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治疗心脑血管疾病的中药制剂及其制备方法.pdf

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治疗 脑血管 疾病 中药 制剂 及其 制备 方法
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摘要
申请专利号:

CN200610000240.7

申请日:

20060106

公开号:

CN1994359A

公开日:

20070711

当前法律状态:

有效性:

失效

法律详情:
IPC分类号: A61K36/481,A61K9/08,A61K9/10,A61K9/16,A61K9/20,A61K9/48,A61P9/10 主分类号: A61K36/481,A61K9/08,A61K9/10,A61K9/16,A61K9/20,A61K9/48,A61P9/10
申请人: 北京奇源益德药物研究所
发明人: 于文风
地址: 100070北京市丰台区丰台科技园航丰路8号317室(园区)
优先权: CN200610000240A
专利代理机构: 代理人:
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法律状态
申请(专利)号:

太阳城集团CN200610000240.7

授权太阳城集团号:

法律状态太阳城集团日:

法律状态类型:

摘要

本发明提供了治疗心脑血管疾病的中药制剂及其制备方法,它用黄芪总皂苷脂质体或前体脂质体、银杏叶总内酯脂质体或前体脂质体与辅料制作成注射制剂或口服制剂。与现有技术相比,本发明采用黄芪总皂苷和银杏叶总内酯的脂质体或前体脂质体作为药物载体,具有靶向性,药物用量少,毒性低,副作用小。

权利要求书

1、一种治疗心脑血管疾病的中药制剂,其特征在于:按照重量百分比计算,它是由黄芪总皂苷脂质体或前体脂质体1~99%和银杏叶总内酯脂质体或前体脂质体99~1%和适当的辅料制作而成。2、按照权利要求1所述的治疗心脑血管疾病的中药制剂,其特征在于:按照重量百分比计算,它是由黄芪总皂苷脂质体或前体脂质体20~80%和银杏叶总内酯脂质体或前体脂质体80~20%和适当的辅料制作而成。3、按照权利要求1或2所述的治疗心脑血管疾病的中药制剂,其特征在于:按照重量百分比计算,它是由黄芪总皂苷脂质体或前体脂质体40~60%与银杏叶总内酯脂质体或前体脂质体60~40%和适当的辅料制作而成。4、按照权利要求1~3任意一项所述的治疗心脑血管疾病的中药制剂,其特征在于:所述组方中的黄芪总皂苷脂质体或前体脂质体可以是在黄芪醇提取物、黄芪水提取物、黄芪水提醇沉提取物、黄芪半仿生提取物、黄芪超临界萃取物或者以上各提取物的精制品的基础上制得;银杏叶总内酯脂质体或前体脂质体可以是在银杏叶醇提取物、银杏叶水提取物、银杏叶水提醇沉提取物、银杏叶半仿生提取物、银杏叶超临界萃取物或者以上各提取物的精制品的基础上制得。5、按照权利要求1~4任意一项所述的治疗心脑血管疾病的中药制剂,其特征在于:所述的制剂为直接用于注射给药的注射液、直接供静脉滴注的静脉输液、需稀释后用于静脉滴注的注射用浓溶液和用冷冻干燥法或喷雾干燥法制得的注射用无菌粉末和无菌块状物以及片剂、胶囊剂、颗粒剂、滴丸剂、丸剂、软胶囊剂、口服液体制剂、口腔崩解片、舌下片或分散片剂。6、按照权利要求4所述的治疗心脑血管疾病的中药制剂,其特征在于:按照重量百分比计算,黄芪总皂苷中总皂苷的含量不低于50%,银杏叶总内酯中总内酯的含量不低于50%,脂质体包封率不低于60%。7、如权利要求1~5中任意一项所述的治疗心脑血管疾病的中药制剂,其特征在于:黄芪总皂苷脂质体和银杏叶总内酯脂质体是采用薄膜法、硫酸铵梯度法、逆相蒸发法、溶剂注入法、去污剂分散法、钙融合法、冻结融解法、主动包封法、冷冻干燥法、复乳法、离心法、前体脂质体法、制备脂质体气雾剂中的一种或几种方法制得的。8、如权利要求1~7中任意一项所述的治疗心脑血管疾病的中药制剂,其特征在于:所述制剂中的脂质体这样制备:按主药∶卵磷脂=1∶10的比例取卵磷脂,按主药∶磷脂酰甘油=1∶1.2的比例取磷脂酰甘油,溶于氯仿-异丙醇的混合溶液中;另取黄芪总皂苷溶于pH5-8的磷酸盐缓冲液中,两相混合,水浴式超声8min后,于旋转蒸发仪中除去有机溶剂即得脂质体混悬液,同法制备银杏叶总内酯脂质体混悬液,与黄芪总皂苷脂质体混悬液混合后以不同的方法制成各种制剂。9、如权利要求1~7中任意一项所述的治疗心脑血管疾病的中药制剂,其特征在于:所述制剂中的前体脂质体这样制备:取磷脂和辅料加一定量无水乙醇溶解,在恒温搅拌的条件下以一定速度注入银杏叶总内酯或黄芪总皂苷溶液中,继续恒温搅拌,降至室温,匀浆,膜过滤,灌装,充氮气,封口;将所得脂质体放入液氮中,冷冻后取出;室温使之溶,重复一次即得银杏叶总内酯或黄芪总皂苷前体脂质体,将银杏叶总内酯前体脂质体和黄芪总皂苷前体脂质体混合后以不同的方法制成各种制剂。10、按照权利要求1~9中任意一项所述的治疗心脑血管疾病的中药制剂的制备方法,其特征在于:所述制剂中的分散片这样制备:取银杏叶总内酯脂质体、黄芪总皂苷脂质体混合,按主药∶辅料=1.4∶1的比例加入磷酸钙,按主药∶辅料=1.2∶1的比例加入微粉纤维素,以及按主药∶辅料=2.5∶1的交联聚乙烯吡咯烷酮,混和均匀,用70%乙醇适量制软材,过20目筛制颗粒,55℃干燥,取出,过30目筛整粒,加入适量滑石粉、微粉硅胶,混和均匀,压片,即得分散片。

