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一种苦豆子多糖口服制剂及其制备方法.pdf

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一种 豆子 多糖 口服 制剂 及其 制备 方法
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摘要
申请专利号:

CN201110007885.4

申请日:

20110114

公开号:

太阳城集团CN102579563A

公开日:

20120718

当前法律状态:

有效性:

有效

法律详情:
IPC分类号: A61K36/489,A61K9/00,A61P35/00,A61P37/04 主分类号: A61K36/489,A61K9/00,A61P35/00,A61P37/04
申请人: 天津市医药科学研究所
发明人: 陶遵威,郑夺,王文彤,张岩,马丽娜
地址: 300020 天津市和平区多伦道79号
优先权: CN201110007885A
专利代理机构: 北京安博达知识产权代理有限公司 代理人: 徐国文
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法律状态
申请(专利)号:

太阳城集团CN201110007885.4

授权太阳城集团号:

法律状态太阳城集团日:

法律状态类型:

摘要

本发明涉及一种苦豆子多糖口服制剂及其制备方法,其特征在于所述口服制剂包括按重量百分比计的苦豆子多糖5-80%和药用辅料;制得的口服制剂不仅方便患者携带使用,副作用较小,安全性较高;制备方法采用:1)粉碎;2)醇提;3)水提;4)醇沉;5)酶解、脱色及除蛋白;6)柱层脱色分离;7)柱层纯化分离;8)制剂;该制备方法可以制备多种进口服剂型,方便患者使用。

权利要求书

太阳城集团1.一种苦豆子多糖口服制剂,其特征在于所述口服制剂包括按重量百分比计的苦豆子多糖5%-80%和药用辅料。2.根据权利要求1所述的苦豆子多糖口服制剂,其特征在于所述口服制剂包括按重量百分比计的苦豆子多糖20%-60%和药用辅料。3.根据权利要求1所述的苦豆子多糖口服制剂,其特征在于所述口服制剂包括颗粒剂、片剂、丸剂、胶囊剂或口服液。4.根据权利要求1所述的苦豆子多糖口服制剂的制备方法,包括以下步骤:1)粉碎:取苦豆子原药材,粉碎,过10-60目筛;2)醇提:取步骤(1)过筛后的苦豆子,将其装入渗漉柱内,用浓度为30%-100%的乙醇浸泡18-24h;再以浓度为30%-100%的乙醇为溶剂,以流速10-15ml/min,渗漉提取,得到苦豆子中所含生物碱成分;至渗漉提取液与碘化铋钾反应无颜色变化时停止渗漉,取苦豆子药渣,晾干备用;3)水提:向步骤(2)晾干后的固体产物中加入体积为该固体产物6-15倍量的水,于60-110℃,回流1-5h得水提物;4)醇沉:将步骤(3)得到的水提物于35-90℃减压浓缩成密度为1.02-1.1的液体,加入乙醇至乙醇终浓度为40-90%醇沉,4℃冰箱放置10-48h,以2000-5000r/min速率离心,取沉淀,得粗糖提取物,粗糖提取物经水复溶后,再加入乙醇至浓度为70-90%放置10-48h,以2000-5000r/min速率离心,取沉淀,冷冻干燥得棕褐色粗糖粉末;5)酶解、脱色及除蛋白:取上述粗糖粉末按比例添加淀粉酶,于85-95℃保温20-40min;加质量百分数为1-3%的活性炭于40-70℃回流30-50min脱色、以2000-5000r/min速率离心;取上清液采用Sevage法脱蛋白,重复3-5次,取水层浓缩、醇沉、离心、冷冻干燥,得到灰白色粉末;6)柱层脱色分离:将上述灰白色粉末和选自纳米大孔氧化铝、纤维素DEAE-52以及NKA、NKA-II、AB-8、S-8、X-5、H103、D301R、D201、001×7型树脂中的一种载体按重量比为1∶10-100的比例上样,采用浓度为0.01%-2%的醋酸铵溶液或氯化钠溶液洗脱液梯度洗脱,将洗脱液浓缩,透析24-48h,醇沉,过夜,以2000-5000r/min速率离心,取沉淀冷冻干燥,得到白色苦豆子多糖粉末;7)柱层纯化分离:将上述白色苦豆子多糖粉末和载体按重量比为1∶10-100的比例上样,采用浓度为0.01%-2%的醋酸铵溶液或氯化钠溶液洗脱液梯度洗脱,将洗脱液浓缩,透析24-48h,醇沉,过夜,以2000-5000r/min速率离心,取沉淀冷冻干燥,得到苦豆子多糖。8)制剂:按照苦豆子多糖重量5%-80%,其他药用辅料余量的比例,制成颗粒剂、片剂、小丸剂、胶囊剂或口服液。5.根据权利要求4所述的苦豆子多糖口服制剂的制备方法,其特征在于所述洗脱液为浓度0.01%-2%的醋酸铵溶液或氯化钠溶液。6.根据权利要求1所述的苦豆子多糖口服制剂的制备方法,其特征在于所述药用辅料为选自交联聚维酮、糊精、淀粉、糖粉、微晶纤维素、糖粉、硬脂酸镁中的一种或几种的混合物。7.根据权利要求4所述的苦豆子多糖口服制剂的制备方法,其特征在于所述颗粒剂制备包括如下步骤:将5%-80%苦豆子多糖、1%-5%交联聚维酮和糊精、淀粉、糖粉一种或几种余量混合均匀制成软材,用制粒机制颗粒,干燥、整粒即得颗粒剂。8.根据权利要求4所述的苦豆子多糖口服制剂的制备方法,其特征在于所述片剂制备包括如下步骤:将重量百分比计的5%-80%苦豆子多糖、3%交联聚维酮、糊精、淀粉、微晶纤维素、糖粉、硬脂酸镁其中一种或几种余量制成软材,用制粒机制颗粒,干燥后压片。9.根据权利要求4所述的苦豆子多糖口服制剂的制备方法,其特征在于所述丸剂制备包括如下步骤:将按重量百分比计的5%-80%苦豆子多糖、1%-5%交联聚维酮和糊精、淀粉、微晶纤维素、糖粉其中一种或几种余量;以空白微晶纤维素为母核,以粉末沉积的方式,利用离心造粒机制备小丸。

