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一种包含CLAPTX的微乳制剂.pdf

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一种 包含 CLAPTX 制剂
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摘要
申请专利号:

太阳城集团CN201210159242.6

申请日:

20120522

公开号:

太阳城集团CN102670504A

公开日:

20120919

当前法律状态:

有效性:

有效

法律详情:
IPC分类号: A61K9/107,A61K31/337,A61K47/44,A61K47/48,A61P35/00 主分类号: A61K9/107,A61K31/337,A61K47/44,A61K47/48,A61P35/00
申请人: 北京大学
发明人: 张烜,李丹,柯曦宇,杨科,李捷思,张强
地址: 100191 北京市海淀区颐和园路5号
优先权: CN201210159242A
专利代理机构: 代理人:
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法律状态
申请(专利)号:

CN201210159242.6

授权太阳城集团号:

法律状态太阳城集团日:

法律状态类型:

摘要

本发明涉及一种被动靶向给药系统,特别是涉及一种包含CLA-PTX的微乳制剂。本发明还涉及所述微乳制剂的制备方法和所述微乳制剂在制备用于治疗恶性肿瘤的药物中的用途。

权利要求书

太阳城集团1.一种水包油型微乳制剂,所述制剂包括油相和水相,其特征在于用于制成所述油相的原料由抗肿瘤药物CLA-PTX、油性介质、表面活性剂、助表面活性剂和任选的其它用于制备油相的原料组成。2.如权利要求1所述的水包油型微乳制剂,其特征在于所述油性介质选自植物油(例如大豆油、棉籽油)、动物油、合成油脂和其混合物。3.如权利要求1所述的水包油型微乳制剂,其特征在于所述表面活性剂为卵磷脂(例如蛋黄卵磷脂、大豆卵磷脂)和非离子表面活性剂(例如聚氧乙烯蓖麻油(如CremophorELP)、聚氧乙烯氢化蓖麻油(如CremophorRH)、吐温(如吐温80))的混合表面活性剂。4.如权利要求1所述的水包油型微乳制剂,其特征在于所述助表面活性剂选自乙醇、丙二醇、甘油和其混合物。5.如权利要求1所述的水包油型微乳制剂,其特征在于所述任选的其它用于制备油相的原料选自其它活性剂(例如其它用于治疗恶性肿瘤的药物)、防腐剂和抗菌剂。6.如权利要求1-5任一项所述的水包油型微乳制剂,其特征在于用于制成所述油相的原料由植物油、卵磷脂、非离子表面活性剂和乙醇组成。7.如权利要求6所述的水包油型微乳制剂,其特征在于用于制成所述油相的原料由大豆油、蛋黄卵磷脂、聚氧乙烯蓖麻油和乙醇组成。8.如权利要求7所述的水包油型微乳制剂,其特征在于大豆油、蛋黄卵磷脂、聚氧乙烯蓖麻油和乙醇之间的质量比(w/w)为:5~10∶15~22∶10~20∶50~70,例如5∶15∶15∶65、5∶20∶10∶65、5∶20∶20∶55、6∶17∶11∶66或8∶22∶10∶60。9.如权利要求1-5任一项所述的水包油型微乳制剂,其特征在于抗肿瘤药物CLA-PTX在油相中的药物浓度为20mg/ml~200mg/ml,例如20mg/ml、50mg/ml、100mg/ml、150mg/ml或200mg/ml。10.如权利要求1-5任一项所述的水包油型微乳制剂,其特征在于用于制成所述水相的原料为任何生理学上可接受的水性介质,例如注射用生理盐水或质量分数为5%的葡萄糖注射液。

说明书

技术领域

本发明涉及一种被动靶向给药系统,特别是涉及一种包含CLA-PTX的微乳制剂。本发明还涉及所述微乳制剂的制备方法和所述微乳制剂在制备用于治疗恶性肿瘤的药物中的用途。 