说明书

治疗心脑血管疾病的中药制剂及其制备方法

技术领域

太阳城集团本发明是一种治疗心脑血管疾病的中药制剂及其制备方法,属于中药的技 术领域。

技术背景

太阳城集团心脑血管疾病是指血液污染导致动脉粥样硬化,从而引起心脑缺血引发的 相应病变。包括:高血压、动脉粥样硬化、冠心病(心梗和心绞痛)、脑缺血 性病变(脑供血不足、脑血栓形成、脑梗塞)及脑出血。血液污染后导致的动 脉粥样硬化及其并发症是导致死亡的第一杀手。在世界范围内动脉粥样硬化血 栓形成而导致死亡比例占全部死亡人数的52%,远远超过第二位死因的肿瘤 (24%)。为了达到更好的防治目的,许多发明人及药品企业做了大量的研究, 也提供了一些优秀的治疗产品;如:本申请人申请名称为“治疗心脑血管疾病 的中药制剂及其制备方法和应用”的专利申请,它采用黄芪和银杏叶的有效部 位配伍用于治疗心脑血管方面的疾病有确切的疗效;但是在深入研究中发现, 采用有效部位的脂质体制剂更适合于生物体内降解、无毒性和无免疫原性,特 别是脂质体作为药物载体,具有靶向性,从而减小药物剂量,降低毒性,减少 副作用等。

发明内容

太阳城集团本发明的目的在于:提供一种治疗心脑血管疾病的中药制剂及其制备方法 和应用;本发明针对现有技术,根据心脑血管疾病如冠心病、脑血栓、老年性 痴呆等均因血管窄缩、血流量减少等原因致使供血不足引发疾病的原理,在实 验筛选的基础上,采用黄芪总皂苷脂质体和银杏叶总内酯脂质体配伍做成制剂, 优选出最佳的组方及工艺;得到的产品,特别是注射制剂产品能起到活血化淤、 通脉舒络、改善血循环和代谢作用。例如冠心病是冠状动脉粥样硬化导致心肌 缺血,缺氧而引起心脏病,两药合用,可起到改善心肌代谢作用、增加冠状动 脉血流,改善心肌的血供以缓解心绞痛的作用。本发明对于治疗心脑血管疾病 如冠心病、心绞痛、心律失常、脑血栓、老年性痴呆等有较好的疗效。而且本 发明为脂质体作为药物载体,具有靶向性,从而减小药物剂量,降低毒性,减 少副作用,其不良反应小、可供病人长期使用。

