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一种纳米金球壳包覆的齐墩果酸脂质体及其制备方法.pdf

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一种 纳米 金球壳包覆 果酸 脂质体 及其 制备 方法
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摘要
申请专利号:

CN201510359479.2

申请日:

20150626

公开号:

CN104984339B

公开日:

20171124

当前法律状态:

有效性:

有效

法律详情:
IPC分类号: A61K41/00,A61K9/127,A61K9/51,A61K47/24,A61K47/28,A61K47/36,A61K31/56,A61P35/00 主分类号: A61K41/00,A61K9/127,A61K9/51,A61K47/24,A61K47/28,A61K47/36,A61K31/56,A61P35/00
申请人: 燕山大学
发明人: 高大威,边艳红,刘艳平,张旭武,李楠,籍冰朔
地址: 066004 河北省秦皇岛市海港区河北大街西段438号
优先权: CN201510359479A
专利代理机构: 秦皇岛一诚知识产权事务所(普通合伙) 代理人: 续京沙
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法律状态
申请(专利)号:

CN201510359479.2

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法律状态太阳城集团日:

法律状态类型:

摘要

一种纳米金球壳包覆的齐墩果酸脂质体,其是在齐墩果酸纳米脂质体表面包覆一层由金纳米粒子组成的致密壳体,其与脂质体构成粒径大小为100‑200nm纳米球;其制备方法主要是:将壳聚糖作为脂质体与金纳米粒子的中间媒介,用其修饰脂质体,得到壳聚糖修饰的纳米脂质体。将此脂质体再与硼氢化钠还原得到的金纳米粒子在特定条件下进行孵育,随后加入一定浓度的氯化金溶液,最后加入抗坏血酸溶液继续孵育一段太阳城集团。本发明可在温和条件下完成,制备方法简单,反应易控制。本发明制备的纳米金球壳包覆的齐墩果酸脂质体在650‑900nm处存在近红外吸收,减少了对机体正常组织的损伤。

权利要求书

太阳城集团1.一种纳米金球壳包覆的齐墩果酸脂质体的制备方法,具体如下:(1)按每毫升冰醋酸溶液中含7~13mg壳聚糖的比例,将壳聚糖溶于0.05~0.15M冰醋酸溶液中,得到壳聚糖溶液,在磁力搅拌器的搅拌下,将壳聚糖溶液逐滴加到上面获得的齐墩果酸纳米脂质体中,并且壳聚糖溶液与齐墩果酸纳米脂质体的体积比为1:1~1:5,混合溶液在室温孵育2~5h,得到壳聚糖修饰的纳米脂质体;(2)在冰浴条件下,将250~270mM的硼氢化钠(NaBH)溶液,迅速滴加到0.1~1.0mM的氯化金溶液中,并使每毫升氯化金溶液中含5~10μL硼氢化钠溶液,剧烈摇晃,反应1~5min后,即得到粒径在5-10nm的金纳米胶体溶液;(3)将步骤(2)中得到的金纳米胶体溶液与步骤(1)中获得的壳聚糖修饰的纳米脂质体以1:1~1:4的体积比混合,置于摇床,25~30℃,100~130rpm,避光孵育15~24h,即得到金纳米粒子包覆的齐墩果酸脂质体;(4)取步骤(3)获得的金纳米粒子包覆的齐墩果酸脂质体,向其中加入15~25mMAuCl溶液,并且金纳米粒子包覆的齐墩果酸脂质体与AuCl溶液的体积比为1000:27~63,混合均匀,在室温条件下,再将0.05~0.3M抗坏血酸溶液加入其中,并且金纳米粒子包覆的齐墩果酸脂质体与抗坏血酸溶液的体积比为1000:5~32,摇晃均匀,将其置于摇床,25~30℃,100~130rpm,孵育7~10h,即制得纳米金球壳包覆的齐墩果酸脂质体。2.根据权利要求1所述的纳米金球壳包覆的齐墩果酸脂质体的制备方法,其特征在于:齐墩果酸纳米脂质体的制备方法如下:(1)将大豆卵磷脂、胆固醇和齐墩果酸以9~12:0.8~1.4:1的质量比,溶解于无水乙醇中,使每毫升无水乙醇中含上述三种溶质质量之和为12~27.5mg,通过磁力搅拌得到均一的油相,即有机相;(2)将步骤(1)获得的有机相在磁力搅拌下,缓慢匀速逐滴滴入到37~48℃的pH6.0~pH7.4—PBS缓冲溶液中,并且有机相:缓冲溶液的体积比为3~6:10,得到脂质体悬液;(3)将步骤(2)得到的脂质体悬液置于摇床,24~29℃,100~130rpm,30~60min,除去脂质体悬液中的无水乙醇,得到齐墩果酸纳米脂质体。