背景技术

微乳(microemulsion)是水、油、表面活性剂和助表面活性剂按适当的比例混合,自发形成的各向同性、透明、热力学稳定的分散体系,其具有粒径小、透明、热力学稳定等特殊优点,因此在制备药物制剂及临床治疗方面具有日益广泛的用途。现在,微乳被普遍认为是一新型理想的药物释放载体,这种药物载体具有透明、稳定、吸收完全,能够实现靶向释药等优点,特别是水包油型(O/W型)微乳可增加脂溶性药物在水中的溶解能力,从而提高了药物的疗效,降低其毒副作用,因此微乳的临床应用价值日益提高,具有非常广阔的发展前景。 

太阳城集团新型抗肿瘤药物CLA-PTX(“共轭亚油酸-紫杉醇偶联物”)是通过将传统抗肿瘤药物PTX(紫杉醇)与CLA(共轭亚油酸)进行化学连接形成的新型偶联物,其具有通过血脑屏障从而实现对脑胶质瘤的靶向治疗效果。但是,CLA-PTX在水溶液中的溶解性极差,在进行静脉注射给药时无法达到理想的给药剂量,因此需要在给药时进行一定程度的增溶。然而,传统的增溶剂在体内会产生一定的毒副作用,游离药物在体内消除速率快并且不能实现非脑部肿瘤的靶向治疗,因此如何提高CLA-PTX在肿瘤部位的浓度以及降低其对内皮网状系统以及正常组织的毒性是所述药物的研究中面临的最大问题。 

发明内容

太阳城集团本发明的创新点在于将被动靶向微乳制剂与新型抗肿瘤药物CLA-PTX相结合,实现靶向技术与新型药物的配合,以提高抗肿瘤药物的溶解性、稳定性与靶向性,降低毒副作用,增强其抗肿瘤效果。 

太阳城集团为此,本发明的一个目的是提供一种水包油型微乳制剂,所述制剂包括油相和水相,其特征在于用于制成所述油相的原料由抗肿瘤药物CLA-PTX、油性介质、表面活性剂、助表面活性剂和任选的其它用于制备油相的原料组成。 

本发明的另一个目的是提供所述微乳制剂的制备方法。 

本发明的另一个目的是提供所述微乳制剂在制备用于治疗恶性肿瘤的药物中的用途。 

本发明的技术方案和要点将在下面作详细说明。 

本发明还涉及以下技术方案: 

1、如权利要求1-10任一项所述的微乳制剂的制备方法,其特征在于所述方法包括如下步骤: 

将油性介质、表面活性剂、助表面活性剂和任选的其它用于制备油相的原料精确称量后加入至容器内; 

将上述步骤得到的混合物静置或水浴超声溶解,形成均一透明的油相; 

精确称取CLA-PTX,加入至油相中,静置或水浴超声至CLA-PTX完全溶解; 

太阳城集团待CLA-PTX完全溶解后再加入用于制成水相的原料进行比例稀释,得到水包油型微乳制剂。 

太阳城集团2、如项1所述的微乳制剂的制备方法,其特征在于所述方法包括如下步骤: 

将大豆油、蛋黄卵磷脂、聚氧乙烯蓖麻油与乙醇按照5~10∶15~22∶10~20∶50~70的质量比精确称量后加入至容器内; 

太阳城集团将上述步骤得到的混合物静置或水浴超声溶解,形成均一透明的油相; 

太阳城集团精确称取CLA-PTX,加入至油相中,静置或水浴超声至CLA-PTX完全溶解,使CLA-PTX在油相中的浓度为20mg/ml~200mg/ml,例如20mg/ml、50mg/ml、100mg/ml、150mg/ml或200mg/ml; 

