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一种牛、羊用冷冻精液稀释液配方及制作方法.pdf

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种牛 冷冻 精液 稀释液 配方 制作方法
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摘要
申请专利号:

太阳城集团CN201210247522.2

申请日:

20120718

公开号:

太阳城集团CN102726372A

公开日:

20121017

当前法律状态:

有效性:

失效

法律详情:
IPC分类号: A01N1/02 主分类号: A01N1/02
申请人: 尹旭升
发明人: 尹旭升,牛华星,张淑二,田宁宁,霍道坦
地址: 250022 山东省济南市济南槐村街68号省畜牧总站
优先权: CN201210247522A
专利代理机构: 北京品源专利代理有限公司 代理人: 冯铁惠
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法律状态
申请(专利)号:

CN201210247522.2

授权太阳城集团号:

法律状态太阳城集团日:

法律状态类型:

摘要

本发明提供一种牛羊用冷冻精液稀释液配方,每100mL稀释液的配方为:柠檬酸1.35~1.55g,三羟甲基氨基甲烷(tris)2.4~2.6g,葡萄糖1.0~1.2g,甘油4.5~6.8ml,卵黄18.0~21ml,牛血清白蛋白(BSA)4.5~7.5ml,维生素B120.45~0.75ml,青霉素钾5~10万IU,硫酸链霉素5~10万IU,余量为蒸馏水。本发明配方成本低,配制以及使用操作步骤较为简便,能够有效提高精子的活力、顶体完整率,质膜完整率,降低精子畸形率。

权利要求书

1.一种牛羊用冷冻精液稀释液配方,其特征在于,每100mL稀释液的配方为: 柠檬酸1.35~1.55g,三羟甲基氨基甲烷(tris)2.4~2.6g,葡萄糖1.0~1.2g,甘油4.5~6.8ml,卵黄18.0~21ml,牛血清白蛋白(BSA)4.5~7.5ml,维生素B 0.45~0.75ml,青霉素钾5~10万IU,硫酸链霉素5~10万IU,余量为蒸馏水。2.一种如权利要求1所述的牛羊用冷冻精液稀释液配方的制作方法,其特征在于:(1)基础液的配制:取柠檬酸、三羟甲基氨基甲烷(tris)、葡萄糖、加入蒸馏水中,配制成基础液A;(2)卵黄液的制备:选取新鲜鸡蛋,将蛋壳消毒,在无菌条件下去蛋壳、蛋清;用已灭菌滤纸将卵黄膜表面的蛋清吸干,用无菌注射器抽取卵黄;(3)将基础液A过滤后,在65℃下进行巴氏消毒灭菌30分钟,温度低于30℃后分别加入经过灭菌的甘油、卵黄,加入牛血清白蛋白(BSA)和维生素B12,搅拌均匀,将PH值调整为6.5~7.5之间,即配制成B液;(4)使用前,在B液中分别加入青霉素钾及硫酸链霉素,即可使用。

说明书

技术领域

太阳城集团本发明涉及一种牛羊用冷冻精液稀释液配方以及制备方法。 

背景技术

稀释液是牛、羊等精液冷冻时必不可少的组成成分,在冷冻过程中对精子起到稀释、缓冲、营养和保护的作用,有效降低低温对精子的影响。尽管国内的冷冻精液制作及人工授精技术已应用多年,但冷冻精液解冻后精子活力(35%~40%)仍低于国外水平(50%~60%)。精液在经过超低温冷冻解冻后,精子的活力降低、死亡数量与畸形率增加,其原因是精子受冷打击致使精子质膜结构发生改变,严重影响质膜的完整性及其复苏后的精子的活力及受精能力。

发明内容

本发明的目的在于提供一种能有效提高冷冻精液解冻后精子活力,顶体完整率,降低精子畸形率的牛羊用冷冻精液稀释液配方以及制备方法。

本发明通过在精液中加入一定量的稳定剂及活性物质,可以有效地起到保护精子的作用。 本发明采用添加一定浓度的BSA(牛血清蛋白)及VB12注射液可以对精子起到一定的保护作用,有效地提高精子活力及顶体完整率,降低精子畸形率。

太阳城集团本发明采用如下技术方案:

太阳城集团一种牛羊用冷冻精液稀释液配方,每100mL稀释液的配方为: 柠檬酸1.35~1.55g,三羟甲基氨基甲烷(tris)2.4~2.6g,葡萄糖1.0~1.2g,甘油4.5~6.8ml,卵黄18.0~21ml,牛血清白蛋白(BSA)4.5~7.5ml,维生素B12 0.45~0.75ml,青霉素钾5~10万IU,硫酸链霉素5~10万IU,余量为蒸馏水。

一种牛羊用冷冻精液稀释液配方的制作方法,包括如下步骤:

太阳城集团(1)基础液的配制:取柠檬酸、三羟甲基氨基甲烷(tris)、葡萄糖、加入蒸馏水中,配制成基础液A;

太阳城集团(2)卵黄液的制备:选取新鲜鸡蛋,将蛋壳消毒,在无菌条件下去蛋壳、蛋清;用已灭菌滤纸将卵黄膜表面的蛋清吸干,用无菌注射器抽取卵黄;

