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一种琴叶榕总黄酮的提取纯化方法.pdf

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一种 琴叶榕总 黄酮 提取 纯化 方法
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摘要
申请专利号:

CN201810743496.X

申请日:

20180709

公开号:

CN108653392A

公开日:

20181016

当前法律状态:

有效性:

审查中

法律详情:
IPC分类号: A61K36/60 主分类号: A61K36/60
申请人: 中山市中医院(广州中医药大学附属中山中医院)
发明人: 彭伟文,戴卫波,罗清,钟希文,邱雄泉,陆阳存
地址: 528400 广东省中山市西区康欣路3号
优先权: CN201810743496A
专利代理机构: 广州致信伟盛知识产权代理有限公司 代理人: 彭玲
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法律状态
申请(专利)号:

CN201810743496.X

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法律状态太阳城集团日:

法律状态类型:

摘要

本发明公开了一种琴叶榕总黄酮的提取纯化方法,包括步骤:(a)将干燥的琴叶榕粉碎成粗粉;(b)取琴叶榕粗粉,以乙醇为提取溶剂,超声破壁后,加热回流提取,离心,上清液浓缩,离心,取上清液,备用;(c)将步骤(b)的上清液,用大孔树脂吸附,依次用纯化水、50‑70%乙醇洗脱,收集50‑70%乙醇洗脱液,浓缩至干,即得琴叶榕总黄酮。本发明是以琴叶榕为原料,先经乙醇超声破壁,再结合乙醇加热回流提取,提取液减压回收溶剂,离心除去沉淀,再通过优化大孔吸附树脂纯化工艺,经提取纯化得到的琴叶榕总黄酮的纯度可达到为30%以上,提取工艺简单,分离纯化效率高,药材利用率高,适合工业化生产。

权利要求书

1.一种琴叶榕总黄酮的提取纯化方法,其特征在于,包括如下步骤:(a)将干燥的琴叶榕粉碎成粗粉;(b)取琴叶榕粗粉,以乙醇为提取溶剂,超声破壁后,加热回流提取,提取液浓缩,离心,取上清液,备用;(c)将步骤(b)的上清液,用大孔树脂吸附,依次用纯化水、50-70%乙醇洗脱,收集50-70%乙醇洗脱液,浓缩至干,即得琴叶榕总黄酮。2.根据权利要求1所述的一种琴叶榕总黄酮的提取纯化方法,其特征在于,步骤a)中,将干燥的琴叶榕粉碎成粗粉,过40-80目筛即可。3.根据权利要求1所述的一种琴叶榕总黄酮的提取纯化方法,其特征在于,步骤b)中,所述乙醇的质量浓度为50-70%,用量为琴叶榕粗粉的5-10倍量,超声破壁的温度为25-40℃,超声破碎的太阳城集团为20-40min,加热回流提取方式为90-100℃水浴回流提取2-3次,每次1-3h。4.根据权利要求3所述的一种琴叶榕总黄酮的提取纯化方法,其特征在于,步骤b)中,所述乙醇的质量浓度为50%,用量为琴叶榕粗粉的6倍量,超声破壁的温度为30℃,超声破碎的太阳城集团为30min,加热回流提取方式为95℃水浴回流提取3次,每次2h。5.根据权利要求1所述的一种琴叶榕总黄酮的提取纯化方法,其特征在于,步骤c)中,所述大孔树脂为D-101型或AB-8型大孔树脂,优选为AB-8型大孔树脂。6.根据权利要求1所述的一种琴叶榕总黄酮的提取纯化方法,其特征在于,步骤c)中,所述大孔树脂纯化的工艺条件为:树脂径高比为1:10-15,上样液体积为2-3BV,洗脱溶剂的用量为2-3BV,过柱及洗脱的体积流量均为1.5-2BV/h。7.根据权利要求6所述的一种琴叶榕总黄酮的提取纯化方法,其特征在于,步骤c)中,所述大孔树脂纯化的工艺条件为:树脂径高比为1:15,上样液体积为3BV,洗脱溶剂的用量为2BV,过柱及洗脱的体积流量均为1.5BV/h。