本发明是这样构成的:按照重量百分比计算,它是由黄芪总皂苷脂质体或 前体脂质体1~99%和银杏叶总内酯脂质体或前体脂质体99~1%和适当的辅料 制作而成。优选为:按照重量百分比计算,它是由黄芪总皂苷脂质体或前体脂 质体20~80%和银杏叶总内酯脂质体或前体脂质体80~20%和适当的辅料制作 而成。准确的说:按照重量百分比计算,它是由黄芪总皂苷脂质体或前体脂质 体40~60%与银杏叶总内酯脂质体或前体脂质体60~40%和适当的辅料制作而 成。

太阳城集团所述组方中的黄芪总皂苷脂质体或前体脂质体可以是在黄芪醇提取物、黄 芪水提取物、黄芪水提醇沉提取物、黄芪半仿生提取物、黄芪超临界萃取物或 者以上各提取物的精制品的基础上制得;银杏叶总内酯脂质体或前体脂质体可 以是在银杏叶醇提取物、银杏叶水提取物、银杏叶水提醇沉提取物、银杏叶半 仿生提取物、银杏叶超临界萃取物或者以上各提取物的精制品的基础上制得。

所述的制剂可以是药剂学上任何可以接受的剂型:直接用于注射给药的注 射液、直接供静脉滴注的静脉输液、需稀释后用于静脉滴注的注射用浓溶液和 用冷冻干燥法或喷雾干燥法制得的注射用无菌粉末和无菌块状物以及片剂、胶 囊剂、颗粒剂、滴丸剂、丸剂、软胶囊剂、口服液体制剂、口腔崩解片、舌下 片或分散片剂。

按照重量百分比计算,黄芪总皂苷中总皂苷的含量不低于50%,银杏叶总 内酯中总内酯的含量不低于50%,脂质体包封率不低于60%。

所述脂质体的制备方法是:黄芪总皂苷脂质体和银杏叶总内酯脂质体是采 用薄膜法、硫酸铵梯度法、逆相蒸发法、溶剂注入法、去污剂分散法、钙融合 法、冻结融解法、主动包封法、冷冻干燥法、复乳法、离心法、前体脂质体法、 制备脂质体气雾剂中的一种或几种方法制得的。

所述制剂中的脂质体这样制备:按主药∶卵磷脂=1∶10的比例取卵磷脂, 按主药∶磷脂酰甘油=1∶1.2的比例取磷脂酰甘油,溶于氯仿-异丙醇的混 合溶液中;另取黄芪总皂苷溶于pH5-8的磷酸盐缓冲液中,两相混合,水浴式超 声8min后,于旋转蒸发仪中除去有机溶剂即得脂质体混悬液,同法制备银杏叶 总内酯脂质体混悬液,与黄芪总皂苷脂质体混悬液混合后以不同的方法制成各 种制剂。

太阳城集团所述制剂中的前体脂质体这样制备:取磷脂和辅料加一定量无水乙醇溶解, 在恒温搅拌的条件下以一定速度注入银杏叶总内酯或黄芪总皂苷溶液中,继续 恒温搅拌,降至室温,匀浆,膜过滤,灌装,充氮气,封口;将所得脂质体放 入液氮中,冷冻后取出;室温使之溶,重复一次即得银杏叶总内酯或黄芪总皂 苷前体脂质体,将银杏叶总内酯前体脂质体和黄芪总皂苷前体脂质体混合后以 不同的方法制成各种制剂。

所述制剂中的分散片这样制备:取银杏叶总内酯脂质体、黄芪总皂苷脂质 体混合,按主药∶辅料=1.4∶1的比例加入磷酸钙,按主药∶辅料=1.2∶ 1的比例加入微粉纤维素,以及按主药∶辅料=2.5∶1的交联聚乙烯吡咯 烷酮,混和均匀,用70%乙醇适量制软材,过20目筛制颗粒,55℃干燥, 取出,过30目筛整粒,加入适量滑石粉、微粉硅胶,混和均匀,压片,即 得分散片。

与现有技术相比,本申请人进行过大量实验研究,筛选出治疗冠心病心绞 痛等疾病的处方为黄芪总皂苷脂质体、银杏叶总内酯脂质体,最佳配伍范围为 黄芪总皂苷脂质体40~60%与银杏叶总内酯脂质体60~40%。采用本发明的工 艺制备产品外观良好、质量稳定。

为证明本发明提供的药物具有有效的效果,申请人进行了一系列实验;

