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一种复配饲料用酶及其制备方法.pdf

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一种 饲料 及其 制备 方法
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摘要
申请专利号:

CN201510003344.2

申请日:

20150106

公开号:

太阳城集团CN104814277A

公开日:

20150805

当前法律状态:

有效性:

失效

法律详情:
IPC分类号: A23K1/165,A23K1/16 主分类号: A23K1/165,A23K1/16
申请人: 宁波北仑锐晟明杰生物科技发展有限公司
发明人: 李建树
地址: 315800 浙江省宁波市北仑区新碶东海明园21幢318室
优先权: CN201510003344A
专利代理机构: 代理人:
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法律状态
申请(专利)号:

CN201510003344.2

授权太阳城集团号:

法律状态太阳城集团日:

法律状态类型:

摘要

本发明公开了一种复配饲料用酶及其制备方法,本发明属于酶制剂领域,具体是复配饲料用酶及其制备方法。由以下重量份数的原料组成:β-葡聚糖酶3-6,木聚糖酶5-8,纤维素酶5-10,半乳糖苷酶1-2,植物乳杆菌胶囊1-3,植物制剂1-3份,生姜提取物0.5-1份,甘草0.5-1份。本发明产品添加的植物制剂既可延长复合酶制剂的保质期,又可提高饲养畜禽的免疫力,有效防止畜禽流行性疾病的发生。

权利要求书

1.一种复配饲料用酶,由以下重量份数的原料组成:β-葡聚糖酶3-6,木聚糖酶5-8,纤维素酶5-10,半乳糖苷酶1-2,植物乳杆菌胶囊1-3,植物制剂1-3份,生姜提取物0.5-1份,甘草0.5-1份。2.根据权利要求1所述复配饲料用酶,所述植物制剂的制备方法如下:称取决明子10-18份;杜仲5-15份;茯苓10-15份;分别将上述中草药粉碎至粒径为2毫米以下,然后于容器中均匀混合并添加3-6倍重量的水,添加上述混合物组分质量1-2%的酸性纤维素酶,控制温度45-55℃,pH:3.5-4,保持1-2h,随后添加混合物料2-3倍重量乙醇和丙醇的混合物,控制温度至60℃-78℃保持3-4h,过滤;滤液真空浓缩后冷冻干燥获得植物制剂。3.根据权利要求1所述复配饲料用酶,所述生姜提取物的制备方法如下:将粉碎至粒径为2毫米以下生姜置于容器中,添加3-6倍重量的水,控制温度50℃-60℃保持2-3h,添加混合物料2-3倍重量乙醇和甲醇的混合物,控制温度至30℃-40℃保持3-8h,过滤;滤液真空浓缩后冷冻干燥获得生姜提取物。4.据权利要求1所述复配饲料用酶,所述植物乳杆菌胶囊的制备方法如下:植物乳杆菌胶囊产品由壁材、植物乳杆菌、冻干保护剂、水苏糖、羊肚菌酶解粉组成。所述的壁材由酶解大豆分离蛋白、壳聚糖、黄原胶、卡拉胶、甘油和海藻糖组成;上述各物质配成混合溶液时的浓度分别为:酶解大豆分离蛋白7-10%、壳聚糖1-2%、黄原胶1-3%、卡拉胶0.1-0.5%、甘油0.3-1%,海藻糖0.5-2%;酶解大豆分离蛋白的制备方法为:配制浓度为10-13%大豆分离蛋白溶液加热到30-45℃,调整pH到3-5,加入大豆分离蛋白重量0.1-1%的酸性蛋白酶保温酶解0.5-1.5小时,酶解后溶液喷雾干燥获得酶解大豆分离蛋白。5.据权利要求4所述复配饲料用酶,植物乳杆菌优选CGMCC NO.9405。6.据权利要求1-4所述复配饲料用酶,植物乳杆菌胶囊产品制备方法如下:1)制备芯材:向经发酵罐发酵培养的植物乳杆菌发酵液中添加发酵液质量3-5%的水苏糖和5-8%的羊肚菌酶解粉,然后与冻干保护剂溶液混合,-50℃下预冻0.5h,然后在真空冷冻干燥机中冻干10-18h,冻干后研磨粉碎制成芯材;所述发酵液与冻干保护剂溶液的比例为1:1.4-0.8;所述冻干保护剂溶液由脱脂奶粉、海藻糖、麦芽糊精溶液组成;三种溶液的体积比为脱脂奶粉:海藻糖:麦芽糊精=3:1:0.5;所述脱脂奶粉、海藻糖、麦芽糊精溶液的浓度分别为:脱脂奶粉5%,海藻糖1%,麦芽糊精2%。2)包被:将芯材悬浮在流化床中,壁材喷雾包被,从一个喷头中喷入壳聚糖、甘油和海藻糖的混合液,从另一个喷头中喷入黄原胶、卡拉胶和酶解大豆分离蛋白的混合液,喷雾速度控制相同,包被过程中流化床内温度在25-38℃之间,30分钟后即形成胶囊。7.据权利要求1所述复配饲料用酶,由以下重量份数的原料组成:本发明所解决的技术问题一种复配饲料用酶,由以下重量份数的原料组成:β-葡聚糖酶3,木聚糖酶8,纤维素酶10,半乳糖苷酶1,植物乳杆菌胶囊3,植物制剂1份,生姜提取物0.5份,甘草0.5份。8.据权利要求1所述复配饲料用酶的制备方法,如下:将所述甘草、植物制剂和生姜提取物分别超微粉碎,然后与木聚糖酶,纤维素酶,β-葡聚糖酶,淀粉酶,半乳糖苷酶,植物乳杆菌胶囊均匀混合后密封包装即得成品。