说明书

技术领域

本发明属于中药技术领域,具体涉及一种琴叶榕总黄酮的提取纯化方法。

背景技术

太阳城集团琴叶榕来源于桑科榕属植物琴叶榕Ficus pandurata Hance,以根、叶入药,其性温,味甘、微辛,具有祛风除湿、解毒消肿、行气、活血调经、舒筋通络、疗疟、通乳汁的功效。民间常以琴叶榕单味药或复方用药的形式治疗跌打损伤、月经不调、腰酸背痛、黄疸、乳痈、疟疾、乳腺炎、胃痛、百日咳、毒蛇咬伤、湿热中阻,恶心不欲食之证等。

现代文献研究中,草药琴叶榕的主要化学成分有三萜类、黄酮类、香豆素类、酚酸类等,其中,黄酮类成分作为科学界公认的具有抗氧化活性的成分中的一类,可用来预防和治疗由氧化应激引起的诸多疾病。目前尚未见琴叶榕总黄酮提取纯化工艺方面的相关研究与报道。

发明内容

为了克服上述现有技术的不足,本发明的首要目的在于提供一种琴叶榕总黄酮的提取纯化方法,该提取工艺简单,分离纯化效率高,药材利用率高,适合工业化生产。

本发明通过以下技术方案实现:

太阳城集团一种琴叶榕总黄酮的提取纯化方法,包括如下步骤:

(a)将干燥的琴叶榕粉碎成粗粉;

太阳城集团(b)取琴叶榕粗粉,以乙醇为提取溶剂,超声破壁后,加热回流提取,提取液浓缩,离心,取上清液,备用;

太阳城集团(c)将步骤(b)的上清液,用大孔树脂吸附,依次用纯化水、50-70%乙醇洗脱,收集50-70%乙醇洗脱液,浓缩至干,即得琴叶榕总黄酮。

优选的,步骤a)中,将干燥的琴叶榕粉碎成粗粉,过40-80目筛即可。

太阳城集团优选的,步骤b)中,所述乙醇的质量浓度为50-70%,用量为琴叶榕粗粉的5-10倍量,超声破壁的温度为25-40℃,超声破壁的太阳城集团为20-40min,加热回流提取方式为90-100℃水浴回流提取2-3次,每次1-3h。

为保证提取效果,本发明对步骤(b)的提取工艺参数进行了优化,具体如下:

太阳城集团(1)乙醇浓度的考察

精密称取5g琴叶榕根的粗粉,共5份,选取40%、50%、60%、70%、80%五个乙醇浓度进行考察,固液比为1:6,30℃条件下超声破壁30min后, 95℃水浴加热回流提取3次,每次2h,合并提取液过滤,浓缩得干浸膏,以甲醇溶解并定容至100mL,备用。紫外分光光度法制备芦丁标准曲线并计算各浸膏溶液中总黄酮的含量,结果发现50%乙醇提取液所得浸膏中总黄酮含量最大,为41.82mg/g,故优选50%乙醇作为提取溶剂。

太阳城集团(2)乙醇用量的考察

太阳城集团精密称取5g琴叶榕根的粗粉,共3份,50%乙醇作为提取溶剂,选取固液比为1:6、1:8、1:10进行考察,30℃条件下超声破壁30min后,95℃水浴加热回流3次,每次2h,合并提取液过滤,浓缩得干浸膏,以甲醇溶解并定容至100mL,备用。结果发现三个固液比条件下所得总黄酮含量均在17±1mg范围内,故优选为1:6固液比。

(3)加热回流提取温度的考察

精密称取5g琴叶榕根的粗粉,共3份,50%乙醇作为提取溶剂,固液比为1:6,依据乙醇沸点选择75℃、85℃、95℃进行提取温度考察,发现随着温度的升高,总黄酮提取率逐渐增大,且95℃时,总黄酮提取率为0.36%。故优选为95℃。

综上优化结果,优选的,步骤b)中,所述乙醇的质量浓度为50%,用量为琴叶榕粗粉的6倍量,超声破壁的温度为30℃,超声破碎的太阳城集团为30min,加热回流提取方式为95℃水浴回流提取3次,每次2h。

