65,132.92,132.58,132.40,130.85,130.39,129.29,128.63,128.57,128.05,126.90,126.47,124.57,124.43,105.15.HRMS(ESI)calcd for C21H16N3O2S[M+H]+374.0963,found 374.0959.Purity:96.39%(tR 19.11min).

(E)-2-((2-(4-(萘-2-基)噻唑-2-基)亚肼基)甲基)苯甲酸(57)

熔点:227.1-228.1℃.1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ12.35(s,1H),8.83(s,1H),8.01(d,J=6.0Hz,1H),7.96(d,J=6.8Hz,2H),7.88(d,J=6.0Hz,1H),7.74-7.71(m,4H),7.64(t,J=6.4Hz,1H),7.48(t,J=6.0Hz,3H),7.42(s,1H),7.38(t,J=6.0Hz,1H).13C NMR(100MHz,DMSO-d6):169.31,169.31,151.40,141.42,140.82,140.22,135.75,134.93,133.11,131.52,130.98,130.12,129.97,128.62,127.99,127.63,127.26,127.14,105.26.HRMS(ESI)calcd for C23H18N3O2S[M+H]+400.1120,found 400.1114.Purity:97.60%(tR 9.16min).

(E)-2-((2-(4-(2-氯苯基)噻唑-2-基)亚肼基)甲基)-6-氟苯甲酸(58)

太阳城集团熔点:211.2-211.7℃.1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ12.40(s,1H),8.18(s,1H),7.86(dd,J1=7.6Hz,J2=1.6Hz,1H),7.69(d,J=8.0Hz,1H),7.55-7.50(m,2H),7.41(t,J=7.6Hz,1H),7.37(s,1H),7.35(t,J=7.6Hz,1H),7.29(t,J=8.8Hz,1H). 13C NMR(100MHz,DMSO-d6):167.56,166.14,160.51,158.06,147.64,138.21,138.17,133.94,133.89,133.68,131.54,131.25,130.83,129.53,127.72,122.04,116.51,116.29,109.58.HRMS(ESI)calcd for C17H10N3O2SClF[M-H]-374.0166,found374.0164.Purity:97.09%(tR12.05min).

太阳城集团(E)-2-((2-(4-(2-氯苯基)噻唑-2-基)亚肼基)甲基)-3-氨基苯甲酸(59)

太阳城集团mp 220.9-221.6℃.1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ12.8(s,1H),11.1(s,1H),7.93(s,1H),7.89(d,J=7.2Hz,1H),7.62(d,J=7.6Hz,1H),7.52-7.43(m,3H),7.12(d,J=7.2Hz,1H),7.08(d,J=8.4Hz,1H),6.77(s,2H).13C NMR(100MHz,DMSO-d6):δ165.84,155.22,154.28,147.07,146.30,133.99,132.71,131.65,131.51,131.09,130.33,129.73,128.14,121.28,114.49,113.14,111.55.Purity:97.06%(tR19.58min).

实施例2(活性评价)

1.实验材料

1.1实验动物

SPF级BALB/c雄性小鼠,每只体重18~22g,购自上海斯莱克实验动物有限公司,适应性喂养7天后用于实验。

1.2试剂

2,4,6-三硝基苯磺酸(TNBS)购于美国Sigma公司,柳氮磺胺嘧啶片(SASP,0.25g/片)购于上海三维制药有限公司,无水乙醇购于上海泰坦科技股份有限公司,水合氯醛购于江苏强盛功能化学股份有限公司,氯化钠购于国药集团化学试剂有限公司,37%~40%甲醛溶液购于上海凌峰化学试剂有限公司,羧甲基纤维素钠购于上海晶纯生化科技股份有限公司,石蜡购于德国Leica公司,二甲苯购于上海凌峰化学试剂有限公司,苏木素伊红(H&E)染色试剂盒购于碧云天生物技术研究所,盐酸购于上海凌峰化学试剂有限公司,中性树胶购于国药集团化学试剂有限公司。

1.3主要实验仪器

太阳城集团电子天平购于上海精天电子仪器有限公司,精密电子天平购于梅特勒-托利多公司,游标卡尺购于哈尔滨量具刃具集团有限责任公司,显微镜购于Nikon公司,石蜡切片机购于德国Leica公司,电热恒温鼓风干燥箱购于上海一恒科学仪器有限公司。

2.实验方法

2.1实验动物饲养

太阳城集团BALB/c雄性小鼠饲养在温度20~25℃,相对湿度50~60%,白光、黑夜各12h的动物房中,可自由索食和饮水。

2.2实验动物分组

太阳城集团实验动物分组及给药剂量见表1。将小鼠随机分为正常对照组、三硝基苯磺酸(TNBS)模型组、药物治疗组及阳性药对照组(柳氮磺胺嘧啶500mg/kg)。

将小鼠随机分为四组,分组及每日给药情况如表1所示:

表1:小鼠分组及每日给药情况

太阳城集团2.3建立TNBS诱导的小鼠溃疡性结肠炎模型与给药

所有模型及给药组小鼠腹部剃毛(面积2×2cm),用1%TNBS(溶于50%乙醇)涂抹致敏。第7天小鼠禁食不禁水,24h后,腹腔注射0.1ml10%水合氯醛进行麻醉,2%TNBS灌肠,建立溃疡性结肠炎小鼠模型。将大鼠灌胃针插入小鼠结肠,针头尖端距肛门约3~3.5cm,注入0.1ml造模溶液(5%TNBS与去离子水按体积比4:1混合,所得溶液再与无水乙醇按体积比1:1混合所得)。仰卧放回鼠笼,自然苏醒。正常对照组以同样的方法注入0.12ml溶剂(50%乙醇溶液)。建模24h后随机处死2只造模小鼠,观察结肠的变化,以确认造模是否成功。

