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使用 聚合物 方法
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摘要
申请专利号:

CN201380044945.7

申请日:

20130628

公开号:

太阳城集团CN104582751B

公开日:

20171114

当前法律状态:

有效性:

有效

法律详情:
IPC分类号: A61M1/34 主分类号: A61M1/34
申请人: 西托索尔本茨公司
发明人: 菲利普·P·哈恩,文森特·J·卡波尼,托马斯·D·戈洛比什,胡迈拉·贝居姆·阿利
地址: 美国新泽西州
优先权: 61/666,626
专利代理机构: 北京集佳知识产权代理有限公司 代理人: 郑斌;彭鲲鹏
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法律状态
申请(专利)号:

太阳城集团CN201380044945.7

授权太阳城集团号:

法律状态太阳城集团日:

法律状态类型:

摘要

本文中提供了降低生物物质中一种或更多种毒素污染或者处理对象的一种或更多种毒素污染的材料和方法,其包括使所述生物物质与有效量的能够吸着所述毒素的吸着剂接触,其中所述吸着剂包含多个孔,范围为至孔体积为0.5cc/g至5.0cc/g,且尺寸为0.05mm至2cm并且吸着所述毒素。还提供了降低生物物质中一种或更多种毒素污染的药盒,其包含能够吸着毒素的吸着剂以及当不与所述吸着剂的包装一起使用时存储所述吸着剂的容器,其中所述吸着剂包含多个孔,范围为至孔体积为0.5cc/g至5.0cc/g,且尺寸为0.05mm至2cm。

权利要求书

1.能够吸着一种或更多种毒素的吸着剂在制备用于降低生物物质中或有需要的对象的所述一种或更多种毒素污染的药盒中的用途,其中所述降低包括:a.使所述生物物质与有效量的所述能够吸着所述毒素的吸着剂接触,其中所述吸着剂包含多个孔,范围为至孔体积为0.5cc/g至5.0cc/g干吸着剂;其中所述吸着剂中孔径在至之间的孔的体积与孔径在至之间的孔的体积的比例小于3∶1,且所述吸着剂的尺寸为0.05mm至2cm,所述吸着剂包含含有至少一种交联剂和至少一种分散剂的包被聚合物;和b.吸着所述毒素,其中所述毒素是外源性毒素或者由微生物产生的毒素,所述微生物可包括一种或更多种细菌、病毒、真菌或寄生虫。2.权利要求1所述的用途,其中所述吸着剂是生物相容性的。3.权利要求1所述的用途,其中所述吸着剂是大孔聚合物吸着剂。4.权利要求1所述的用途,其中所述吸着在体内发生。5.权利要求1所述的用途,其中所述吸着离体发生。6.权利要求1所述的用途,其中所述毒素来自生物来源,所述生物来源包括细菌、病毒、真菌、植物或动物的一种或更多种物种。7.权利要求6所述的用途,其中所述细菌物种包括:金黄色葡萄球菌(Staphylococcusaureus)、溶血葡萄球菌(S.haemolyticus)、产气荚膜梭状芽胞杆菌(Clostridiumperfringens)、破伤风梭状芽胞杆菌(C.tetani)、肉毒梭状芽胞杆菌(C.botulium)、肠出血性大肠杆菌(Escherichiacoli)、产肠毒素性大肠杆菌、产肠毒素性LT大肠杆菌、肠致病性大肠杆菌、肠侵袭性大肠杆菌、肠聚集性大肠杆菌、弥散粘附性大肠杆菌、痢疾志贺菌(Shigelladystenteria)、弗氏志贺菌(S.flexneri)、鲍氏志贺菌(S.boydii)、宋内志贺菌(S.sonnei)、霍乱弧菌(Vibriocholera)、副溶血弧菌(V.parahaemolyticus)、创伤弧菌(V.vulnificus)、蜡样杆菌(Bacilluscereus)、炭疽杆菌(B.anthracis)、伤寒沙门菌(Salmonellatyphi)、副伤寒沙门菌(S.paratyphi)、都柏林沙门菌(S.dublin)、肠炎沙门菌(S.enteritdis)、单核细胞增多性利斯特菌(Listeriamonocytogenes)、小肠结肠炎耶尔森菌(Yerseniaentercolitia)、假结核耶尔森菌(Y.psedotubersculosis)、难辨链球菌(Streptococcusdifficulis)、粪链球菌(S.faecalis)、化脓链球菌(S.pyogenes)、羊布鲁杆菌(Brucellamilitensis)、流产布鲁杆菌(B.abortus)、猪布鲁杆菌(B.suis)、空肠弯曲杆菌(Camplyobacterjejuni)、类志贺邻单胞菌(Plesiomasshigelloides)、嗜水气单胞菌(Aeromonashydrophila)、豚鼠气单胞菌(A.caviae)、索比亚气单胞菌(A.sobria)、惠氏托菲利马菌(Tropherymawhippelii)或支原体(mycoplasma)。8.权利要求6所述的用途,其中所述病毒物种包括轮状病毒(Rotavirus)。9.权利要求6所述的用途,其中所述真菌物种包括:白色念珠菌(Candidaalbicans)、食管炎念珠菌(C.esophagitis)、鹿花菌(Gyromitraesculenta)、薄褶鹅膏(Amanitatenuifolia)、双孢鹅膏(A.bisporigera)、鳞柄白鹅膏(A.virosa)、纹缘盔孢菌(Galerinaautumnalis)、褐白环菇(Leucoagaricusbrunnea)、酒红环柄菇(Lepiota.josserandii)、褐鳞环柄菇(L.helveola)、近肉红环柄菇(L.subincarnata)、大青褶伞(Chlorophyllummolybdites)、土生红褶菌(Entolomalividum)、豹斑口蘑(Tricholomapardinum)、发光类脐菇(Omphalotusolearius)、卷边网褶菌(Paxillusinvolutus)、绿盖鹅膏(Amanitaphalloides)、暗褐毒鹅膏(A.brunnescens)、黄曲霉菌(Aspergillusflavus)或寄生曲霉菌(A.parasiticus)。10.权利要求6所述的用途,其中所述植物物种包括蓖麻籽、牛毛草或谷物。11.权利要求6所述的用途,其中所述植物物种包括豆类。12.权利要求6所述的用途,其中所述植物物种包括小麦或芸豆。13.权利要求6所述的用途,其中所述动物物种包括石斑鱼、红鲷鱼、琥珀鱼、梭鱼、河豚、蓝鳍金枪鱼、金枪鱼、鲣鱼、马林鱼、鲭鱼、贻贝、扇贝、虾、牡蛎、人或鸡。14.权利要求1所述的用途,其中所述毒素是大肠杆菌产肠毒素性STa、大肠杆菌产肠毒素性STb、葡萄球菌毒素B、α毒素或中毒性休克综合征毒素-1、产气荚膜梭状芽胞杆菌肠毒素或α毒素、大肠杆菌志贺样毒素STX-1、志贺样毒素STX-2、维洛毒素、志贺志贺菌毒素、霍乱毒素、产肠毒素性LT、破伤风毒素、肉毒杆菌毒素、艰难梭状芽胞杆菌毒素B、艰难梭状芽胞杆菌毒素A、蓝藻毒素、假单胞菌外毒素A和百日咳毒素。15.权利要求1所述的用途,其中所述生物物质来自哺乳动物。16.权利要求1所述的用途,其中所述毒素污染是全身的或局部的。17.权利要求1至16中任一项所述的用途,其中经口、经阴道、经直肠、经鼻或局部引入所述吸着剂。18.权利要求1至16中任一项所述的用途,其中使用所述吸着剂来体外处理生物物质,所述生物物质包括唾液、血液、血浆、血清、胃肠液、脑脊液、阴道液、腹膜液、胸膜液、尿液、滑液、淋巴、肺泡粘液或玻璃体液。19.权利要求1所述的用途,其中所述毒素的重量等于或小于50,000道尔顿(50kDa)。20.权利要求1所述的用途,其中所述吸着剂具有这样的孔结构,以使孔径在至范围内的孔的总体积为0.5cc/g至5.0cc/g干吸着剂;其中所述吸着剂中孔径在至之间的孔的体积与孔径在至之间的孔的体积的比例小于2∶1。21.权利要求20所述的用途,其中所述毒素的分子量范围为50,000道尔顿至约450,000道尔顿。22.权利要求1所述的用途,其中所述吸着剂具有这样的孔结构,以使孔径在至范围内的孔的总体积为0.5cc/g至5.0cc/g干吸着剂;其中所述吸着剂中孔径在至之间的孔的体积与孔径在至之间的孔的体积的比例小于3∶1。23.权利要求22所述的用途,其中所述毒素的分子量等于或小于1,000,000道尔顿。24.权利要求1所述的用途,其中所述吸着剂包含含有至少一种交联剂、至少一种单体、至少一种分散剂和至少一种致孔剂的多个孔。25.权利要求1所述的用途,其中所述吸着剂是具有两种或更多种不同孔尺寸之吸着剂的混合物。26.权利要求1所述的用途,其中所述吸着剂配制成粉末、片剂、胶囊、溶液、凝胶片剂、分散体、浆体、栓剂或混悬剂。27.权利要求1所述的用途,其中所述吸着剂与食物、流体或其任意组合相混合。28.降低生物物质中一种或更多种毒素污染的药盒,其包含:a.能够吸着毒素的吸着剂,其中所述吸着剂包含多个孔,范围为至孔体积为0.5cc/g至5.0cc/g干吸着剂;其中所述吸着剂中孔径在至之间的孔的体积与孔径在至之间的孔的体积的比例小于3∶1,且所述吸着剂的尺寸为0.05mm至2cm,所述吸着剂包含含有至少一种交联剂和至少一种分散剂的包被聚合物;和b.当不与所述吸着剂的包装一起使用时存储所述吸着剂的容器。29.权利要求28所述的药盒,其中所述吸着剂是生物相容性的。30.降低生物物质中一种或更多种毒素污染的装置,其包含:a.能够吸着毒素的吸着剂,其中所述吸着剂包含多个孔,范围为至孔体积为0.5cc/g至5.0cc/g干吸着剂;其中所述吸着剂中孔径在至之间的孔的体积与孔径在至之间的孔的体积的比例小于3∶1,且所述吸着剂的尺寸为0.05mm至2cm,所述吸着剂包含含有至少一种交联剂和至少一种分散剂的包被聚合物;和b.容器,其中所述吸着剂被定位在所述容器内,以使所述生物物质可被直接引入到所述容器中。31.权利要求30所述的装置,其中所述生物物质是血液。32.权利要求30或31所述的装置,其中所述吸着剂是生物相容性的。33.药物组合物,其包含:a.能够吸着毒素的吸着剂,其中所述吸着剂包含多个孔,范围为至孔体积为0.5cc/g至5.0cc/g干吸着剂;其中所述吸着剂中孔径在至之间的孔的体积与孔径在至之间的孔的体积的比例小于3∶1,且所述吸着剂的尺寸为0.05mm至2cm,所述吸着剂包含含有至少一种交联剂和至少一种分散剂的包被聚合物;和b.食物产品。34.药物组合物,其包含:a.能够吸着毒素的吸着剂,其中所述吸着剂包含多个孔,范围为至孔体积为0.5cc/g至5.0cc/g干吸着剂;其中所述吸着剂中孔径在至之间的孔的体积与孔径在至之间的孔的体积的比例小于3∶1,且所述吸着剂的尺寸为0.05mm至2cm,所述吸着剂包含含有至少一种交联剂和至少一种分散剂的包被聚合物;和b.可饮用的液体。35.权利要求33或34所述的药物组合物,其中所述吸着剂是生物相容性的。36.能够吸着一种或更多种无毒亚基的吸着剂在制备用于降低生物物质中一种或更多种毒素污染的药盒中的用途,其中所述降低包括:a.使所述生物物质与有效量的所述能够吸着一种或更多种无毒亚基的吸着剂接触,其中当两个或更多个这些亚基组合时形成毒素,其中所述吸着剂包含多个孔,范围为至孔体积为0.5cc/g至5.0cc/g干吸着剂;其中所述吸着剂中孔径在至之间的孔的体积与孔径在至之间的孔的体积的比例小于3∶1,且所述吸着剂的尺寸为0.05mm至2cm,所述吸着剂包含含有至少一种交联剂和至少一种分散剂的包被聚合物;和b.吸着所述一种或更多种无毒亚基。37.能够吸着一种或更多种无毒亚基的吸着剂在制备用于处理有需要的对象的一种或更多种毒素污染的药盒中的用途,其中所述处理包括:a.使所述对象的生物物质与有效量的所述能够吸着一种或更多种无毒亚基的吸着剂接触,其中当两个或更多个这些亚基组合时形成毒素,其中所述吸着剂包含多个孔,范围为至孔体积为0.5cc/g至5.0cc/g干吸着剂;其中所述吸着剂中孔径在至之间的孔的体积与孔径在至之间的孔的体积的比例小于3∶1,且所述吸着剂的尺寸为0.05mm至2cm,所述吸着剂包含含有至少一种交联剂和至少一种分散剂的包被聚合物;和b.吸着所述一种或更多种无毒亚基。

