太阳城集团

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瞬时连接于聚合物载体的干生长激素组合物.pdf

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瞬时 连接 聚合物 载体 生长激素 组合
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摘要
申请专利号:

太阳城集团CN201080057256.6

申请日:

20101215

公开号:

CN102711733A

公开日:

20121003

当前法律状态:

有效性:

失效

法律详情:
IPC分类号: A61K9/14,A61K9/19,A61K47/48,A61K38/27,A61K9/00,A61K38/00,A61K47/26 主分类号: A61K9/14,A61K9/19,A61K47/48,A61K38/27,A61K9/00,A61K38/00,A61K47/26
申请人: 阿森迪斯药物股份有限公司
发明人: G·N·拉斯姆森,S·金德曼,H·拉乌,T·韦格
地址: 丹麦海勒鲁普
优先权: 09179335.6
专利代理机构: 北京市中咨律师事务所 代理人: 陈润杰;黄革生
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法律状态
申请(专利)号:

太阳城集团CN201080057256.6

授权太阳城集团号:

法律状态太阳城集团日:

法律状态类型:

摘要

太阳城集团本发明涉及含有冻干保护剂和任选地一种或一种以上赋形剂的rhGH聚合物前体药物的干组合物。此类组合物当储存在2-8℃时稳定至少1年。本发明还涉及制备所述组合物的方法、包含此类组合物的容器,以及试剂盒。

权利要求书

1.干组合物,其包含治疗有效量的rhGH聚合物前体药物和一种或多种冻干保护剂,其中所述生长激素与聚合物载体瞬时连接。2.根据权利要求1的组合物,其特征在于所述组合物是通过冷冻干燥干燥的。3.根据权利要求1或2的干组合物,其特征在于所述干组合物当储存在2-25℃时稳定至少1年。4.根据权利要求1-3中任一项的组合物,其中所述冻干保护剂是海藻糖。5.根据权利要求1-4中任一项的组合物,其特征在于所述组合物作为单剂量组合物提供。6.根据权利权利要求1-4中任一项的组合物,其特征在于所述组合物作为多剂量组合物提供。7.根据权利要求1-6中任一项的组合物,其中所述rhGH聚合物前体药物具有(A)中所示的化学结构,其中HN-rhGH表示与瞬时连接体连接的rhGH残基;R1、R2、R3、R4和R5独立地选自氢、甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、叔丁基;PEG表示与瞬时连接体连接的聚乙二醇化残基;n=1或2;且X选自C1-C8烷基或者C1-C12杂烷基。8.权利要求7的组合物,其中所述通式(A)的部分具有以下结构其中每个c独立地是250至750的整数,优选300至400的整数,和更优选地500。9.根据权利要求1-8中任一项的组合物,其特征在于其含有一种或多种其他的生物学活性剂,或者以其游离形式或者作为前体药物,且其中一种或多种其他的生物学活性剂选自IGF-1、促生长激素释放肽或促生长激素释放肽样化合物、促性腺激素释放激素激动剂和/或类似物、生长激素释放因子和类似物、性腺类固醇、抗雄激素类、非甾类芳香酶抑制剂、HIV联合疗法、游离脂肪酸调节物、促蛋白合成类固醇、雌激素激动剂/拮抗剂、普萘洛尔、食欲抑制剂、骨质疏松症药物、包括双膦酸类化合物、骨形成剂、雌激素类、甲状旁腺激素和选择性受体调节剂和/或抗糖尿病药物如胰岛素、噻唑烷二酮类、磺酰脲类、肠降血糖素模拟物、美各里替尼类、双胍类、α-葡糖苷酶抑制剂和糊精类似物。10.根据权利要求1-9中任一项的组合物,其特征在于所述hGH聚合物前体药物在组合物中的剂量足以在一次应用中提供用于至少3天的治疗性有效量的rhGH剂量。11.根据权利要求10的组合物,其特征在于所述hGH聚合物前体药物的一次应用足以维持1周。12.权利要求1-11中任一项的组合物,其中所述组合物包含一种或多种赋形剂。13.权利要求1-12中任一项的组合物,其中所述组合物包含14.权利要求1-13中任一项的组合物,其中所述组合物包含15.权利要求1-14中任一项的组合物,其中所述组合物包含16.权利要求1-15中任一项的组合物,其中所述组合物的全部生长激素部分的至少30%是在位置Lys158聚乙二醇化的。17.包含权利要求1-16中任一项的组合物的容器。18.根据权利要求17的容器,其特征在于所述容器是双腔注射器。19.权利要求18的双腔注射器,其特征在于根据权利要求1-16中任一项的干组合物提供在所述双腔注射器的第一个腔中,且重构溶液在双腔注射器的第二个腔中提供。20.制备根据权利要求1-16中任一项的组合物的方法,包括步骤(i)将rhGH聚合物前体药物与一种或多种冻干保护剂和任选地一种或多种赋形剂混合,(ii)将与期望数量的剂量等同的量的步骤(i)的混合物转移到容器的合适的腔中,(iii)干燥该混合物,并(iv)密封该容器。21.制备根据权利要求1-16中任一项的组合物的方法,包括步骤(i)将rhGH聚合物前体药物与海藻糖二水合物和琥珀酸混合,以产生包含rhGH聚合物前体药物        10-300mg/ml琥珀酸                    5-50mM海藻糖二水合物            25-850mg/ml的组合物,(ii)将步骤(i)的组合物的pH用三羟甲基氨基甲烷调整到pH4.0至pH6.5,(iii)将与期望数量的剂量等同的量的步骤(i)的混合物转移到容器的合适的腔中,(iv)干燥该混合物,并(v)密封该容器;其中可以改变步骤(ii)和(iii)的顺序。22.权利要求21的方法,其中所述步骤(i)的组合物包含rhGH聚合物前体药物        10-300mg/ml琥珀酸                    5-50mM海藻糖二水合物            30-150mg/ml。23.权利要求21或22的方法,其中所述步骤(i)的组合物包含rhGH聚合物前体药物        10-300mg/ml琥珀酸                    5-50mM海藻糖二水合物            50-100mg/ml。24.权利要求21或23中任一项的方法,其中所述步骤(i)的组合物包含rhGH聚合物前体药物        30-60mg/ml琥珀酸                    10mM海藻糖二水合物            70-85mg/ml。25.权利要求21或24中任一项的方法,其中在步骤(ii)中将pH调整至pH4.5至pH5.5。26.根据权利要求20-25中任一项的方法,其中所述容器是双腔注射器,第一个腔具有所述混合物,所述方法进一步包括步骤●在密封容器前用重构溶液填充第二腔。27.试剂盒,其包含针和含有根据权利要求1-16中任一项的组合物和任选地还含有重构溶液的容器,所述容器适合于与针一起使用。28.根据权利要求27的试剂盒,其特征在于所述容器是双腔注射器。29.制备包含治疗有效量的rhGH聚合物前体药物和一种或多种冻干保护剂的重构组合物的方法,其中所述生长激素与聚合物载体瞬时连接,所述方法包括步骤●将权利要求1-16中任一项的组合物与重构溶液接触。30.重构组合物,其包含治疗有效量的rhGH聚合物前体药物和一种或多种冻干保护剂,其中生长激素与聚合物载体瞬时连接,所述组合物可通过权利要求20的方法获得。31.权利要求30的重构组合物,其中所述重构组合物包含rhGH聚合物前体药物        10-300mg/ml琥珀酸                    5-50mM海藻糖二水合物            25-850mg/ml,并具有pH4.5至pH6的pH。32.权利要求30或31的重构组合物,其中所述重构组合物包含rhGH聚合物前体药物        10-300mg/ml琥珀酸                    5-50mM海藻糖二水合物            30-150mg/ml,并具有pH4.5至pH6的pH。33.权利要求30至32中任一项的重构组合物,其中所述重构组合物包含rhGH聚合物前体药物        30-60mg/ml琥珀酸                    10mM海藻糖二水合物            70-85mg/ml,并具有pH4.5至pH5.5的pH。34.权利要求30-33中任一项的重构组合物,其中所述重构组合物还包含一种或多种防腐剂和/或抗微生物剂。35.权利要求30或34的重构组合物,其中所述重构组合物还包含一种或多种赋形剂。

说明书

太阳城集团本发明涉及rhGH聚合物前体药物的干组合物、其制备方法以及包含所述组合物的容器和试剂盒。

太阳城集团生长激素(GH)是在人类和其他动物中刺激生长和细胞繁殖的激素。其是在垂体前叶的侧翼内通过促生长激素细胞合成、储存和分泌的具有191个氨基酸的单链多肽激素。当提及由重组DNA技术产生的人类生长激素(hGH)时,该激素也通称为促生长素,并简称为“rhGH”。

生长激素在体内具有多种功能,最显著的功能是在幼年期间增加高度,并且通过GH的治疗性使用可以治疗几种疾病。

由于生长激素产生不足引起的生长激素缺乏造成了多种负面影响。在婴儿期和幼年期,最突出的特征是生长不足,导致身材矮小,而在成年期,其会造成瘦体重降低、骨密度减少以及其他物理和生理影响。生长激素缺乏的标准治疗是在皮下或者肌肉中每日注射重组人类生长激素(rhGH)。

太阳城集团为了使儿科患者群体免于每日注射的负担,意图提供长效生长激素组合物,以在幼年期治疗生长激素缺乏。描述了长效的或者持续释放人类生长激素的多种组合物。第一代生长激素长效药剂基于高度黏性液体如蔗糖醋酸异丁酸酯(WO 01/78683,Genentech)或生物可降解PLGA(聚交酯/聚乙醇酸交酯)凝胶中的人类生长激素的缓慢释放组合物。在US 5,645,010中,Alkermes描述了锌复合hGH在PLGA中的组合物。对应的市售产品(Nutropin Depot)提供为单剂量可注射的组合物。出于多种原因,Nutropin Depot并没有显示出明显的市场占有,并且已经停售。

最新的基于聚合物的组合物使用透明质酸代替PLGA(US2008/0063727,LG Life Sciences)。其他研发集中于生长激素的PEG缀合物,以延长注射后经由皮下组织的吸收期以及循环缀合物的终末半衰期二者(US 4,179,337描述了聚乙二醇化的促生长素,如WO 03/044056,Pharmacia和WO 06/102659,Nektar)为目的。

太阳城集团然而,对于如何配制聚乙二醇化的生长激素,仅可得到很少的详细说明。由于PEG自身为高黏性物质,与未修饰的蛋白质比较,携带高分子量PEG链的相应蛋白质缀合物也表现出强烈增强的黏性。由于期望以比每日剂量更低的频率提供充足物质而同时寻求最小化注射体积,该情况更为明显。因此,长效聚乙二醇化生长激素的组合物比现存的未修饰生长激素的每日一次组合物更浓而且更黏稠。

Ambrx的WO 2006/071840中详述了掺入非天然氨基酸的聚乙二醇化生长激素变体的组合物。Novo的WO 2007/025988描述了通过肟键含有生长激素和PEG的组合物。Novo的US 26/257479详述了PLGA中PEG生长激素缀合物的组合物。最近,通过在前体药物方法中使用可逆的连接体,引入了聚乙二醇化范围的扩展。hGH的聚乙二醇化前体药物表现出聚乙二醇化缀合物显著降低的生物活性,但释放自该缀合物的游离的生长激素表现出完全未受影响的生物学活性。

太阳城集团此类hGH前体药物的组合物,不仅仅需要考虑通过PEG组分引入的黏性,还必须提供足够的前体药物稳定性,以避免储存期间过早的hGH释放。如果PEG部分与药物之间的可逆连接在储存期间降解,那么则增加了立即可用的药物浓度,其导致了超剂量的风险。此外,在储存期间释放的任一药物在施用给患者后都经历快速的肾脏清除,因此,降低了长效组合物提供药物的治疗相关量的太阳城集团。这造成了不满足医疗需求的风险。

此外,已知rhGH在储存条件下会经历分解反应,其会产生相应组分的杂质。因此,应当强制鉴定合适的rhGH聚合物前体药物组合物,其中rhGH应当显示出可接受的杂质谱。