说明书

技术领域

太阳城集团本发明涉及到一种苦豆子多糖口服制剂及其制备方法,尤其作为抗肿瘤药物和免疫增强剂的应用,属中药制剂技术领域。

背景技术

苦豆子(Sophora alopecuroides L.)系豆科槐属植物,是一种多年生草本植物。苦豆子全株味苦性寒,药用根、茎、全草及种子,具有清热解毒、祛风燥湿、止痛杀虫等作用。随着现代药理药效学研究的不断深入,苦豆子的药用价值被医药界所公认。

苦豆子是重要的药用植物资源和饲用植物资源,早在1914年国外就从苦豆子籽实中提出“苦参总碱”。世界性研究苦豆子始于20世纪30年代初,前苏联学者用提出的“苦参总碱”入药后,发现具有清热解毒,抗菌消炎等作用,又分离出槐定碱、槐胺碱。此后,波兰、美国学者相继研究报导了苦豆子植物体内的多种化学成份。1930年被正式列入《美国药典》,在世界上广泛引起重视并用于医药界,随后美国抗癌研究中心发现苦参碱中槐果碱在临床上有抗癌效果。

国内研究始于1971年,为了开发资源,1975年研制的苦豆子生物碱制剂“苦豆子片”治疗腹泻新药,被正式载入1977年版《中国药典》,现改名为“克泻灵片”。1983年开发出“苦参碱制剂妇炎栓”,用于治疗妇科疾病。1984年国内建成了第一条苦豆子生物碱工业生产线,生产苦豆总碱、苦参素、苦参碱、槐定碱等,开始了苦豆子生物碱系列产品的批量生产。

苦豆子的化学成分主要是蛋白质、糖类、有机酸、黄酮类、色素和生物碱。苦豆子生物碱属于喹诺里西啶生物碱,由三价氮原子形成的稠合的二个哌啶环,又称双稠哌啶,仍属于哌啶或吡啶的衍生物。按其结构可分为3个类型:即羽扇豆碱,二环型;金雀花碱,三环型;鹰爪豆碱,四环型。

太阳城集团目前从苦豆子中提取分离及鉴定的生物碱有:苦参碱、槐果碱、槐胺碱、新槐胺碱、槐定碱、苦参碱-N-氧化物、槐果碱-N-氧化物、槐定碱-N-氧化物、3-d-羟荃槐定碱、13,14-脱氢槐定碱、N-羟定槐定碱、N-羟荃-13,14-脱氢槐定碱、苦豆碱、N-甲基苦豆碱、烯丙基苦豆碱、金雀花碱、N-甲村金雀花碱、鹰啶叶碱、三巴豆荃基四胺及具有羽扁豆结构特点的两种新生物碱,共21种生物碱。

由于苦豆子的根上结有大量的根瘤,固氮能力很强,因此是一种很好的绿肥植物。在新疆农村,农民将收割的苦豆子新鲜枝叶埋入瓜和葡萄的根部,结出来的西瓜、甜瓜和葡萄都会又大又甜。