说明书

相关申请的交叉引用

太阳城集团本申请要求2012年6月29日提交的美国临时申请No.61/666,626的权益,其通过引用全文并入本文中。

技术领域

太阳城集团本发明一般地涉及用于降低毒素污染的材料、方法、药盒(kit)和装置。

背景技术

毒素是对正常生理功能造成破坏并可能导致疾病的外源性或内源性物质。它们通过与身体组织(包括肠、皮肤或粘膜)接触或被身体组织吸收而导致疾病。可以充当毒素的物质即使没有数百万,也有数千。甚至通常不是毒素的一些物质,在适当条件下可以成为毒素。毒素的作用强度和速度差异显著。已开发了对于毒素暴露的治疗,包括解除与毒素的接触以及使用解毒剂。

解毒剂是反作用于毒素效果的物质。然而,大多数的解毒剂特定于唯一类型的毒素或毒素家族。因此,医院、诊所、战地医院、医生办公室、救护车以及其他第一急救者(first responder)不可能携带每种毒素的解毒剂。此外,许多毒素的解毒剂还没有开发出来,并且一些解毒剂的量可能太少以至于不能有效地用于治疗一些毒素暴露。

因此,需要快速、有效和高效率地降低毒素污染和处理对象中的毒素污染之新的且更好的材料、方法、药盒和装置。

发明内容

本文中提供了降低生物物质中一种或更多种毒素污染的合适的材料和方法,其包括使生物物质与有效量的能够吸着毒素的吸着剂接触,其中所述吸着剂包含多个孔,范围为至孔体积为0.5cc/g至5.0cc/g,且尺寸为0.05mm至2cm并且吸着毒素。本文中还提供了处理有此需要的对象中一种或更多种毒素污染的合适方法,其包括使对象的生物物质与有效量的能够吸着毒素的吸着剂接触,其中所述吸着剂包含多个孔,范围为至孔体积为0.5cc/g至5.0cc/g,且尺寸为0.05mm至2cm并且吸着毒素。

太阳城集团本文中还提供了降低生物物质中一种或更多种毒素污染的合适的药盒,其包含能够吸着毒素的吸着剂以及当不与所述吸着剂的包装一起使用时存储所述吸着剂的容器,其中所述吸着剂包含多个孔,范围为至孔体积为0.5cc/g至5.0cc/g,且尺寸为0.05mm至2cm。本文中还提供了降低生物物质中一种或更多种毒素污染的合适装置,其包含能够吸着毒素的吸着剂以及容器,其中所述吸着剂包含多个孔,范围为至孔体积为0.5cc/g至5.0cc/g,且尺寸为0.05mm至2cm,并且其中所述吸着剂被定位在所述容器内部,使得可以直接将生物物质引入到容器中。

本文中还提供了包含能够吸着毒素的吸着剂以及食物产品或可饮用液体的合适药物组合物,其中所述吸着剂包含多个孔,范围为至孔体积为0.5cc/g至5.0cc/g,且尺寸为0.05mm至2cm。

太阳城集团本文中提供了降低生物物质中一种或更多种毒素污染的方法,其包括使生物物质与有效量的能够吸着一种或更多种无毒亚基(subunit)的吸着剂接触,其中当两个或更多个这些亚基组合时形成毒素,其中所述吸着剂包含多个孔,范围为至孔体积为0.5cc/g至5.0cc/g,且尺寸为0.05mm至2cm并且吸着一种或更多种无毒亚基。本文中还提供了处理有此需要的对象中一种或更多种毒素污染的方法,其包括使对象的生物物质与有效量的能够吸着一种或更多种无毒亚基的吸着剂接触,其中当两个或更多个这些亚基组合时形成毒素,其中所述吸着剂包含多个孔,范围为至孔体积为0.5cc/g至5.0cc/g,且尺寸为0.05mm至2cm并且吸着一种或更多种无毒亚基。

附图说明

太阳城集团当结合附图阅读时,将进一步理解发明内容以及下面的详述描述。为了举例说明本发明的目的,示出了本发明的示例性实施方案的附图;然而,本发明不限制于所公开的具体方法、组合物和装置。此外,附图不一定是按比例绘制的。在附图中:

太阳城集团图1示出了绘制为对数尺度之吸着剂孔径的函数的吸着剂孔体积。

图2示出了作为太阳城集团之函数的艰难梭状芽胞杆菌(Clostridium difficile)毒素A的去除。

图3示出了作为太阳城集团之函数的艰难梭状芽胞杆菌毒素B的去除。

太阳城集团举例说明性实施方案的详细描述

太阳城集团通过参考以下详细的描述,结合考虑形成了本公开内容的一部分的附图和实施例,可更容易地理解本发明。应该理解的是,本发明并不限制于本文中所描述和/或示出的具体的材料、装置、方法、应用、条件或参数,并且本文中所用的术语仅仅是为了以实例来描述具体实施方案的目的,并不旨在限制请求保护的本发明。本文中使用的术语“多个”意指多于一个。当表示数值的范围时,另一个实施方案包括从一个特定值和/或到另一个特定值。类似地,当数值通过使用前置词“约”表示为近似值时,应该理解的是,该特定值形成另一个实施方案。所有的范围都包括端值并且可以组合。

应当理解的是,为清楚起见,本文中在不同的实施方案的上下文中描述的本发明的某些特征也可以在单个实施方案中以组合的形式提供。反之,为简便起见,在单个实施方案的上下文中描述的本发明的多种特征也可以单独地或以任何子组合的形式提供。另外,提及范围中说明的值包括该范围内的各个和每个值。

以下定义旨在帮助理解本发明:

术语“抗微生物剂”包括抗细菌剂、抗病毒剂、抗真菌剂、防腐剂等。合适的抗微生物剂包括但不限于:异烟肼、利福平、吡嗪酰胺、乙胺丁醇、红霉素、万古霉素、四环素、氯霉素、磺胺类、庆大霉素、阿莫西林、青霉素、链霉素、对氨基水杨酸、克拉霉素、氯法齐明、米诺环素、磺胺类、乙硫异烟胺、环丝氨酸、卡那霉素、阿米卡星、卷曲霉素、紫霉素、氨硫脲、利福布丁和喹诺酮类(例如环丙沙星、氧氟沙星和司帕沙星)、利福平、奥司他韦、阿昔洛韦、拉米夫定、唑类抗真菌剂、棘白菌素类等。抗细菌剂包括但不于:β-内酰胺抗细菌剂,包括例如羧苄西林、氨苄西林、氯唑西林、苯唑西林和哌拉西林、头孢菌素类和其他头孢烯类(包括例如头孢克洛、头孢孟多、头孢唑林、头孢哌酮、头孢噻肟、头孢西丁、头孢他啶、头孢曲松)以及碳青霉烯类(包括例如亚胺培南和美罗培南);以及糖肽类、大环内酯类、喹诺酮类(例如萘啶酸)、四环素和氨基糖苷类(例如庆大霉素和巴龙霉素)。