因此,首先需要研发hGH聚合物前体药物的组合物,其确保了rhGH聚合物前体药物化合物的稳定性。

此外,期望提供此类hGH聚合物前体药物的单剂量以及多剂量组合物。

因此,本发明的目的是提供此类组合物。

该目的通过包含治疗有效量的rhGH聚合物前体药物和一种或者多种冻干保护剂和任选地一种或多种可药用赋形剂的干组合物实现,其中生长激素与聚合物载体瞬时连接。

在本发明的上下文中,术语和短语使用如下。

因为重组人类GH在序列上与天然人类GH相同,所以在本文中,术语重组人类生长激素(rhGH)也涉及所谓的生物起源等同物。因此,在本发明的含义内,术语rhGH和hGH可以同义使用。

如本领域技术人员已知,对所关注的生物学物质(在本文中为GH)做出例如轻微氨基酸改变而不显著影响生物学物质的活性,是目前的一项常规工作。

除重组的人类生长激素和生物起源生长激素外,在本文中术语重组人类生长激素还涉及全部可能的rhGH多肽。

可能的rhGH多肽的精确描述给自于Pharmacia公司的WO-A2005/079838第15页第0043段一直到并且包括第0053段中。

术语“hGH多肽或hGH蛋白质”当在本文中使用时,包括优选来自哺乳动物物种、更优选来自人类和鼠类物种的全部hGH多肽,以及它们的变体、类似物、直向同系物(orthologs)、同系物和衍生物及其片段,其特征在于在生长期促进生长并维持正常的身体组成、合成代谢和脂类代谢。任选地,术语“hGH多肽或hGH蛋白质”进一步包括与天然存在的hGH变体比较具有一个或多个其他氨基酸残基的hGH,其中这些其他氨基酸残基可以在氨末端、C-末端和/或内部。应当理解,术语“hGH多肽或hGH蛋白质”还指具有添加的、缺失的或者交换的氨基酸残基的任意组合的hGH变体。

优选地,术语“hGH多肽或hGH蛋白质”当在本文中使用时,包括优选来自哺乳动物物种、更优选来自人类和鼠类物种的全部hGH多肽,以及它们的变体、类似物、直向同系物、同系物和衍生物及其片段,其特征在于在生长期促进生长并维持正常的身体组成、合成代谢和脂类代谢。

更优选地,hGH多肽或hGH蛋白质与以下给出的使用根据本领域技术人员已知的IUPAC-IUB的氨基酸单字母码序列具有至少95%的同一性。

太阳城集团FPTIPLSRLFDNAMLRAHRLHQLAFDTYQEFEEAYIPKEQKYSFLQNPQTSLCFSESIPTPSNREETQQKSNLELLRISLLLIQSWLEPVQFLRSVFANSLVYGASDSNVYDLLKDLEEGIQTLMGRLEDGSPRTGQIFKQTYSKFDTNSHNDDALLKNYGLLYCFRKDMDKVETFLRIVQCRSVEGSCGF

太阳城集团术语“hGH多肽或hGH蛋白质”优选指具有如A.L.Grigorian等人,Protein Science(2005)14,902-913中公开的序列的22kDa hGH多肽,以及表现出基本上相同的生物学活性(在生长期促进生长并维持正常的身体组成、合成代谢和脂类代谢)的其变体、同系物和衍生物。更优选地,术语“hGH多肽或hGH蛋白质”指正好具有上述序列的多肽。

如本文中所用的术语“hGH多肽或hGH蛋白质”指来自同一物种但不同于参考hGH多肽的多肽。通常,差异是有限的,以使参考和变体的氨基酸序列在整体上是非常类似的,并且在许多区域是相同的。优选地,hGH多肽与参考hGH多肽具有至少70%、80%、90%、95%、96%、97%、98%或99%的同一性,优选地,hGH多肽具有如A.L.Grigorian等人,Protein Science(2005),14,902-913中所示的序列。就与查询氨基酸序列具有至少例如95%“同一性”的氨基酸序列的多肽而言,其指除所指多肽序列可以包括查询氨基酸序列的每一百个氨基酸中至多5个氨基酸改变外,所指多肽的氨基酸序列与查询序列是相同的。参考序列的这些改变可以发生在参考氨基酸序列的氨基端或羧基端位置,或者这些末端位置之间的任何位置、个别地分散在参考序列的残基之间或者分散在参考序列内一个或多个邻近的群组中。查询序列可以是参考序列的整个氨基酸序列或者如本文所述的任一特定片段。

此类hGH多肽变体可以是天然存在的变体,例如由占据生物体染色体上给定位置的一个或几个交替形式的hGH编码的天然存在的等位变体、或者由来源于单个初级转录物的天然存在的剪接变体编码的同种型。备选地,hGH多肽变体可以是这样的变体,其是已知并不天然存在的并可以使用本领域已知的诱变技术制备的变体。

本领域已知,在没有实质上丢失生物功能的情况下,可以从生物活性肽或蛋白质的N-末端或C-末端中缺失一个或多个氨基酸(参见例如Ron等人,(1993),Biol.Chem.,268 2984-2988,所述公开在此处以其整体引入作为参考)。

本领域技术人员还公认,在没有显著影响蛋白质的结构或功能的情况下,可以改变hGH多肽的一些氨基酸序列。此类突变包括根据本领域已知的一般规则选择的缺失、插入、倒位、重复和取代,而几乎对活性不产生影响。例如,在Bowie等人(1990),Science 247:1306-1310中提供了有关如何制备表型沉默氨基酸取代的指导,在此以其整体引入作为参考,其中作者指出:存在两种主要用于研究氨基酸序列耐受改变的方法。

太阳城集团第一种方法依赖于进化的过程,其中通过自然选择接受或者拒绝突变。第二种方法使用基因工程在克隆的hGH的特定位置引入氨基酸改变,并选择或筛选以鉴定维持功能的序列。这些研究已经显示,蛋白质可以出乎意料地耐受氨基酸取代。作者进一步表明,在蛋白质的某些位置处,什么样的氨基酸改变可能是许可的。例如,大多数掩藏的氨基酸残基需要非极性侧链,而表面侧链的极少数特征一般是保守的。其他此类表型沉默取代描述于上述Bowie等人,(1990),以及其中所引用的参考文献中。

太阳城集团通常认为保守的取代是在脂肪族氨基酸Ala、Val、Leu和Phe间,用一个取代另一个,互换羟基残基Ser和Thr、交换酸性残基Asp和Glu、在酰胺残基Asn和Gln之间取代、交换碱性残基Lys和Arg,以及在芳香族残基Phe、Tyr之间取代。此外,以下氨基酸群组通常代表等效改变:(1)Ala、Pro、Gly、Glu、Asp、GIn、Asn、Ser、Thr;(2)Cys、Ser、Tyr、Thr;(3)Val、lIe、Leu、Met、Ala、Phe;(4)Lys、Arg、His;(5)Phe、Tyr、Trp、His。

术语hGH多肽还包括由hGH类似物、直向同系物和/物种同系物编码的所有hGH多肽。如本文中所用的术语“hGH类似物”指不同的和不相关的生物的hGH,其在各个生物中执行相同的功能,但其并非来源于生物祖先所共有的祖先结构。相反,类似的hGH独立地产生,然后进化以执行相同的功能(或者类似的功能)。换言之,类似的hGH多肽是具有非常不同的氨基酸序列但执行相同的生物学活性即在生长期促进生长并维持正常的身体组成、合成代谢和脂类代谢的多肽。如本文中所用的术语“hGH直向同系物”指两种不同物种内的hGH,其序列通过祖先物种中共同的同系hGH相互关联,但已经进化变得相互不同。如本文中所用的术语“hGH同系物”指不同生物的hGH,其在各个生物中执行相同的功能,并来源于生物祖先所共有的祖先结构。换言之,同系hGH多肽是具有非常类似的氨基酸序列的多肽,其执行相同的生物学活性,即在生长期促进生长并维持正常的身体组成、合成代谢和脂类代谢。优选地,可以将hGH多肽同系物定义为显示出与参考hGH多肽、优选具有如上所述序列的hGH多肽具有至少40%、50%、60%、70%、80%、90%、95%、96%、97%、98%或99%的同一性的多肽。

因此,hGH多肽可以是例如:(i)其中一个或多个氨基酸残基用保守的或者非保守的氨基酸残基(优选地保守氨基酸残基)取代的hGH多肽,并且该取代的氨基酸残基可以是或者可以不是由遗传密码编码的:或者(ii)其中一个或多个氨基酸残基包含取代基的hGH多肽:或者(iii)其中hGH多肽与另一化合物、例如增加多肽半衰期的化合物(例如聚乙二醇)融合的hGH多肽:或者(iv)其中其他的氨基酸与上述形式的多肽融合的hGH多肽,例如IgG Fc融合区肽,或者前导序列或分泌序列或者用于纯化上述形式的多肽的序列或原蛋白序列。

太阳城集团hGH多肽可以是单体或者多聚体。多聚体可以是二聚体、三聚体、四聚体或者包含至少5个单聚多肽单元的多聚体。多聚体还可以是同源二聚体或者异源二聚体。多聚体可以是疏水、亲水、离子和/或共价结合的结果和/或可以通过例如脂质体形成间接连接。在一个实例中,共价结合在含hGH多肽或其片段的融合蛋白质所含的异源序列之间(参见例如美国专利号5,478,925,其公开在此处以其整体引入作为参考)。在另一实例中,hGH多肽或其片段通过肽连接体例如US.5,073,627(在此处引用作为参考)中所述那些与一个或多个可以为hGH多肽或者异源多肽的多肽连接。

用于制备多聚体hGH多肽的另一方法涉及使用与已知促进蛋白质多聚化的亮氨酸拉链或异亮氨酸拉链多肽序列融合的hGH多肽,其中发现使用本领域技术人员已知的技术,包括WO 94/10308的教导。在另一实例中,hGH多肽可以通过在含多肽序列的融合hGH多肽中所含的多肽序列之间的相互作用结合。还可以使用本领域已知的化学技术产生hGH多聚体,例如使用本领域已知的连接体分子和连接体分子长度优化技术的交联(参见例如US 5,478,925)、本领域已知在位于(期望含在多聚体内的)多肽序列内的半胱氨酸残基之间形成一个或多个分子间交联的技术(参见例如US 5,478,925)、将半胱氨酸或者生物素添加到hGH多肽的C-末端或N-末端,以及产生含有一个或多个以上这些修饰多肽的技术(参见例如US 5,478,925)或者产生含hGH多聚体的脂质体的30种技术的任意一种(参见例如美国专利号5,478,925),所述公开以其整体引用作为参考。

如本文中所用的术语“hGH多肽片段”指包含hGH多肽、优选具有上述序列的多肽的临近跨度的一部分氨基酸序列的任意肽或者多肽,即其指与天然存在的变体比较,在N末端、C末端和/或内部具有至少一个氨基酸残基的一个或多个缺失的hGH多肽。

众所周知,rhGH或其变体、缀合物或者衍生物可能经历分解反应,其会产生杂质,例如:

·琥珀酰亚胺和异天冬氨酸降解产物(杂质):异天冬氨酰肽键的形成是肽和蛋白质在温和条件下非酶促降解的最常见形式之一。对于hGH,琥珀酰亚胺形成和随后水解成异天冬氨酸和天冬氨酸的主要位点是ASP130。

·由于脱酰胺作用产生的降解产物(杂质):在温和条件下,hGH的主要脱酰胺位点是ASN149和ASN152。

·由于氧化作用产生的降解产物(杂质):在温和条件下,hGH的主要氧化位点是MET14。

太阳城集团为了增强药物如rhGH的体内物理化学或者药物动力学性质,可以将该药物与载体缀合。如果药物与载体和/或连接体瞬时结合,通常将此类系统指定为载体-连接的前体药物。根据IUPAC提供的定义(如在http://www.chem.qmuI.ac.uk/iupac.medchem给出,在2009年7月22日获取),载体连接的前体药物是含有给定活性物质与瞬时载体基团的暂时连接的前体药物,其产生改善的物理化学或者药物动力学性质,并且通常通过水解切割可以在体内容易地去除。