太阳城集团待CLA-PTX完全溶解后再加入注射用生理盐水或质量分数为5%的葡萄糖注射液进行比例稀释,得到水包油型微乳制剂。 

3、如项1或2所述的微乳制剂的制备方法,其特征在于所述比例稀释为按照油相与水相之间的质量比=1∶10~1∶100进行比例稀释。 

4、如项1或2所述的微乳制剂的制备方法,其特征在于所述水浴超声的水浴温度为25-35℃,例如30℃。 

太阳城集团5、如权利要求1-10任一项所述的微乳制剂在制备用于治疗恶性肿瘤的药物中的用途。 

6、如项5所述的用途,其特征在于所述恶性肿瘤为脑胶质瘤,例如鼠源性脑胶质瘤。 

术语 

“CLA”表示共轭亚油酸,其具有抗脑肿瘤与脑肿瘤新生血管的作用。 

太阳城集团“PTX”表示抗肿瘤药物紫杉醇。 

“CLA-PTX”表示共轭亚油酸-紫杉醇偶联物。 

太阳城集团“药脂比”表示:药物与脂材的质量比(w/w),脂材为除抗肿瘤药物CLA-PTX以外的用于制成所述油相的原料的总称,即脂材由油性介质、表面活性剂、助表面活性剂和任选的其它用于制备油相的原料组成。 

“PBS溶液”表示pH=7.4的磷酸盐缓冲液。 

太阳城集团“IC50”表示导致50%肿瘤细胞死亡时所对应的药物浓度。 

“C6细胞”为原发于脑部的脑胶质瘤细胞。进行药效实验时,将所述细胞接种于裸鼠右侧腋下,构成异位肿瘤模型。 

详细说明 

太阳城集团本发明的下列技术特征之间可以进行任意的组合,以形成不同的技术方案。这些技术方案均包含在本发明的范围之内 

太阳城集团CLA-PTX(“共轭亚油酸-紫杉醇偶联物”)的合成方法描述于参考文献Ke XY,Zhao BJ,Zhao X,Wang Y,Huang Y,Chen XM,Zhao BX,Zhao SS,Zhang X,Zhang Q.The therapeutic efficacy of conjugated linoleic acid- paclitaxel on glioma in therat.Biomaterials.2010 Aug;31(22):5855-64中。在此将其公开的内容整体引入本申请中作为参考。 

本发明的第一个方面提供一种水包油型微乳制剂,所述制剂包括油相和水相,其特征在于用于制成所述油相的原料由抗肿瘤药物CLA-PTX、油性介质、表面活性剂、助表面活性剂和任选的其它用于制备油相的原料组成。 

可选用的油性介质的实例包括但不限于植物油(例如大豆油、棉籽油)、动物油、合成油脂和其混合物。 

太阳城集团可选用的表面活性剂的实例包括但不限于卵磷脂(例如蛋黄卵磷脂、大豆卵磷脂)和非离子表面活性剂(例如聚氧乙烯蓖麻油(如CremophorELP)、聚氧乙烯氢化蓖麻油(如CremophorRH)、吐温(如吐温80))的混合表面活性剂。 

可选用的助表面活性剂的实例包括但不限于乙醇、丙二醇、甘油和其混合物。 

太阳城集团可选用的其它用于制备油相的原料的实例包括但不限于其它活性剂(例如其它用于治疗恶性肿瘤的药物)、防腐剂和抗菌剂。 

太阳城集团在一个优选的实施方案中,用于制成所述油相的原料由植物油(为油性介质)、卵磷脂、非离子表面活性剂(卵磷脂和非离子表面活性剂为混合表面活性剂)和乙醇(为助表面活性剂)组成。 

在一个特别优选的实施方案中,用于制成所述油相的原料由大豆油、蛋黄卵磷脂、聚氧乙烯蓖麻油和乙醇组成。 

在该实施方案中,大豆油、蛋黄卵磷脂、聚氧乙烯蓖麻油和乙醇之间的质量比(w/w)可以为:5~10∶15~22∶10~20∶50~70,例如5∶15∶15∶65、5∶20∶10∶65、5∶20∶20∶55、6∶17∶11∶66和8∶22∶10∶60,优选为8∶22∶10∶60。 

在一个实施方案中,抗肿瘤药物CLA-PTX在油相中的药物浓度为20mg/ml~200mg/ml,例如20mg/ml、50mg/ml、100mg/ml、150mg/ml或200mg/ml。。 

在一个实施方案中,制成所述水相的原料为任何生理学上可接受的水性介质,例如注射用生理盐水或质量分数为5%的葡萄糖注射液(即每100g注射液中含有5g葡萄糖)。 

本发明的另一个方面提供所述微乳制剂组合物的制备方法,所述方法包括如下步骤: 