说明书

技术领域 本发明涉及一种治疗癌症的纳米脂质体及其制备方法。

背景技术

在当今社会癌症已经成为人类健康的第二号杀手,癌症的治愈一直以来都是全球的一大难题。目前较普遍的治疗癌症的方法有化疗、放疗和外科手术。然而目前的这些治疗手段都对机体造成很大的毒副损伤,并且恶性肿瘤很难被治愈,且常常由于发现的不及时,错失最佳治疗时机。所以,目前亟待解决的问题是寻求新的能够消灭肿瘤细胞,而且又不会伤害正常细胞的治疗手段。

近年来,药物载体已经被广泛关注。脂质体是一种在水溶液中脂质自组装的结构,其是一种生物相容性很好,极具前景的药物载体。脂质体通常是通过提高药物的生物利用度、溶解度和滞留太阳城集团来提高许多水溶性以及脂溶性药物的治疗效果。但是常规的纳米脂质体又具有一系列的缺陷,例如,易被单核细胞吞噬系统捕获,靶向性不强以及稳定性差等。

发明内容

本发明的目的在于提供一种治疗癌症靶向性强且药物释放可控制的纳米金球壳包覆的齐墩果酸脂质体及其制备方法。本发明主要是以齐墩果酸纳米脂质体为基础,在其表面结合壳聚糖,以增加脂质体的稳定性并使其带有正电荷;然后用硼氢化钠(NaBH4)还原氯化金溶液,得到金纳米粒子;最后将壳聚糖修饰的脂质体与金纳米胶体溶液按一定比例混合,在一定条件下进行孵育,得到致密的、具有良好近红外吸收的纳米金球壳包覆的齐墩果酸脂质体。

一、本发明的纳米金球壳包覆的齐墩果酸脂质体是在齐墩果酸纳米脂质体表面包覆一层由金纳米粒子组成的致密壳体,其与脂质体构成粒径大小为100-200nm纳米球。该纳米金球壳包覆的齐墩果酸脂质体的最大共振吸收波长在650-900nm区域内。

二、本发明的制备方法具体如下:

1、制备齐墩果酸纳米脂质体

太阳城集团(1)将大豆卵磷脂、胆固醇和齐墩果酸以9~12:0.8~1.4:1的质量比,溶解于无水乙醇中,使每毫升无水乙醇中含上述三种溶质质量之和为12~27.5mg,通过磁力搅拌得到均一的油相,即有机相;

太阳城集团(2)将步骤(1)获得的有机相在磁力搅拌下,缓慢匀速逐滴滴入到37~48℃的pH 6.0~pH 7.4PBS缓冲溶液中,并且有机相:缓冲溶液=3~6:10(体积比),得到脂质体悬液;

太阳城集团(3)将步骤(2)得到的脂质体悬液置于摇床,24~29℃,100~130rpm,30~60min,除去脂质体悬液中的无水乙醇,得到齐墩果酸纳米脂质体。

太阳城集团2、制备纳米金球壳包覆的齐墩果酸脂质体

太阳城集团(1)按每毫升冰醋酸溶液中含7~13mg壳聚糖的比例,将壳聚糖溶于0.05~0.15M冰醋酸溶液中,得到壳聚糖溶液。在磁力搅拌器的搅拌下,将壳聚糖溶液逐滴加到上面获得的齐墩果酸纳米脂质体中,并且壳聚糖与齐墩果酸纳米脂质体的体积比为1:1~1:5,混合溶液在室温孵育2~5h,得到壳聚糖修饰的纳米脂质体;

太阳城集团(2)在冰浴条件下,将250~270mM的硼氢化钠(NaBH4)溶液,迅速滴加到0.1~1.0mM的氯化金溶液中,并使每毫升氯化金溶液中含5~10μL硼氢化钠溶液,剧烈摇晃,反应1~5min后,即得到粒径在5-10nm的金纳米胶体溶液;

(3)将步骤(2)中得到的金纳米胶体溶液与步骤(1)中获得的壳聚糖修饰的纳米脂质体以1:1~1:4的体积比混合,置于摇床,25~30℃,100~130rpm,避光孵育15~24h,即得到金纳米粒子包覆的齐墩果酸脂质体;