太阳城集团大孔吸附树脂是一类不溶于酸、碱及各种有机溶剂的有机高聚物吸附剂, 具有选择性好、操作简单、适用范围广等特点, 在很多领域都有广泛的应用,可分为极性、弱极性和非极性三大类,本发明根据极性的不同,选取了三种常用的大孔树脂作为考察对象,对大孔树脂的种类进行了筛选,具体方法如下:

太阳城集团静态吸附-解吸性能比较 取预处理好的D-101、AB-8、NKA-9型湿树脂均2.0g置于3个100mL的具塞锥形瓶中,加入上样液20mL,静态吸附10h,过滤;滤渣以20mL蒸馏水淋洗,抽干。量取60mL的50%乙醇静置洗脱10h,结果如表1所示。

太阳城集团动态吸附-解吸性能比较 取预处理好的三种树脂各10.0g,湿法装柱,贴壁缓慢加入20mL的上样液,以2BV/h的体积流量进行过柱,过柱液重吸附2次,再加入适量的蒸馏水以相同的体积流量清洗树脂,洗液并入过柱液中;将该些柱子中的树脂,均以200mL的50%乙醇作为洗脱剂,体积流量为2BV/h,收集洗脱液,结果如表1所示。

表1 3种大孔吸附树脂的静态及动态吸附-解吸性能

由表1结果可以看出,D-101型、AB-8型大孔树脂对琴叶榕上样液均具有较好的静态吸附和动态解吸附性能,而弱极性的AB-8型树脂对于琴叶榕总黄酮的纯化效果较优,因此,步骤c)中,所述大孔树脂为D-101型或AB-8型大孔树脂,更优选为AB-8型大孔树脂。

太阳城集团本发明选用乙醇为洗脱溶剂,并进一步对乙醇浓度进行了考察,具体如下:

分别取3g湿树脂置于5个具塞锥形瓶中,加入1.455mg/mL的上样液10mL,编号为40%、50%、60%、70%、80%,静态吸附4h后,过滤,滤渣以相应的乙醇洗脱4h。结果显示,50-70%的乙醇静态洗脱并浓缩得到的浸膏中总黄酮纯度较高,且经70%乙醇静态洗脱并浓缩得到的浸膏中总黄酮纯度最高,达到了24.62%,且该洗脱剂对于总黄酮的静态解吸效率高达85.49%,故宜选70%的乙醇作为最佳洗脱剂。

太阳城集团大孔树脂的径高比越大,总黄酮的纯度也越高,这可能是随着理论塔板数的增多而使得树脂的除杂能力增强所致,为考虑实际应用,本发明的树脂径高比优选为1:10-15,更优选为1: 15。

太阳城集团过柱及洗脱的体积流量越快,则产物中所含杂质越多,可能是由于药材各成分与树脂之间的作用太阳城集团过短而吸附力不够,使得同等流速的洗脱作用的选择性差。优选的,本发明过柱及洗脱的体积流量均为1.5-2 BV/h,更优选为1.5BV/h。

上样液体积对总黄酮的质量浓度也有一定的影响。本发明通过对泄露曲线的考察,结果显示,在上样液体积为2.99BV时,过柱液中总黄酮质量浓度为0.139mg/mL,可认为未出现明显泄露;当上样液体积为3.29BV时,已经发生明显的泄露现象了。故最大上样液体积不应该超过3BV为宜,优选为2-3BV,更优选为3BV。

太阳城集团本发明通过大量试验的优化,优选大孔树脂纯化的工艺条件为:树脂径高比为1:10-15,上样液体积为2-3BV,洗脱溶剂的用量为2-3 BV,过柱及洗脱的体积流量均为1.5-2BV/h。

太阳城集团更优选的,步骤c)中,所述大孔树脂纯化的工艺条件为:树脂径高比为1: 15,上样液体积为3BV,洗脱溶剂的用量为2 BV,过柱及洗脱的体积流量均为1.5BV/h。

本发明与现有技术相比,具有如下有益效果:

太阳城集团本发明是以琴叶榕为原料,先经乙醇超声破壁,再结合乙醇加热回流提取,提取液减压回收溶剂,离心除去沉淀,再通过优化大孔吸附树脂纯化工艺,经提取纯化得到的琴叶榕总黄酮的纯度可达到为30%以上,提取工艺简单,分离纯化效率高,药材利用率高,适合工业化生产。