太阳城集团将油性介质、表面活性剂、助表面活性剂和任选的其它用于制备油相的原料精确称量后加入至容器内; 

将上述步骤得到的混合物静置或水浴超声溶解,形成均一透明的油相; 

精确称取CLA-PTX,加入至油相中,静置或水浴超声至CLA-PTX完全溶解; 

待CLA-PTX完全溶解后再加入用于制成水相的原料进行比例稀释,得到水包油型微乳制剂。 

在一个优选的实施方案中,所述方法包括如下步骤: 

太阳城集团将大豆油、蛋黄卵磷脂、聚氧乙烯蓖麻油与乙醇按照5~10∶15~22∶10~20∶50~70的质量比精确称量后加入至容器内; 

将上述步骤得到的混合物静置或水浴超声溶解,形成均一透明的油相; 

精确称取CLA-PTX,加入至油相中,静置或水浴超声至CLA-PTX完全溶解,使CLA-PTX在油相中的浓度为20mg/ml~200mg/ml,例如20mg/ml、50mg/ml、100mg/ml、150mg/ml或200mg/ml; 

太阳城集团待CLA-PTX完全溶解后再加入注射用生理盐水或质量分数为5%葡萄糖注射液进行比例稀释,得到水包油型微乳制剂。 

在一个实施方案中,所述比例稀释为按照油相与水相之间的质量比=1∶10~1∶100进行比例稀释。 

在一个实施方案中,所述水浴超声的水浴温度为25-35℃,例如30℃。 

太阳城集团本发明的另一个方面提供所述微乳制剂在制备用于治疗恶性肿瘤的药物中的用途。 

太阳城集团在一个实施方案中,所述恶性肿瘤为脑胶质瘤,例如鼠源性脑胶质瘤。 

本发明所述的微乳制剂可以通过静脉注射给药。 

本发明的优点和/或能够产生的效果在于: 

将CLA-PTX包载于微乳制剂中后可以提高CLA-PTX的给药浓度,同时被动靶向至异位肿瘤部位,从而发挥更好的抗肿瘤作用,同时对正常组织的毒副作用降低。 

附图说明

图1为包含DiR的微乳制剂的活体成像实验结果。 

图2为荷瘤裸鼠在给药后肿瘤的体积与太阳城集团的关系曲线。 

具体实施方式

实施例1 

包含CLA-PTX的微乳制剂的构建 

太阳城集团将上述质量比的大豆油、蛋黄卵磷脂、聚氧乙烯蓖麻油与乙醇精确称量后加入至容器内; 

太阳城集团将上述步骤得到的混合物静置或水浴超声溶解,形成均一透明的油相; 

精确称取20mgCLA-PTX,加入至1ml的油相中,静置溶解或采用水浴超声30s进行加速溶解,使CLA-PTX在油相中的浓度为20mg/ml; 

待CLA-PTX完全溶解后再加入注射用生理盐水或质量分数为5%的葡萄糖注射液按照油相∶水相=1∶10w/w进行比例稀释,得到水包油型微乳制剂。 

太阳城集团其中所述水浴超声的水浴温度为30℃。 

实施例2 

太阳城集团包含CLA-PTX的微乳制剂的构建 

太阳城集团将上述质量比的大豆油、蛋黄卵磷脂、聚氧乙烯蓖麻油与乙醇精确称量后加入至容器内; 

太阳城集团将上述步骤得到的混合物静置或水浴超声溶解,形成均一透明的油相; 

精确称取20mgCLA-PTX,加入至1ml的油相中,静置溶解或采用水浴超声30s进行加速溶解,使CLA-PTX在油相中的浓度为20mg/ml; 

太阳城集团待CLA-PTX完全溶解后再加入注射用生理盐水或质量分数为5%的葡萄糖注射液按照油相∶水相=1∶10w/w进行比例稀释,得到水包油型微乳制剂。 

其中所述水浴超声的水浴温度为30℃。 

实施例3 

包含CLA-PTX的微乳制剂的构建 

太阳城集团将上述质量比的大豆油、蛋黄卵磷脂、聚氧乙烯蓖麻油与乙醇精确称量后加入至容器内; 