苦豆子体内含有26种以上的生物碱单体,全株味极苦,成为荒漠草原及农田上生长的一种有毒植物。苦豆子主要生物碱为喹里西啶生物碱,一般称之为羽扇生物碱,具有抗病毒、抗肿瘤、抗心律失常、抗炎、抗变态反应、抗溃疡、抗升高白细胞、平喘、清热、止痛、杀虫、镇静、镇痛和多种保健功效。这就是民间用药中的“以毒攻毒”的治疗方法,民间用其根治疗喉痛、咳嗽及湿疹等。根、茎、叶和花可作为提取生物碱的原料,广泛用于医药和生物农药的制造。

在苦豆子所含的许多生物碱中,科学家们提炼出了苦参素,苦参素对改善肝脏生物化学指标及抗乙肝病毒具有良好效果,已经制成了注射制剂和口服制剂。目前,将从苦豆子中提取的多糖制成口服制剂的文献尚未见报道。

发明内容

太阳城集团本发明的目的在于提供一种苦豆子多糖口服制剂,该多糖所含杂质较少,经药理筛选实验证明苦豆子多糖具有有效抗肿瘤活性和免疫增强作用,制得的口服制剂不仅方便患者携带使用,且副作用较小,安全性较高。

本发明的另一个目的在于提供一种苦豆子多糖口服制剂的制备方法。

本发明提供的一种苦豆子多糖口服制剂,其改进之处在于所述口服制剂包括按重量百分比计的苦豆子多糖5%-80%和药用辅料。

本发明提供的第一优选的苦豆子多糖口服制剂,所述口服制剂包括按重量百分比计的苦豆子多糖20%-60%和药用辅料。

本发明提供的第二优选的苦豆子多糖口服制剂,所述口服制剂包括颗粒剂、片剂、丸剂、胶囊剂或口服液。

太阳城集团本发明提供的苦豆子多糖口服制剂的制备方法,包括以下步骤:

太阳城集团1)粉碎:取苦豆子原药材,粉碎,过10-60目筛;

2)醇提:取步骤(1)过筛后的苦豆子,将其装入渗漉柱内,用浓度为30%-100%的乙醇浸泡18-24小时;再以浓度为30%-100%的乙醇为溶剂,以流速10-15ml/min,渗漉提取,得到苦豆子中所含生物碱成分;至渗漉提取液与碘化铋钾反应无颜色变化时停止渗漉,取苦豆子药渣,晾干备用;

3)水提:向步骤(2)晾干后的固体产物中加入体积为该固体产物6-15倍量的水,于60-110℃,回流1-5h得水提物;

太阳城集团4)醇沉:将步骤(3)得到的水提物于35-90℃减压浓缩成密度为1.02-1.1的液体,加入乙醇至乙醇终浓度为40%-90%醇沉,4℃冰箱放置10-48h,以2000-5000r/min速率离心,取沉淀,得粗糖提取物,粗糖提取物经水复溶后,再加入乙醇至浓度为70%-90%放置10-48h,以2000-5000r/min速率离心,取沉淀,冷冻干燥得棕褐色粗糖粉末;

太阳城集团5)酶解、脱色及除蛋白:取上述粗糖粉末按比例添加淀粉酶,于85-95℃保温20-40分钟;加质量百分数为1%-3%的活性炭于40-70℃回流30-50min脱色、以2000-5000r/min速率离心;取上清液采用Sevage法脱蛋白,重复3-5次,取水层浓缩、醇沉、离心、冷冻干燥,得到灰白色粉末;

太阳城集团6)柱层脱色分离:将上述灰白色粉末和选自纳米大孔氧化铝、纤维素DEAE-52以及NKA、NKA-II、AB-8、S-8、X-5、H103、D301R、D201、001×7型树脂中的一种载体按重量比为1∶10-100的比例上样,采用浓度为0.01%-2%的醋酸铵溶液或氯化钠溶液洗脱液梯度洗脱,将洗脱液浓缩,透析24-48h,醇沉,过夜,以2000-5000r/min速率离心,取沉淀冷冻干燥,得到白色苦豆子多糖粉末;

太阳城集团7)柱层纯化分离:将上述白色苦豆子多糖粉末和载体按重量比为1∶10-100的比例上样,采用浓度为0.01%-2%的醋酸铵溶液或氯化钠溶液洗脱液梯度洗脱,将洗脱液浓缩,透析24-48h,醇沉,过夜,以2000-5000r/min速率离心,取沉淀冷冻干燥,得到苦豆子多糖。

8)制剂:按照苦豆子多糖重量5%-80%,其他药用辅料余量的比例,制成颗粒剂、片剂、小丸剂、胶囊剂或口服液。

本发明提供的第一优选的苦豆子多糖口服制剂的制备方法,所述洗脱液为浓度0.02%-2%的醋酸铵溶液或氯化钠溶液。

太阳城集团本发明提供的第二优选的苦豆子多糖口服制剂的制备方法,所述药用辅料为选自交联聚维酮、糊精、淀粉、糖粉、微晶纤维素、糖粉、硬脂酸镁中的一种或几种的混合物。

本发明提供的第三优选的苦豆子多糖口服制剂的制备方法,所述颗粒剂制备包括如下步骤:

太阳城集团将5%-80%苦豆子多糖、1%-5%交联聚维酮和糊精、淀粉、糖粉一种或几种余量混合均匀制成软材,用制粒机制颗粒,干燥、整粒即得颗粒剂。

本发明提供的第四优选的苦豆子多糖口服制剂的制备方法,所述片剂制备包括如下步骤:

将重量百分比计的5%-80%苦豆子多糖、3%交联聚维酮、糊精、淀粉、微晶纤维素、糖粉、硬脂酸镁其中一种或几种余量制成软材,用制粒机制颗粒,干燥后压片。

本发明提供的第五优选的苦豆子多糖口服制剂的制备方法,所述丸剂制备包括如下步骤:

太阳城集团将按重量百分比计的5%-80%苦豆子多糖、1%-5%交联聚维酮和糊精、淀粉、微晶纤维素、糖粉其中一种或几种余量;以空白微晶纤维素为母核,以粉末沉积的方式,利用离心造粒机制备小丸。

另外,苦豆子多糖口服液制备,包括如下步骤:将按重量百分比计的苦豆子多糖5%-80%和药用辅料余量,用常规方法制成口服液。

太阳城集团其次,本发明采用洗脱液梯度洗脱,使得苦豆子多糖的纯度明显提高,产率增加;纯化的技术除了以上提供的几种树脂材料外,采用由天津神能科技有限公司提供的纳米氧化铝大孔树脂,目前,该种树脂为新研发产品,其应用尚处于试验阶段,该树脂通过将硫酸和偏铝酸钠混合加热后经干燥得到,该树脂比普通的氧化铝树脂孔径较大,吸附能力较强,该公司将此树脂运用于石油化工领域,但没有应用到医药领域,本发明将此树脂用于对苦豆子多糖进行纯化;通过去比表面积大吸附力强的特点、使得苦豆子多糖的纯度明显提高,处理所得上清液最后经减压浓缩、醇沉、离心、冷冻干燥等过程可得苦豆子多糖精品;得到的苦豆子多糖精品通过药剂学方法,可制成医药学上的各种剂型。

一般豆类中的淀粉含量较高,本发明采用在常温下采用浓度为30%-100%的乙醇浸泡,避免了淀粉在温度较高情况下糊化影响有效成分的提取。另外,苦豆子中的生物碱成分含量较高,通常情况下,含量较高的生物碱多采用稀酸或乙醇提取,但鉴于本发明要提取的为苦豆子多糖,采用稀酸可能会影响多糖的结构,且可能引入杂质。采用30%-100%的乙醇浸泡,及流速6-10ml/min条件下,可以最大程度提取生物碱,当流速大于10ml/min时,由于流速过快,苦豆子中的生物碱不能及时释放,当流速小于6ml/min时,由于流速过慢,生物碱已被溶解导致释放太阳城集团过长,不能最大程度提取生物碱。

太阳城集团采用浓度40%-100%的乙醇醇沉,使得上清液中有效成分最大限度的得到保留,且存在的生物碱得到有效去除。醇沉后静置10-48h,使绝大部分沉淀析出,若静置太阳城集团小于10h,则将导致部分苦豆子淀粉杂质不能有效去除。

由于苦豆子本身属豆科类,淀粉含量较高,获得的浸膏的粘稠性较大,将浸膏浓缩在密度为1.02-1.10范围,避免了发生有效成分絮凝现象,且浓度越大,生产成本越低;另外加入淀粉酶,使得淀粉通过酶的进一步催化水解获取多糖;采用柱层脱色分离进一步情制获取多糖。

本发明从提取过苦参素和苦参碱的苦豆子药渣中进行多糖提取。纯化的技术除了之前提供的几种树脂材料外,加入纳米大孔氧化铝树脂,这种树脂现今在多糖纯化领域未曾应用,其主要特点为吸附力强、比表面积大。

洗脱液浓度先后为:0.01%NaCl、0.02%NaCl、饱和氯化钠溶液;2%醋酸铵溶液,纯化后多糖含量大于90%。

太阳城集团与现有技术相比,本发明提供的一种苦豆子多糖口服制剂及其制备方法具有以下优点:

太阳城集团1、采用渗漉提取苦豆子总碱后剩余的药渣方法提取多糖,提取工艺简单,提取的多糖纯度高;

2、制备的多糖口服剂的剂型多种,可以方便患者携带、使用;

太阳城集团3、成本低,适合药物的工业化生产条件;