具体实施方式

太阳城集团下面通过具体实施方式来进一步说明本发明,以下实施例为本发明具体的实施方式,但本发明的实施方式并不受下述实施例的限制。

实施例1:

一种琴叶榕总黄酮的提取纯化方法,包括如下步骤:

太阳城集团(a)将干燥的琴叶榕粉碎成粗粉,过40目筛;

(b)取琴叶榕粗粉,以6倍量的50%乙醇为提取溶剂,超声破壁30min后,95℃水浴回流提取3次,每次2h,提取液浓缩,离心,取上清液,备用;

太阳城集团(c)将步骤(b)的上清液,用AB-8型大孔树脂吸附,依次用纯化水、70%的乙醇溶液洗脱,收集70%乙醇洗脱液,浓缩至干,即得琴叶榕总黄酮;其中,树脂径高比为1: 15,上样液体积为3BV,洗脱溶剂的用量为2 BV,过柱及洗脱的体积流量均为1.5BV/h,测试总黄酮的含量及纯度,结果见表2所示。

实施例2:

一种琴叶榕总黄酮的提取纯化方法,包括如下步骤:

太阳城集团(a)将干燥的琴叶榕粉碎成粗粉,过50目筛;

(b)取琴叶榕粗粉,以8倍量的60%乙醇为提取溶剂,超声破壁25min后,95℃水浴回流提取2次,每次2.5h,提取液浓缩,离心,取上清液,备用;

太阳城集团(c)将步骤(b)的上清液,用D-101型大孔树脂吸附,依次用纯化水、65%的乙醇溶液洗脱,收集65%的乙醇洗脱液,浓缩至干,即得琴叶榕总黄酮;其中,树脂径高比为1: 12,上样液体积为2.5BV,洗脱溶剂的用量为3 BV,过柱及洗脱的体积流量均为2BV/h,测试总黄酮的含量及纯度,结果见表2所示。

实施例3:

一种琴叶榕总黄酮的提取纯化方法,包括如下步骤:

(a)将干燥的琴叶榕粉碎成粗粉,过60目筛;

(b)取琴叶榕粗粉,以7倍量的55%乙醇为提取溶剂,超声破壁35min后,95℃水浴回流提取3次,每次1.5h,提取液浓缩,离心,取上清液,备用;

太阳城集团(c)将步骤(b)的上清液,用AB-8型大孔树脂吸附,依次用纯化水、60%的乙醇溶液洗脱,收集60%的乙醇洗脱液,浓缩至干,即得琴叶榕总黄酮;其中,树脂径高比为1: 15,上样液体积为3BV,洗脱溶剂的用量为2.5 BV,过柱及洗脱的体积流量均为1.5BV/h,测试总黄酮的含量及纯度,结果见表2所示。

对比例1:

一种琴叶榕总黄酮的提取纯化方法,包括如下步骤:

太阳城集团(a)将干燥的琴叶榕粉碎成粗粉,过40目筛;

太阳城集团(b)取琴叶榕粗粉,以6倍量的50%乙醇为提取溶剂,加热回流提取3次,每次2h,提取液浓缩,离心,取上清液,备用;

(c)将步骤(b)的上清液,用AB-8型大孔树脂吸附,依次用纯化水、70%的乙醇洗脱,收集70%的乙醇洗脱液,浓缩至干,即得琴叶榕总黄酮;其中,树脂径高比为1: 15,上样液体积为3BV,洗脱溶剂的用量为2 BV,过柱及洗脱的体积流量均为1.5BV/h,测试总黄酮的含量及纯度,结果见表2所示。

表2 :实施例和对比例的总黄酮测试结果

太阳城集团 实施例1 实施例2 实施例3 对比例1 总黄酮含量(mg/g) 343.6 298.9 310.8 288.6 总黄酮纯度(%) 34.36 30.25 31.86 32.26

由上表可以看出,本发明先经乙醇超声破壁,再结合乙醇加热回流提取,再通过优化大孔吸附树脂纯化工艺,经提取纯化得到的琴叶榕总黄酮的纯度可达到30%以上。由实施例1和对比例1对比可以看出,先经乙醇超声破壁,可以将总黄酮充分提取出来。

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