在载体连接的前体药物中使用的连接体是瞬时的,意为在生理学条件(pH7.4,37℃的含水缓冲液)下,其是非酶促水解可降解的(可切割的),半衰期范围为例如1小时至3个月。术语“瞬时的”和“可逆的”可同义使用。

太阳城集团本领域技术人员明白,hGH聚合物前体药物是共价缀合物,意为hGH部分通过可逆的连接体部分与聚合物共价连接。

优选地,在hGH聚合物前体药物中使用的连接体是无痕迹的,意为它们将hGH以其游离形式释放。

合适的载体是聚合物,并可以与连接体直接缀合或者通过不可切割的间隔区与连接体缀合。术语“hGH聚合物前体药物”指hGH的载体连接的前体药物,其中载体是聚合物。

太阳城集团术语聚合物描述了由通过化学键、以线性、环状、分枝状、交联或者树状聚体(dendrimeric)方式或它们的组合连接的重复结构单元组成的分子,其可以是合成来源或者生物来源或者二者的组合。通常,聚合物具有至少1kDa的分子量。

聚合物优选地选自例如2-异丁烯酰基-氧乙基磷酰基胆碱、水凝胶、基于PEG的水凝胶、聚(丙烯酸)、聚(丙烯酸酯)、聚(丙烯酰胺)、聚(烷氧基)聚合物、聚(酰胺)、聚(酰胺基胺)(poly(amidoamines))、聚(氨基酸)、聚(酐)、聚(天冬酰胺)、聚(丁酸)、聚(羟基乙酸)、聚对苯二甲酸丁二醇酯、聚(己内酯)、聚(碳酸酯)、聚(氰丙烯酸酯)、聚(二甲基丙烯酰胺)、聚(酯)、聚(乙烯)、聚(乙二醇)、聚(环氧乙烷)、聚(磷酸三乙酯)(poly(ethyl phosphates))、聚(乙基唑啉)、聚(羟基乙酸)、聚(丙烯酸羟乙酯)、聚(羟基乙基唑啉)、聚(羟基甲基丙烯酸脂)、聚(羟丙基甲基丙烯酰胺)、聚(甲基丙烯酸羟丙脂)、聚(羟丙基唑啉)、聚(亚氨基碳酸酯)、聚(乳酸)、聚(乳酸-羟基乙酸共聚物)、聚(甲基丙烯酰胺)、聚(甲基丙烯酸酯)、聚(甲基唑啉)、聚(有机膦腈)、聚(原酸酯)、聚(唑啉)、聚(丙二醇)、聚(硅氧烷)、聚(氨基甲酸酯)、聚(乙烯醇)、聚(乙烯胺)、聚(乙烯甲基醚)、聚(乙烯基吡咯烷酮)、硅酮、纤维素、羧甲基纤维素、羟丙基甲基纤维素、甲壳质、脱乙酰壳多糖、葡聚糖、糊精、明胶、透明质酸及衍生物、甘露聚糖、果胶、鼠李半乳糖醛酸聚糖(rhamnogalacturonans)、淀粉、羟烷基淀粉、羟乙基淀粉和其他基于碳水化合物的聚合物、木聚糖及其共聚物。

本文中所用的术语“PEG”或“聚乙二醇化残基”用于示例以重复单元为特征的合适的水溶性聚合物。合适的聚合物可以选自聚烷氧基聚合物、透明质酸及其衍生物、聚乙烯醇、聚唑啉、聚酐、聚(原酸酯)、聚碳酸酯、聚氨基甲酸酯、聚丙烯酸、聚丙烯酰胺、聚丙烯酸酯、聚甲基丙烯酸酯、聚有机膦腈、聚硅氧烷、聚乙烯吡咯烷酮、聚氰丙烯酸酯和聚酯。优选地是聚烷氧基聚合物,特别地含以重量计至少10%、更优选地以重量计至少25%、甚至更优选地以重量计至少50%的环氧乙烷单元的聚乙二醇聚合物。

太阳城集团“组合物”指两种或两种以上化学物质的混合物。药物组合物包含药物活性部分,或者以其游离形式或者作为前体药物,以及可药用赋形剂和/或载体。

“干组合物”意为hGH聚合物前体药物组合物以干的形式在容器中提供。用于干燥的合适方法是喷雾干燥和冷冻干燥(冻干)。该hGH聚合物前体药物的干组合物具有最大10%、优选地小于5%和更优选地小于2%(根据Karl Fischer测定)的残留水含量。干燥的优选方法是冷冻干燥。“冷冻干燥的组合物”意为首先冷冻hGH聚合物前体药物组合物,随后通过减压进行水减少。该术语并不排除在将组合物填充入最终容器之前在制备工艺中发生的其他干燥步骤。

“冷冻干燥”(冻干)为脱水过程,其特征在于冷冻组合物,然后降低周围压力和任选地加热,以允许组合物中冷冻的水直接从固相中升华成气体。通常,通过凝华作用收集升华的水。

“重构”意为添加液体以使组合物回到原来的形式,例如溶液。

“重构溶液”指在施用给需要其的患者之前,用于重构rhGH聚合物前体药物的干组合物的液体。

“容器”意为任意容器,其中包含了rhGH聚合物前体药物组合物并可以储存,直到重构。

“稳定的”和“稳定性”意为在指定的储存太阳城集团内,聚合物缀合物保持缀合并不会大量程度的水解,并表现出与rhGH相关的可接受的杂质谱。为了被视为稳定的,组合物含有少于5%的游离形式的药物和少量的rhGH相关杂质,例如ASP130琥珀酰亚胺和异天冬氨酸形成、ASN140和ASN152脱酰胺,以及MET14氧化。可以将杂质定量为胰蛋白酶肽(tryptic peotides),基于相对于相应未修饰胰蛋白酶肽的峰面积的它们的各个峰面积,并且“少量”可对应于该杂质存在的程度不大于20%,优选地不大于10%,甚至更优选地不大于5%(每种杂质)。

太阳城集团药物的“游离形式”指药物以其未修饰的、药理学完全活性形式,例如从聚合物缀合物中释放后。

“治疗有效量”意为足以治愈、缓解或者部分阻止给定疾病及其并发症的临床表征的量。将足够实现其的量定义为“治疗有效量”。每一目的的有效量取决于疾病或者损伤的严重程度,以及受试者的体重和一般状态。应当理解,使用常规实验、通过构建数值矩阵并测试矩阵中不同的点,可以实现合适剂量的测定,这都落入受训医师的普通技术内。在本发明的范围内,治疗有效量涉及旨在实现长期即3天或更长、例如1周或3周的治疗效果的剂量。

“缓冲液”或“缓冲剂”指维持pH在期望范围内的化学化合物。生理上耐受的缓冲液为例如磷酸钠、琥珀酸盐、组氨酸、碳酸氢盐、柠檬酸盐和乙酸盐、硫酸盐、硝酸盐、氯化物、丙酮酸盐。还可以使用解酸剂,例如Mg(OH)2或ZnCO3。可以调整缓冲能力,以匹配对pH稳定性最敏感的条件。

太阳城集团“赋形剂”指与治疗剂一起施用的化合物,例如缓冲剂、等渗性改性剂、防腐剂、稳定剂、抗吸收剂、氧化保护剂或者其他辅助剂。然而,在一些情况下,一种赋形剂可以具有两种或者三种功能。

“冻干保护剂”是这样的分子,当与目的蛋白质组合时,在一般干燥、并特别地在冷冻干燥和随后的储存期间,显著防止或降低蛋白质的化学和/或物理不稳定性。示例性冻干保护剂包括糖,如蔗糖或海藻糖;氨基酸如谷氨酸单钠或组氨酸或精氨酸;甲胺类,如甜菜碱;易溶盐(lyotropic salt),如硫酸镁;多元醇,如三元或者更高级糖醇,例如甘油、赤藓醇、丙三醇、阿糖醇、木糖醇、山梨醇和甘露醇;乙二醇;丙二醇;聚乙二醇;普朗尼克类(pluronics);羟烷基淀粉,例如羟乙基淀粉(HES)及其组合。

太阳城集团优选地,“冻干保护剂”是这样的分子,当与目的蛋白质组合时,在一般干燥、并特别地在冷冻干燥和随后的储存期间,显著防止或降低蛋白质的化学和/或物理不稳定性。示例性冻干保护剂包括糖,如蔗糖或海藻糖;氨基酸,如谷氨酸单钠或组氨酸;甲胺类,如甜菜碱;易溶盐,如硫酸镁;多元醇,如三元的或者更高级糖醇,例如甘油、赤藓醇、丙三醇、阿糖醇、木糖醇、山梨醇和甘露醇;乙二醇;丙二醇;聚乙二醇;普朗尼克类;羟烷基淀粉,例如羟乙基淀粉(HES)及其组合。

太阳城集团优选地,在干燥步骤前,将冻干保护剂以“冻干保护量”加入到组合物中,其意为,在冻干保护量的冻干保护剂存在下冷冻干燥蛋白质后,蛋白质在冷冻干燥和储存期间,基本上保留其物理和化学稳定性和完整性。

太阳城集团“表面活性剂”指降低流体表面张力的湿润剂。

太阳城集团“等渗性改性剂”指最小化由于细胞损伤产生的伤害的化合物,所述细胞损伤归因于注射长效药剂处渗透压的差异。

术语“稳定剂”指用于稳定聚合物前体药物的化合物。通过加强稳定蛋白质的力、通过去稳定变性状态或者通过将赋形剂与蛋白质直接结合,来实现稳定。

太阳城集团“抗吸收剂”主要指离子或非离子表面活性剂或者其他蛋白质或可溶性聚合物,用于包被或者竞争性吸附于组合物容器的内表面。赋形剂的所选浓度和类型取决于要避免的影响,但通常恰在CMC值之上在界面形成表面活性剂的单层。

“氧化保护剂”指抗氧化剂,如抗坏血酸、四氢甲基嘧啶羧酸(ectoine)、谷胱甘肽、甲硫氨酸、单硫代甘油、桑色素、聚氮丙啶(PEI)、没食子酸丙酯、维生素E、螯合剂如柠檬酸、EDTA、六磷酸盐(hexaphosphate)、巯基乙酸。

“抗微生物剂”指杀死或抑制微生物如细菌、真菌、酵母、原生动物和/或破坏病毒的化学物质。

太阳城集团“可药用”意为包括不会干扰活性成分的生物学活性的有效性并且对所施用的宿主无毒的任意赋形剂和/或添加剂。

太阳城集团“密封容器”意为以不透气的方式封闭容器,不允许外部与内部之间的气体交换,并保持内含物无菌。

以下部分进一步详细描述了本发明。

本发明组合物含有rhGH聚合物前体药物。优选地,rhGH聚合物前体药物具有(AB)中显示的通式,

hGH-(NH-L-S0)n  (AB),

其中

n为2、3或4;优选地2;

hGH(-NH)n表示hGH残基;

每个L为官能团La,其通过自动切割诱导基团Ga是自身可水解的(自动可切割的);和

太阳城集团每个S0独立地是聚合物链,具有至少5kDa的分子量,其中S0任选地通过包含至少第一分支结构BS1而支化,所述至少第一分支结构BS1包含具有至少4kDa分子量的至少第二聚合物链S1,其中S0、BS1、S1的至少之一进一步包含自动切割诱导基团Ga,并且其中无hGH-NH的前体药物缀合物的分子量为至少25kDa和最多1000kDa,优选地至少25kDa和最多500kDa,甚至更优选地至少30kDa和最多250kDa,甚至更优选地至少30kDa和最多120kDa,甚至更优选地至少40kDa和最多100kDa。

太阳城集团在优选的实施方案中,聚合物是PEG,且每个生长激素分子的总PEG载荷达到至少25kDa。一般地,总PEG载荷为小于1000kDa。优选地,PEG载荷为至少25kDa和最多500kDa,甚至更优选地至少30kDa和最多250kDa,甚至更优选地至少30kDa和最多120kDa,甚至更优选地至少40kDa和最多100kDa,甚至更优选地至少40kDa和最多90kDa。