实验例1:对不同配比药效学比较研究

我们通过抗血小板聚集试验、抑制小鼠尾血栓形成试验,对不同比例的处 方进行了系统的筛选试验,结果如下:

太阳城集团     组方研究结论   配方   编号     处方组成及比例     筛选评价指标    黄芪总皂苷脂质体∶银杏    叶总内酯脂质体 血小板抑制率(%) 血栓形成抑制率(%)   1   2   3   4   5   6   7   8     模型组     1∶99     20∶80     40∶60     60∶40     80∶20     99∶1     阳性对照组     0.33%     48.8%     50.9%     58.6%     59.8%     48.5%     44.4%     60.2%     -0.28%     20.4%     33.5%     40.2%     41.4%     30.8%     21.7%     41.3%

由实验结果可知,黄芪总皂苷脂质体、银杏叶总内酯脂质体最佳配伍范围 为黄芪总皂苷脂质体40~60%与银杏叶总内酯脂质体60~40%。

实验例2:脂质体制备方法研究

2.1脂质体的制备方法的考察

2.1.1逆向蒸发法:取大豆卵磷脂100mg,胆固醇60mg溶于20mL乙醚中,置 于锥形瓶中。以pH5-8的磷酸盐缓冲液为溶剂配制1%银杏叶总内酯或黄芪总皂 苷溶液,电磁搅拌下,将1%银杏叶总内酯或黄芪总皂苷溶液15mL缓缓滴入锥形 瓶中,搅拌使与乙醚形成乳浊液,减压蒸馏1h将乙醚蒸除,得脂质体。

2.1.2乙醚注入法:以pH5-8的磷酸盐缓冲液为溶剂配制1%银杏叶总内酯 或黄芪总皂苷溶液,取15mL于锥形瓶中。将大豆卵磷脂100mg、胆固醇60mg 溶于6mL乙醚中。电磁搅拌下,缓缓将乙醚溶液用五号针头(针尖在液面以下) 均匀后加热65℃,挥发除去乙醚,得脂质体。

2.1.3薄膜法:大豆卵磷脂100mg,胆固醇60mg溶于20mL乙醚中,用旋转 蒸发仪减压除去有机溶剂,在梨形瓶中形成均匀的磷脂膜,加15mL含1%银杏叶 总内酯或黄芪总皂苷的pH5-8的磷酸盐缓冲液,浸泡,搅拌洗脱脂质膜,可得 脂质体。

太阳城集团2.1.4硫酸铵梯度法:取大豆卵磷脂100mg,胆固醇60mg溶于20mL乙醚中, 用旋转蒸发仪减压除去有机溶剂,在梨形瓶中形成均匀的磷脂膜,于真空干燥 箱中干燥后,加入20mL硫酸铵溶液浸泡洗脱脂质膜。将制备的空白脂质体用探 头超声细胞破碎器破碎后,装入透析袋中(约10mmol·L-1),放入0.9%氯化钠 溶液中透析48h,取出透析后的空白脂质体,加入15mL1%银杏叶总内酯或黄芪 总皂苷溶液,置于60℃水浴中孵化10min,得脂质体。

2.2包封率测定

采用透析法测定脂质体包封率。各取上述几种方法制备的脂质体5mL置于 透析袋中,分别置50mL烧杯中,精密加入磷酸缓冲液45mL浸泡,每隔2h搅拌 15min。12h后取浸泡液2.5mL置于25mL容量瓶中,加pH5-8磷酸盐缓冲液定 容。以pH5-8磷酸盐缓冲液为空白在274nm处测吸收度。同步,取5mL1%银杏叶 总内酯或黄芪总皂苷溶液于透析袋中透析,作为空白药物对比,采用包封率计 算公式:

包封率=(C总-C游离)/C总×100%

太阳城集团其中C总为脂质体混悬液中总药量,C游离为未包入脂质体中药物量。结果 见下表。

太阳城集团     不同方法制备脂质体的包封率   乙醚注入法   逆向蒸发法  薄膜法  硫酸铵梯度法   银杏叶总内酯   包封率(%)   黄芪总皂苷包   封率(%)     32.5     37.4     68.4     62.6   35.1   46.1     44.7     52.3