4、抗肿瘤活性很好,可以有效的用于肿瘤患者的治疗,同时可以从提高患者机体的免疫力;

太阳城集团5、中药成分较多,对患者的身体产生的副作用较小,因此患者用药相对安全,可以使得患者的病情得到有效治疗;

6、苦豆子多糖的成分在制备过程中得到充分的发挥。

附图说明

太阳城集团图1是:本发明提供的一种从苦豆子中提取多糖的方法-试验2混合四种单糖对照品衍生物色谱图;

图2是:本发明提供的一种从苦豆子中提取多糖的方法-试验3苦豆子多糖水解衍生物色谱图;

太阳城集团图3是:本发明提供的一种从苦豆子中提取多糖的方法-苦豆子多糖分子量测定色谱图;

图中:1:D-甘露糖、2:D-鼠李糖、3:D-葡萄糖、4:D-半乳糖。

具体实施方式

以下通过具体实施方式,对本发明提供的一种从苦豆子中提取多糖的方法做进一步更详细的说明。

相关试验

试验1苦豆子多糖相对分子质量测定

太阳城集团 1.1色谱条件的确定

太阳城集团流动相的选择:根据OHpak SB-804色谱柱条件,可采用三次蒸馏水、磷酸盐缓冲溶液或醋酸盐缓冲溶液做流动相,但缓冲液浓度控制在0.1~0.3mol/L之间,pH值控制在3.0~8.0之间;选用三次蒸馏水和0.2mol/LpH5.0磷酸盐缓冲液和醋酸盐缓冲液为流动相,以右旋糖酐作为分离试样在柱中进行分离检测;3种流动相对苦豆子多糖的分离效果都很好,出于保护色谱柱的考虑,选用三次蒸馏水作流动相;

流速的选择:根据色谱柱条件,流速应当不超过1.5ml/min,采用0.6、0.8、1.0、1.2ml/min的流速进行样品分离实验;

实验结果表明,出峰太阳城集团随着流速的加大而减少,其峰形也有所改变,随之柱压也明显升高,对多糖的分离效果也有所下降;采用0.8ml/min的流速,进样量20μl;

柱温的选择:根据色谱柱条件,柱温选择30℃。

1.2多糖分子量标准曲线的制作

分别精密称取右旋糖酐标准品Mw2000000、133800、84400、41100、21400、7100、4600、2500、180各50.0mg,用三次蒸馏水定容于5ml容量瓶中,配成10.0mg/mL的标准品溶液,按照1.3.1节中确定的色谱条件下分别进样,测得各色谱峰保留太阳城集团。应用岛津GPC软件以不同分子量标准右旋糖酐的保留太阳城集团(RT)为横坐标,相应的相对分子质量对数值(lgMw)为纵坐标,绘制标准曲线。

1.3苦豆子多糖样品测定

太阳城集团称取苦豆子多糖50.0mg,用三次蒸馏水定容于5ml容量瓶中,配成10.0mg/mL的样品溶液。按制作标准曲线的色谱条件进样,得到苦豆子多糖的保留太阳城集团和相对分子质量如下表1。

太阳城集团表1苦豆子多糖的保留太阳城集团和相对分子质量

太阳城集团 试验2柱前衍生化HPLC法分析苦豆子多糖中单糖组成

2.1方法以三氟乙酸水解苦豆子多糖,加入衍生化试剂1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮(PMP)生成衍生化产物,采用RP-HPLC法,色谱柱:C18色谱柱(250mm×4.6mm,5μm),流动相:乙腈-0.1mol·L-1磷酸盐缓冲液pH6.7(17∶83),流速:1.0mL·min-1,检测器:二极管阵列检测器,检测波长:254nm,柱温:35℃;结果苦豆子多糖由D-甘露糖、D-鼠李糖、D-葡萄糖、D-半乳糖等主要4种单糖组成;D-甘露糖、D-鼠李糖、D-葡萄糖、D-半乳糖的比例约450.76∶1∶4.45∶193.97;结论该方法可以准确的测定出苦豆子多糖中含有的各种单糖。

表2苦豆子多糖水解衍生物色谱测定对应参数

太阳城集团1∶254nm,8nm

太阳城集团 试验2苦豆子多糖抗肿瘤筛选

实验动物:昆明小鼠

动物肿瘤:S180(骨肉瘤)、HepA(肝癌胶水)、U14(宫颈癌)、EAC(艾氏胶水)测试样品:苦豆子多糖(除蛋白后);