PEG可以通过一个或多个锚着点与hGH连接。在一个锚着点的情况下,hGH PEG前体药物单缀合物中的相应PEG是分支的,并含有至少3个链。在一个以上锚着点的情况下,例如在双缀合物中,hGH PEG前体药物中的相应PEG可以是分支的或者线性的。双缀合物可以含有线性的或者分支的PEG或者可以含有一个线性的和一个分支的PEG链的混合物。在使用分支的PEG的情况下,可以存在一个或多个分支单元。

太阳城集团分支的PEG是由连接两个或多个PEG链的分支点组成的PEG分子,以形成具有用于连接生长激素的一个锚着点的分子。其可以是两个20kDaPEG链连接以形成一个分支的40kDa PEG分子。在其中分子含有两个或三个分支点的情况下,该分子分别指3臂和4臂PEG。

总而言之,并且在上述限制内,PEG聚合物并不局限于特定的结构,并且可以是线性的、分支的或者多臂的(例如分叉的PEG或者与多元醇核连接的PEG)、树枝状的或者具有可降解的连接体。

天然人类GH的聚乙二醇化可以发生在几个赖氨酸基团上或者在N末端胺(F1)上,由Clark等人(本文中参考文献2)在第21973页表III描述。高反应性位置为位置F1和LYS-140。中等反应性位置为LYS-115、LYS-38和LYS-70。低反应性位置为LYS-172、LYS-41、LYS-158和LYS-168。然而,聚乙二醇化可以发生在GH的任一赖氨酸残基处和/或N末端胺处。

本发明干组合物的rhGH聚合物前体药物优选地在选自Lys158、Lys145、Lys38、Lys140和Lys70的一个或多个赖氨酸处聚乙二醇化。更优选地,hGH部分的聚乙二醇化主要发生在位置Lys158、Lys145、Lys38和Lys140处,甚至更优选地主要在位置Lys158、Lys145和Lys38处。

优选地,本发明组合物全部生长激素部分的至少30%都在位置Lys158处聚乙二醇化。

太阳城集团在本文中,短语“聚乙二醇化主要发生在位置LysX处”意为rhGH聚合物前体药物的全部rhGH部分的至少10%都在氨基酸位置X处聚乙二醇化。

在更一般的情况下,通过合适的选择所述聚合物,本文中所用的PEG与瞬时连接体组合可以降低脂肪萎缩(lipoatrophy)的风险。然而,本发明的原理也应用于除PEG外的聚合物。因此,术语PEG仅在本文中用于示例合适的聚合物。

太阳城集团因此,在优选的实施方案中,hGH PEG前体药物是用其伯氨基之一缀合至自动可切割官能团La再缀合至聚合物链S0的单缀合物。该聚合物链S0具有至少5kDa的分子量,并包含至少一个分支结构BS1。分支结构BS1包含第二个聚合物链S1,其具有至少4 kDa的分子量。

如上所述,需要第三个聚合物链S2以具有至少4kDa的分子量。聚合物链S2可以是BS1的一部分或者可以是S0或S1的其他分支,产生其他分支结构BS2,其包含S2。

任选地,本发明的干组合物中包含的前体药物缀合物中存在3个以上、例如4、5、6、7或8个聚合物链。然而,每一另外的聚合物链具有至少4kDa的分子量。聚合物链的总数受最多1000Da(无hGH-NH)的前体药物缀合物总重量的限制。

因此,本发明干组合物中包含的rhGH聚合物前体药物的优选实施方案涉及前体药物,其中分支结构BS1、BS2的至少之一包含具有至少4 kDa分子量的另外第四个聚合物链S3,或者S0、S1、S2之一包含含有具有至少4kDa分子量的至少第四个聚合物链S3的第三分支结构BS3。

太阳城集团分支结构或聚合物链之一包含对于La的自动切割必需的自动切割诱导基团Ga。

任选地,将分支结构之一用作基团Ga,以使分支结构由Ga组成(而不是包含所述基团),其也被术语“包含”所涵盖。

图1使用示例性hGH聚合物前体药物说明了La、Ga、S0、S1、S2、S3、BS1、BS2和BS3的含义。

太阳城集团前体药物缀合物(AA)的制备通常产生缀合物混合物,其中hGH的几个伯氨基被缀合产生不同的单缀合、不同双缀合、不同三缀合等的前体药物。可以通过本领域已知的标准方法如柱层析等分离相应的单缀合、双缀合或三缀合hGH PEG前提药物。

在hGH PEG前体药物的单缀合物中,至少3个聚合物链S0、S1、S2含有“聚合物部分”,其特征在于一个或多个重复单元,它们可以是随机、嵌段式或者交替分布的。此外,至少3个聚合物链S0、S1、S2显示出端基,其通常是氢原子或者具有1-6个碳原子的烷基,所述端基可以是分支的或者不分支的如甲基,特别地,对于基于PEG的聚合物链,产生所谓的mPEG。如本文中所理解的术语“基于PEG的”应用于其中基于聚合物链的总重量PEG的质量比例为至少10%重量,优选地至少25%和更优选地至少50%。

太阳城集团应当指出,至少3个聚合物链S0、S1、S2内的聚合物部分可以具有其他链样取代基,其来源于重复单元并产生具有小于4kDa分子量的链,并且并不将其看作聚合物链S0、S1、S2等。优选地,至少3个聚合物链S0、S1、S2携带小于1000Da分子量的取代基。

S0的相关结构特点是其临界距离。临界距离定义了S0与La的连接位点与第一分支结构BS1之间的最短距离,测量为连接的原子。临界距离的长度对如在WO-A 2009/133137中描述的化合物33所讨论的残留活性具有影响,所述专利申请在此处引用作为参考。临界距离优选地小于50,更优选地小于20和最优选的小于10。

通常,至少3个聚合物链S0、S1和S2各自含有互连部分。Ga存在于至少一个互连部分中。对于非S0的聚合物链,互连部分是连接例如S1的聚合物部分与BS1和S2的聚合物部分与BS2的结构元件。对于S0,互连部分是连接La和BS1的结构元件。

互连部分可以由C1~50烷基链组成,其是分支的或者不分支的,且其任选地被杂原子或官能团中断或者终止,所述杂原子或官能团选自-O-;-S-;N(R);C(O);C(O)N(R);N(R)C(O);一个或多个碳环或杂环,其中R是氢或C1-20烷基链,其任选地被一个或多个上述原子或基团中断或终止,其进一步具有作为端原子的氢;且其中碳环是苯基;萘基;茚基;茚满基;四氢萘基(tetralinyl);C3-10环烷基;且其中杂环是4-7元杂环基;或者9-11元杂双环基。

太阳城集团“C3-10环烷基”或“C3-10环烷基环”意为具有3-10个碳原子的环烷基链,其可以具有碳-碳双键为至少部分饱和的,例如环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环己烯基、环庚基、环辛基、环壬基、环癸基。环烷基碳的每个氢可以被取代基替换。术语“C3-10环烷基”或“C3-10环烷基环”还包括桥接双环,如降冰片烷或降冰片烯。

太阳城集团“4-7元杂环基”或者“4-7元杂环”意为具有4、5、6或7个环原子的环,其可以含有不超过最大数目的双键(完全、部分或者未饱和的芳族环或者非芳族环),其中至少1个环原子至4个环原子被选自硫(包括-S(O)-、-S(O)2-)、氧和氮(包括=N(O)-)的杂原子取代,且其中该环通过碳或氮原子与分子的剩余部分连接。4-7元杂环的实例是氮杂环丁烷、氧杂环丁烷、硫杂环丁烷(thietane)、呋喃、噻吩、吡咯、吡咯啉、咪唑、咪唑啉、吡唑、吡唑啉、唑、唑啉、异唑、异唑啉、噻唑、噻唑啉、异噻唑、异噻唑啉、噻二唑、噻二唑啉、四氢呋喃、四氢噻吩、吡咯烷、咪唑烷、吡唑烷、唑烷、异唑烷、噻唑烷、异噻唑烷、噻二唑烷、环丁砜、吡喃、二氢吡喃、四氢吡喃、咪唑烷、吡啶、哒嗪、吡嗪、嘧啶、哌嗪、哌啶、吗啉、四唑、三唑、三唑烷、四唑烷、二氮杂环庚烷或高哌嗪。

太阳城集团“9-11元杂双环基”或“9-10元杂双环”意为具有9-11个环原子的两个环的杂环系统,其中两个环公用至少一个环原子,且其可以包含不超过最大数目的双键(完全、部分或者未饱和的芳族环或者非芳族环),其中至少1个环原子至6个环原子被选自硫(包括-S(O)-、-S(O)2-)、氧和氮(包括=N(O)-)的杂原子取代,且其中该环通过碳或氮原子与分子的剩余部分连接。9-11元杂双环的实例是吲哚、二氢吲哚、苯并呋喃、苯并噻吩、苯并唑、苯并异唑、苯并噻唑、苯并异噻唑、苯并咪唑、苯并咪唑啉、喹啉、喹唑啉、二氢喹唑啉、喹啉、二氢喹啉、四氢喹啉、十氢喹啉、异喹啉、十氢异喹啉、四氢异喹啉、二氢异喹啉、苯并氮杂嘌呤或蝶啶。术语9-11元杂双环还包括两个环的螺结构如1,4-二氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷或者桥接的杂环如8-氮杂-双环[3.2.1]辛烷。

碳环、杂环和杂双环可以被C1-20烷基取代,该C1-20烷基任选地被选自-O-;-S-;N(R);C(O);C(O)N(R);N(R)C(O)的杂原子或官能团中断或者终止,其中R是氢或C1-10烷基链,其任选地通过一个或多个上述原子或基团中断或者终止,其进一步具有氢作为端原子。

至少3个链S0、S1、S2的聚合物部分形成了链的主要部分,优选地每链分子量的至少90%,更优选地至少95%,甚至更优选地至少97.5%,甚至更优选地至少99%。因此,链的基础表现为聚合物部分。

太阳城集团优选地,至少3个链S0、S1、S2独立地基于选自下组的聚合物:聚烷氧基聚合物、透明质酸及其衍生物、聚乙烯醇、聚唑啉、聚酐、聚(原酸酯)、聚碳酸酯、聚氨基甲酸酯、聚丙烯酸、聚丙烯酰胺、聚丙烯酸酯、聚甲基丙烯酸酯、聚有机膦腈、聚硅氧烷、聚乙烯吡咯烷酮、聚氰丙烯酸酯和聚酯。

优选地,至少3个链S0、S1、S2基于相同的聚合物。优选地,至少3个链S0、S1、S2基于聚烷氧基聚合物。甚至更优选地,至少3个链S0、S1、S2基于聚乙二醇。

相应地,同样地适用于其他链S3、S4、S5等。

链S0包含分支结构BS1,以使S1与S0连接。对于S2连接,可以使用分支结构BS1或者存在另外的分支结构BS2,其可以是S0或S1的一部分。因此,当存在其他链时,可以存在其他分支结构。例如在存在链S3的情况下,其可以与BS1、BS2或分支结构BS3连接。分支结构BS3,如果存在,可以是S0、S1或S2的一部分。

总之,可以使用允许链分支的任意化学实体。优选地,分支结构独立地选自至少3重取代的碳环、至少3重取代的杂环、叔碳原子、季碳原子和叔氮原子,其中术语碳环和杂环如上述所定义。

太阳城集团在该领域的文献中,有时将自动切割诱导基团称为连接体,以将其结构与载体区分。然而,常常很难明确分别这两种结构特征。因此,在本发明的含义内,认为切割诱导基团Ga是载体S的一部分,包含至少S0、S1、S2、BS1和任选地BS2。Ga化学性质的改变允许在很大程度上改造对应的连接载体的前体药物的自切割特性的性质。

如上所讨论,聚乙二醇化前体药物,其中该药物例如为在专利申请WO-A 2005/099768中所述的rhGH,且具有释放特征,其在其中被描述为1,6切割系统,不会产生有毒的芳族化合物。在该文件中概括地描述了大量本文中相关的合适瞬时连接体结构,以得到相关的目的释放谱。其他瞬时连接体结构分类/概括地描述于例如其他Complex Biosystems GmbH申请中,如WO-A 2005/034909、WO-A 2005/099768、WO-A 2006/003014和WO-A 2006/136586中。