说明书

技术领域

本发明属于酶制剂领域,具体是复配饲料用酶及其制备方法。

背景技术

太阳城集团目前在饲料工业中应用的酶制剂主要有4大类:分别用来降解纤维素、蛋白质、淀粉和植酸。

太阳城集团一种仔猪饲用复合酶制剂,申请号为201110026602.0,发明公开了一种仔猪饲用复合酶制剂。该仔猪饲用复合酶制剂包括下述七种酶:酸性蛋白酶、淀粉酶、木聚糖酶、β-葡聚糖酶、纤维素酶、和植酸酶;所述七种酶的酶活力比依次为1∶1∶(8-10)∶(3.3-4)∶1∶(0.5-0.55)∶(0-0.02)。本发明复合酶制剂可降解饲料中各种抗营养因子,降低肠道食糜粘度,提高饲料代谢能;提高仔猪对蛋白质和淀粉的消化率;降低肠道内有害微生物的过度繁殖,减少肠壁的损伤,调解肠道微生态平衡;提高仔猪存活率,抗病力,降低腹泻率,提高整体均匀度;促进仔猪增重,降低养殖成本。

一种添加有激活剂的猪用饲料复合酶制剂,申请号:201210500011.7,发明提供了一种添加有激活剂的猪用饲料复合酶制剂,配方中的植酸酶可将饲料中的有机磷分解成可以吸收的无机磷酸盐,蛋白酶可降解饲料中的蛋白质类营养物质,促进生猪对饲料中磷和氮的吸收,同时也降低了生猪粪尿中磷和氮的排放量,减少其对环境造成的污染。而激活剂可提高酶的反应速率,使酶制剂见效更快,且激活剂和酶制剂中的各成分联合使用还可使熟肉的剪切力降低,改善猪肉嫩度。本发明制得的猪用饲料复合酶制剂可提高猪只对饲料中氮、磷的消化率,从而使生猪粪尿中磷的排泄量减少40%以上,氮的排泄量减少29%以上;见效快,2-3天即有显著的成效;熟肉剪切力降低50%以上。

太阳城集团名称为一种猪用饲料复合酶制剂及其制备方法申请号:201410275557.6,本发明提供了一种猪用饲料复合酶制剂,属于饲料添加剂领域。该添加剂由复合酶与增强剂组成;复合酶为脂肪酶、中性蛋白酶、β-淀粉酶、异淀粉酶、中性植酸酶、木聚糖酶、α-半乳糖苷酶;增强剂由松针提取物、竹叶粗多糖、忍冬藤粉、高良姜粉、川木香粉、紫草粉、维生素C、氯化钠、丁酸钠、硫酸亚铁和葡萄糖酸钙组成。该酶制剂能有效提高饲料的利用率,降低料肉比,促进猪只的生长速度;还可以起到增强猪的免疫力的作用,对提高猪只的健康度,降低猪只发病率具有非常大的帮助,市场前景十分广阔。

名称为一种添加有酶保护剂的高效猪用饲料复合酶制剂,申请号为201210381755.1,发明提供了一种添加有酶保护剂的高效猪用饲料复合酶制剂,可降解饲料中的β-葡聚糖、植酸、果 胶等抗营养因子和生物大分子等物质,从而促进猪只对饲料中营养成分的吸收,提高饲料利用率;保护剂的加入可减少酶的失活率,延长有效太阳城集团,使该酶制剂的效果更加显著和持久;本发明制得的高效复合酶制剂饲料转化率高,可使用料肉比下降19%以上;猪只生长速度提高23%以上;酶活性保持太阳城集团长,18个月内,酶活性可保持在90%以上。