太阳城集团结果:由实验结果可知,银杏叶总内酯脂质体、黄芪总皂苷脂质体采用逆 向蒸发法的包封率较高,因此确定逆向蒸发法为本制剂的脂质体制备方法。

太阳城集团实验例3:制剂药效学实验

对大鼠急性心肌缺血的保护作用:取SD大鼠,体质量230~250g,雌雄各 半,随机分为模型对照组、银杏叶总内酯-黄芪总皂苷注射液0.3g/kg组、本发 明注射剂0.3g/kg组、本发明口服液0.3g/kg组,每组10只,连续7天,在末 次给药后1h结扎大鼠冠状动脉左前降支。于冠脉结扎3h后心室取血3ml,以3000 ×g的速度离心5min制备血清,取血清,用超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA) 试剂盒分别测定血清中相应指标。摘取大鼠心脏排出心腔内积血,用生理盐水冲 洗并用滤纸吸去水分,剔除脂肪血管等非心肌组织,剪除心房和右心室,留下左 心室称重,计算梗死区(湿重)占左心室(湿重)百分比。结果见下表。

太阳城集团     对大鼠冠脉结扎后心肌梗死范围及血清中SOD、MDA的影响     组别     心梗范围(%)   SOD(NU/ml)   MDA(nmol/ml)     模型组     23.7±2.4   156.3±28.5   12.32±2.25     银杏叶总     内酯-黄芪     总皂苷注     射液     0.3g/kg     组     16.5±1.9   198.6±32.5   8.20±2.49     本发明注     射剂组     本发明口     服液组     13.6±2.4     14.6±2.2   232.5±24.6   225.1±30.3   6.14±1.33   5.87±1.02

太阳城集团由实验结果可知,本发明药物制剂能明显提高冠脉结扎大鼠血清中SOD活 性,显著抑制了MDA的生成,明显减小心肌梗死区面积,并且在大大降低用量 的情况下,疗效仍然优于银杏叶总内酯、黄芪总皂苷普通注射液。

具体的实施方式

太阳城集团本发明的实施例1:黄芪总皂苷脂质体60g银杏叶总内酯脂质体40g

太阳城集团取黄芪总皂苷脂质体、银杏叶总内酯脂质体,将混悬液置于-20℃冰箱中 预冻12h,最后经冷冻干燥后即得冻干粉针剂。静脉注射,一日一次,一次一支。

本发明的实施例2:黄芪总皂苷脂质体40g银杏叶总内酯脂质体60g

太阳城集团取黄芪总皂苷脂质体、银杏叶总内酯脂质体,滤过,加注射用水,分装到 安剖瓶,封口灭菌,即得注射液和注射用浓溶液。

太阳城集团本发明的实施例3:黄芪总皂苷脂质体50g银杏叶总内酯脂质体50g

太阳城集团取黄芪总皂苷脂质体、银杏叶总内酯脂质体,将所得混悬液填充在软胶囊 中,即得软胶囊。

本发明的实施例4:黄芪总皂苷脂质体40g银杏叶总内酯脂质体60g

太阳城集团取黄芪总皂苷脂质体、银杏叶总内酯脂质体,将所得混悬液与预胶化淀粉 混合,用聚乙吡咯烷酮的乙醇液为粘合剂制粒,干燥后整粒,再与适量聚乙二 醇6000混合均匀,压片即为片剂。

本发明的实施例5:黄芪总皂苷脂质体50g银杏叶总内酯脂质体50g

取黄芪总皂苷脂质体、银杏叶总内酯脂质体,按主药∶辅料=1.4∶1的 比例加入磷酸钙,按主药∶辅料=1.2∶1的比例加入微粉纤维素,以及按 主药∶辅料=3∶1的交联聚乙烯吡咯烷酮,混和均匀,用70%乙醇适量 制软材,过20目筛制颗粒,55℃干燥,取出,过30目筛整粒,加入适量 滑石粉、微粉硅胶,混和均匀,压片,即得分散片。

本发明的实施例6:黄芪总皂苷脂质体60g银杏叶总内酯脂质体40g

取黄芪总皂苷脂质体、银杏叶总内酯脂质体,加入2.5倍量糊精,0.4%的 甜菊甙,1.5%的微晶纤维素,用适量乙醇溶液制软材,制粒,65℃鼓风干燥, 制粒,整粒,即得颗粒剂。