太阳城集团更多瞬时连接体结构概括地描述于如WO-A 99/30727(Enzon Inc)中。

太阳城集团为了解决如本文中所述GH的当前问题,本发明人已经选择了合适的优选瞬时连接体结构,以得到本文所述的rhGH聚乙二醇化前体药物的相关功能特性。基于本文详细描述的优选连接体结构,在技术人员的知识范围内可以制备其他合适的优选瞬时连接体结构,其给予rhGH聚乙二醇化前体药物以本文所述的相关功能特性。

太阳城集团特别地,可以选择可自身水解的(可自动切割的)合适瞬时连接体结构用于掺入到S0中。本文中所选择的连接体结构详述如下。

为了将水解不稳定性引入官能团L如酰胺或氨基甲酸酯中,必需将结构性化学组分改造成载体,以例如作为接近官能团的邻基发挥功能。将对前体药物酰胺键的切割性进行控制的此类自动切割诱导化学结构称为自动切割诱导基团Ga。自动切割诱导基团对给定官能团La的水解速率具有强烈的影响。

优选的La选自C(O)-O-和C(O)-,其与hGH的伯氨基一起形成氨基甲酸酯或酰胺基。因此,优选本发明组合物,其中La选自C(O)-O-和C(O)-,其与hGH的伯氨基一起形成氨基甲酸酯或酰胺基,产生通式(AA1)或(AA2)

hGH-NH-C(O)O-S0  (AA1),

太阳城集团hGH-NH-C(O)-S0   (AA2)。

太阳城集团以下部分列出了可作为切割诱导基团Ga发挥功能的多种结构组分。

太阳城集团基团Ga表示自动切割诱导基团。Ga可以就此存在或者作为级联自动切割诱导基团,其通过其他水解或者酶促切割步骤去屏蔽而生效。如果Ga就此存在,那么其控制La的限速自动水解。

Ga的实例:

太阳城集团A.J.Garman等人(A.J.Garman,S.B.Kalindjan,FEBS Lett.1987,223(2),361-365 1987)使用PEG5000-马来酸酐用于组织型纤溶酶原激活物和尿激酶中氨基的可逆修饰。经在pH7.4的缓冲液中温育、通过切割马来酰胺酸连接而从PEG-uPA缀合物再生功能性酶,遵循一级动力学,半衰期为6.1h。

简单的芳族部分可能将不稳定性赋予连接的氨基甲酸酯键(WO-A01/47562)。例如,将取代的或未取代的芴基甲基基团用于活化前体药物方法中多种生物活性剂的氨基甲酸酯连接体(Tsubery等人,J Biol Chem279(2004)38118-24)。在WO-A 2007/075534中,两个PEG链与芴基部分连接。

因此,Ga是与氨基甲酸酯官能团La直接连接的芳族环或芴基甲基。

太阳城集团因此,优选本发明组合物,其中Ga是与由La和hGH的伯氨基形成的氨基甲酸酯官能团直接连接的芳族环或芴基甲基。

备选地,Ga的转化可以诱导S0内分子重排,例如1,4-或1,6-消除。重排使得La更不稳定,从而诱导其切割。Ga的转化在级联机制中是限速步骤。理论上,临时连接的切割速率与给定治疗情况中药物分子的期望释放速率相同。在该基于1,6-消除的级联系统中,期望的是La的切割在其不稳定性受Ga的转化诱导后是基本上瞬时的。此外,期望的是限速切割动力学在治疗有用的太阳城集团范围内进行,不需要其他酶促作用,以避免与上述主要酶促切割相关的缺点。

太阳城集团R.B.Greenwald,A.Pendri,C.D.Conover,H.Zhao,Y.H.Choe,A.Martinez,K.Shum,S.Guan,J.Med.Chem.,1999,42,3657-3667 &PCT专利申请WO-A 99/30727描述了基于1,4-或1,6-苄基消除来合成含氨基小分子化合物的聚(乙二醇)前体药物的方法。在该方法中,药物分子的氨基通过氨基甲酸酯基与聚乙二醇化苄基部分连接。聚(乙二醇)通过酯、碳酸酯、氨基甲酸酯或酰胺键与苄基连接。PEG从药物分子中的释放通过自动水解联合酶促切割而发生。在该方法中,引发释放的掩蔽基团的切割后是经典和快速的1,4-或1,6-苄基消除。还可以将该连接体系统用于蛋白质的可释放聚(乙二醇)缀合物(S.Lee,R.B.Greenwald等人,Bioconj.Chem.2001,12(2),163-169)。将溶菌酶用作模式蛋白质,因为当聚乙二醇化在赖氨酸残基的ε-氨基上发生时,其失去了其活性。将多种量的PEG连接体与蛋白质缀合。天然蛋白质自PEG缀合物的再生发生在大鼠血浆中或者非生理性高pH缓冲液中。还参见F.M.H.DeGroot等人(WO-A2002/083180和W0-A 2004/043493)和D.Shabat等人(WO-A 2004/019993)。

因此,La是氨基甲酸酯官能团,所述基团的切割通过S0的1,4-或1,6苄基消除、由Ga的羟基或氨基诱导,其中Ga含经历限速转化的酯键、碳酸酯键、氨基甲酸酯键或酰胺键。实际上,Ga可以通过水解切割。

因此,优选本发明组合物,其中La与hGH的氨基一起形成氨基甲酸酯官能团,所述基团的切割通过S0的1,4-或1,6苄基消除、由Ga的羟基或氨基诱导,其中Ga含经历限速转化的酯键、碳酸酯键、氨基甲酸酯键或酰胺键。

Ga可以含有级联切割系统,其通过由代表前述前体的结构组合组成的Ga的组分启动。Ga的前体可以含有其他临时连接,例如酰胺、酯或氨基甲酸酯。前体的临时连接(例如氨基甲酸酯)的稳定性或者对水解的敏感性可以通过自动水解特性控制或者可能要求酶的活性。

Antczak等人(Bioorg Med Chem 9(2001)2843-48)描述了形成含胺药物分子的大分子级联前体药物系统的基础的试剂。在该方法中,将抗体用作为载体,用稳定的键连接抗体和活化基团,携带可切割的掩蔽基团。在去除酯连接的掩蔽基团后,La切割并释放药物化合物。

太阳城集团D.Shabat等人(Chem.Eur.3.2004,10,2626-2634)描述了基于扁桃酸活化基团的聚合物前体药物系统。在该系统中,掩蔽基团通过氨基甲酸酯键与活化基团连接。活化基团通过酰胺键与聚丙烯酰胺聚合物永久缀合。通过催化抗体活化掩蔽基团后,掩蔽基团通过环化被切割,并释放药物。药物释放后,活化基团仍与聚丙烯酰胺聚合物连接。

太阳城集团M.-R.Lee等人描述了(Angew.Chem.2004,116,1707-1710)基于扁桃酸活化基团和酯连接的掩蔽基团的类似前体药物系统。然而,在这些连接中,1,6-消除步骤仍产生了高反应性的芳族中间物。即使芳族部分仍与聚合物载体永久连接,也可能产生具有潜在毒性或免疫原性影响的副反应。

Greenwald等人在2000年公布了基于三甲基锁内酯化作用的含氨基前体药物的聚(乙二醇)药物递送系统(R.B.Greenwald等人,J.Med.Chem.2000,43(3),457-487;WO-A 02/089789)。在该前体药物系统中,取代的邻羟苯基-二甲基丙酸通过酰胺键与药物分子的氨基偶联。羟基通过酯基、碳酸酯基或氨基甲酸酯基与PEG连接。药物释放中的决速步是这些官能团的酶促切割、继之以通过内酯化作用的快速酰胺切割,释出芳族内酯副产物。

最近,R.B.Greenwald等人(Greenwald等人,J.Med.Chem.2004,47,726-734)描述了基于二-(N-2-羟乙基)甘氨酸酰胺(N-2-(羟乙基)甘氨酸酰胺)连接体的PEG前体药物系统。在该系统中,两个PEG分子与偶联至药物分子的氨基的N-2-(羟乙基)甘氨酸分子连接。前体药物活化的前两个步骤是两个PEG分子的酶促切割。描述了PEG和N-2-(羟乙基)甘氨酸之间的不同连接,产生了不同的前体药物活化动力学。该系统的主要缺点是与药物分子缀合的N-2-(羟乙基)甘氨酸酰胺较慢的水解速率(在磷酸缓冲液中t1/2=3h),导致N-2-(羟乙基)甘氨酸修饰的前体药物中间物的释放,其与母体药物分子比较可能显示出不同的药物动力学和药效学特性。

太阳城集团更特别地,下文描述了S0的具有特定间隔区部分的优选基团La和Ga。

根据WO-A 2005/099768的优选结构选自通式(I)和(II):

太阳城集团其中,在这些通式中,T表示hGH-NH;X表示间隔区部分;Y1和Y2各自独立地表示O、S或NR6;Y3和Y5相互独立地表示O或S;Y4表示O、NR6或-C(R7)(R8);R2和R3相互独立地表示选自以下的部分:氢、取代的或非取代的线性、分支或者环状烷基或杂烷基、芳基、取代的芳基、取代的或非取代的杂芳基、氰基、硝基、卤素、羧基、羧烷基、烷基羰基或酰胺基烷基;R4表示选自以下的部分:氢、取代的或非取代的线性、分支或者环状烷基或杂烷基、芳基、取代的芳基、取代的或非取代的杂芳基、取代的或非取代的线性、分支或者环状烷氧基、取代的或非取代的线性、分支或者环状杂烷氧基、芳氧基或杂芳氧基、氰基和卤素;R7和R8各自独立地选自氢、取代的或非取代的线性、分支或者环状烷基或杂烷基、芳基、取代的芳基、取代的或非取代的杂芳基、羧烷基、烷基羰基或酰胺基烷基、氰基和卤素;R6表示选自氢、取代的或非取代的线性、分支或者环状烷基或杂烷基、芳基、取代的芳基、取代的或非取代的杂芳基的基团;R1表示S0的其余部分;W表示选自取代的或非取代的线性、分支或者环状烷基、芳基、取代的芳基和取代的或者非取代的线性、分支或者环状杂烷基、取代的或非取代的杂芳基的基团;Nu表示亲核体;n表示零或者正整数;且Ar表示多取代的芳族烃或者多取代的芳族杂环。

在本发明的含义内,基团La由Y3-C(Y5)NH-(与hGH的氨基一起)表示,Ga由Nu-W-Y4-C(Y1)Y2表示,且Ar(R4)n-C(R3)XR1表示S0,其进一步包括至少S1、S2、BS1和任选的BS2。

在备选的实施方案中,S1通过Ar连接或者表示R3。然后与XR1取代的Y3邻近的碳原子表示分支结构BS1,S1以包含Ga的Ar结尾。显然,在该实施方案中,术语S0和S1是可互换的。

太阳城集团优选地,在通式(AA)或(AA1)中,S0为通式(AAA1)

太阳城集团其中在通式(AAA1)中

Ga具有上述含义;

太阳城集团S00为CH2;或者C(O);

S0A是具有1-20个碳原子的亚烷基链,其任选地被一个或多个选自任选取代的杂环;O;S;C(O)和NH的基团、环或杂原子中断或终止;

BS1、BS2、BS3独立地选自N和CH。

S0B、S1A独立地是具有1-200个碳原子的亚烷基,其任选地被一个或多个选自任选取代的杂环;O;S;C(O)和NH的基团、环或杂原子中断或终止;

S0C,S1B为(C(O))n2(CH2)n1(OCH2CH2)nOCH3,其中每个n独立地为100-500的整数,每个n1独立地为0、1、2、3、4、5、6、7或8,且n2为0或1。

S2、S3独立地为氢或(C(O))n2(CH2)n1(OCH2CH2)nOCH3,其中每个n独立地为100-500的整数,每个n1独立地为0、1、2、3、4、5、6、7或8,且n2为0或1,条件是S2、S3的至少之一不是氢,