太阳城集团(3)将基础液A过滤后,在65℃下进行巴氏消毒灭菌30分钟,温度低于30℃后分别加入经过灭菌的甘油、卵黄,加入牛血清白蛋白(BSA)和维生素B12,搅拌均匀,将PH值调整为6.5~7.5之间,即配制成B液;

(4)使用前,在B液中分别加入青霉素钾及硫酸链霉素,即可使用。 

太阳城集团使用本发明配方时,可以:

1、根据原精精液量、活力及密度换算后确定所需的稀释液添加量。本发明配方可直接加入牛的原精液中,以达到稀释的目地。

2、对于稀释液添加量低于100ml时,可直接将本品分多次加入牛精液中进行稀释;若稀释液添加量超过100ml时,可分两次加入,初次加入原精液体积的3~5倍,后将剩余稀释液与初步稀释后的精液一同放入平衡柜中平衡,分装前30分钟,将剩余稀释液加入精液中,再放入平衡柜中直至分装。

本发明具有如下优点及效果:

1、与国标稀释液配方相比,成本低,配制以及使用操作步骤较为简便。

2、能够有效提高精子的活力(45%~55%)、顶体完整率(≥68%),质膜完成率(≥50%),降低精子畸形率(≤15%,其中绵羊≤18%)。

3、体外授精试验显示:精子穿卵能力增加145%。

4、本发明配方使用范围较广,在肉牛、奶牛、山羊及绵羊精液的制作中均取得良好效果,其精子活力≥45%,顶体完整率≥68%,质膜完整率(≥50%),精子畸形率≤15%(绵羊精子畸形率≤18%)。

 

具体实施例

 实施例1:

(1)基础液的配制:取柠檬酸1.353g,三羟甲基氨基甲烷(tris)2.422g,葡萄糖1.1g,加入68.5ml蒸馏水中,配制成基础液A。

(2)卵黄液的制备:选取新鲜鸡蛋,将蛋壳用75%的酒精消毒,在无菌条件下去蛋壳、蛋清;用已灭菌滤纸将卵黄膜表面的蛋清吸干,用无菌注射器抽取卵黄。

(3)将基础液A过滤后进行巴氏消毒灭菌(65℃30分钟),温度低于30℃后分别加入经过灭菌的甘油5.0ml,卵黄20ml,加入6ml 牛血清蛋白(BSA)和0.5ml维生素B12,再用磁力搅拌器搅拌均匀,将PH值调整为6.5~7.5之间,即配制成B液。

(4)使用前,在B液中分别加入青霉素钾及硫酸链霉素各5万IU,即可使用。 

(5)本配方使用效果最好。

实施例2:

(1)基础液的配制:取柠檬酸1.45g,三羟甲基氨基甲烷(tris)2.56g,葡萄糖1.0g,加入68.4ml蒸馏水中,配制成基础液A。

(2)卵黄液的制备:选取新鲜鸡蛋,将蛋壳用75%的酒精消毒,在无菌条件下去蛋壳、蛋清;用已灭菌滤纸将卵黄膜表面的蛋清吸干,用无菌注射器抽取卵黄。

太阳城集团(3)将基础液A过滤后进行巴氏消毒灭菌(65℃30分钟),温度低于30℃后分别加入经过灭菌的甘油6.5ml,卵黄18ml,加入6.5ml 牛血清蛋白(BSA)和0.6ml维生素B12,再用磁力搅拌器搅拌均匀,将PH值调整为6.5~7.5之间,即配制成B液。

(4)使用前,在B液中分别加入青霉素钾及硫酸链霉素各7.5万IU,即可使用。

实施例3:

太阳城集团(1)基础液的配制:取柠檬酸1.55g,三羟甲基氨基甲烷(tris)2.48g,葡萄糖1.2g,加入64.8ml蒸馏水中,配制成基础液A。

太阳城集团(2)卵黄液的制备:选取新鲜鸡蛋,将蛋壳用75%的酒精消毒,在无菌条件下去蛋壳、蛋清;用已灭菌滤纸将卵黄膜表面的蛋清吸干,用无菌注射器抽取卵黄。

太阳城集团(3)将基础液A过滤后进行巴氏消毒灭菌(65℃30分钟),温度低于30℃后分别加入经过灭菌的甘油6.0ml,卵黄21ml,加入7.5ml 牛血清蛋白(BSA)和0.7ml维生素B12,再用磁力搅拌器搅拌均匀,将PH值调整为6.5~7.5之间,即配制成B液。

(4)使用前,在B液中分别加入青霉素钾及硫酸链霉素各10万IU,即可使用。

需要注意的是,本发明中:

太阳城集团1、所用的化学药品一般为化学纯或为分析纯,使用前均进行溶解过滤。

2、使用的鸡蛋应选取当日产鲜鸡蛋,并经酒精进行表面消毒,取卵黄时一定不要混入蛋白与卵黄膜。

3、甘油使用前须经高压灭菌,灭菌压力0.1-0.15MPa,20分钟。

4、青霉素与链霉素以人用药品最优。

太阳城集团5、配制后的稀释液应保存至4~6℃环境中,应注意密封保鲜不受污染。

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