名称为一种添加有酶保护剂的高效猪用饲料复合酶制剂,申请号:201210360110.X,发明提供了一种添加有酶保护剂的高效猪用饲料复合酶制剂,可降解饲料中的β-葡聚糖、植酸、果胶等抗营养因子和生物大分子等物质,从而促进猪只对饲料中营养成分的吸收,提高饲料利用率;保护剂的加入可减少酶的失活率,延长有效太阳城集团,使该酶制剂的效果更加显著和持久;本发明制得的高效复合酶制剂饲料转化率高,可使用饲料系数下降19%以上;猪只生长速度提高23%以上;酶活性保持太阳城集团长,30个月内,酶活性可保持在90%以上。

名称为一种乳仔猪饲料复合酶制剂及其生产方法和应用,申请号:201410150709.X,发明公开了一种乳仔猪饲料复合酶制剂及其生产方法和应用。该复合酶制剂的酶活组成为:葡萄糖氧化酶80-100U/g,α-半乳糖苷酶20-25U/g,木聚糖酶3000-4000U/g,β-葡聚糖酶500-600U/g,酸性蛋白酶2000-3000U/g,中性蛋白酶800-1000U/g,真菌α-淀粉酶400-500U/g,葡萄糖淀粉酶3000-4000U/g。该复合酶制剂采用玉米淀粉及磷酸二氢钾、磷酸氢二钾、硫酸钙混合物作为稀释剂。该复合酶制剂使用方法为:在每吨乳仔猪全价配合饲料中的添加量为500-750克。

太阳城集团杜仲富含苯丙素类化合物、环烯醚萜类等活性成分,具有清除体内垃圾,加强细胞物质代谢,分解体内胆固醇,降低体内脂肪,广谱抗菌,提高白血球数量,增强免疫力等显著功效。杜仲纯粉在动物实验上的结果表明:可促进胆固醇和脂质代谢;添加杜仲纯粉饲养的鳗鱼,具有天然鳗鱼的味道;将杜仲纯粉添加到饲料中可提高肉鸡的品质,使之具有诱人的香味和品质。

茯苓具有利水渗湿,健脾化痰,宁心安神,败毒抗癌的作用,可松弛消化道平滑肌,抑制胃酸分泌,防止肝细胞坏死,抗菌等功效所含茯苓酸具有增强免疫力、抗肿瘤以及镇静、降血糖等的作用;茯苓多糖能降低点带石斑鱼血清A/G值,提高血清补体C3含量,提高血液白细胞数和白细胞吞噬率,提高其非特异性免疫力。

综上所述,复配饲料用酶的应用有着其广阔的市场空间和巨大的经济价值,但复配饲料用酶的热稳定性、安全性、复配全面性及作用效果的充分发挥仍是酶制剂生产厂家和广大养殖户共同关注的一个重要问题,制备更安全,更全面,酶作用效果更好的复配饲料用酶是本行业技术人员的共同责任和追求。

发明内容

本发明所解决的技术问题一种复配饲料用酶,由以下重量份数的原料组成:

太阳城集团β-葡聚糖酶3-6,木聚糖酶5-8,纤维素酶5-10,半乳糖苷酶1-2,植物乳杆菌胶囊1-3,植物制剂1-3份,生姜提取物0.5-1份,甘草0.5-1份。

太阳城集团所述木聚糖酶、β-葡聚糖酶、纤维素酶、均为食品级酶制剂;

所述植物制剂的制备方法如下:

称取决明子10-18份;杜仲5-15份;茯苓10-15份;分别将上述中草药粉碎至粒径为2毫米以下,然后于容器中均匀混合并添加3-6倍重量的水,添加上述混合物组分质量1-2%的酸性纤维素酶,控制温度45-55℃,pH:3.5-4,保持1-2h,随后添加混合物料2-3倍重量乙醇和丙醇的混合物,控制温度至60℃-78℃保持3-4h,过滤;滤液真空浓缩后冷冻干燥获得植物制剂。

太阳城集团所述乙醇和丙醇的质量比例为1:1-1.5;乙醇浓度为95%;丙醇浓度为100%;

太阳城集团所述生姜提取物的制备方法如下:

太阳城集团将粉碎至粒径为2毫米以下生姜置于容器中,添加3-6倍重量的水,控制温度50℃-60℃保持2-3h,添加混合物料2-3倍重量乙醇和甲醇的混合物,控制温度至30℃-40℃保持3-8h,过滤;滤液真空浓缩后冷冻干燥获得生姜提取物。

所述乙醇和甲醇的质量比例为1:2,乙醇浓度85-95%。甲醇浓度100%。

太阳城集团所述植物乳杆菌胶囊的制备方法如下:

植物乳杆菌胶囊产品由壁材、植物乳杆菌、冻干保护剂、水苏糖、羊肚菌酶解粉组成。

所述的壁材由酶解大豆分离蛋白、壳聚糖、黄原胶、卡拉胶、甘油和海藻糖组成;上述各物质配成混合溶液时的浓度分别为:酶解大豆分离蛋白7-10%、壳聚糖1-2%、黄原胶1-3%、卡拉胶0.1-0.5%、甘油0.3-1%,海藻糖0.5-2%。

酶解大豆分离蛋白的制备方法为:配制浓度为10-13%大豆分离蛋白溶液加热到30-45℃,调整pH到3-5,加入大豆分离蛋白重量0.1-1%的酸性蛋白酶保温酶解0.5-1.5小时,酶解后溶液喷雾干燥获得酶解大豆分离蛋白。

太阳城集团羊肚菌酶解粉制备方法如下:

太阳城集团(1)羊肚菌子实体干燥粉碎;

太阳城集团(2)水溶均质:将粉碎的羊肚菌子实体加入不锈钢筒中,加入子实体3-6倍重量的水,浸泡3-5小时,然后将此羊肚菌子实体液通过胶体磨,胶体磨操作条件为:调整胶体磨定子与转子的间隙为0.5-1微米,胶体磨流量为0.4-1吨/小时;

(3)升温酶解:将经过胶体磨处理的羊肚菌子实体液混合液转移到不锈钢酶解罐中加热到50-60℃,调整pH到4.5-6.0,加入羊肚菌子实体重量0.05-0.1%的纤维素酶、0.01-0.1% 的β-葡聚糖酶、0.01-0.1%的蛋白酶,保温酶解0.5-1.5小时,酶解过程中不断搅拌。

(4)干燥:酶解后的醪液过滤后干燥获得羊肚菌酶解粉。

太阳城集团所述干燥可以采用常规喷雾干燥、冷冻干燥等干燥形式。

所述冻干保护剂由脱脂奶粉、海藻糖、麦芽糊精组成。

太阳城集团本发明胶囊产品包含的植物乳杆菌优选CGMCC NO.9405。

菌种CGMCC NO.9405保藏单位的名称中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心;

保藏单位地址:北京市朝阳区北辰西路1号院3号

保藏日期:2014年07月02日

分类命名:植物乳杆菌

拉丁文名:Lactobacillus Plantarum

太阳城集团上述植物乳杆菌胶囊产品制备方法如下:

1)制备芯材:向经发酵罐发酵培养的植物乳杆菌发酵液中添加发酵液质量3-5%的水苏糖和5-8%的羊肚菌酶解粉,然后与冻干保护剂溶液混合,-50℃下预冻0.5h,然后在真空冷冻干燥机中冻干10-18h,冻干后研磨粉碎制成芯材;

太阳城集团所述发酵液与冻干保护剂溶液的比例为1:1.4-0.8;所述冻干保护剂溶液由脱脂奶粉、海藻糖、麦芽糊精溶液组成;三种溶液的体积比为脱脂奶粉:海藻糖:麦芽糊精=3:1:0.5;

太阳城集团所述脱脂奶粉、海藻糖、麦芽糊精溶液的浓度分别为:脱脂奶粉5%,海藻糖1%,麦芽糊精2%。

2)包被:将芯材悬浮在流化床中,壁材喷雾包被,从一个喷头中喷入壳聚糖、甘油和海藻糖的混合液,从另一个喷头中喷入黄原胶、卡拉胶和酶解大豆分离蛋白的混合液,喷雾速度控制相同,包被过程中流化床内温度在25-38℃之间,30分钟后即形成胶囊。此干燥方法采用专利201120503311.1中设备处理。

本发明复合酶的制备方法如下:

太阳城集团将所述甘草、植物制剂和生姜提取物分别超微粉碎,然后与木聚糖酶,纤维素酶,β-葡聚糖酶,半乳糖苷酶,植物乳杆菌胶囊均匀混合后密封包装即得成品。

所述酶适用于饲料加工厂和养殖场自配饲料,使用时应与饲料中的其它原料混合均匀,可事先将本发明与少量饲料混合均匀,再混合到大批饲料中,直接饲喂。建议每吨全价料添加量为:100-150g。