本发明的实施例7:黄芪总皂苷脂质体55g银杏叶总内酯脂质体45g

太阳城集团取黄芪总皂苷脂质体、银杏叶总内酯脂质体,将与主药比例是1.8∶1的硬 脂酸钠置不锈钢容器内,加入提取物,混合均匀,加热至80-85℃,待全部熔融 后,70-75℃保温,机械高速搅拌15min至均匀,转移至贮液瓶中,70~75℃保 温,调节滴液阀门,滴入30~35℃的煤油中,滴距5~6cm,滴速40~45滴/分, 将形成的滴丸沥尽并擦除煤油,包装,即得滴丸剂。

本发明的实施例8:黄芪总皂苷脂质体45g银杏叶总内酯脂质体55g

将黄芪总皂苷脂质体与银杏叶总内酯脂质体混合均匀,加入5%的羧甲基淀 粉钠和1.4%甘露醇,压制成片,即得口崩片。

本发明的实施例9:黄芪总皂苷脂质体80g银杏叶总内酯脂质体20g

太阳城集团将黄芪总皂苷脂质体与银杏叶总内酯脂质体混合均匀,将与主药比例是1∶ 1.2的泊洛沙姆置不锈钢容器内,加入提取物,混合均匀,加热至80-85℃,待 全部熔融后,70-75℃保温,机械高速搅拌15min至均匀,转移至贮液瓶中,70~ 75℃保温,调节滴液阀门,滴入30~35℃的植物油中,滴距5~6cm,滴速40~ 45滴/分,将形成的滴丸沥尽并擦除植物油,包装,即得滴丸剂。

本发明的实施例10:黄芪总皂苷脂质体20g银杏叶总内酯脂质体80g

太阳城集团将黄芪总皂苷脂质体与银杏叶总内酯脂质体混合均匀,按主药∶辅料= 1.5∶1的比例加入碳酸钙,按主药∶辅料=1.2∶1的比例加入预凝胶淀 粉,以及按主药∶辅料=4∶1的交联聚乙烯吡咯烷酮,混和均匀,用75 %乙醇适量制软材,过20目筛制颗粒,55℃干燥,取出,过30目筛整粒, 加入适量滑石粉、微粉硅胶,混和均匀,压片,即得分散片。

太阳城集团本发明的实施例11:黄芪总皂苷脂质体1g银杏叶总内酯脂质体99g

太阳城集团将黄芪总皂苷脂质体与银杏叶总内酯脂质体混合均匀,加入2倍量淀粉, 0.6%的甜菊甙,1.2%的微晶纤维素,用适量乙醇溶液制软材,制粒,60℃鼓风 干燥,制粒,整粒,即得颗粒剂。

本发明的实施例12:黄芪总皂苷脂质体99g银杏叶总内酯脂质体1g

将黄芪总皂苷脂质体与银杏叶总内酯脂质体混合均匀,加入等量的糊 精,混合均匀,制粒,即得颗粒剂。

本发明的实施例13:黄芪总皂苷脂质体30g银杏叶总内酯脂质体70g

将黄芪总皂苷脂质体与银杏叶总内酯脂质体混合均匀,加入等量的糊 精,混合均匀,制粒,装胶囊,即得胶囊剂。

本发明的实施例14:黄芪总皂苷脂质体70g银杏叶总内酯脂质体30g

将黄芪总皂苷脂质体与银杏叶总内酯脂质体混合均匀,加入蒸馏水,反复 滤过,至滤液澄清为止。加蔗糖于滤液中,搅拌溶解后用脱脂棉滤过,自滤器 上添加蒸馏水适量,摇匀,即得糖浆剂。

太阳城集团实施例15:以上黄芪总皂苷脂质体、银杏叶总内酯脂质体可以是市售的或 是用以下方法制备的:

太阳城集团(1)逆向蒸发法:取大豆卵磷脂100mg,胆固醇60mg溶于20mL乙醚中,置 于锥形瓶中。以pH5-8的磷酸盐缓冲液为溶剂配制1%银杏叶总内酯或黄芪总皂 苷溶液,电磁搅拌下,将1%银杏叶总内酯或黄芪总皂苷溶液15mL缓缓滴入锥形 瓶中,搅拌使与乙醚形成乳浊液,减压蒸馏1h将乙醚蒸除,得脂质体;

(2)溶剂注入法(乙醚注入法):以pH5-8的磷酸盐缓冲液为溶剂配制1% 银杏叶总内酯或黄芪总皂苷,取15mL于锥形瓶中。将大豆卵磷脂100mg、胆固 醇60mg溶于6mL乙醚中。电磁搅拌下,缓缓将乙醚溶液用五号针头(针尖在液 面以下)注入银杏叶总内酯或黄芪总皂苷溶液中。搅拌均匀后加热至65℃,挥 发除去乙醚,得脂质体;