太阳城集团(4)取步骤(3)获得的金纳米粒子包覆的齐墩果酸脂质体,向其中加入15~25mM AuCl3溶液,并且金纳米粒子包覆的齐墩果酸脂质体与AuCl3溶液的体积比为1000:27~63,混合均匀,在室温条件下,再将0.05~0.3M抗坏血酸溶液加入其中,并且金纳米粒子包覆的齐墩果酸脂质体与抗坏血酸溶液的体积比为1000:5~32,摇晃均匀,将其置于摇床,25~30℃,100~130rpm,孵育7~10h,即制得纳米金球壳包覆的齐墩果酸脂质体。

本发明与现有技术相比具有如下优点:

太阳城集团1、本发明制备的金纳米粒子粒径在5~10nm,具有良好的生物相容性,并且对生物体无毒性。同时,金纳米粒子在近红外区域具备表面等离子共振现象,展现了高效的吸光产热的特性。

2、本发明利用壳聚糖作为脂质体与金纳米粒子中间媒介,用其修饰脂质体,既可以增强脂质体的稳定性,又可与金纳米粒子进行结合,得到具有理想形貌,分散性较好,粒径大小在100-200nm的纳米金球壳包覆的齐墩果酸脂质体。

太阳城集团3、本发明的纳米金球壳包覆的齐墩果酸脂质体与现有的药物载体相比,其在650-900nm处存在近红外吸收,其优势在于能够穿透进入组织深部达10cm,并且对正常组织无损伤。

太阳城集团4、本发明的金纳米壳包覆的齐墩果酸脂质体在近红外刺激下,能实现疾病的化学药物治疗和光热治疗的同步化以及齐墩果酸的控制释放。

太阳城集团5、本发明在温和条件下完成,制备方法简单,反应易控制,重复性高。

附图说明

太阳城集团图1是本发明实施例1所得纳米金球壳包覆的齐墩果酸脂质体透射电子显微镜图。

太阳城集团图2是本发明实施例2所得纳米金球壳包覆的齐墩果酸脂质体粒径分布图。

图3是本发明实施例3所得纳米金球壳包覆的齐墩果酸脂质体能谱图。

具体实施方式

实施例1

将45mg大豆卵磷脂(购自沈阳天峰生物制药有限公司)、4.0mg胆固醇(购自天津市大茂化学仪器供应站)和5.0mg齐墩果酸(购自四川什邡市华康药物原料厂),溶解于3mL无水乙醇中,通过磁力搅拌得到均一的油相,即有机相。在磁力搅拌下,将3mL有机相缓慢匀速逐滴滴入到10mL,37℃,pH 6.0的PBS缓冲溶液中,得到脂质体悬液。置于摇床,24℃,100rpm,30min除去脂质体悬液中的无水乙醇,得到齐墩果酸纳米脂质体。

太阳城集团将7mg壳聚糖溶于1mL,0.05M冰醋酸溶液中,得到壳聚糖溶液。在磁力搅拌器的搅拌下,将壳聚糖溶液逐滴加入到脂质体中,并且壳聚糖与齐墩果酸纳米脂质体的体积比为1:1,混合溶液在室温孵育2h,得到壳聚糖修饰的纳米脂质体。

太阳城集团在冰浴条件下,将5μL,250mM的硼氢化钠(NaBH4)溶液,迅速滴加到1mL,0.1mM的氯化金溶液中,剧烈摇晃,反应1min之后,即得到粒径在5-10nm的金纳米胶体溶液。将得到的金纳米胶体溶液与壳聚糖修饰的脂质体以1:1的体积比混合,置于摇床,25℃,100rpm,避光孵育15h,即得到金纳米粒子包覆的齐墩果酸脂质体;

太阳城集团取1000μL的金纳米粒子包覆的壳聚糖脂质体,向其中加入27μL的15mM AuCl3溶液,混合均匀,在室温条件下,吸取5μL的0.05M抗坏血酸溶液加入其中,摇晃均匀,将其置于摇床,25℃,100rpm,孵育7h,即制得纳米金球壳包覆的齐墩果酸脂质体。

应用透射电子显微镜对纳米金球壳包覆的齐墩果酸脂质体进行形貌表征,如图1所示,从该图片可以看出,在齐墩果酸纳米脂质体表面包覆一层由金纳米粒子组成的致密壳体,而且形貌规则。