太阳城集团建模当天开始给药(用0.5%羧甲基纤维素钠,CMC-Na),连续给药7天。每天称量体重,观察小鼠的精神状态、大便性状、皮毛状态、摄食量等。

2.4样品采集

最后一次给药24h后,颈部脱臼处死小鼠,剪开腹膜,取全部结肠,沿肠系膜缘纵向剖开肠管,用冰生理盐水冲洗干净,放在冰上,观察结肠的病理变化,然后除去脂肪和肠系膜,用滤纸吸干水分,称量结肠的重量并测量其长度。放入4%甲醛中固定24h以上,组织脱水,进行石蜡包埋、H&E染色,对病理切片观察评价。

2.5评价指标

太阳城集团2.5.1一般情况观察

每日观察并记录小鼠的精神状态、皮毛色泽以及活动情况等。每日称量小鼠体重,观察大便性状,根据疾病活动指数(DAI)体重评分标准如下:

太阳城集团体重:体重不变,0分;体重比正常下降1%~5%,1分;下降6%~10%,2分;11%~15%,3分;大于15%,4分。

2.5.2结肠重量/长度比值变化

太阳城集团取出小鼠结肠后,用精密电子天平测量结肠的重量,用游标卡尺测量其长度,计算结肠重量/长度的比值。

太阳城集团2.5.3结肠大体形态损伤情况观察

取结肠后,观察结肠与其他组织黏连、溃疡和炎症情况,并记录评分,评分标准为:无黏连、无溃疡、无炎症,0分;轻度黏连、局部充血、无溃疡,1分;重度黏连、有1处溃疡(面积小于1cm)、无明显炎症,2分;1处以上溃疡(面积小于1cm)伴有炎症,3分;2处严重溃疡(面积大于1cm)并伴有炎症,4分;溃疡面积每增加1cm加1分。

太阳城集团2.5.4结肠组织病理学观察

光镜下观察结肠组织病理学改变情况,记录评分。评分标准如下:

太阳城集团1)上皮细胞:正常形态,0分;有杯状细胞丢失,1分;杯状细胞大面积丢失,2分;隐窝细胞丢失,3分;隐窝细胞大面积丢失,4分。

2)炎症细胞浸润:没有浸润,0分;浸润在隐窝基底层,1分;浸润到达黏膜肌层,2分;浸润深入到黏膜肌层,伴随黏膜增厚和明显水肿,3分;浸润到达黏膜下层,4分。

2.6统计学分析

数据以均值±标准差(mean±S.E.M.)表示,使用SPSS统计软件进行数据分析,组间比较应用one-way ANOVA和Tukey’s HSD post hoc检验,p<0.05认为有统计学意义。

3.实验结果和分析

太阳城集团3.1一般情况观察结果

跟正常对照组相比,TNBS模型组小鼠在造模第3天大便性状开始发生变化,出现腹泻症状,第4天后腹泻,血便,精神萎靡,活动减少,饮食减退,皮毛凌乱暗哑,体重明显下降;药物治疗组和阳性药对照组,在造模第3天出现腹泻症状,第4天后腹泻,血便,精神萎靡,活动减少,饮食减退,皮毛凌乱暗哑,体重下降,但跟TNBS模型组相比,症状较轻。体重下降情况如表2所示:

太阳城集团表2:小鼠体重下降情况

注:与正常对照组相比,**p<0.01:与模型组相比,#p<0.05,##p<0.01

3.2结肠重量/长度比值变化

结肠重量、长度以及二者比值如表3所示:

太阳城集团表3:小鼠重量/长度比值变化

太阳城集团注:与正常对照组相比,*p<0.05;与模型组比,#p<0.05

TNBS模型组重量/长度比值明显比正常对照组大,表明模型组充血肿胀情况比较严重,而药物治疗组和阳性药对照组重量/长度比值明显低于模型组,表明本发明化合物和阳性药柳氮磺胺嘧啶都可以逆转TNBS引起的小鼠结肠充血水肿。

3.3结肠大体形态损伤情况与结肠组织病理学观察结果

观察结肠大体形态和组织病理学切片可以发现,跟正常对照组相比,模型组损伤比较明显,充血肿胀、溃疡严重,有炎症细胞的浸润现象。药物治疗组和阳性对照组,这些损伤情况明显得到改善。

结肠大体形态损伤与组织病理学评分结果总结于表4。

太阳城集团表4:结肠大体形态损伤与组织病理学观察结果

注:与正常对照组相比,**p<0.01;与TNBS模型组相比,#p<0.05,##p<0.01

讨论:

太阳城集团从在动物水平进行的本发明化合物的溃疡性结肠炎治疗活性检测结果可知,本发明的化合物具备优异的溃疡性结肠炎治疗活性,其中一些化合物的溃疡性结肠炎治疗活性与阳性对照药物相当。从而为开发低毒、高效、安全的新型溃疡性结肠炎治疗药物奠定新的物质基础。

太阳城集团在本发明提及的所有文献都在本申请中引用作为参考,就如同每一篇文献被单独引用作为参考那样。此外应理解,在阅读了本发明的上述讲授内容之后,本领域技术人员可以对本发明作各种改动或修改,这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定的范围。

太阳城集团本文
本文标题:新型噻唑类衍生物在治疗炎性肠病中的应用.pdf
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