术语“生物相容性”被定义为是指吸着剂能够与生理流体、活组织或生物体相接触,在吸着剂与生理流体、活组织或生物体接触的过程中不产生不可接受的临床变化。在一些实施方案中,意指所述吸着剂是生物体的肠道和消化道可以耐受的。本发明的吸着剂优选是无毒的。生物相容性的吸着剂可以是生物可降解的聚合物、可吸收的聚合物,或者二者皆是。

术语“微生物”包括细菌、病毒、真菌和寄生虫。

术语“毒素”用于指被认为与消极的临床结果有关联的病原体的物质。毒素包括毒素亚基、毒素前体和毒力因子。毒素可以来自生物来源,例如细菌、病毒、真菌、寄生虫、植物或动物。毒素可以是预先形成的或者也可以仅在一旦存在生物物质的情况下变为有毒的。例如,肉毒杆菌毒素(7个亚型之一)通常在厌氧条件下(例如在罐头货品中)由肉毒梭状芽胞杆菌(Clostridium botulinum)细菌产生。这种预先形成的肉毒杆菌毒素是已知最强效的毒素之一,当摄取时,通过抑制突触内乙酰胆碱的释放阻断神经肌肉传递,导致麻痹和呼吸衰竭。由蓖麻籽产生的蓖麻毒素是另一种预先形成毒素的实例,当被吸入、注入或摄入时可能是致命的。来自蘑菇的蝇蕈毒素以及由真菌物种曲霉菌(Aspergillus)的菌株产生的霉菌毒素黄曲霉毒素是另一些预形成毒素的实例。毒素也可在身体内形成,其通常由微生物形成,但是也可由患者自身的细胞形成,例如在病毒性感染中发生。实例包括由艰难梭状芽胞杆菌细菌形成并释放到肠腔中的毒素TcdA和TcdB,其杀伤胃肠道中的细胞,导致严重的可能威胁生命的腹泻。另一个实例是由大肠杆菌的某些菌株产生的志贺样毒素或维洛毒素(verotoxin),其经常通过受污染的未煮熟的肉、蔬菜或水果传播,并引起食物传播的疾病。维洛毒素由细菌在肠腔内产生,但随后被吸收到血流中,在那里其被血管内皮细胞吸收从而杀伤它们。维洛毒素优先靶向肾小球,导致肾衰竭并可导致致命的溶血性尿毒综合征。另一实例是在病毒轮状病毒感染胃肠道后由患者自身的细胞产生的NSP4毒素。轮状病毒是婴幼儿严重腹泻的最常见的病因,每年造成超过60万例患者死亡。NSP4充当肠毒素以激活结肠上皮细胞内的离子通道,导致大量分泌性腹泻,而不会造成任何结构损伤。过多通常无毒的物质以高浓度存在时也可以变为毒素。一个实例包括细胞因子,其通常是免疫系统产生的蛋白质,在低水平时对于免疫系统的功能是重要的,但在高水平时,成为引起细胞死亡、严重的炎症和器官功能障碍的炎性毒素。毒素也可以由无毒的前体或原毒素经代谢形成。一个实例是淀粉样前体蛋白,这是体内产生的一种无毒蛋白质,当由被称为分泌酶(secretase)的酶进行切割时,可形成片段β-淀粉样蛋白,这是一种可导致形成作为阿尔茨海默病致病根源的淀粉样蛋白斑块的毒素。无毒的亚基或前体彼此结合时也可成为毒素。这样的一个实例是由炭疽杆菌(Bacillus anthracis)产生作为炭疽病病因的致死因子、水肿因子以及保护性抗原。它们本身是无毒的,但是当结合在一起并进入细胞时,这些亚基形成致命毒素、致死毒素和水肿毒素,引起细胞死亡和细胞裂解。另一个实例是金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)α毒素,其作为单体时是无毒的,但是当7个单体装配成孔形成复合物时,就变成了一种强效溶血毒素。物质也可能在体内的一个位置时没有毒性作用,但是当放置在身体的另一部位时可能变为毒素。这样的一个实例是革兰氏阴性细菌内毒素脂多糖,其在肠腔中几乎不具有毒性,但如果其逸入血流,会导致败血性休克。毒素也可以是常见的酶,例如脂肪酶、淀粉酶、胰蛋白酶、透明质酸酶、胶原酶以及在没有被适当地调节时或者在作用于没有被保护免受其酶作用的身体区域时引起细胞或组织损伤的其他物质。当这些物质有助于体内的病原体的传播或毒力时,它们被归类为“毒力因子”。这些是实例而不是意在限制。

术语“胃肠内腔”或“内腔”是指在胃肠道内的空间或腔。

本文中使用的术语“胃肠道疾病”包括胃炎、梅内特里耶病(Ménétrier disease)、胃肠溃疡、肠胃炎、胃肠炎性疾病、肠感染、肠-粘膜损伤、炎性肠病、乳糜泻(celiac disease)等。

太阳城集团本文中使用的术语“吸着剂”包括吸附剂和吸收剂。

如本文中使用的术语“生理流体”是来源于身体的液体,可包括但不限于:鼻咽液、口腔液、食管液、胃液、胰液、肝液、胸膜液、心包液、腹膜液、肠液、前列腺液、精液、阴道分泌物以及泪液、唾液、肺或支气管分泌物、粘液、胆汁、血液、淋巴、血浆、血清、滑液、脑脊液、尿液和间质液、细胞内液以及细胞外液(例如烧伤或伤口渗出的流体)。

如本文所使用的“载体流体”是外源施用的液体,其包括但不限于:经口、通过饲管、经腹膜或直肠(例如灌肠剂或结肠清洗)施用的液体。

除非上下文另有明确说明,否则如本文所使用的没有数量词修饰的名词表示一个/种或更多个/种,并且提及特定的数值包括至少该特定值。当表示数值范围时,另一个实施方案包括从一个特定值和/或到另一个特定值。类似地,当数值通过使用前置词“约”被表示为近似值时,应该理解的是,该特定值形成另一个实施方案。所有的范围都包括端值并且可以组合。

太阳城集团除非另有定义,否则本文中使用的所有其他技术和科学术语与所描述方法和组合物相关领域普通技术人员通常所理解的具有相同的含义。除非另有规定,否则本文中所使用的下列术语和短语具有赋予它们的含义。

太阳城集团此外,以下确定了多种参考文献,并通过引用将其全文并入。

本发明部分地基于以下的发现:通过改造由孔尺寸范围与孔体积的比例定义的孔结构,可制造出吸收毒素、毒素前体、毒素亚基或毒力因子的生物相容性吸着剂组合物,统称为宽大小范围的“毒素”而不考虑其他物理特性。当引入到生物物质(通常是哺乳动物,并且特别是人)中时,所述生物相容性吸着剂可用来抑制或降低一种或更多种毒素的污染。然而,生物物质也可以是支持微生物的增殖或维持而制造的物质。在与抗微生物剂一起作用时,吸着剂组合物可用于降低毒素,所述抗微生物剂杀伤或阻止直接产生毒素或导致产生毒素的微生物的生长。吸着剂组合物也可适用于当由于多种原因其他的处理可能不可用的情况。例如,吸着剂可用于当毒素尚未被明确确定的情况时。另一个可使用本生物相容性的吸着剂和方法的例子是当毒素是可确认的,但还没有充分地确定其类型或进行有针对性的处理培养时。另一个例子是当因为担心当微生物死亡时释放更多的毒素(这将使患者的病情恶化)而不能使用抗微生物剂时。

本发明的生物相容性吸着剂组合物包含多个孔。生物相容性的吸着剂被设计为吸附从低于1kDa至1000kDa的范围广泛的毒素。尽管不希望受理论的束缚,但是认为吸着剂是通过将预定分子量的分子隔离在孔内起作用。可通过聚合物吸附的分子的大小会随着聚合物孔尺寸的增大而增加。相反地,随着将孔尺寸增大到超过吸附给定分子的最佳孔尺寸,所述蛋白质的吸附可能或将减小。

在一个实施方案中,多孔聚合物吸收等于或小于50,000道尔顿(50kDa)的小到中等大小蛋白质分子并且不吸收大的血液蛋白分子,所述多孔聚合物包含这样的孔结构,以使孔尺寸在至范围内的孔的总体积在0.5cc/g至5.0cc/g干吸着剂的范围中。所述吸着剂具有这样的孔结构,以使孔尺寸在至范围内的孔的总体积为大于0.5cc/g至5.0cc/g干吸着剂;其中吸着剂在至(孔径)之间的孔的体积与至(孔径)之间的孔的体积的比例为小于3∶1。

在另一个实施方案中,多孔聚合物最佳吸收约300,000道尔顿的中等到大尺寸的蛋白质分子并且不吸收或最小化吸收非常大的血液蛋白质,所述多孔聚合物包含这样的孔结构,以使孔尺寸在至范围内的孔的总体积在0.5cc/g至5.0cc/g干吸着剂的范围中。所述吸着剂具有这样的孔结构,以使孔尺寸在至范围内的孔的总体积为大于0.5cc/g至5.0cc/g干吸着剂;其中所述吸着剂在至(孔径)之间的孔的体积与至(孔径)之间的孔的体积的比例小于2∶1。

在另一个实施方案中,多孔聚合物最佳吸收等于或小于1,000,000道尔顿的非常大尺寸的蛋白质分子,并且不吸收或最小化吸收非常大的血液蛋白质,所述多孔聚合物包含这样的孔结构,以使孔尺寸在至范围内的孔的总体积在0.5cc/g至5.0cc/g干吸着剂的范围中。所述吸着剂具有这样的孔结构,以使孔尺寸在至范围内的孔的总体积大于0.5cc/g至5.0cc/g干吸着剂;其中在至(孔径)之间的孔的体积与至(孔径)之间的孔的体积的比例小于3∶1。