(3)薄膜法:大豆卵磷脂100mg,胆固醇60mg溶于20mL乙醚中,用旋转 蒸发仪减压除去有机溶剂,在梨形瓶中形成均匀的磷脂膜,加15mL含1%银杏叶 总内酯或黄芪总皂苷的pH5-8的磷酸盐缓冲液,浸泡,搅拌洗脱脂质膜,可得 脂质体;

(4)硫酸铵梯度法:取大豆卵磷脂100mg,胆固醇60mg溶于20mL乙醚中, 用旋转蒸发仪减压除去有机溶剂,在梨形瓶中形成均匀的磷脂膜,于真空干燥 箱中干燥后,加入20mL硫酸铵溶液浸泡洗脱脂质膜。将制备的空白脂质体用探 头超声细胞破碎器破碎后,装入透析袋中(约10mmol·L-1),放入0.9%氯化钠 溶液中透析48h,取出透析后的空白脂质体,加入15mL1%银杏叶总内酯或黄芪 总皂苷溶液,置于60℃水浴中孵化10min,得脂质体;

(5)冻结融解法:取磷脂和辅料加一定量无水乙醇溶解,在恒温搅拌的条 件下以一定速度注入银杏叶总内酯或黄芪总皂苷溶液中,继续恒温搅拌,降至 室温,匀浆,膜过滤,灌装,充氮气,封口。将所得脂质体放入液氮中,冷冻 后取出。室温使之溶,重复一次即得;

(6)冷冻干燥法:取豆磷脂2.0g,胆固醇0.5g用适量乙醇在80℃熔融, 加入pH5-8磷酸盐缓冲液,待乙醇自然挥尽后转移至组织捣碎机中,高速搅拌 10min,过滤,火菌,超声15min,在无菌条件下,加入灭菌银杏叶总内酯或黄 芪总皂苷注射原料1.0g及灭菌甘露醇2.0g溶解,灌装于安瓶中,冷冻干燥成 冻干脂质体;(7)钙融合法:7umol的磷脂酰丝氨酸(PS)制成薄膜后,用1.5ml 生理盐水水合,超声波处理5min。取出0.25ml加入到20mmol/L的等量的氯化 钙溶液中混合,37℃孵育80min。生成的卷桶状物1800g离心10min,取沉淀加 入银杏叶总内酯或黄芪总皂苷溶液后孵育15min。随后加入45mmol/L含有EDTA 的生理盐水缓冲液0.25ml孵育50min,即得脂质体;

太阳城集团(8)主动包封法:以pH为4的300mmol/L枸橼酸水溶液为介质,采用逆 相蒸发法或薄膜法制备空白脂质体。用1mol/L的氢氧化钠或碳酸钠溶液调节空 白脂质体混悬液的pH至7.8,使脂质体膜内外形成质子的梯度,即得到脂质体 膜的内部为酸性,外部为碱性的脂质体。将银杏叶总内酯或黄芪总皂苷溶液pH5 -8的磷酸盐缓冲液溶解,65℃孵育。在65℃孵育条件下,将脂质体混悬液与 银杏叶总内酯或黄芪总皂苷溶液混合并轻摇,孵育12min即得;

(9)复乳法:按摩尔比为7∶2.2∶1.5取磷脂酰胆碱(PC)、胆固醇(Ch) 和磷脂酸(PA),将它溶于有机溶剂,加入一定的银杏叶总内酯或黄芪总皂苷 溶液,置高速组织捣碎机(10000r/min)乳化10min,再加入磷酸盐缓冲液(pH5 -8),再一次高速乳化(8000r/min),得乳状液。在减压通氮条件下,除去 有机溶液,即得;

(10)离心法:将80mg磷脂溶于5ml二丁醚中,加入银杏叶总内酯或黄芪 总皂苷溶液的氯化钠溶液0.2ml。超声处理得透明溶液,移置有20ml相同渗透 压的氯化钠溶液的离心管中,用3000r/min离心30min,除去上层有机溶剂,下 层则为含有脂质体的氯化钠溶液。经大孔树脂吸附未包封的银杏叶总内酯或黄 芪总皂苷,即得脂质体;