肿瘤接种:取接种肿瘤7-10天状态良好的荷瘤(胶水型)动物,常规消毒后抽取少量胶水,推片瑞氏染色细胞分类证实肿瘤细胞数不少于75%后将胶水抽出,以胶水与生理盐水之比为1∶4比例稀释,制备成接种用的肿瘤细胞悬液;肿瘤细胞悬液的制备均在无菌条件下完成。吸取上述制备的肿瘤细胞混悬液0.2ml接种于小鼠右侧腋窝皮下,从取出肿瘤胶水至肿瘤接种完成在60min内完成。

分组与给药:肿瘤细胞接种后24小时动物分组并给药,所有动物按体重均匀分组,依实验要求不同分为6组,每组动物数量14只,雌雄各半;分组情况:正常对照组、荷瘤对照组、环磷酰胺组(阳性对照组)、苦豆子多糖低剂量(100mg/kg)、苦豆子多糖中剂量组(200mg/kg)、苦豆子多糖高剂量组(400mg/kg)。

给药方式:除环磷酰胺组为接种肿瘤24小时后腹腔一次性给药(50mg/kg)外,其余各组均为灌胃给药,每天一次,连续七天。

抗肿瘤活性评价:

末次给药后24h,称取小鼠体重,处死后取其肿瘤组织,并称重,以肿瘤生长抑制率来评价药物的体内抗癌效果。计算公式:

肿瘤生长抑制率=(1-T/C)×100%

式中,T为给药组平均瘤重,C为荷瘤对照组平均瘤重。

实验结果:

太阳城集团S180:环磷酰胺组抑瘤率77.11%;苦豆子多糖低剂量组抑瘤率23.17%;苦豆子多糖中剂量组抑瘤率23.94%;苦豆子多糖高剂量组抑瘤率43.11%。

太阳城集团肝癌:环磷酰胺组抑瘤率66.14%;苦豆子多糖低剂量组抑瘤率28.75%;苦豆子多糖中剂量组抑瘤率16.26%;苦豆子多糖高剂量组抑瘤率24.19%。

太阳城集团U14:t检验结果显示无统计学意义

太阳城集团EAC:环磷酰胺组抑瘤率44.14%;苦豆子多糖低剂量组抑瘤率34.22%;苦豆子多糖中剂量组抑瘤率22.99%;苦豆子多糖高剂量组抑瘤率19.46%;实验证明,苦豆子多糖具有一定的细胞免疫活性。

实施例1

以下实施例中,采用的苦豆子多糖口服制剂的制备方法,包括以下步骤:

太阳城集团1)粉碎:取苦豆子原药材,粉碎,过筛;

2)醇提:取已粉碎的苦豆子,装入渗漉柱内,用70%乙醇浸泡24h;以70%乙醇为溶剂,流速6ml/min,渗漉提取苦豆子中所含生物碱成分,直至渗漉提取液与碘化铋钾反应无颜色变化时停止渗漉;回收乙醇,得苦豆子药渣,风干备用;

3)水提:向上述风干的固体产物中加入其固体产物2倍体积的水,于60℃回流反应1h得水提物;

太阳城集团4)醇沉:将上述水提物于35℃减压浓缩成密度为1.02的液体,用40%的乙醇醇沉,室温放置10h,离心,取沉淀,得粗糖提取物,粗糖提取物经水溶后,再加入80%的乙醇醇沉放置10h,离心,取沉淀冷冻干燥,得棕褐色粗糖粉末;

5)酶解、脱色及除蛋白:取上述精制糖提取物按比例添加淀粉酶,置于85℃保温20min;加1%活性炭90℃回流30min、脱色、离心;取上清液Sevage法脱蛋白,重复3次,取水层浓缩、离心、冷冻干燥,得到灰白色粉末粉末;

6)柱层纯化分离:将上述白色苦豆子多糖粉末和载体按重量比为1∶10的比例上样,采用浓度为0.01%的醋酸铵溶液洗脱液梯度洗脱,将洗脱液浓缩,透析24h,醇沉,过夜,以2000r/min速率离心,取沉淀冷冻干燥,得到苦豆子多糖;

太阳城集团7)制剂:将苦豆子多糖重量5%、淀粉50%、糊精40%、5%交联聚维酮和淀粉浆混合均匀制成软材,用制粒机制颗粒,干燥、整粒即得颗粒剂。

实施例2

本实施例的苦豆子多糖口服制剂的制备方法,包括以下步骤:

1)粉碎:取苦豆子原药材,粉碎,过筛;

太阳城集团2)醇提:取已粉碎的苦豆子,装入渗漉柱内,用90%乙醇浸泡24h;以85%乙醇为溶剂,流速10ml/min,渗漉提取苦豆子中所含生物碱成分,直至渗漉提取液与碘化铋钾反应无颜色变化时停止渗漉;回收乙醇,得苦豆子药渣,风干备用;

太阳城集团3)水提:向上述风干的固体产物中加入其固体产物8倍体积的水,于110℃回流反应5小时得水提物;