太阳城集团R2、R3如以下通式(A)定义。

术语杂环意为如上所定义的杂环。任选的取代基是例如氧代(=O),其中环是至少部分饱和的、分支的或不分支的烷基链,具有1-6个碳原子,或卤素。优选的取代杂环是琥珀酰亚胺。

优选地,通式(AAA1)中的Ga是OC(O)-R,且R是如下所示通式(I)的部分结构,其中R1、R4、R5和n定义如下。

另一优选的实施方案描述于WO06136586A2中。因此,以下结构是优选的:

太阳城集团其中,在这三种结构中,T是NH-hGH;

X是间隔区部分例如R13-Y1;

太阳城集团Y1是O、S、NR6、琥珀酰亚胺、马来酰亚胺、不饱和的碳-碳键或者含自由电子对的任一杂原子或者不存在;

太阳城集团R13选自取代的或非取代的线性、分支或环状烷基或杂烷基、芳基、取代的芳基、取代的或非取代的杂芳基;

R2和R3独立地选自氢、酰基或者羟基保护基团;

太阳城集团R4至R12独立地选自氢、X-R1、取代的或非取代的线性、分支或环状烷基或杂烷基、芳基、取代的芳基、取代的或非取代的杂芳基、氰基、硝基、卤素、羧基、甲酰胺;

太阳城集团R1是S0的剩余部分,包含至少S1、S2、BS1和任选的BS2。

在该实施方案中,La是酰胺基团,且Ga包括携带OR2/OR3的N-分支的结构。

又在另一优选的实施方案中,优选的结构通过前体药物缀合物D-L给出,其中

-D是NH-hGH;且

太阳城集团-L是非生物活性连接体部分-L1,由通式(I)表示,

其中,在通式(I)中,短划线表示通过形成酰胺键与hGH的氨基连接;

太阳城集团X是C(R4R4a);N(R4);O;C(R4R4a)-C(R5R5a);C(R5R5a)-C(R4R4a);C(R4R4a)-N(R6);N(R6)-C(R4R4a);C(R4R4a)-O或O-C(R4R4a);

X1是C或S(O);

X2是C(R7,R7a)或C(R7,R7a)-C(R8,R8a);

R1、R1a、R2、R2a、R3、R3a、R4、R4a、R5、R5a、R6、R7、R7a、R8、R8a独立地选自H和C1-4烷基;或

任选地,一个或多个的配对R1a/R4a、R1a/R5a、R4a/R5a、R4a/R5a、R7a/R8a形成化学键;

太阳城集团任选地,一个或多个的配对R1/R1a、R2/R2a、R4/R4a、R5/R5a、R7/R7a、R8/R8a与其所连接的原子一起形成C3-7环烷基;或者4-7元杂环基;

任选地,一个或多个的配对R1/R4、R1/R5、R1/R6、R4/R5、R7/R8、R2/R3与其所连接的原子一起形成环A;

任选地,R3/R3a与其所连接的氮原子一起形成4-7元杂环;

太阳城集团A选自苯基;萘基;茚基;茚满基;四氢萘基;C3-10环烷基;4-7元杂环基和9-11元杂双环基;和

其中L1被一个基团L2-Z取代,且任选地进一步取代,条件是通式(I)中用星号标记的氢没有被取代基取代;其中

L2是单化学键或者间隔区;且

太阳城集团Z是S的剩余部分,包括至少S1、S2、BS1和任选的BS2。

在该实施方案中,La由酰胺基表示,且Ga由N(H*)X1(O)表示,且与N连接的链包括N的取代基。

该类型的前体药物缀合物描述于欧洲专利申请N° 08150973.9中。

因此,本发明的组合物是优选的,其中La-S0由通式(AAA2)表示,

太阳城集团其中,在通式(AAA2)中,短划线表示与hGH的伯氨基的连接,以使La和氨基形成酰胺键;

太阳城集团X是C(R4R4a);N(R4);O;C(R4R4a)-C(R5R5a);C(R5R5a)-C(R4R4a);C(R4R4a)-N(R6);N(R6)-C(R4R4a);C(R4R4a)-O;或O-C(R4R4a);

太阳城集团X1是C或S(O);

X2是C(R7,R7a)或(R7,R7a)-C(R8,R8a);

R1、R1a、R2、R2a、R3、R3a、R4、R4a、R5、R5a、R6、R7、R7a、R8、R8a独立地选自H和C1-4烷基;或

太阳城集团任选地,一个或多个的配对R1a/R4a、R1a/R5a、R4a/R5a、R4a/R5a、R7a/R8a形成化学键;

太阳城集团任选地,一个或多个的配对R1/R1a、R2/R2a、R4/R4a、R5/R5a、R7/R7a、R8/R8a与其所连接的原子一起形成C3-7环烷基或4-7元杂环基;

太阳城集团任选地,一个或多个的配对R1/R4、R1/R5、R1/R6、R4/R5、R7/R8、R2/R3与其所连接的原子一起形成环A;

任选地,R3/R3a与其所连接的氮原子一起形成4-7元杂环;

太阳城集团A选自苯基;萘基;茚基;茚满基;四氢萘基;C3-10环烷基;4-7元杂环基和9-11元杂双环基;和

其中S0被一个基团L2-Z取代,且任选地进一步取代,条件是通式(AAA2)中用星号标记的氢没有被取代基取代;其中

L2是单化学键或间隔区;和

Z为通式(AAA2a)

其中S00、S0A、S0B、S0C、S1A、S1B、S2、S3、BS1、BS2和BS3具有如上通式(AAA1)所表示的含义。

“烷基”意为直链或者分支的碳链。烷基碳的每一个氢可以被取代基取代。

“C1-4烷基”意为具有1-4个碳原子的烷基链,例如,如果在分子的末端存在,为:甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基,或者例如当分子的两部分通过烷基连接时,为:-CH2-、-CH2-CH2-、-CH(CH3)-、-CH2-CH2-CH2-、-CH(C2H5)-、-C(CH3)2-。C1-4烷基的每个氢都可以被取代基取代。

“C1-6烷基”意为具有1-6个碳原子的烷基链,例如,如果在分子1的末端存在,为:C1-4烷基、甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、正戊基、正己基,或者例如当分子的两部分通过烷基连接时,为:-CH2-、-CH2-CH2-、-CH(CH3)-、-CH2-CH2-CH2-、-CH(C2H5)-、-C(CH3)2-。C1-6烷基的每个氢都可以被取代基取代。术语“C1-8烷基”相应地定义。

太阳城集团相应地,“C1-18烷基”意为具有1-18个碳原子的烷基链,且“C8-18烷基”意为具有8-18个碳原子的烷基链。相应地,“C1-50烷基”意为具有1-50个碳原子的烷基链。

太阳城集团“C2-50链烯基”意为具有2-50个碳原子的分支的或者不分支的链烯基链,例如,如果在分子的末端存在,为:-CH=CH2、-CH=CH-CH3、-CH2-CH=CH2、-CH=CH-CH2-CH3、-CH=CH-CH=CH2,或者例如当分子的两部分通过烯基连接时,为-CH=CH-。如所进一步说明,C2-50链烯基碳的每个氢都可以被取代基取代。因此,术语“链烯基”涉及具有至少一个碳碳双键的碳链。任选地,可以存在一个或多个三键。

太阳城集团“C2-50炔基”意为具有2-50个碳原子的分支的或者不分支的炔基链,例如,如果在分子的末端存在,为:-C≡CH、-CH2-C≡CH、CH2-CH2-C≡CH、CH2-C≡C-CH3,或者例如当分子的两部分通过炔基连接时,为-C≡C-。如所进一步说明,C2-50炔基碳的每个氢都可以被取代基取代。因此,术语“炔基”涉及具有至少一个碳碳三键的碳链。任选地,可以存在一个或多个双键。

“C3-7环烷基”或“C3-7环烷基环”意为具有3-7个碳原子的环状烷基链,其可以具有碳-碳双键为至少部分不饱和的,例如环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环己烯基、环庚基。环烷基碳的每个氢都可以被取代基取代。术语“C3-7环烷基”或“C3-7环烷基环”还包括桥连双环,如降冰片烷或降冰片烯。相应地,“C3-5环烷基”意为具有3-5个碳原子的环烷基。

相应地,“C3-10环烷基”意为具有3-10个碳原子的环状烷基,例如C3-7环烷基;环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环己烯基、环庚基、环辛基、环壬基、环癸基。术语“C3-10环烷基”还包括至少部分饱和的碳单环和碳双环。

太阳城集团“卤素”意为氟代、氯代、溴代或碘代。一般优选地,卤素是氟代或氯代。

太阳城集团“4-7元杂环基”或“4-7元杂环”意为具有4、5、6或7个环原子的环,其可以含有不超过最大数目的双键(完全、部分或不饱和的芳族环或者非芳族环),其中至少1个环原子至4个环原子被选自硫(包括-S(O)-、-S(O)2-)、氧或氮(包括=N(O)-)的杂原子取代,且其中该环通过碳原子或氮原子与该分子的剩余部分连接。4-7元杂环的实例是氮杂环丁烷、氧杂环丁烷、硫杂环丁烷、呋喃、噻吩、吡咯、吡咯啉、咪唑、咪唑啉、吡唑、吡唑啉、唑、唑啉、异唑、异唑啉、噻唑、噻唑啉、异噻唑、异噻唑啉、噻二唑、噻二唑啉、四氢呋喃、四氢噻吩、吡咯烷、咪唑烷、吡唑烷、唑烷、异唑烷、噻唑烷、异噻唑烷、噻二唑烷、环丁砜、吡喃、二氢吡喃、四氢吡喃、咪唑烷、吡啶、哒嗪、吡嗪、嘧啶、哌嗪、哌啶、吗啉、四唑、三唑、三唑烷、四唑烷、二氮杂环庚烷、氮杂或高哌嗪。

“9-11元杂双环基”或“9-10元杂双环”意为具有9-11个环原子的两个环的杂环系统,其中两个环公用至少一个环原子,且其可以包含不超过最大数目的双键(完全、部分或者未饱和的芳族环或者非芳族环),其中至少1个环原子至6个环原子被选自硫(包括-S(O)-、-S(O)2-)、氧和氮(包括=N(O)-)的杂原子取代,且其中该环通过碳或氮原子与分子的剩余部分连接。9-11元杂双环的实例是吲哚、二氢吲哚、苯并呋喃、苯并噻吩、苯并唑、苯并异唑、苯并噻唑、苯并异噻唑、苯并咪唑、苯并咪唑啉、喹啉、喹唑啉、二氢喹唑啉、喹啉、二氢喹啉、四氢喹啉、十氢喹啉、异喹啉、十氢异喹啉、四氢异喹啉、二氢异喹啉、苯并氮杂嘌呤或蝶啶。术语9-11元杂双环还包括两个环的螺结构如1,4-二氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷或者桥接的杂环如8-氮杂-双环[3.2.1]辛烷。

优选地,La-S0选自

其中R是H或C1-4烷基;Y是NH;O或S;并且R1、R1a、R2、R2a、R3、R3a、R4、X、X1、X2具有如上所示的含义。

甚至更优选的,La-S0选自

其中,R具有如上所示的含义。

太阳城集团至少1个(不超过4个)氢被基团L2-Z取代。在存在一个以上基团L2-Z的情况下,每个L2和每个Z可以独立地选择。优选地,仅存在一个基团L2-Z。

太阳城集团一般而言,在上述通式中,除了取代用星号标记的氢以外,可以在任一位置用L2-Z取代S0。优选地,直接由R、R1-R8给出的1-4个氢,或者作为C1-4烷基或者其他基团的氢,以及通过R和R1-R8的定义给出的环被L2-Z取代。