太阳城集团将上述步骤得到的混合物静置或水浴超声溶解,形成均一透明的油相; 

精确称取20mgCLA-PTX,加入至1ml的油相中,静置溶解或采用水浴超声30s进行加速溶解,使CLA-PTX在油相中的浓度为20mg/ml; 

待CLA-PTX完全溶解后再加入注射用生理盐水或质量分数为5%的葡萄糖注射液按照油相∶水相=1∶10w/w进行比例稀释,得到水包油型微乳制剂。 

其中所述水浴超声的水浴温度为30℃。 

实施例4 

太阳城集团包含CLA-PTX的微乳制剂的构建 

将上述质量比的大豆油、蛋黄卵磷脂、聚氧乙烯蓖麻油与乙醇精确称量后加入至容器内; 

太阳城集团将上述步骤得到的混合物静置或水浴超声溶解,形成均一透明的油相; 

精确称取20mgCLA-PTX,加入至1ml的油相中,静置溶解或采用水浴超声30s进行加速溶解,使CLA-PTX在油相中的浓度为20mg/ml; 

待CLA-PTX完全溶解后再加入注射用生理盐水或质量分数为5%的葡萄糖注射液按照油相∶水相=1∶10w/w进行比例稀释,得到水包油型微乳制剂。 

其中所述水浴超声的水浴温度为30℃。 

实施例5 

太阳城集团包含CLA-PTX的微乳制剂的构建 

将上述质量比的大豆油、蛋黄卵磷脂、聚氧乙烯蓖麻油与乙醇精确称量后加入至容器内; 

太阳城集团将上述步骤得到的混合物静置或水浴超声溶解,形成均一透明的油相; 

精确称取20mgCLA-PTX,加入至1ml的油相中,静置溶解或采用水浴超声30s进行加速溶解,使CLA-PTX在油相中的浓度为20mg/ml; 

太阳城集团待CLA-PTX完全溶解后再加入注射用生理盐水或质量分数为5%的葡萄糖注射液按照油相∶水相=1∶10w/w进行比例稀释,得到水包油型微乳制剂。 

太阳城集团其中所述水浴超声的水浴温度为30℃。 

实验部分 

太阳城集团为检验本发明的微乳制剂的抗肿瘤效果,我们以实施例5的包含CLA-PTX的微乳制剂为例,进行了以下方面的考察: 

太阳城集团1、微乳性质的表征 

采用动态光散射法(dynamic light scattering,DLS)对其进行粒径和zeta电位的测定,结果见表1。结果表明本发明所述的微乳制剂的制备方法优良、可行。 

表1* 

*表1是三次平行测量的结果。 

2、细胞毒性实验 

太阳城集团采用硫氰酸铵B(sulforhodamineB)(SRB)测定方法,在第0天将C6细胞以5000个/孔的浓度接种于96孔板中。在第1天,将配制于DMSO中的CLA-PTX游离药母液(浓度为10mg/ml)和包含CLA-PTX的微乳制剂(取实施例5所制备得到的油相,并用作为水相的PBS按照油相∶水相=1∶10w/w的比例进行稀释,制备成CLA-PTX的浓度为2mg/ml的包含CLA-PTX的微乳制剂)用细胞培养基进行进一步稀释,制备成一系列药物的稀释液(20.0μg/ml、16.0μg/ml、10μg/ml、8.0μg/ml、4.0μg/ml、2.0μg/ml、1.0μg/ml和0.5μg/ml),将每种稀释液以200μl的体积加入到接种有肿瘤细胞的孔中,每种浓度的稀释液平行测定3孔,然后孵育48小时,弃去培养基,用10%三 氯乙酸(w/w)在4℃固定细胞1小时,用自来水冲洗后,晾干并用0.4%SRB(w/w)在4℃染色10分钟,取出用0.1%乙酸(v/v)冲洗,晾干后加入10μM的Tris溶液,置摇床震荡30分钟后,用酶标仪在540nm处测定吸光值,从而确定药物对于C6细胞系的IC50值。 