将生物相容性的吸着剂引入到生物物质中。术语生物物质包括见于体内的物质,通常来自于哺乳动物如狗、猫、兔、牛、绵羊、马、猪和山羊,优选人。所述生物物质是例如细胞或生理流体,例如唾液、鼻咽液、血液、血浆、血清、胃肠液、胆汁、脑脊髓液、心包液、阴道液、精液、前列腺液、腹膜液、胸膜液、尿液、滑液、间质液、细胞内液或细胞质、淋巴、支气管分泌物、粘液或玻璃体液或房水。所述术语还包括支持真核或原核细胞、病毒、真菌或原生动物离体增殖或维持的物质,例如培养基、生物基质、卵等。可以将生物相容性的吸着剂和生物物质在体内或离体引入并混合。

太阳城集团毒素是最常见的有机物质,例如蛋白质、肽、碳水化合物、脂质、核酸及其组合(例如,多聚体的或多亚基的蛋白质、糖蛋白、糖脂、脂蛋白等)。毒素也可包括有机化学品(例如生物碱)以及某些无机分子(例如氰化物)。

毒素可由很多种生物体生产。例如,毒素可由微生物例如细菌、病毒、真菌和寄生虫生产。毒素也可由大型生物例如昆虫、鱼类、甲壳类、贝类、两栖类、爬行类、鸟类和哺乳动物形成。毒素也可由植物物质(例如植物、藻类以及浮游植物)产生。病毒通常通过DNA或RNA或其他核酸序列含有遗传密码,以指导它们所感染的细胞来制造病毒蛋白(包括毒素)。也可以在环境中找到许多毒素(是自然过程的产物)。毒素可通过本身可能有毒或可能无毒的亚基的组装和/或修饰而形成。毒素在低浓度时可以是无毒物质,但在较高浓度时变得有毒。一些毒素可以是部位特异的。毒素也可是无毒的前体代谢的副产品。毒素也可以人工合成并制造(例如,生物战应用等)。

外源毒素可经皮肤或粘膜表面摄入、注入、吸入、吸收,例如口腔或口腔粘膜、舌下粘膜、鼻粘膜、鼻窦、鼻咽、口咽、呼吸道、胃肠道、泌尿生殖道和眼粘膜。内源性毒素可在身体的任何地方产生,例如在血液中、胃肠道、呼吸道、泌尿生殖道、组织内以及体腔内。通常情况下,内源性毒素可通过扰乱局部的生物过程而作用于局部或引起局部疾病,或者毒素可扰乱全身的生物过程而作用于全身,以引起全身性疾病或器官功能障碍。无毒的前体也可从环境中吸收或在体内产生,然后经代谢或其他修饰在体内转化为毒素。

毒素可通过许多不同的机制引起病理状况。一些导致直接杀伤细胞。例如,棕色隐遁蜘蛛(brown recluse spider)毒液中含有许多既溶细胞又溶血的毒素。这些毒素是酶,例如透明质酸酶、脱氧核糖核酸酶、核糖核酸酶、碱性磷酸酶和脂肪酶。鞘磷脂酶D被认为是负责由棕色隐遁蜘蛛毒液螯入所引起大部分组织破坏和溶血的蛋白质组分。由花生四烯酸、前列腺素介导的强烈炎症应答和嗜中性粒细胞的趋化渗透通过包括介质C-反应蛋白和补体激活在内的内部血管级联进一步放大。这些因素和其他因素造成了坏死性蜘蛛中毒的局部反应和全身反应。另一些通过破坏正常细胞生理来作用。例如,炭疽水肿因子与保护性抗原结合以造成直接的细胞死亡。

太阳城集团最常见的毒素来源之一是来自肠内病原体例如艰难梭状芽胞杆菌、肠出血性大肠杆菌(Enterohemorrhagic E. coli,EHEC)(如大肠杆菌OE157:H7或大肠杆菌O104:H4)、霍乱弧菌(Vibrio cholera)、痢疾志贺菌(Shigella dysenteriae)和轮状病毒。这些毒素可破坏或杀伤胃肠粘膜的细胞并可改变胃肠的内稳态,往往导致腹泻和呕吐,这可导致脱水、吸收不良、甚至有可能死亡,特别是在幼年者、老年人、免疫力受损的对象中。这些毒素可导致更严重的并发症,例如结肠炎、出血性腹泻、胃肠道出血、免疫系统功能的下降、中毒性巨结肠、肠穿孔、休克、败血症和死亡。由感染和毒素引起的胃肠粘膜的损害可进一步导致细菌和毒素(如内毒素)从肠道向血液或身体中的迁移,这可触发或加剧败血症。根据CDC,在2009年45个国家中有221,226例霍乱病例,造成约5000人死亡。这些都主要是由产毒素或毒素产生的霍乱血清组O1和O139菌株引起的,其产生了大量霍乱毒素。一些毒素(例如肉毒杆菌毒素或志贺样毒素(STX-1))可以从胃肠道吸收,并且经血液或淋巴分布到身体的不同部位以引起疾病。

在环境中经常见到肠内病原体,包括细菌、病毒、寄生虫和植物。发病机制可能与生物体直接相关(例如小肠结肠炎耶尔森菌(Yersinia enterocolitica)、诺沃克病毒(Norwalk virus))、与由生物体产生的毒素相关(例如艰难梭状芽胞杆菌、产肠毒素性大肠杆菌(Enterotoxigenic E.coli,ETEC))、由细胞功能的改变导致促炎性细胞因子的释放而引起(例如肠致病性大肠杆菌(Enteropathogenic E.coli,EPEC)、空肠弯曲杆菌(Camplylobacter jejuni)),或者这些机制的组合(例如霍乱弧菌、痢疾志贺菌)。

本发明的一些实施方案可用于抑制或降低由在宽范围的分子量的毒素和预先形成的毒素或者在生物物质存在的情况下形成的毒素的污染。在生物物质存在下形成毒素的一个例子是细菌内毒素,例如脂多糖(LPS)。认为宿主血流中LPS的出现导致内源性产生了多种直接和间接介导LPS毒性的宿主因子。这些宿主衍生的介质包括许多现在公认的炎性细胞因子、内分泌激素以及许多其他的内源性因子(例如白三烯和血小板活化因子)。细胞因子,例如TNF-α、IL-1和IFN-γ,是由于多种微生物(包括细菌、病毒、真菌和寄生虫)感染而由被刺激的巨噬细胞和T淋巴细胞所释放的。相互作用因子包括细胞因子级联。已观察到TNF-α刺激其他类型细胞因子的产生。通常在炎症中观察到IL-1诱导应答,例如发热、白细胞增多、淋巴细胞的活化、以及诱导急性期蛋白质在肝内的生物合成。然而,在高的水平时,这些细胞因子等可以是炎性毒素并且引起不良作用,例如毛细血管渗漏、通过凋亡的细胞死亡、血流动力学不稳定性、器官功能障碍和恶病质。

太阳城集团作为另一个实例,在细菌感染中,细胞因子例如IL-8充当吸引白细胞(例如中性粒细胞)到细胞因子的表达区域的信号。通常,通过中性粒细胞释放酶和超氧阴离子对于破坏感染的细菌至关重要。然而,如果细胞因子的表达导致嗜中性粒细胞入侵例如肺,则中性粒细胞的酶和氧自由基的释放可以导致发生成人呼吸窘迫综合征(adult respiratory distress syndrome,ARDS),其可以是致命的。

在某些实施方案中,毒素来自一个或更多个不同的生物来源。生物来源可包括如表1(毒素、毒素亚基及其代表性病原体的非排他性列表)中示出的一种或更多种细菌、病毒、真菌或寄生虫。

表1。

太阳城集团表2是在其中可使用本发明吸着剂来降低或抑制生物物质污染之病毒毒素的非排他性列表。

表2。

太阳城集团表3是在其中可使用本发明吸着剂以降低或抑制生物物质污染之真菌毒素的非排他性列表。

表3。

太阳城集团表4是在其中使用本发明的吸着剂可降低或抑制生物物质污染之植物来源毒素的非排他性列表。

表4。

表5是在其中使用本发明的吸着剂可降低或抑制生物物质污染之动物来源毒素的非排他性列表。

表5。

太阳城集团此外,生物相容性吸着剂组合物可包含具有不同孔结构的吸着剂的混合物。这样的混合物是有利的,例如,当尚未明确鉴定出病原体时或有理由怀疑存在多种与胃肠炎相关的病原体时,例如摄入被污染的水。

在另一实例中,本发明的方法和吸着剂可通过经口或经直肠施用用于处理艰难梭状芽胞杆菌感染。艰难梭状芽胞杆菌通常在世界各地的医院和其他长期医疗机构获得。它们是这些机构中严重腹泻的主要原因。在医疗机构中,后果包括更长太阳城集团的滞留、更多次的再入院和更高的成本(Glouliouris等,Clin.Med.,11:75-79,2011)。由患者大量排泄的艰难梭状芽胞杆菌芽胞和污染可存活数月或数年。通常该细菌可被胃肠系统的正常菌群所抑制,但在结肠菌群失衡或破坏时,允许艰难梭状芽胞杆菌增殖并产生导致腹泻和可能的发热和结肠炎的毒素。可用的处理方法是甲硝唑和万古霉素,但是因为需要重新建立正常的肠道菌群才能完全恢复,所以经常复发。艰难梭状芽胞杆菌产生两种毒素,毒素A和毒素B,这两者都是致病的(Lyerly等,Clin.Microbiol.Rev.,1(1):1-18,1988)。蛋白质相当大,在还原条件下毒素A和毒素B两者都大于250,000,并且已描述了毒素A的范围为400,000至600,000道尔顿(Krivan和Wilkins,Infect.mmun.,55:1873-1877,1987;Bano等,Rev.Infect.Dis.6:S11-S201984;Bano等,Biochem.Int.2:629-635,1981),并且毒素B的范围为360,000至500,000道尔顿(Lyerly等,Infect.Immun.54:70-76,1986)。