太阳城集团此外,可以任选地进一步取代S0。总之,可以使用任意取代基,只要不会影响切割原则。

优选地,一个或多个其他的任选取代基独立地选自卤素;CN;COOR9;OR9;C(O)R9;C(O)N(R9R9a);S(O)2N(R9R9a);S(O)N(R9R9a);S(O)2R9;S(O)R9;N(R9)S(O)2N(R9aR9b);SR9;N(R9R9a);NO2;OC(O)R9;N(R9)C(O)R9a;N(R9)S(O)2R9a;N(R9)S(O)R9a;N(R9)C(O)OR9a;N(R9)C(O)N(R9aR9b);OC(O)N(R9R9a);T;C1-50烷基;C2-50链烯基或C2-50炔基,其中T;C1-50烷基;C2-50链烯基和C2-50炔基任选被一个或多个相同或者不同的R10取代,且其中C1-50烷基;C2-50链烯基和C2-50炔基任选地被一个或多个选自以下的基团中断:T、-C(O)O-;-O-;-C(O)-;-C(O)N(R11)-;-S(O)2N(R11)-;-S(O)N(R11)-;-S(O)2-;-S(O)-;-N(R11)S(O)2N(R11a)-;-S-;-N(R11)-;-OC(O)R11;-N(R11)C(O)-;-N(R11)S(O)2-;-N(R11)S(O)-;-N(R11)C(O)O-;-N(R11)C(O)N(R11a)-和-OC(O)N(R11R11a);

R9、R9a、R9b独立地选自H;T和C1-50烷基;C2-50链烯基或C2-50炔基,其中T;C1-50烷基;C2-50链烯基和C2-50炔基任选被一个或多个相同或者不同的R10取代,且其中C1-50烷基;C2-50链烯基和C2-50炔基任选地被一个或多个选自以下的基团中断:T、-C(O)O-;-O-;-C(O)-;-C(O)N(R11)-;-S(O)2N(R11)-;-S(O)N(R11)-;-S(O)2-;-S(O)-;-N(R11)S(O)2N(R11a)-;-S-;-N(R11)-;-OC(O)R11;-N(R11)C(O)-;-N(R11)S(O)2-;-N(R11)S(O)-;-N(R11)C(O)O-;-N(R11)C(O)N(R11a)-和-OC(O)N(R11R11a);

T选自苯基;萘基;茚基;茚满基;四氢萘基;C3-10环烷基;4-7元杂环基或9-11元杂双环基,其中T任选被一个或多个相同或者不同的R10取代;

R10是卤素;CN;氧代(=O);COOR12;OR12;C(O)R12;C(O)N(R12R12a);S(O)2N(R12R12a);S(O)N(R12R12a);S(O)2R12;S(O)R12;N(R12)S(O)2N(R12aR12b);SR12;N(R12R12a);NO2;OC(O)R12;N(R12)C(O)R12a;N(R12)S(O)2R12a;N(R12)S(O)R12a;N(R12)C(O)OR12a;N(R12)C(O)N(R12aR12b);OC(O)N(R12R12a)或C1-6烷基,其中C1-6烷基任选被一个或多个相同或者不同的卤素取代;

R11、R11a、R12、R12a、R12b独立地选自H或C1-6烷基,其中C1-6烷基任选被一个或多个相同或者不同的卤素取代。

太阳城集团术语“中断”意为在两个碳之间或者在碳和氢之间的碳链的末端插入基团。

太阳城集团L2是单化学键或间隔区。在L2是间隔区的情况下,优选地将其定义为上文定义的一个或多个任选的取代基,条件是L2被Z取代。

因此,当L2不是单化学键时,L2-Z是COOR9;OR9;C(O)R9;C(O)N(R9R9a);S(O)2N(R9R9a);S(O)N(R9R9a);S(O)2R9;S(O)R9;N(R9)S(O)2N(R9aR9b);SR9;N(R9R9a);OC(O)R9;N(R9)C(O)R9a;N(R9)S(O)2R9a;N(R9)S(O)R9a;N(R9)C(O)OR9a;N(R9)C(O)N(R9aR9b);OC(O)N(R9R9a);T;C1-50烷基;C2-50链烯基或C2-50炔基,其中T;C1-50烷基;C2-50链烯基和C2-50炔基任选被一个或多个相同或者不同的R10取代,且其中C1-50烷基;C2-50链烯基和C2-50炔基任选地被一个或多个选自以下的基团中断:T、-C(O)O-;-O-;-C(O)-;-C(O)N(R11)-;-S(O)2N(R11)-;-S(O)N(R11)-;-S(O)2-;-S(O)-;-N(R11)S(O)2N(R11a)-;-S-;-N(R11)-;-OC(O)R11;-N(R11)C(O)-;-N(R11)S(O)2-;-N(R11)S(O)-;-N(R11)C(O)O-;-N(R11)C(O)N(R11a)-和-OC(O)N(R11R11a);

太阳城集团R9、R9a、R9b独立地选自H;Z;T和C1-50烷基;C2-50链烯基或C2-50炔基,其中T;C1-50烷基;C2-50链烯基和C2-50炔基任选被一个或多个相同或者不同的R10取代,且其中C1-50烷基;C2-50链烯基和C2-50炔基任选地被一个或多个选自以下的基团中断:T、-C(O)O-;-O-;-C(O)-;-C(O)N(R11)-;-S(O)2N(R11)-;-S(O)N(R11)-;-S(O)2-;-S(O)-;-N(R11)S(O)2N(R11a)-;-S-;-N(R11)-;-OC(O)R11;-N(R11)C(O)-;-N(R11)S(O)2-;-N(R11)S(O)-;-N(R11)C(O)O-;-N(R11)C(O)N(R11a)-和-OC(O)N(R11R11a);

太阳城集团T选自苯基;萘基;茚基;茚满基;四氢萘基;C3-10环烷基;4-7元杂环基或9-11元杂双环基,其中t任选被一个或多个相同或者不同的R10取代;

太阳城集团R10是Z;卤素;CN;氧代(=O);COOR12;OR12;C(O)R12;C(O)N(R12R12a);S(O)2N(R12R12a);S(O)N(R12R12a);S(O)2R12;S(O)R12;N(R12)S(O)2N(R12aR12b);SR12;N(R12R12a);NO2;OC(O)R12;N(R12)C(O)R12a;N(R12)S(O)2R12a;N(R12)S(O)R12a;N(R12)C(O)OR12a;N(R12)C(O)N(R12aR12b);OC(O)N(R12R12a)或C1-6烷基,其中C1-6烷基任选被一个或多个相同或者不同的卤素取代;

太阳城集团R11、R11a、R12、R12a、R12b独立地选自H;Z或C1-6烷基,其中C1-6烷基任选被一个或多个相同或者不同的卤素取代;

太阳城集团条件是R9、R9a、R9b、R10、R11、R11a、R12、R12a、R12b之一是Z。

下文列出了甚至更优选的一般芳族结构。

太阳城集团优选地,hGH聚合物前体药物具有通式(A)中给出的结构。

其中在通式(A)中

NH-rhGH表示通过形成氨基甲酸酯键与瞬时连接体连接的rhGH残基;

太阳城集团R1、R2、R3、R4和R5独立地选自氢、甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、叔丁基,

PEG表示与瞬时连接体连接的聚乙二醇化残基,

且n=1或2,且

X选自C1-C8烷基或者C1-C12杂烷基。

太阳城集团优选地,通式(A)的部分具有以下结构

其中每个c独立地为250-750的整数,优选300-400的整数,和更优选地500。

术语“C1-C12杂烷基”意为具有1-12个碳原子的烷基链,其任选被如上所定义的杂原子、官能团、碳环或杂环中断。术语“C1-C8烷基”意为如上所定义的C1-8烷基。

在优选的实施方案中,在通式(A)中,La由与rhGH连接的氨基甲酸酯基团表示,Ga由芳族氧基团、与其连接的羰基以及连接于羰基的取代基表示,如以下通式I所示。

更优选的结构通过通式I给出,其是上文一般芳族连接体结构内结构(A)的一部分:

通式I

太阳城集团并且其中通式I的优选实例包括:

太阳城集团通式II的更优选芳族结构,其是上文一般芳族连接体结构内结构(A)的一部分:

通式II

并且其中通式II的优选实例包括:

太阳城集团通式III的更优选结构,其是上文一般芳族连接体结构内结构(A)的一部分,其中PEG-X是

通式III

且PEG-W包括以下取代基:

优选的hGH聚合物前体药物缀合物的其他实例显示如下:

R选自氢、甲基、乙基、丙基和丁基,

太阳城集团X选自C1-C8烷基或C1-C12杂烷基。

太阳城集团此外,在优选和更优选的实施方案中,PEG优选地意为S0的剩余部分,其包含至少S1、S2、BS1和任选地BS2。

太阳城集团在优选的实施方案中,包含在本发明组合物中的前体药物选自

太阳城集团其中m为200-500的整数,且n为100-125的整数;

太阳城集团其中n为400-500的整数;

太阳城集团其中n为400-500的整数;和

其中n为400-500的整数。

太阳城集团优选地,hGH部分的聚乙二醇化发生在一个或多个选自Lys158、Lys145、Lys38、Lys140和Lys70的赖氨酸处。更优选地,hGH部分的聚乙二醇化主要发生在位置Lys158、Lys145、Lys38和Lys140处,甚至更优选地主要在位置Lys158、Lys145和Lys38处。

优选地,本发明组合物的全部生长激素部分的至少30%是在位置Lys158处聚乙二醇化的。

在本发明的干组合物中包含的hGH聚合物前体药物可以通过本领域已知的方法制备。然而,特别地对于通式(AA1)的化合物,优选如下构建前体药物分子:以汇集合成方式、通过提供包含一个或多个硫羟基和活化的碳酸酯的第一前体分子和包含马来酰亚胺基的第二前体分子以在其他反应中反应导致硫代琥珀酰亚胺基的形成,并将结合的前体分子与hGH反应,产生通式(AA1)的化合物。

因此,用于制备通式hGH-NH-C(O)O-S0(AA1)的化合物的方法,其中S0具有如上所示的含义,且包含至少一个基团

包括以下步骤:

太阳城集团(a)将通式ROC(O)O-S0’-SH(AA1’)的化合物与通式

(AA2’)的化合物反应,其中R为活化碳酸酯基团的合适剩余部分,且其中选择S0’和S0”,以产生包含至少一个基团的S0,产生通式ROC(O)O-S0的化合物,和

(b)将通式ROC(O)O-S0的化合物与hGH-NH2反应,其中hGH-NH2表示具有其伯氨基之一的hGH,以产生通式(AA1)的化合物。

碳酸酯官能团的合适R基团包括取代的烷基或者碳环或杂环,如芳基或环烷基,如五氟苯基或NHS基团。

包含如上所述的rhGH聚合物前体药物的稳定组合物,当储存在-80℃至25℃、优选地2-25℃的温度时,是稳定的干组合物,储存期优选地至少6个月,更优选地至少1年,更优选地至少2年。干燥rhGH聚合物前体药物组合物的优选方法是冷冻干燥。

太阳城集团因此,本发明另外的方面是通过冷冻干燥而干燥的组合物。另一方面是当储存在-80℃至25℃、优选地2-25℃的温度时稳定至少1年的本发明组合物。更优选地,温度为2℃-8℃。另一优选的温度为15℃-25℃。

根据本发明的rhGH聚合物前体药物的干组合物包含一种或多种冻干保护剂。冻干保护剂的实例包括糖类,例如蔗糖或海藻糖;氨基酸,如谷氨酸单钠或组氨酸或精氨酸;甲胺类,例如甜菜碱;易溶盐,例如硫酸镁;多元醇,如三元的或者更高级的糖醇,例如甘油、赤藓醇、丙三醇、阿糖醇、木糖醇、山梨醇和甘露醇;乙二醇;丙二醇;聚乙二醇;普朗尼克类;羟烷基淀粉,例如羟乙基淀粉(HES)及其组合。优选地,冻干保护剂包括糖类,如蔗糖或海藻糖;氨基酸,如谷氨酸单钠或组氨酸;甲胺类,如甜菜碱;易溶盐,如硫酸镁;多元醇,如三元的或者更高级的糖醇,例如甘油、赤藓醇、丙三醇、阿糖醇、木糖醇、山梨醇和甘露醇;乙二醇;丙二醇;聚乙二醇;普朗尼克类;羟烷基淀粉如羟乙基淀粉(HES)及其组合。