太阳城集团实验结果显示,包含CLA-PTX的微乳制剂平均三次测量的IC50值为1.10±0.038μM,而CLA-PTX游离药物平均三次测量的IC50值为1.86±1.095μM,结果说明包含CLA-PTX的微乳制剂具有比CLA-PTX游离药物更好的抑制肿瘤细胞生长的作用,表明本发明的包含CLA-PTX的微乳制剂具有优良的抗肿瘤效果。 

太阳城集团3、急性毒性评价与LD50值 

为考察游离CLA-PTX与包含CLA-PTX的微乳制剂在动物体内的急性毒性,以ICR小鼠作为急性毒性实验动物,通过计算LD50(半数致死量)值反映药物的毒性。选择ICR小鼠(体重18-22g)50只,随机分为五组,每组10只,雌雄各半。将游离CLA-PTX偶联物溶解于聚氧乙烯蓖麻油∶乙醇∶水=1∶1∶8(v/v/v)的混合溶剂中,配制成浓度为4mg/ml、4.74mg/ml、5.64mg/ml、6.72mg/ml和8mg/ml的五组溶液,每组分别按照10ml/kg的体积通过尾静脉注射给药,观察每组小鼠一周内的死亡数量,计算出游离CLA-PTX的小鼠LD50值为103.9mg/kg。后取10只ICR小鼠(体重18-22g),雌雄各半,将包含CLA-PTX的微乳制剂(按照实施例5中油相的配方,加入200mgCLA-PTX,并用作为水相的质量分数为5%的葡萄糖注射液按照油相∶水相=1∶10w/w的比例进行稀释,得到包含CLA-PTX的微乳制剂)按照10ml/kg的体积通过尾静脉注射给药,观察小鼠一周内的死亡数量。结果显示小鼠一周内未出现死亡,故CLA-PTX微乳制剂的安全剂量可达200mg/kg,说明其毒性远远小于游离药物。 

4、靶向性实验 

太阳城集团采用荷瘤裸鼠(每只裸鼠异位接种1×106个C6细胞)进行靶向性实验。肿 瘤大小测量方法为使用游标卡尺分别测量肿瘤的长(a)和宽(b),肿瘤体积(V)的计算公式为V=ab2/2,待肿瘤体积生长至100-150mm3时,对实验组裸鼠尾静脉注射包含荧光染料DiR的微乳制剂,其具体制备方法如下:采用实施例5的配方,取荧光染料DiR(浓度2mg/ml,配制于甲醇中的母液)40μl加入1ml油相中,后用注射用生理盐水按照油相∶水相=1∶10w/w的比例进行稀释,形成8μg/ml的包含DiR的微乳制剂。将包含DiR的微乳制剂按照80μg/kg的剂量进行尾静脉注射,对照组注射等体积的生理盐水,注射后24小时于活体成像仪下观察激发后的荧光强度,结果参见图1。 

结果表明,与对照组相比,微乳制剂的荧光在肿瘤部位有集中分布,说明本发明的微乳制剂具有很好的被动靶向肿瘤的作用。 

5、药效试验 

将荷瘤裸鼠(每只裸鼠异位接种1×106个C6细胞)分为对照组和微乳制剂组(每组6只)。待接种肿瘤后的第9、12、15天,按照20mg/kg剂量尾静脉注射实施例5的包含CLA-PTX的微乳制剂,之后于不同太阳城集团测量肿瘤体积大小,持续至接种肿瘤后的第21天。实验结果见图2。 

由肿瘤的体积与太阳城集团的关系曲线可以看出,在第21天时对照组裸鼠肿瘤的平均体积为2356±429mm3,而微乳制剂组裸鼠肿瘤的平均体积为929±274mm3,抑瘤率为60.5%,结果说明包含CLA-PTX的微乳制剂能够有效抑制肿瘤的生长,具有很好的抗肿瘤效果。 

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