太阳城集团在另一个实例中,本发明的方法和吸着剂可用于通过在体外血液灌流系统中使用血液相容吸着剂来处理血液中的细菌毒素。标准血液透析、血液过滤和炭血液灌流不能够去除大于约10kDa的毒素。高分子量截止滤波器和中等分子量的吸着剂盒对于广泛的,特别是大(>60kDa)的毒素的清除并不是理想地适合的。所述吸着剂系统与抗生素相结合,可用以去除来自血液、血浆或血清的小于1kDa至大于400kDa范围内之病原体来源的毒素。也产生血液传播毒素之感染的实例包括产生α毒素或中毒性休克综合征毒素-1的金黄色葡萄球菌和耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(methicillin-resistantStaphlococus aureus,MRSA)、与全身志贺样毒素毒血症相关的肠出血性大肠杆菌的肠感染、与α毒素产生相关的产气荚膜梭状芽胞杆菌感染导致坏死性筋膜炎、与气单胞菌溶素毒素产生相关的气单胞菌伤口感染等。

在某些实施方案中,吸着剂包含含有至少一种交联剂和至少一种分散剂的包被聚合物。

一些优选的包被聚合物包含至少一种交联剂和至少一种分散剂。合适的分散剂包括羟乙基纤维素、羟丙基纤维素、聚(甲基丙烯酸羟乙酯)、聚(丙烯酸羟乙酯)、聚(甲基丙烯酸羟丙酯)、聚(丙烯酸羟丙酯)、聚(甲基丙烯酸二甲胺乙酯)、聚(丙烯酸二甲胺乙酯)、聚(甲基丙烯酸二乙胺乙酯)、聚(丙烯酸二乙胺乙酯)、聚(乙烯醇)、聚(N-乙烯基吡咯烷酮)、聚(甲基丙烯酸)的盐、以及聚(丙烯酸)的盐、及其混合物。

太阳城集团合适的交联剂包括二乙烯基苯、三乙烯基苯、二乙烯基萘、三乙烯基环己烷、二乙烯基砜、三羟甲基丙烷三甲基丙烯酸酯、三羟甲基丙烷二甲基丙烯酸酯、三羟甲基丙烷三丙烯酸酯、三羟甲基丙烷二丙烯酸酯、季戊四醇二甲基丙烯酸酯、季戊四醇三甲基丙烯酸酯、季戊四醇四甲基丙烯酸酯、季戊四醇二丙烯酸酯、季戊四醇三丙烯酸酯、季戊四醇四丙烯酸酯、二季戊四醇二甲基丙烯酸酯、二季戊四醇三甲基丙烯酸酯、二季戊四醇四甲基丙烯酸酯、二季戊四醇二丙烯酸酯、二季戊四醇三丙烯酸酯、二季戊四醇四丙烯酸酯、二乙烯基甲酰胺及其混合物。优选地,该聚合物与该涂层的形成同时发生,以使该分散剂与聚合物的表面化学结合。

太阳城集团使用有机溶剂作为致孔剂或孔形成剂,并在产生多孔聚合物的聚合作用期间诱导所得的相分离。一些优选的致孔剂是苄醇、环己烷、环己醇、环己醇/甲苯混合物、环己酮、癸烷、癸烷/甲苯混合物、二-2-乙基己基磷酸、邻苯二甲酸二-2-乙基己酯、2-乙基-1-己酸、2-乙基-1-己醇、2-乙基-1-己醇/正庚烷混合物、2-乙基-1-己醇/甲苯混合物、异戊醇、正庚烷、正庚烷/乙酸乙酯、正庚烷/乙酸异戊酯、正庚烷/四氢化萘混合物、正庚烷/甲苯混合物、正己烷/甲苯混合物、戊醇、聚(苯乙烯-共-甲基丙烯酸甲酯)/邻苯二甲酸二丁酯、聚苯乙烯/2-乙基-1-己醇混合物、聚苯乙烯/邻苯二甲酸二丁酯、聚苯乙烯/正己烷混合物、聚苯乙烯/甲苯混合物、甲苯、磷酸三正丁酯、1,2,3-三氯丙烷/2-乙基-1-己醇混合物、2,2,4-三甲基戊烷(异辛烷)、三甲基戊烷/甲苯混合物、聚(丙二醇)/甲苯混合物、聚(丙二醇)/环己醇混合物、以及聚(丙二醇)/2-乙基-1-己醇混合物。

太阳城集团优选的吸着剂包括来自选自以下的一种或更多种单体的聚合物:二乙烯基苯和乙基乙烯基苯、苯乙烯、乙基苯乙烯、丙烯腈、甲基丙烯酸丁酯、甲基丙烯酸辛酯、丙烯酸丁酯、丙烯酸辛酯、甲基丙烯酸十六酯、丙烯酸十六酯、甲基丙烯酸乙酯、丙烯酸乙酯、乙烯基甲苯、乙烯基萘、乙烯基苄基醇、乙烯基甲酰胺、甲基丙烯酸甲酯、丙烯酸甲酯、三乙烯基苯、二乙烯基萘、三乙烯基环己烷、二乙烯基砜、三羟甲基丙烷三甲基丙烯酸酯、三羟甲基丙烷二甲基丙烯酸酯、三羟甲基丙烷三丙烯酸酯、三羟甲基丙烷二丙烯酸酯、季戊四醇二甲基丙烯酸酯、季戊四醇三甲基丙烯酸酯、季戊四醇四甲基丙烯酸酯、季戊四醇二丙烯酸酯、季戊四醇三丙烯酸酯、季戊四醇四丙烯酸酯、二季戊四醇二甲基丙烯酸酯、二季戊四醇三甲基丙烯酸酯、二季戊四醇四甲基丙烯酸酯、二季戊四醇二丙烯酸酯、二季戊四醇三丙烯酸酯、二季戊四醇四丙烯酸酯、二乙烯基甲酰胺及其混合物。

一些优选的聚合物包括离子交换聚合物。

太阳城集团一些优选的聚合物包括纤维素聚合物。合适的聚合物包括交联葡聚糖凝胶,例如SephadexTM。

太阳城集团某些优选的聚合物包含多孔的高度交联的苯乙烯或二乙烯基苯共聚物。这些共聚物中的一些包括经受部分地氯甲基化以使氯含量达到7%分子量的大孔或中孔的苯乙烯-二乙烯基苯-乙基苯乙烯共聚物。这些聚合物中的另一些是在溶胀状态下由交联苯乙烯共聚物通过广泛地氯甲基化和随后的后交联(通过用弗瑞德一克莱福特(Friedel-Crafts)催化剂处理)生产的超高交联聚苯乙烯。这些聚合物中的另一些是在溶胀状态下由交联的苯乙烯共聚物通过大量的额外的后交联(用选自包含单氯二甲基醚和对-亚二甲苯二氯化物的双官能交联剂)生产的超高交联聚苯乙烯。

在本发明的实践中可用的一些聚合物是可作为干粉施用的亲水自润湿聚合物,其包含亲水性官能团,例如胺、羟基、磺酸根和羧基基团。

在本发明中可用的某些聚合物是由苯乙烯、二乙烯基苯、乙基乙烯基苯可聚合单体以及丙烯酸类和甲基丙烯酸类单体制备的大孔聚合物,例如下面列出的由制造商制备的那些。Rohm and Haas公司(现Dow Chemical公司的一部分):(i)大孔聚合物吸着剂,例如AmberliteTM XAD-1、AmberliteTM XAD-2、AmberliteTM XAD-4、AmberliteTM XAD-7、Amberlite XADTM 7HP、AmberliteTM XAD-8、AmberliteTM XAD-16、AmberliteTM XAD-16HP、AmberliteTM XAD-18、AmberliteTM XAD-200、AmberliteTM XAD-1180、AmberliteTM XAD-2000、AmberliteTM XAD-2005、AmberliteTM XAD-2010、AmberliteTM XAD-761和AmberliteTMXE-305,以及色谱级吸着剂,例如AmberchromTM CG71,s,m,c、AmberchromTM CG161,s,m,c、AmberchromTM CG 300,S,m,c和AmberchromTM CG1000,S,m,c。Dow Chemical公司:DowexTMOptiporeTML-493、DowexTM OptiporeTMv-493、DowexTM OptiporeTM V-502、DowexTMOptiporeTML-285、DowexTM Optipore TM L-323和DowexTM Optipore TMV-503。Lanxess(原来的Bayer和Sybron):LewatitTM VPOC1064MD PH、LewatitTM VPOC1163、LewatitTM OCEP63、LewatitTM S6328A、LewatitTM OC1066和LewatitTM60/150MIBK。Mitsu bishi Chemical公司:DiaionTM HP10、DiaionTM HP20、DiaionTM HP 21、DiaionTM HP 30、DiaionTM HP 40、DiaionTM HP 50、DiaionTM SP 70、DiaionTM SP 205、DiaionTM SP 206、DiaionTM SP 207、DiaionTM SP 700、DiaionTM SP 800、DiaionTM SP 825、DiaionTM SP 850、DiaionTM SP 875、DiaionTM HP 1MG、DiaionTM HP 2MG、DiaionTM CHP55A、DiaionTM CHP 55Y、DiaionTM CHP 20A、DiaionTM CHP 20Y、DiaionTM CHP 2MGY、DiaionTM CHP 20P、DiaionTM HP 20SS、DiaionTM SP 20SS和DiaionTM SP 207SS。Purolite公司:PurosorbTM AP 250和PurosorbTMAP 400。