有益效果: 

本发明产品中采用植物制剂、生姜提取物、甘草科学复配,有效减缓了酶制剂的回潮;同时可增强复合酶的耐冻、耐热性能,保持相同的酶活力,其耐热温度可提高10-15℃,耐冷冻温度可降低5-10℃,有效防止了复合酶在运输、保存和使用过程中酶活力的损失,延长了复合酶的保质期,达到同样的酶活力,同类产品保质期可延长3-5个月。

太阳城集团本发明产品添加的植物制剂既可延长复合酶制剂的保质期,又可提高饲养畜禽的免疫力,有效防止畜禽流行性疾病的发生。

本发明提供的乳酸菌微胶囊,其壁材中添加了改性大豆分离蛋白,改性大豆分离蛋白比大豆分离蛋白乳化能力提高25%、胶凝能力提高15-25%,改性大豆分离蛋白黄原胶和卡拉胶及壳聚糖的配合使用,凝胶强度提高了10%以上,增强了胶囊的耐胃酸性;

本发明胶囊采用改性大豆分离蛋白,具有很好的肠溶性,胶囊到达肠道后在1-1.5小时内即可完全崩解释放出植物乳杆菌,并迅速增殖成为优势菌群,从而达到抑制病原菌生长等作用。

太阳城集团本发明产品中保护剂与酶制剂、植物制剂、生姜提取物与酶制剂的共同协同作用,使得复合酶的酶活力和效力最大限度的发挥,并相应的提高了饲料的利用率和动物的生长率,增强了动物的食欲和抗病能力,延长了产品的保质期和保护了环境。

具体实施方式

下面通过具体的实施方案叙述本发明。除非特别说明,本发明中所用的技术手段均为本领域技术人员所公知的方法。另外,实施方案应理解为说明性的,而非限制本发明的范围,本发明的实质和范围仅由权利要求书所限定。对于本领域技术人员而言,在不背离本发明实质和范围的前提下,对这些实施方案中的物料成分和用量进行的各种改变或改动也属于本发明的保护范围。

实施例1

本发明所用植物乳杆菌CGMCC No.9405的选育过程如下:

原始出发菌种→试管活化→硫酸二乙酯(DES)诱变→亚硝基胍(NTG)诱变→等离子体诱变→平板初筛→摇瓶复筛→传代稳定性试验。

太阳城集团本发明所采用的出发菌株在MRS葡萄糖培养基中,其乳酸的生产速率为1.5g/L/d,当培养基pH为3.5时几乎停止生长,对亚硝酸钠的分解速率为0.34mg/h/kg白菜。出发菌株由李政采集于宁夏盐池县育肥羊场的青储饲料,采集太阳城集团2013年9月15日。

太阳城集团为了提高其乳酸生产速率、耐酸能力和亚硝酸盐的分解速率,依次采用DES和NTG技术对该菌种进行诱变,诱变后菌株采用MRS碳酸钙平板进行初筛,然后采用500mL摇瓶发酵,生物传感器分析仪对高产菌进行复筛,选育优良的植物乳杆菌菌株,然后做传代实验,评价其遗传稳定性。

太阳城集团植物乳杆菌tlj-2014遗传稳定性结果表明:经过连续传代十次,各项性能指标都比较稳定,遗传性较好,性状没有回复,因此把植物乳杆菌tlj-2014作为选育得到的目的菌株。

经验证发现:该诱变菌株的乳酸生产速率可以达到35g/L/d,该菌株经过71小时发酵后乳酸浓度达到95g/L;能够在pH为1.80的条件下存活。降解亚硝酸盐速度快,分解能力达到9.8mg/h/kg(自然发酵过程亚硝酸盐积累的速率大约为1.1mg/h/kg),能够耐1%胆盐。