4)醇沉:将上述水提物于90℃减压浓缩成密度为1.1的液体,用100%的乙醇醇沉,室温放置48h,离心,取沉淀,得粗糖提取物,粗糖提取物经水溶后,再加入100%的乙醇醇沉放置48h,离心,取沉淀;

5)酶解、脱色及除蛋白:取上述粗糖粉末按比例添加淀粉酶,于95℃保温40min;加质量百分数为3%的活性炭于70℃回流50min脱色、以5000r/min速率离心;取上清液采用Sevage法脱蛋白,重复5次,取水层浓缩、醇沉、离心、冷冻干燥,得到灰白色粉末;

6)柱层脱色分离:将上述灰白色粉末和纤维素DEAE-52树脂载体按重量比为1∶100的比例上样,采用浓度为2%的醋酸铵溶液洗脱液梯度洗脱,将洗脱液浓缩,透析48h,醇沉,过夜,以5000r/min速率离心,取沉淀冷冻干燥,得到白色苦豆子多糖粉末;

7)制剂:按照苦豆子多糖重量80%,1%交联聚维酮和糊精、淀粉、糖粉余量混合均匀制成软材,用制粒机制颗粒,干燥、整粒即得颗粒剂。

实施例3

太阳城集团苦豆子多糖口服制剂的制备方法,包括以下步骤:

太阳城集团1)粉碎:取苦豆子原药材,粉碎,过50目筛;

2)醇提:取步骤(1)过筛后的苦豆子,将其装入渗漉柱内,用浓度为80%的乙醇浸泡20h;再以浓度为60%的乙醇为溶剂,以流速12ml/min,渗漉提取,得到苦豆子中所含生物碱成分;至渗漉提取液与碘化铋钾反应无颜色变化时停止渗漉,取苦豆子药渣,晾干备用;

太阳城集团3)水提:向步骤(2)晾干后的固体产物中加入体积为该固体产物6倍量的水,于80℃,回流3h得水提物;

太阳城集团4)醇沉:将步骤(3)得到的水提物于70℃减压浓缩成密度为1.02的液体,加入乙醇至乙醇终浓度为50%醇沉,4℃冰箱放置30h,以3000r/min速率离心,取沉淀,得粗糖提取物,粗糖提取物经水复溶后,再加入乙醇至浓度为80%放置30h,以3000r/min速率离心,取沉淀,冷冻干燥得棕褐色粗糖粉末;

太阳城集团5)酶解、脱色及除蛋白:取上述粗糖粉末按比例添加淀粉酶,于85℃保温30min;加质量百分数为2.5%的活性炭于60℃回流40min脱色、以3000r/min速率离心;取上清液采用Sevage法脱蛋白,重复4次,取水层浓缩、醇沉、离心、冷冻干燥,得到灰白色粉末;

太阳城集团6)柱层脱色分离:将上述灰白色粉末和NKA载体按重量比为1∶10的比例上样,采用浓度为0.01%的氯化钠溶液洗脱液梯度洗脱,将洗脱液浓缩,透析30h,醇沉,过夜,以3000r/min速率离心,取沉淀冷冻干燥,得到白色苦豆子多糖粉末;

太阳城集团本实施例的片剂制备:将重量百分比计的80%苦豆子多糖、3%交联聚维酮溶液和17%糊精、淀粉、微晶纤维素、糖粉、硬脂酸镁余量制成软材,用制粒机制颗粒,干燥后压片。

实施例4

苦豆子多糖口服制剂的制备方法,包括以下步骤:

1)粉碎:取苦豆子原药材,粉碎,过50目筛;

太阳城集团2)醇提:取步骤(1)过筛后的苦豆子,将其装入渗漉柱内,用浓度为60%的乙醇浸泡20h;再以浓度为70%的乙醇为溶剂,以流速12ml/min,渗漉提取,得到苦豆子中所含生物碱成分;至渗漉提取液与碘化铋钾反应无颜色变化时停止渗漉,取苦豆子药渣,晾干备用;

太阳城集团3)水提:向步骤(2)晾干后的固体产物中加入体积为该固体产物8倍量的水,于70℃,回流4h得水提物;

4)醇沉:将步骤(3)得到的水提物于60℃减压浓缩成密度为1.1的液体,加入乙醇至乙醇终浓度为70%醇沉,4℃冰箱放置30h,以4000r/min速率离心,取沉淀,得粗糖提取物,粗糖提取物经水复溶后,再加入乙醇至浓度为80%放置38h,以5000r/min速率离心,取沉淀,冷冻干燥得棕褐色粗糖粉末;