(11)制备脂质体气雾剂:5ml银杏叶总内酯或黄芪总皂苷溶液,280mg/ml 卵磷脂乙醇液及6.0g的二氯二氟甲烷混合成有机相,含有7%乙醇50ml水为水 相,每次阀门放出50ul有机相及水相,即得。

太阳城集团实施例16:以上银杏叶总内酯前体脂质体、黄芪总皂苷前体脂质体可以是 市售的或是用以下方法制备的:

(1)冻融法:取磷脂和辅料加一定量无水乙醇溶解,在恒温搅拌的条件下 以一定速度注入银杏叶总内酯或黄芪总皂苷溶液中,继续恒温搅拌,降至室温, 匀浆,膜过滤,灌装,充氮气,封口。将所得脂质体放入液氮中,冷冻后取出。 室温使之溶,重复一次即得;

(2)喷雾干燥法:将精确称取的银杏叶总内酯或黄芪总皂苷、大豆磷脂 和胆固醇共同溶于氯仿中,过滤,滤液收集于圆底烧瓶中,旋转蒸发挥去氯仿成 薄膜,真空干燥后,加入pH5-8的磷酸盐缓冲液,浸泡2-8h,然后在氮气流保护 下高速搅拌,一定太阳城集团后,向其中缓慢滴加同样缓冲液溶解的聚乙烯吡咯烷酮 (PVP)和蔗糖溶液,继续搅拌,并补足缓冲液至150mL,然后将脂质体混悬液用微 孔滤膜过滤,滤液在氮气保护下罐封,即得银杏叶总内酯或黄芪总皂苷脂质体。 采用喷干法,实验条件为:进风温度125℃,进料速度60mL/min,旋风分离器压差 55mmH2O,雾化盘转速2700r/min;

(3)旋转蒸发法:分别称取卵磷脂、胆固醇、VE,聚乙烯吡咯烷酮(PVP) 等溶于适量氯仿并收集于茄形烧瓶中,置水浴上,用旋转蒸发器减压挥去氯仿 成膜后加银杏叶总内酯或黄芪总皂苷磷酸缓冲液。浸泡薄膜后。在频率35kHz、 强档工作状态下超声,即得银杏叶总内酯或黄芪总皂苷脂质体混悬液。取甘露 醇等置于150ml茄形烧瓶中,持续减压蒸发至干燥,取出置于真空干燥器中室 温减压过夜,彻底干燥后氮气下分装,即得。

太阳城集团实施例17:黄芪总皂苷、银杏叶总内酯可以是市售的,或是用以下方法制 备的:

(1)取黄芪,粉碎成过10目筛的粗粉,加入5~15倍体积50~80%乙醇 回流提取1~4次,每次0.5~3.5小时,合并提取液,浓缩至60℃时测定相对 密度为1.05~1.15,加入1~4倍量水饱和正丁醇,振摇萃取1~8次,合并正 丁醇液,减压回收溶剂至60℃时测定相对密度为1.05~1.15,干燥得黄芪总皂 苷;

(2)取黄芪,粉碎成过10目筛的粗粉,加入6~12倍体积50~80%乙醇 回流提取1~4次,合并提取液,滤过,滤液浓缩至60℃时测定相对密度为1.05~ 1.15,加入1~3倍药材重量体积的水溶解,滤过,滤液过AB-8大孔吸附树脂 柱,用3~6倍树脂体积水和1~4倍树脂体积15%乙醇冲洗树脂柱,然后用40~ 70%乙醇解吸,收集乙醇解吸液,回收乙醇得黄芪总皂苷;

(3)银杏叶,加入3~12倍量的40%~80%的乙醇,回流提取1~5次,每 次0.5~3小时,合并回流液,过滤,滤液回收乙醇浓缩,加入1~4倍体积乙 酸乙酯萃取1~6次,合并乙酸乙酯液,减压回收溶剂,真空干燥得银杏叶总内 酯;

太阳城集团(4)银杏叶,加入3~12倍量的40%~80%的乙醇,回流提取1~5次,每 次0.5~3小时,合并回流液,过滤,滤液回收乙醇浓缩,加入注射用水溶解, 滤过,滤液过大孔吸附树脂柱或聚酰胺柱和硅胶柱,用0~15%乙醇洗脱杂质, 再用2~8倍树脂重量的40~90%乙醇洗脱,洗脱液回收乙醇浓缩,真空干燥, 得银杏叶总内酯。

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