1)DES诱变选育

太阳城集团a.在超净台上取试管斜面上的植物乳杆菌L一环(出发菌),接入装有50mL培养基MRS(无琼脂,葡萄糖20g/L)的250mL三角瓶中,200rpm,37℃培养12h左右,使菌体处于对数生长前期。

b.取5mL菌液,5000rpm离心10min收集菌体,用生理盐水洗涤2次。

c.用pH7.0磷酸缓冲液稀释成107个/mL菌悬液。

d.取32mL pH7.0的磷酸钾缓冲液、8mL菌悬液、0.4mL DES在预先放入转子的150mL三角瓶中充分混合,使DES最终浓度为1%(v/v)。

太阳城集团e.在37℃摇床中150rpm反应30min,取1mL混合液,加入0.5mL 25%Na2S2O3溶液中止反应。

太阳城集团f.适当稀释,取最后稀释度的菌液0.2mL,涂布于碳酸钙筛选培养基(含100g/L葡萄糖的碳酸钙MRS培养基)平皿中。在37℃培养2~3天后,采用影印法将该筛选平板的菌株转印到pH为1.5、1.8和2.0的LPHMRS培养基(低pH值改性MRS培养基)上和亚硝酸钠筛选培养基(单一氮源为2g/L亚硝酸钠的改性MRS筛选培养基)上。

g.在37℃培养2~3天后,挑选菌落较大,分别能在LPHMRS培养基、亚硝酸钠筛选培养基上生长并且在碳酸钙筛选培养基上。经初步筛选,挑取出的菌落命名为植物乳杆菌L1。

2)亚硝基胍诱变 

a.在超净台上取试管斜面上的植物乳杆菌L1一环,接入装有50mL培养基MRS(无琼脂)(葡萄糖浓度为60g/L)的250mL三角瓶中,200rpm,37℃培养12h左右,使菌体处于对数生长前期。

太阳城集团b.取5mL菌液5000rpm离心10min收集菌体,用生理盐水洗涤2次。

c.用pH6.0磷酸缓冲液稀释成107个/mL菌悬液。

d.取10mL菌悬液转移至100mL三角瓶中,加入10mg的NTG,配制成终浓度为10mg/mL的NTG溶液,并加入4-5滴丙酮,以利于NTG溶解。

e.在37℃下200rpm振荡反应30min,5000rpm离心10min收集菌体,用无菌生理盐水洗涤数次,中止反应。

太阳城集团f.适当稀释,取最后稀释度的菌液0.2mL,涂布于碳酸钙筛选培养基(含100g/L葡萄糖的碳酸钙MRS培养基)平皿中。在37℃培养2~3天后,采用影印法将该筛选平板的菌株转印到pH为1.5、1.8和2.0的LPHMRS培养基(低pH值改性MRS培养基)上和亚硝酸钠筛选培养基(单一氮源为2g/L亚硝酸钠的改性MRS筛选培养基)上。

g.挑选菌株方法:挑选菌落较大,分别能在LPHMRS培养基、亚硝酸钠筛选培养基上生长并且在碳酸钙筛选培养基上。经初步筛选,挑取100支符合以上条件的菌落。

3)摇瓶复筛

太阳城集团a.在超净台上分别取各试管斜面上的植物乳杆菌一环,接入装有50mL培养基MRS(无琼脂)(葡萄糖浓度为100g/L)的250mL三角瓶中,200rpm,37℃培养15h左右,使菌体处于对数生长中期。

b.分别取5mL菌液,接入装有50mL碳酸钙筛选液体培养基(含250g/L葡萄糖的碳酸钙MRS培养基)平皿中、pH为1.5、1.8和2.0的LPHMRS液体培养基(低pH值改性MRS培养基)和亚硝酸钠液体筛选培养基(单一氮源为2g/L亚硝酸钠的改性MRS筛选培养基)上(注:采用250mL三角瓶)。200rpm,37℃培养3-4天,每天分别检测碳酸钙筛选液体培养基中L-乳酸产生速率、LPHMRS液体培养基中的生物量和亚硝酸钠液体筛选培养基中亚硝酸盐的消耗速率。发酵结束后,比较100株菌种的碳酸钙筛选液体培养基中L-乳酸产生速率、LPHMRS液体培养基中的生物量和亚硝酸钠液体筛选培养基中亚硝酸盐的消耗速率。

c.选择兼具高L-乳酸产生速率、耐受低pH(该菌种仅能在最低为pH1.8的培养基中生长)和亚硝酸盐的消耗速率高的菌株,将其命名为L2菌。

4)遗传稳定性试验

太阳城集团将L2菌在斜面上连续十次传代,并用摇瓶复筛的方法检测每次传代后的发酵情况。实验发现,在斜面上连续十次传代,该菌种性状没有明显变化,各项性能指标都正常,说明该菌种的遗传稳定性较强。菌株命名为植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)tlj-2014。

5)5L发酵罐试验 

a.取斜面上的植物乳杆菌L2一环,接入装有50mL培养基MRS(无琼脂)(葡萄糖浓度为150g/L)的250mL三角瓶中,200rpm,37℃培养12h左右,使菌体处于对数生长中期。