太阳城集团本发明并不依赖电荷或配体-受体复合物结合反应来抑制或降低病原体毒性。Bacon Kurtz等人描述了使用酸性官能团附着到聚合物主链上以结合艰难梭状芽胞杆菌毒素A和毒素B的聚合物(美国专利6,890,523)。在Kurtz中的相互作用是离子性的,其中疏水性或亲水性基团附着到聚合物上以结合毒素。Chamot等(美国专利申请2006/009169)描述了使用连接到毒素结合部分的无机聚合物颗粒,该毒素结合部分包含与艰难梭状芽胞杆菌毒素A和毒素B相结合的寡糖序列。还描述了毒素结合表面孔尺寸大于毒素直径的2倍。Chamot描述了结合毒素以形成配体/受体样复合体的寡糖部分。

用作吸着剂的聚合物材料通常不被人和动物代谢,但可由特征为可生物降解的聚合物、可吸收的聚合物或二者的材料来合成。某些聚合物可以是不规则的或规则形状的颗粒,例如粉末、珠、或直径在0.1微米至2厘米范围内的其他形式。

在本发明中使用的聚合物优选地具有生物相容性和血液相容性的外表面涂层,但并不是绝对必要的,尤其是在某些情况下,例如经口或经直肠施用。这些涂层中的某些通过自由基接枝共价地与聚合物颗粒(例如珠)相结合。例如单体液滴转化为聚合物珠过程中,可发生自由基接枝。随着液滴内部单体的聚合并被转换成聚合物,分散剂涂布的和稳定的单体液滴变为与液滴表面共价结合。如果在悬浮聚合中使用的分散剂是不赋予生物相容性或血液相容性的分散剂,生物相容性和血液相容性的外表面涂层可以共价地接枝到预先形成的聚合物珠上。将生物相容性和血液相容性的涂层接枝到预先形成的聚合物珠上是在聚合物的单体或低分子量寡聚物存在下,通过激活自由基引发剂赋予表面涂层生物相容性或血液相容性。

施用的途径可以是全身的或局部的。在某些实施方案中,可以经口、经直肠或通过饲管给予组合物。可以在消化道内(包括在胃或肠的环境中)作为能够在外部或内部被润湿的干粉或其他干燥颗粒来提供吸着剂,可添加或不添加润湿剂(例如乙醇或异丙醇、可饮用的液体例如水或者其他载体流体)。其他可能的施用途径包括皮下或经皮递送。在一些实施方案中,施用是表面的。这样的方法包括眼部施用、施用到皮肤或伤口、直接施用到体腔或关节和递送到粘膜如鼻、经口、经阴道和经直肠递送或其他向消化道的递送。在一些实施方案中,处理是体外的。体外施用将包括通过含有吸着剂并将其返回到体内的装置来使流体循环以从血液或生理流体去除炎性介质。在一些实施方案中,这样的方法包括通过肠胃外途径的局部或全身施用。肠胃外施用包括静脉内、动脉内、皮下、腹膜内或肌内注射或输注;或颅内(包括鞘内或脑室内施用)。

吸着剂可以配制成例如散剂、片剂、胶囊剂、溶液剂、浆剂、乳剂、栓剂或在食品物质中。吸着剂可包装在便携瓶、小瓶、泡罩包装、袋子、小袋,或允许用于单个或多个剂量的其他容器中。根据用途,吸着剂可以是无菌的或未经灭菌的。可以通过标准方法使聚合物灭菌。这样的方法是本领域技术人员公知的。可以将一系列剂量以适当的太阳城集团间隔(例如数小时)分别施用治疗有效的量。可通过本领域技术人员公知的方法来施用本发明的组合物。

提供的前面的描述是为了说明的目的并不应当被解释为限制本发明。虽然已经参考优选的实施方案或优选的方法对本发明进行了描述,要理解的是,本文中已经使用的词语是描述性和举例说明性的词语,而不是限制性的词语。此外,尽管本文已经参考特定的材料结构、方法、组合物和实施方案对本发明进行了描述,但是并非旨在将本发明限制于本文中所公开的细节,因为本发明延伸到所附权利要求范围之内所有的结构、方法、组合物和用途。此外,已经描述了来自组合物和方法的几个优点;本发明并不限制于包含任何或所有这些优点的组合物和方法。那些生物相容性聚合物技术领域的技术人员得益于本说明书的教导,可实现对如本文所述的本发明的多种修改并且可做出变化而不脱离由所附权利要求书所限定的本发明的范围和精神。此外,一项所描述实施方案的任何特征可适用于本文中所描述的其他实施方案。例如,相对于特定的毒素吸收实施方案的讨论,与生物相容性聚合物的设计相关的任何特征或优点可以适用于本文中所描述的任何其他毒素吸收的实施方案。

通过以下非限制性实施例进一步举例说明本发明。

实施例

实施例1-18

在实施例1-18中描述了以其孔结构和其合成表征的十八多孔聚合物吸附剂。在实施例19中给出了孔结构的表征。

合成过程由以下组成:(1)制备水相,(2)制备有机相,(3)进行悬浮聚合,(4)纯化所得的多孔聚合物吸着剂产品(分离净化(work-up)),和(5)添加血液相容性涂层。

太阳城集团以下合成方法普遍适合于所制作的所有样品。每种聚合物样品之间的合成过程不同;参考表6,以下是为了查看每个实施例的具体运行条件的通用方法。

太阳城集团反应器设置。在5L或0.5L的釜式反应器中安装有顶置式搅拌器(over-head stirrer)、水冷式冷凝器、多级搅拌器叶片、热电偶和鼓泡器。对于0.5L的釜,在顶盖和釜底之间安装垫圈。5L的设置在顶盖和釜底之间安装有一个挡板组件和两个扁平的橡胶垫圈。将所有未使用的端口都覆盖上相应的塞。用由安装有上述热电偶的温度控制器调节的加热套控制温度。

聚合。在室温(RT)下将聚乙烯醇(“PVA”)分散在一半的水添加物中,然后加热至70℃。然后将剩余的盐:MSP、DSP、TSP和亚硝酸钠溶解于剩余的水添加量(water charge)中。将PVA溶液和盐溶液分别添加到反应器中,并且边搅拌边加热到期望的反应温度。在搅拌速度设定在适于形成合适的液滴尺寸的每分钟转数(“rpm”)下,将预混合的有机相(包括引发剂)倾入到反应器中的水相上。一旦温度达到设定点,将反应计时器设定为16个小时并启动,使反应继续进行。

太阳城集团分离净化。溶剂水平标记。冷却后,将溶剂虹吸出至珠平面。然后用50℃至70℃的水,以每半小时1床体积的速率洗涤珠5次。如果聚合物是改性的,跳过以下分离净化步骤(参见表6)。然后用室温的甲醇以每10分钟1柱床体积的速率洗涤珠3次。将聚合物通过索氏抽提器(soxhlet apparatus)过夜提取。使聚合物进行8小时蒸汽汽提。蒸汽汽提完成后,在异丙醇中使聚合物再润湿,然后用纯化水筛分至期望的颗粒大小。然后使聚合物在烘箱中于100℃下干燥。

改性设置。釜式反应器中安装有顶置式搅拌器、多级搅拌器叶片和热电偶。将所有未使用的端口覆盖上相应的塞和作为通风孔的一个开放式软管接头。在顶盖和底釜之间安装有垫圈。用由安装有上述热电偶的温度控制器调节的加热套控制温度。

改性反应。用异丙醇以每小时约1床体积洗涤聚合物10次,然后用纯化水以每小时约1床体积洗涤10次。将聚合物筛分至期望的颗粒大小,并添加到反应器设置中。将过量的水虹吸出至正好高于床平面,并且随后添加要加入的水。将温度控制器设定在40℃,然后启动。也启动顶置式搅拌器。添加每个试剂的同时该系统倾斜升温至40℃设定点。当温度在30℃至34℃之间时,添加水中的过硫酸铵(AMPS)。当在35℃至36℃之间时,添加NNNN-四甲基乙二胺(TMED)和水。当在39℃至40℃之间时,添加乙烯基吡咯烷酮(VP)和水。当温度达到40℃时,启动2个小时的反应计时器;使反应继续进行。冷却后,将溶剂虹吸出至珠平面。然后用室温的水以每半小时1床体积的速率洗涤珠3次。使珠进行6小时的蒸汽汽提。在异丙醇中使珠再润湿,然后在纯净H2O中洗涤10次。然后使聚合物在烘箱中于100℃下干燥。

这个过程产生了球状多孔聚合物珠形式的干净的干吸着剂。

表6:用于实施例1-18的合成条件。

太阳城集团实施例19:孔结构表征

太阳城集团用Micromeritics Autopore IV9500V1.09汞贯入度仪(汞侵入仪)或者Micromeritics ASAP 2010仪(N2解吸)分析吸附剂聚合物的孔结构。结果示于图1,其中孔体积被绘制为孔径的函数。图1是用于实施例1-18的对数微分孔结构。

实施例20:孔结构特征

在孔尺寸范围内将各种吸着剂聚合物的孔体积分成几类,并且在表7和8中提供了这些数值。在第一个范围中,容量孔体积(capacity pore volumc)是这样的孔体积:可接受蛋白质吸着并且由直径大于之孔的孔体积组成。有效的孔体积是这样的孔体积:选择性接受小于约50,000道尔顿的蛋白质并且由直径在100至范围内的孔直径组成。尺寸过大的孔体积是可接受大于约50,000道尔顿的蛋白质并且由直径大于之孔的孔体积组成。尺寸过小的孔体积是直径小于且不能接受大于约10,000道尔顿蛋白质之孔的孔体积。

太阳城集团在第二个范围中,容量孔体积是这样的孔体积:可接受蛋白质吸着并且由直径大于之孔的孔体积组成。有效的孔体积是这样的孔体积:选择性可接受小于约300,000道尔顿的蛋白质并且由直径在1000至范围内的孔直径组成。尺寸过大的孔体积是可接受大于300,000道尔顿的蛋白质并且由直径大于之孔的孔体积组成。尺寸过小的孔体积是直径小于并且不能接受大于约10,000道尔顿蛋白质之孔的孔体积。