实施例2

将55mg大豆卵磷脂(购自沈阳天峰生物制药有限公司)、5.5mg胆固醇(购自天津市大茂化学仪器供应站)和5mg齐墩果酸(购自四川什邡市华康药物原料厂),溶解于5mL无水乙醇中,通过磁力搅拌得到均一的油相,即有机相。在磁力搅拌下,将5mL有机相缓慢匀速逐滴滴入到10mL,43℃,pH 6.8的PBS缓冲溶液中,得到脂质体悬液。置于摇床,26℃,115rpm,45min除去脂质体悬液中的无水乙醇,得到齐墩果酸纳米脂质体。

将10mg壳聚糖溶于1mL,0.10M冰醋酸溶液中,得到壳聚糖溶液。在磁力搅拌器的搅拌下,将壳聚糖溶液逐滴加入到脂质体中,并且壳聚糖与齐墩果酸纳米脂质体的体积比为1:3,混合溶液在室温孵育3h,得到壳聚糖修饰的纳米脂质体。

太阳城集团在冰浴条件下,将7μL,260mM的硼氢化钠(NaBH4)溶液,迅速滴加到1mL,0.5mM的氯化金溶液中,剧烈摇晃,反应3min之后,即得到粒径在5-10nm的金纳米胶体溶液。将得到的金纳米胶体溶液与壳聚糖修饰的脂质体以1:2的体积比混合,置于摇床,27℃,120rpm,避光孵育20h,即得到金纳米粒子包覆的齐墩果酸脂质体;

太阳城集团取1000μL的金纳米粒子包覆的壳聚糖脂质体,向其中加入55μL的20mM AuCl3溶液,混合均匀,在室温条件下,吸取25μL的0.15M抗坏血酸溶液加入其中,摇晃均匀,将其置于摇床,26℃,115rpm,孵育8h,即制得纳米金球壳包覆的齐墩果酸脂质体。

采用激光粒度仪对纳米金球壳包覆的齐墩果酸脂质体进行形貌表征,如图2所示,从图可以看出纳米金球壳包覆的齐墩果酸脂质体粒径分布在100-200nm左右。

实施例3

将60mg大豆卵磷脂(购自沈阳天峰生物制药有限公司)、7.0mg胆固醇(购自天津市大茂化学仪器供应站)和5mg齐墩果酸(购自四川什邡市华康药物原料厂),溶解于6mL无水乙醇中,通过磁力搅拌得到均一的油相,即有机相。在磁力搅拌下,将6mL有机相缓慢匀速逐滴滴入到10mL,48℃,pH 7.4的PBS缓冲溶液中,得到脂质体悬液。置于摇床,29℃,130rpm,60min除去脂质体悬液中的无水乙醇,得到齐墩果酸纳米脂质体。

将13mg壳聚糖溶于1mL,0.15M冰醋酸溶液中,得到壳聚糖溶液。在磁力搅拌器的搅拌下,将壳聚糖溶液逐滴加入到脂质体中,并且壳聚糖与齐墩果酸纳米脂质体的体积比为1:5,混合溶液在室温孵育5h,得到壳聚糖修饰的纳米脂质体。

在冰浴条件下,将10μL,270mM的硼氢化钠(NaBH4)溶液,迅速滴加到1mL,1.0mM的氯化金溶液中,剧烈摇晃,反应5min之后,即得到粒径在5-10nm的金纳米胶体溶液。将得到的金纳米胶体溶液与壳聚糖修饰的脂质体以1:4的体积比混合,置于摇床,30℃,130rpm,避光孵育24h,即得到金纳米粒子包覆的齐墩果酸脂质体;

太阳城集团取1000μL的金纳米粒子包覆的壳聚糖脂质体,向其中加入63μL的25mM AuCl3溶液,混合均匀,在室温条件下,吸取32μL的0.30M抗坏血酸溶液加入其中,摇晃均匀,将其置于摇床,30℃,130rpm,孵育10h,即制得纳米金球壳包覆的齐墩果酸脂质体。

采用能谱仪对纳米球壳包覆的齐墩果酸脂质体进行表征,如图3所示,从图可以看出,能谱中出现C、O、P、Cu、Au元素对应的峰,其中C元素一方面来源于铜网上覆盖的碳膜,另一方面来源于脂质体的组成成分,O、P元素来源于脂质体,Cu元素来源于铜网,Au元素的存在则说明金纳米粒子已经成功结合到了脂质体表面。

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