太阳城集团b.将对数期的菌种接入装有3L MRS液体培养基(初始葡萄糖为150g/L)的5L发酵罐中。接种量为10%,37℃下100rpm培养8小时,对数前期溶氧控制10%(通气0.5L/min),后期厌氧培养63小时。发酵结束后,植物乳杆菌L2的乳酸产量达到95g/L。

c.将对数期的菌种接入装有3L pH为1.8的LPHMRS液体培养基(初始葡萄糖为50g/L)的5L发酵罐中。接种量为10%,37℃下100rpm培养8小时,对数前期溶氧控制10%(通气0.5L/min),后期厌氧,整个过程用0.5mol/L的氢氧化钠将发酵液pH控制在1.8,总培养太阳城集团为48小时。发酵结束后,检测植物乳杆菌L2的生物量为2.5g/L,说明植物乳杆菌L2能够在pH1.8的环境中生存。

太阳城集团d.将对数期的菌种接入装有3L亚硝酸钠液体筛选培养基(单一氮源为2g/L亚硝酸钠的改性MRS筛选培养基)的5L发酵罐中。接种量为10%,37℃下100rpm培养8小时,对数前期溶氧控制10%(通气0.5L/min),后期厌氧,发酵过程根据亚硝酸盐的消耗速率流加20g/L 的亚硝酸钠溶液,培养2-3天。发酵结束后,计算发酵过程植物乳杆菌L2对亚硝酸钠的降解速率。结果发现:在该条件下,L2对亚硝酸钠的降解速率可以达到563mg/h/L。

实施例2

植物乳杆菌胶囊产品由壁材、植物乳杆菌、冻干保护剂、水苏糖、羊肚菌酶解粉组成。

太阳城集团所述的壁材由酶解大豆分离蛋白、壳聚糖、黄原胶、卡拉胶、甘油和海藻糖组成;上述各物质配成混合溶液时的浓度分别为:酶解大豆分离蛋白10%、壳聚糖1%、黄原胶3%、卡拉胶0.1%、甘油0.5%,海藻糖0.5%。

酶解大豆分离蛋白的制备方法为:配制浓度为10-13%大豆分离蛋白溶液加热到30-33℃,调整pH到3,加入大豆分离蛋白重量0.2%的酸性蛋白酶保温酶解1.5小时,酶解后溶液喷雾干燥获得酶解大豆分离蛋白。

植物乳杆菌为保藏编号CGMCC NO.9405菌种。

所述羊肚菌酶解粉的制备方法如下:

(1)羊肚菌子实体干燥粉碎;

太阳城集团(2)水溶均质:将粉碎的羊肚菌子实体加入不锈钢筒中,加入子实体3倍重量的水,浸泡5小时,然后将此羊肚菌子实体液通过胶体磨,胶体磨操作条件为:调整胶体磨定子与转子的间隙为0.6±1微米,胶体磨流量为0.5吨/小时;

(3)升温酶解:将经过胶体磨处理的羊肚菌子实体液混合液转移到不锈钢酶解罐中加热到50℃,调整pH到6.0,加入羊肚菌子实体重量0.05%的纤维素酶、0.01%的β-葡聚糖酶、0.1%的蛋白酶,保温酶解1.5小时,酶解过程中不断搅拌。

(4)干燥:酶解后的醪液过滤后喷雾干燥获得羊肚菌酶解粉。

上述植物乳杆菌胶囊产品的制备过程如下:

太阳城集团1)制备芯材:向经发酵罐发酵培养的植物乳杆菌发酵液中添加发酵液质量3%的水苏糖和8%的羊肚菌酶解粉,然后与冻干保护剂溶液混合,-50℃下预冻0.5h,然后在真空冷冻干燥机中冻干10h,冻干后研磨粉碎制成芯材;发酵液与冻干保护剂溶液的比例为1:1.4;冻干保护剂溶液由脱脂奶粉、海藻糖、麦芽糊精溶液组成;三种溶液的体积比为脱脂奶粉:海藻糖:麦芽糊精=3:1:0.5;

所述脱脂奶粉、海藻糖、麦芽糊精溶液的浓度分别为:脱脂奶粉5%,海藻糖1%,麦芽糊精2%。

太阳城集团2)包被:将芯材悬浮在流化床中,壁材喷雾包被,从一个喷头中喷入壳聚糖、甘油和海藻糖的混合液,从另一个喷头中喷入黄原胶、卡拉胶和酶解大豆分离蛋白的混合液,喷雾速度控制相同,包被过程中流化床内温度在28℃,30分钟后即形成胶囊。采用如专利 201120503311.1所述装置制备。