太阳城集团在第三个范围中,容量孔体积是这样的孔体积:可接受蛋白质吸着并且由直径大于之孔的孔体积组成。有效的孔体积是这样的孔体积:选择性接受小于约1,000,000道尔顿的蛋白质并且由直径在10,000至40,范围内的孔直径组成。尺寸过大的孔体积是可接受大于1,000,000道尔顿的蛋白质并且由直径大于之孔的孔体积组成。尺寸过小的孔体积是直径小于并且不能接受大于约40,000道尔顿蛋白质之孔的孔体积。

太阳城集团表7提供了用于实施例1-18的孔体积和孔体积比例。

表7。

太阳城集团表8提供了用于实施例1-18的孔体积比例。

表8。

太阳城集团实施例21:体外艰难梭状芽胞杆菌毒素A(rTcdA)

太阳城集团这项研究的主要目的是评价聚合物珠(多孔珠ID为:TDG-057-118、RJR-090-136、RJR-090-091、RJR-090-137、RJR-090-023和RJR-090-178和无孔珠的ID:RT-075-1-14)与艰难梭状芽胞杆菌rTcdA结合的能力。使用八种类型无孔和无孔珠。以rTcdA的浓度在100μg/mL时进行评价。在2mL螺盖管中,于含有磷酸缓冲盐水的0.3ml最终工作体积中,使不含珠和20μL各自无孔珠和有孔珠与100(理想的是64.65)μg/ml的rTcdA进行孵育。添加毒素后,立即将各组中不含珠、含无孔珠或者多孔珠的管静置0.583小时,使珠沉降。从这些管中取出225μl样品。这些被指定为0.583小时样品。将取自1.5小时和2.5小时样品的管置于管辊上。从这些管中取出225μl样品。将所有样品储存在-20℃直到使用。收集所有样品之后,用BCA(二喹啉甲酸)蛋白质测定法(Thermo Scientific,目录号23225)评价留在每个样品中的蛋白质浓度。结果如下所示。珠TDG057-118以及RJR-090-136展现出最好的毒素去除率。

表9提供了用于实施例21的聚合物的重量。

表9。

太阳城集团艰难梭状芽胞杆菌毒素A的吸附结果示于表10中。

表10。

图2示出了艰难梭状芽胞杆菌毒素A随太阳城集团的去除。

太阳城集团实例22:体外艰难梭状芽胞杆菌毒素B(rTcdB)

这项研究的主要目的是评价相比于不含珠的对照,聚合物珠(多孔珠ID:RJR-090-016和无孔珠ID:RJR-090-014)与艰难梭状芽胞杆菌rTcdB毒素(在毒素浓度为25和100μg/mL时)体外结合并将其去除的能力。简言之,在2mL螺盖微量离心管中,于0.3ml最终工作体积的磷酸缓冲盐水中将不含珠或者无孔珠(≈37.0μg干燥珠重量)或多孔珠(≈12.1μg干燥珠重量)的固定体积(各自46μL)与25或100μg/mL的rTcdB进行孵育。进行该实验以使空隙容积(珠以外)保持恒定在0.3mL。与无孔珠相比,多孔珠的重量反映其高的孔隙度。添加毒素后,立即将各组中不含珠、含无孔珠或者多孔珠的管静置45分钟且不搅拌,以使珠通过重力沉降。从这些管中取出225μl样品并储存在-20℃。这些被指定为0.75小时样品。在管辊上将分别被指定为1.75小时和2.75小时样品的管连续混合。分别在实验开始后1.0小时和2.0小时的太阳城集团点,将管从辊上取走,在架子上静置45分钟以使珠沉降。从这些管中取出225μl样品。将所有样品储存在-20℃直到使用。收集所有样品之后,用BCA(二喹啉甲酸)蛋白质测定法(Thermo Scientific,目录号23225)评价留在每个样品中的蛋白质浓度。在如下表11中所示的结果代表各等分样品中rTcdB毒素随太阳城集团的浓度。虽然无孔珠展现出与毒素的一些结合,但是多孔珠的贡献是清楚的,特别是在较高浓度时,其中无孔珠明显饱和,但在多孔珠中没有观察到饱和。

太阳城集团艰难梭状芽胞杆菌毒素B的吸附结果示于表11中。

表11。

实施例23:体外艰难梭状芽胞杆菌毒素B(rTcdB)

这项研究的主要目的是评价Cytosorbents珠(多孔珠ID:TDG-057-118、RJR-090-136、RJR-090-091、RJR-090-137、RJR-090-023和RJR-090-087和无孔珠ID:RT-075-1-14)与艰难梭状芽胞杆菌rTcdB结合的能力。使用七种类型有孔和无孔珠以及不含珠的对照。以rTcdB的浓度在100μg/ml时进行评价。在2mL螺盖管中,于含有磷酸缓冲盐水的0.3ml最终工作体积中,使不含珠和20μL(样品的干重,参见下表11)的各自无孔珠和有孔珠与100(理想的是99.76)μg/mL的rTcdB进行孵育。

太阳城集团用于实施例19的聚合物的重量示于表12中。

表12。

添加毒素后,立即将各组中不含珠、含无孔珠或者多孔珠的管静置0.583小时,使珠沉降。从这些管中取出225μl样品。这些被指定为0.583小时样品。将取自1.5小时和2.5小时样品的管置于管辊上。从这些管中取出225μL样品。将所有样品储存在-20℃直到使用。收集所有样品之后,用BCA(二喹啉甲酸)蛋白质测定法(Thermo Scientific,目录号23225)评价留在每个样品中的蛋白质浓度。结果如下所示。珠RJR-090-136展现出最好的毒素去除率,随后是TDG 057-118和/或RJR-090-137。

艰难梭状芽胞杆菌毒素B的吸附结果示于表13中。

表13。

图3示出了艰难梭状芽胞杆菌毒素B随太阳城集团的去除。

实施例24-体外肉毒神经毒素A1型(BoNT/A1)的研究

太阳城集团这项研究的主要目的是评价聚合物珠(多孔珠ID:TDG-057-118和无孔珠ID:RT-075-14-1)的能力。使用两种类型有孔和无孔珠。以在磷酸缓冲盐水中BoNT/A1的浓度为10、50和100μg/ml进行评价。在2mL螺盖微量离心管中,于0.3ml最终工作体积中将不含珠或者无孔珠(≈32.1μg干燥珠重量)或多孔珠(≈5.5μg干燥珠重量)的固定体积(各自40μL)与10、50或100μg/mL的BoNT/A1进行孵育。进行该实验以使空隙容积(珠以外)保持恒定在0.3mL。与无孔珠相比,多孔珠的重量反映其高的孔隙度。添加BoNT/A1后,立即从各组中不含珠、含无孔珠或者多孔珠的管中取出225μl样品并储存在-20℃。这些被指定为0小时样品。将与1小时和2小时样品相关的管放置在管辊上并连续混合。在室温孵育1或2小时后,从合适的管中除出225μl样品。将所有样品储存在-20℃直到使用。收集所有样品之后,用BCA(二喹啉甲酸)蛋白质测定法(Thermo Scientific,目录号23225)评价留在每个样品中的蛋白质浓度。如表14中列出的结果中可见,与不含珠的对照或无孔珠相比,多孔珠在浓度高达100μg/mL时,去除了多于95%的BoNT/A1毒素。

肉毒神经毒素A1型的吸附结果示于表14。

表14

太阳城集团实施例25-体外志贺样毒素1的研究

这项研究的主要目的是评价CytoSorbents聚合物珠(多孔珠ID:TDG-071-167,大孔珠ID:RJR-090-013和无多孔珠ID:RT-075-14-1)与志贺样毒素1结合的能力。使用三种类型的有孔和无孔珠。以在磷酸缓冲盐水中志贺样毒素1的浓度为50和100μg/ml进行评价。在2mL螺盖微量离心管中,于0.3ml最终工作体积中将不含珠或者42μL的多孔珠(≈12.5μg干燥珠重量)、42μL的大孔珠(≈9.5μg干燥珠重量)和42μL的无孔珠(≈33.8μg干燥珠重量)与50或100μg/mL的志贺样毒素1进行孵育。

太阳城集团添加志贺样毒素1后,立即从各组中不含珠、含无孔珠或者多孔珠的管中取出225μg样品并储存在-20℃。这些被指定为0.25小时样品。将与1.25和2.25小时样品相关的管放置在管辊上并连续混合。在室温孵育1.25或2.25小时后,从合适的管中取出225μl样品。将所有样品储存在-20℃直到使用。收集所有样品之后,用BCA(二喹啉甲酸)蛋白质测定法(Thermo Scientific,目录号23225)评价留在每个样品中的蛋白质浓度。可以看出,与无孔珠相比,标准珠和大孔珠两者都具有更好的去除动力学。

志贺样毒素1的吸附结果示于表15。

表15。

太阳城集团实施例26:体外志贺样毒素2的研究

这项研究的主要目的是评价CytoSorbents聚合物珠(多孔珠ID:TDG-071-167,大孔珠ID:RJR-090-013和无孔珠ID:RT-075-14-1)与志贺样毒素2结合的能力。使用三种类型的有孔和无孔珠。以在磷酸缓冲盐水中志贺样毒素2的浓度为50和100μg/ml进行评价。在2mL螺盖微量离心管中,于0.3ml最终工作体积中将不含珠和42μL的多孔珠(≈12.5μg干燥珠重量)、42μL的大孔珠(≈9.5μg干燥珠重量)和42μL的无孔珠(≈33.8μg干燥珠重量)与50或100μg/ml的志贺样毒素2进行孵育。添加志贺样毒素2后,立即从各组中不含珠、含无孔珠或者多孔珠的管中取出225μl样品并储存在-20℃。这些被指定为0.25小时样品。将与1.25和2.25小时样品相关的管放置在管辊上并连续混合。在室温孵育1.25或2.25小时后,从合适的管中取出225μL样品。将所有样品储存在-20℃直到使用。收集所有样品之后,用BCA(二喹啉甲酸)蛋白质测定法评价留在每个样品中的蛋白质浓度。可以看出,与无孔珠相比,标准珠和大孔珠两者都具有更好的去除动力学。