5)酶解、脱色及除蛋白:取上述粗糖粉末按比例添加淀粉酶,于95℃保温40min;加质量百分数为3%的活性炭于70℃回流50min脱色、以3000r/min速率离心;取上清液采用Sevage法脱蛋白,重复5次,取水层浓缩、醇沉、离心、冷冻干燥,得到灰白色粉末;

6)柱层纯化分离:将上述白色苦豆子多糖粉末和载体按重量比为1∶10的比例上样,采田浓度为2%的氯化钠溶液洗脱液梯度洗脱,将洗脱液浓缩,透析24h,醇沉,过夜,以5000r/min速率离心,取沉淀冷冻干燥,得到苦豆子多糖。

本实施例的片剂制备:将重量百分比计的80%苦豆子多糖、3%交联聚维酮溶液和17%糊精、淀粉、微晶纤维素、糖粉、硬脂酸镁余量制成软材,用制粒机制颗粒,干燥后压片。

实施例5颗粒剂

太阳城集团本实施例的苦豆子多糖的提取同实施例4步骤1)-步骤7),本实施例的颗粒剂制备:

组分            重量百分比%

苦豆子多糖        5

乳糖              80

交联聚维酮        5

太阳城集团具体操作过程:将上述比例的苦豆子多糖与乳糖、交联聚维酮混合均匀,加入5%聚维酮溶液制成软材,用制粒机制颗粒,干燥、整粒即得颗粒剂。

实施例6 小丸剂

太阳城集团本实施例的苦豆子多糖的提取同实施例3步骤1)-步骤7),小丸剂制备:

组分             重量百分比%

苦豆子多糖         80

微晶纤维素         20

太阳城集团具体操作过程:以60-80空白微晶纤维素小丸为母核,以粉末沉积的方式,利用离心造粒机制备小丸。

实施例7片剂

本实施例的苦豆子多糖的提取同实施例2步骤1)-步骤7),片剂制备:

组分          重量百分比%

苦豆子多糖    60

太阳城集团淀粉          15

太阳城集团微晶纤维素    20

太阳城集团硬脂酸镁       5

制备:将上述比例的苦豆子多糖与其余组分混合均匀,加入淀粉浆制成软材,用制粒机制颗粒,干燥后压片。

实施例8颗粒剂制备

本实施例的苦豆子多糖的提取同实施例1步骤1)-步骤7),颗粒剂制备:

太阳城集团将20%苦豆子多糖、3%交联聚维酮和77%糊精、淀粉和糖粉混合均匀制成软材,用制粒机制得颗粒剂,糊精、淀粉和糖粉的比例为1∶1∶2。

实施例9片剂制备

本实施例的苦豆子多糖的提取同实施例4步骤1)-步骤7),将重量百分比计的70%苦豆子多糖、5%交联聚维酮和25%糊精、淀粉、微晶纤维素、糖粉、硬脂酸镁的混合物制成软材,用制粒机制颗粒,干燥后压片,其中,糊精、淀粉、微晶纤维素、糖粉、硬脂酸镁的比例为1∶1∶2∶3∶4。

实施例10丸剂制备

太阳城集团本实施例的苦豆子多糖的提取同实施例3步骤1)-步骤7),将按重量百分比计的60%苦豆子多糖、2%交联聚维酮和38%糊精、淀粉、微晶纤维素、糖粉的混合物;以空白微晶纤维素为母核,以粉末沉积的方式,利用离心造粒机制备小丸剂,其中糊精、淀粉、微晶纤维素、糖粉的比例为1∶2∶3∶6。

实施例11片剂制备

太阳城集团本实施例的苦豆子多糖的提取同实施例1步骤1)-步骤7),片剂制备:将重量百分比计的70%苦豆子多糖、5%交联聚维酮、和25%糊精、淀粉、微晶纤维素、糖粉、硬脂酸镁的混合物制成软材,用制粒机制颗粒,干燥后压片,其中,糊精、淀粉、微晶纤维素、糖粉、硬脂酸镁的比例为1∶2∶4∶3∶5。

太阳城集团 实施例12小丸剂制备

太阳城集团本实施例的苦豆子多糖的提取同实施例2步骤1)-步骤7),小丸剂制备:将按重量百分比计的80%苦豆子多糖、5%交联聚维酮和15%糊精、淀粉、微晶纤维素、糖粉的混合物;以空白微晶纤维素为母核,以粉末沉积的方式,利用离心造粒机制备小丸剂,其中,糊精、淀粉、微晶纤维素、糖粉的比例为1∶2∶1∶3。

最后应当说明的是:以上实施例仅用以说明本发明的技术方案而非对其限制,尽管参照上述实施例对本发明进行了详细的说明,所属领域的普通技术人员应当理解:技术人员阅读本申请说明书后依然可以对本发明的具体实施方式进行修改或者等同替换,但这些修改或变更均未脱离本发明申请待批权利要求保护范围之内。

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