植物乳杆菌胶囊产品耐胆盐测试。

太阳城集团将实施例2中的胶囊产品置于37℃的猪胆盐溶液(溶液浓度3.0%)中保温并不断搅拌,2h后取出,用灭菌生理盐水洗涤,用解囊液溶解,测定乳酸菌存活率,并与未包埋的菌液进行比较。测试结果如下表所示。

        形态变化 存活率 实施例1 不崩解 87.5% 实施例2 不崩解 89.3% 未包被对照 -- 0.65%

实施例4

太阳城集团复配酶,由以下重量份数的原料组成:

β-葡聚糖酶5,木聚糖酶6,纤维素酶8,半乳糖苷酶1,植物乳杆菌胶囊2,植物制剂2份,生姜提取物0.8份,甘草1份。

所述植物制剂的制备方法如下:

太阳城集团称取决明子15份;杜仲10份;茯苓12份;分别将上述中草药粉碎至粒径为2毫米以下,然后于容器中均匀混合并添加5倍重量的水,添加上述混合物组分质量2%的酸性纤维素酶,控制温度50℃,pH:3.8,保持1h,随后添加混合物料3倍重量乙醇和丙醇的混合物,控制温度至70℃保持3h,过滤;滤液真空浓缩后冷冻干燥获得植物制剂。

所述乙醇和丙醇的质量比例为1:1;乙醇浓度为95%;丙醇浓度为100%;

所述生姜提取物的制备方法如下:

太阳城集团将粉碎至粒径为2毫米以下生姜置于容器中,添加4倍重量的水,控制温度55℃保持2h,添加混合物料3倍重量乙醇和甲醇的混合物,控制温度至35℃保持5h,过滤;滤液真空浓缩后冷冻干燥获得生姜提取物。

太阳城集团所述乙醇和甲醇的质量比例为1:2,乙醇浓度90%。甲醇浓度100%。

太阳城集团实施例5 基本同例1-4

一种复配饲料用酶,由以下重量份数的原料组成:

β-葡聚糖酶3,木聚糖酶8,纤维素酶10,半乳糖苷酶1,植物乳杆菌胶囊3,植物制剂1份,生姜提取物0.5份,甘草0.5份。

太阳城集团所述酸性木聚糖酶、植酸酶、β-葡聚糖酶、纤维素酶、酸性蛋白酶均为食品级酶制剂;

复配饲料用酶制备方法如下:

太阳城集团将所述甘草、植物制剂和生姜提取物分别超微粉碎,然后与木聚糖酶,纤维素酶,β- 葡聚糖酶,淀粉酶,半乳糖苷酶,植物乳杆菌胶囊均匀混合后密封包装即得成品。

饲喂试验

材料与方法 

试验猪的选择及分组

太阳城集团在湖南某一大型正规养猪场,选取36头体重为(30±2)kg的健康杜长大三元杂交生长猪,随机分成3组,每组2栏重复,每重复6头,阉公猪和小母猪各半。正式试验前进行为期1周的预试,并完成驱虫和常规免疫工作。试验分前后两期进行,前期(30kg-60kg),后期(61kg~90kg)。

饲养管理

饲喂干粉料,自由采食,以吃饱不剩为限,自动饮水器饮水。前期日喂三次,后期日喂二次,以栏为单位记录耗料量。猪舍为砖瓦结构、水泥地面、单列式,试猪分别饲养于9栏内,各栏舍的环境条件一致,每日上下午清扫圈舍各一次,同时观察猪的行为、食欲、粪便。试验期间记录疾病及治疗情况。

饲料及配方 

以全价国标生长猪饲料为基础,每吨饲料添加试验组、对照组1和对照组2的复配饲料用酶100g;

太阳城集团测试指标:在试验前(30kg-60kg)、中期和试验后期(61kg~90kg)结束时,分别称个体重,称重均在早晨空腹进行。分阶段,以栏为单位记录其每日耗料量、发病率,同时计算日采食量和饲料利用效率,并对上述数据进行统计分析,生长猪生长性能见表2。

表2

      

      

太阳城集团4.1.5 对上述试验全期测试结果进行分析如表3

表3

      项目 试验组 对照组1 对照组2 日增重(g) 877 746 657 采食量(kg) 189.73 193.46 210.17 料重比 2.80 3.36 4.15 腹泻率(%) 1 4 17 毛色评分 9 6.0 5.5

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