志贺样毒素2的吸附结果示于表16。

表16。

实施例27:体外蓖麻毒素的研究

这项研究的主要目的是评价CytoSorbents聚合物珠(小多孔珠ID:TDG-057-145,改性的第1批-106/+45,大孔珠ID:RJR-090-016和无孔珠ID:RJR-090-014)与蓖麻毒素结合的能力。使用三种类型的有孔和无孔珠。以在磷酸缓冲盐水中蓖麻毒素的浓度为100和1000μg/ml进行评价。在2mL螺盖微量离心管中,于0.3mL最终工作体积中将不含珠或者43μL的多孔珠(≈14.6μg干燥珠重量)、43μL的大孔珠(≈11.3μg干燥珠重量)和44μL的无孔珠(≈35.4μg干燥珠重量)与100或1000μg/ml的蓖麻毒素进行孵育。添加蓖麻毒素后,立即从各组中不含珠、含无孔珠或者多孔珠的管中取出225μL样品并储存在-20℃。这些被指定为0.75小时样品。将与1.75和2.75小时样品相关的管放置在管辊上并连续混合。在室温孵育1.75或2.75小时后,从合适的管中取出225μL样品。将所有样品储存在-20℃直到使用。收集所有样品之后,用BCA(二喹啉甲酸)蛋白质测定法(Thermo Scientific,目录号23225)评价留在每个样品中的蛋白质浓度。可以看到,与最初的大孔珠相比,小孔珠具有更好的去除动力学。不含珠的对照或无孔珠分别没有去除毒素和去除不超过9%的毒素。

太阳城集团蓖麻毒素的吸附结果示于表17中。

表17。

例28:体外霍乱毒素的研究

太阳城集团这项研究的主要目的是评价CytoSorbentsTM聚合物珠(小孔珠ID:TDG-057-145,改性的第1批,-106/+45,大孔珠ID:RJR-090-016和无孔珠ID:RJR-090-014)与霍乱毒素结合的能力。使用三种类型的有孔和无孔珠。以在磷酸缓冲盐水中霍乱毒素的浓度为50和100μg/ml进行评价。在2mL螺盖微量离心管中,于0.3mL最终工作体积中将不含珠和43μL的标准多孔珠(≈14.6μg干燥珠重量)、43μL的大孔珠(≈11.3μg干燥珠重量)和44μL的无孔珠(≈35.4μg干燥珠重量)与50或100μg/mL的霍乱毒素进行孵育。添加霍乱毒素后,立即从各组中不含珠、含无孔珠或者多孔珠的管中取出225μL样品并储存在-20℃。这些被指定为0.75小时样品。将与1.75和2.75小时样品相关的管放置在管辊上并连续混合。在室温孵育1.75或2.75小时后,从合适的管中取出225μL样品。将所有样品储存在-20℃直到使用。收集所有样品之后,用BCA(二喹啉甲酸)蛋白质测定法(Thermo Scientific,目录号23225)评价留在每个样品中的蛋白质浓度。可以看到,与大孔珠相比,小孔珠具有更好的去除动力学。不含珠的对照或无孔珠分别没有去除毒素和去除不超过25%的毒素。

霍乱毒素的吸附结果示于表18中。

表18。

实施例29:体外产气荚膜梭状芽胞杆菌肠毒素的研究

太阳城集团这项研究的主要目的是评价CytoSorbents聚合物珠(多孔珠ID:TDG-071-167,大孔珠ID:TDG-057-118和无孔珠ID:RT-075-14-1)与产气荚膜梭状芽胞杆菌肠毒素结合的能力。使用三种类型的有孔和无孔珠。以在磷酸缓冲盐水中产气荚膜梭状芽胞杆菌肠毒素的浓度为50和100(理想的是11.46和31.42)μg/ml进行评价。在2mL螺盖微量离心管中,于0.3mL最终工作体积中将不含珠和40μL的多孔珠(≈11.9μg干燥珠重量)、40μL的大孔珠(≈9.0μg干燥珠重量)和40μL的无孔珠(≈32.1μg干燥珠重量)与50或100(理想的是11.46和31.42)μg/ml的产气荚膜梭状芽胞杆菌肠毒素进行孵育。添加产气荚膜梭状芽胞杆菌肠毒素后,立即从各组中不含珠、含无孔珠或者多孔珠的管中取出225μl样品并储存在-20℃。这些被指定为0.5小时样品。将与1.5和2.5小时样品相关的管放置在管辊上并连续混合。在室温孵育1.5或2.5小时后,从合适的管中取出225μL样品。将所有样品储存在-20℃直到使用。收集所有样品之后,用BCA(二喹啉甲酸)蛋白质测定法(Thermo Scientific,目录号23225)评价留在每个样品中的蛋白质浓度。可以看到,与标准的珠和无孔珠相比,大孔珠具有更好的从31.42mg/mL毒素中去除的动力学。不含珠的对照或无孔珠没有去除任何的毒素。

太阳城集团产气荚膜梭状芽胞杆菌肠毒素的吸附结果示于表19中。

表19

太阳城集团实施例30:体外葡萄球菌肠毒素B的研究

这项研究的主要目的是评价CytoSorbents聚合物珠(小孔珠ID:TDG-057-145和无孔珠ID:RJR-090-014)与葡萄球菌肠毒素B结合的能力。使用三种类型的有孔和无孔珠。以在磷酸缓冲盐水中葡萄球菌肠毒素B的浓度为50和100(理想的是43.02和97.85)μg/ml进行评价。在2mL螺盖微量离心管中,于0.3mL最终工作体积中将不含珠和43μL的多孔珠(≈14.6μg干重)和44μL的无孔珠(≈35.4μg干重)与50或100(理想的是43.02和97.85)μg/ml的葡萄球菌肠毒素进行孵育。添加葡萄球菌肠毒素B后,立即从各组中不含珠、含无孔珠或者多孔珠的管中取出225μL样品并储存在-20℃。这些被指定为0.75小时样品。将与1.75和2.75小时样品相关的管放置在管辊上并连续混合。在室温孵育1.75或2.75小时后,从合适的管中取出225μL样品。将所有样品储存在-20℃直到使用。收集所有样品之后,用BCA(二喹啉甲酸)蛋白质测定法评价留在每个样品中的蛋白质浓度。可以看到,与无孔珠相比,小孔珠具有更好的去除动力学(在0.75小时高于或等于98%)。不含珠的对照或无孔珠没有有效地去除毒素。

太阳城集团葡萄球菌肠毒素B的吸附结果示于表20中。

表20。

太阳城集团实施例31:体外金黄色葡萄球菌α溶血素

太阳城集团这项研究的主要目的是评价两种不同的CytoSorbents多孔珠类型(小孔:RJR-100-144;大孔:RJR-100-168)和无孔珠(RJR-090-158)与金黄色葡萄球菌α溶血素结合的能力。以在磷酸缓冲盐水中金黄色葡萄球菌α溶血素的浓度为50和100μg/ml进行评价。在1.5mL螺盖管中,于0.3mL最终工作体积中将不含珠和40μL的多孔珠(≈11.9μg干燥珠重量)、40μL的大孔珠(≈9.0μg干燥珠重量)和40μL的无孔珠(≈32.1μg干燥珠重量)与50或100μg/ml的毒素进行孵育。添加金黄色葡萄球菌α溶血素肠毒素后,立即从各组中不含珠、含无孔珠或者多孔珠的管中取出225μl样品并储存在-20℃。将与0.5、1.5和2.5小时样品相关的管放置在管辊上并连续混合。在室温孵育0.5、1.5和2.5小时后,从合适的管中取出225μL样品。将所有样品储存在-20℃直到使用。收集所有样品之后,用BCA(二喹啉甲酸)蛋白质测定法(Thermo Scientific,目录号23225)评价留在每个样品中的蛋白质浓度。BCA测定显示多孔聚合物比不含珠的对照和无孔珠具有更好的去除动力学。

太阳城集团通过BCA蛋白测定法和NanoDrop得到的金黄色葡萄球菌α溶血素的吸附结果示于下表21中。

表21。

实施例32:体外大肠杆菌STa毒素

这项研究的主要目的是评价CytoSorbents多孔珠类型(珠#1:SFA-102-106,珠#2:CytoSorb Lot 08311,珠#3:TDG-057-118)和无孔珠(RT-075-14-1)与大肠杆菌STa毒素结合的能力。以在磷酸缓冲盐水中大肠杆菌STa毒素的浓度为50和100μg/mL进行评价。在1.5mL螺盖管中,于0.3mL最终工作体积中将不含珠、40μL的SFA-102-106(≈9.0μg干燥珠重量)、40μL的CytoSorb Lot 083111(≈11.9μg干燥珠重量)、40μL的TDG-057-118(≈9.0μg干燥珠重量)和40μL的无孔珠(≈32.1μg干燥珠重量)与50或100μg/ml的大肠杆菌STa毒素进行孵育。添加大肠杆菌STa毒素后,立即从各组中不含珠、含无孔珠或者多孔珠的管中取出225μl样品并储存在-20℃。将与0.5小时、1.5小时和2.5小时样品相关的管放置在管辊上并连续混合。在室温孵育0.5小时、1.5小时或2.5小时后,从合适的管中取出225μl样品。将所有样品储存在-20℃直到使用。收集所有样品之后,用BCA(二喹啉甲酸)蛋白质测定法(Thermo Scientific,目录号23225)评价留在每个样品中的蛋白质浓度。BCA测定显示所有的3种多孔聚合物比不含珠的对照和无孔珠具有更好的去除动力学。

大肠杆菌STa毒素吸附结果示于表22。

表22

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