优选的冻干保护剂是非还原糖,如海藻糖或蔗糖,特别地海藻糖。

太阳城集团在干燥步骤前,优选将冻干保护剂以“冻干保护量”加入到组合物中,其意为,在冻干保护量的冻干保护剂存在下干燥蛋白质后,蛋白质在干燥和储存期间基本上保留其物理和化学稳定性和完整性。

太阳城集团根据本发明的rhGH聚合物前体药物的干组合物可以含有一种或多种赋形剂。可以将用于胃肠外组合物中的赋形剂分类为例如缓冲剂、等渗性改性剂、防腐剂、稳定剂、抗吸收剂、氧化保护剂或者其他辅助剂。然而,在一些情况下,一种赋形剂可以具有两种或者三种功能。干组合物可以含有一种或一种以上的以下赋形剂:

太阳城集团(i)缓冲剂:在生理上耐受的缓冲液以维持pH在期望范围,例如磷酸钠、碳酸氢盐、琥珀酸盐、组氨酸、柠檬酸盐和乙酸盐、硫酸盐、硝酸盐、氯化物、丙酮酸盐。还可以使用解酸剂,例如Mg(OH)2或ZnCO3。可以调整缓冲能力,以匹配对pH稳定性最敏感的条件。

太阳城集团(ii)等渗性改性剂:以最小化由于细胞损伤产生的伤害,所述细胞损伤归因于注射长效药剂处渗透压的差异。实例为甘油和氯化钠。可以使用对于血清的285-315mOsmol/kg的假定重量摩尔渗透压浓度,通过渗透压测定法测定有效的浓度。

(iii)防腐剂:多剂量胃肠外制剂需要以足够的浓度添加防腐剂,以最小化患者由于注射而受感染的风险,已经建立了相应的法规要求。一般的防腐剂包括间甲酚、苯酚、对羟苯甲酸甲酯、对羟苯甲酸乙酯、对羟苯甲酸丙酯、对羟苯甲酸丁酯、三氯叔丁醇、苯甲醇、硝酸苯汞、乙基汞硫代水杨酸钠、山梨酸、山梨酸钾、苯甲酸、氯甲酚和苯扎氯铵。

(iv)稳定剂:通过加强稳定蛋白质的力、通过去稳定变性状态或者通过将赋形剂与蛋白质直接结合,实现稳定。稳定剂可以是氨基酸如丙氨酸、精氨酸、天冬氨酸、甘氨酸、组氨酸、赖氨酸、脯氨酸;糖类,如葡萄糖、蔗糖、海藻糖;多元醇,如甘油、甘露醇、山梨醇;盐,如磷酸钾、硫酸钠;螯合剂,如EDTA、六磷酸盐(hexaphosphate);配体,如二价金属离子(锌、钙等);其他盐或有机分子,如苯酚衍生物。此外,可以使用寡聚体或聚合物如环糊精、葡聚糖、树状聚物(dendrimers)、PEG或PVP或鱼精蛋白或HAS。

太阳城集团(v)抗吸收剂:主要是离子或非离子表面活性剂或者其他蛋白质或可溶性聚合物用于竞争性包被或吸附于组合物的内表面或者组合物的容器的内表面。例如,泊洛沙姆(Pluronic F-68)、PEG十二烷基醚(Brij 35)、聚山梨醇酯20和80、葡聚糖、聚乙二醇、PEG-多组氨酸、BSA和HSA及明胶。赋形剂的所选浓度和型号取决于要避免的影响,但通常刚好在CMC值之上在界面形成表面活性剂的单层。

(vi)冷冻保护剂:在冷冻或喷雾干燥期间,赋形剂可以抵消由氢键断裂和水去除引起的去稳定作用。为此,可以使用糖和多元醇,但对于表面活性剂、氨基酸、非水溶剂和其他肽也观察到了相应的积极作用。海藻糖对于降低湿度诱导的聚集特别有效,并改善由于蛋白质疏水基团暴露于水可能引起的热稳定性。还可以使用甘露醇和蔗糖,或者作为唯一的冻干保护剂/冷冻保护剂或者相互组合,其中已知较高比率的甘露醇:蔗糖增强干组合物中蛋白质的物理稳定性。还可以将甘露醇与海藻糖组合。海藻糖还可以与山梨醇组合或者将山梨醇用作为唯一保护剂。还可以使用淀粉或淀粉衍生物。

(vii)氧化保护剂:抗氧化剂,例如抗坏血酸、四氢甲基嘧啶羧酸、甲硫氨酸、谷胱甘肽、单硫代甘油、桑色素、聚氮丙啶(PEI)、没食子酸丙酯、维生素E、螯合剂如柠檬酸、EDTA、六磷酸盐、巯基乙酸。

太阳城集团(viii)其他辅助剂:例如润湿剂、粘度改进剂、抗生素。酸和碱如盐酸和氢氧化钠是制备期间pH调节所必需的辅助剂。

在本发明的一个实施方案中,将rhGH聚合物前体药物的干组合物提供为单剂量,意为包含rhGH聚合物前体药物的干组合物的容器包含一个治疗性剂量。

太阳城集团因此,在本发明的另一方面,将组合物提供为单剂量组合物。

太阳城集团在另一实施方案中,rhGH聚合物前体药物的干组合物含有多剂量,意为包含rhGH聚合物前体药物的干组合物的容器含有一个以上治疗性剂量。优选地,多剂量组合物含有至少2个剂量如2-12个剂量的hGH聚合物前体药物和优选地至少4个剂量。

因此,在本发明的另一方面,将组合物提供为多剂量组合物。

在另一方面,根据本发明的组合物的特征在于其含有一个或多个其他的生物学活性剂,或者以其游离形式或者作为前体药物,且其中一个或多个其他的生物学活性剂选自IGF-1、促生长激素释放肽(ghrelin)或促生长激素释放肽样化合物、促性腺激素释放激素激动剂和/或类似物、生长激素释放因子和类似物、性腺类固醇(gonadal steroids)、抗雄激素类、非甾类芳香酶抑制剂、HIV联合疗法、游离脂肪酸调节物、促蛋白合成类固醇、雌激素激动剂/拮抗剂、普萘洛尔、食欲抑制剂、骨质疏松症药物、包括双膦酸类化合物、骨形成剂、雌激素类、甲状旁腺激素和选择性受体调节剂和/或抗糖尿病药物如胰岛素、噻唑烷二酮类、磺酰脲类、肠降血糖素模拟物、美各里替尼类、双胍类、α-葡糖苷酶抑制剂和糊精类似物。用于其他生物学活性剂的前体药物还优选地为瞬时聚合物前体药物,以及特别地如本文对rhGH所述的前体药物。优选地,其他生物学活性剂以其游离形式包含。

再将rhGH聚合物前体药物的干组合物应用于需要其的患者之前,将干组合物重构。重构可以发生在其中提供rhGH聚合物前体药物的容器中,例如在小瓶、注射器、双腔注射器、安瓿瓶和药筒中,或者可以将rhGH聚合物前体药物的干组合物转移到不同的容器中,然后重构。重构通过将预定量的重构溶液加入到冷冻干燥物中进行。重构溶液是无菌液体,如水或缓冲液,其可以含有其他添加剂,如防腐剂和/或抗微生物剂。如果将rhGH聚合物前体药物组合物提供为单剂量,重构溶液可以含有一种或多种防腐剂和/或抗微生物剂。优选地,其为无菌水。如果rhGH聚合物前体药物组合物是多剂量组合物,优选地,重构溶液含有一种或多种防腐剂和/或抗微生物剂,例如苯甲醇和甲酚。

太阳城集团重构的组合物优选地包含

rhGH聚合物前体药物        10-300mg/ml

                          琥珀酸5-50mM

太阳城集团海藻糖二水合物        25-850mg/ml,

并具有pH4.5-pH6的pH。

更优选地,重构的组合物包含

太阳城集团rhGH聚合物前体药物    10-300mg/ml

太阳城集团琥珀酸                5-50mM

太阳城集团海藻糖二水合物        30-150mg/ml,

并具有pH4.5-pH6的pH。

甚至更优选地,重构的组合物包含

rhGH聚合物前体药物    10-300mg/ml

太阳城集团琥珀酸                5-50mM

海藻糖二水合物        50-100mg/ml,

并具有pH4.5-pH6的pH。

最优选地,重构的组合物包含

rhGH聚合物前体药物    30-60mg/ml

琥珀酸                10mM

海藻糖二水合物        75-85mg/ml,

太阳城集团并具有pH4.5-pH5.5的pH。

太阳城集团任选地,重构的组合物包含一种或多种防腐剂和/或抗微生物剂。

太阳城集团任选地,重构的组合物包含一种或多种赋形剂。

重构后,rhGH聚合物前体药物的单剂量组合物的体积不超过4ml,例如约0.5至约3.5ml。

太阳城集团在rhGH聚合物前体药物的重构的多剂量组合物中,每一剂量的体积不超过4ml,例如约0.5至约3.5ml。该rhGH聚合物前体药物的多剂量组合物的各个治疗性剂量可以用于需要其的不同患者或者可以用于一个患者,其中在应用第一个剂量后储存剩余的剂量直到需要时。在后者的情况下,重构的rhGH聚合物前体药物当储存在2-8℃时稳定至少2周,优选地至少4周,且更优选地至少6周。

优选地,hGH聚合物前体药物在组合物中的剂量足以在一次应用中提供至少3天的hGH的治疗性有效量。更优选地,hGH聚合物前体药物的一次应用提供了4天、甚至更优选地5天和最优选地1周的hGH的治疗性有效量。

太阳城集团在本发明的另一方面,组合物包含在容器如小瓶、注射器、双腔注射器、安瓿瓶和药筒中。优选地,容器是双腔注射器。特别地,根据本发明的干组合物提供在双腔注射器的第一个腔中,重构溶液提供在双腔注射器的第二个腔中。

太阳城集团本发明的另一方面是制备根据本发明的组合物的方法,包括步骤

太阳城集团(i)将rhGH聚合物前体药物与一种或多种冻干保护剂和任选地一种或多种赋形剂混合,

太阳城集团(ii)将与期望数量的剂量等同的量的步骤(i)的混合物转移到容器的合适的腔中,

(iii)干燥该混合物,并

(iv)密封该容器。

优选地,制备本发明组合物的方法,包括步骤

(i)将rhGH聚合物前体药物与海藻糖二水合物和琥珀酸混合,以产生包含

rhGH聚合物前体药物    10-300mg/ml

琥珀酸                5-50mM

海藻糖二水合物        25-850mg/ml

的组合物,

(ii)将步骤(i)的组合物的pH用三羟甲基氨基甲烷(tris)调整到pH4.0至pH6.5,

(iii)将与期望数量的剂量等同的量的步骤(i)的混合物转移到容器的合适的腔中,

(iv)干燥该混合物,并

(v)密封该容器;

其中可以改变步骤(ii)和(iii)的顺序。

太阳城集团优选地,步骤(i)中的组合物包含

太阳城集团rhGH聚合物前体药物    10-300mg/ml

琥珀酸                5-50mM

海藻糖二水合物        50-100mg/ml。

太阳城集团更优选地,步骤(i)中的组合物包含

太阳城集团rhGH聚合物前体药物    30-60mg/ml

琥珀酸                10mM

太阳城集团海藻糖二水合物        70-85mg/ml。

腔的数目取决于剂量的数目。如果仅预计一个剂量,那么容器可以包含一个、两个或多个腔。

太阳城集团优选地,步骤(iii)通过冷冻干燥进行。

优选地,在上述方法中,容器是双腔注射器,第一个腔含有包含hGH聚合物前体药物组合物的混合物,该方法还包括步骤

·在密封容器前用重构溶液填充第二腔。

另一方面是试剂盒。如果施用器械是简单的皮下注射器,则试剂盒可以包含注射器、针、含有重构溶液的小瓶,以及含有用于注射器的干hGH聚合物前体药物组合物的小瓶或安瓿瓶。任选地,试剂盒包含针的安全装置,其可以用于使用后的针的加盖或者覆盖,以防止损伤。

太阳城集团在更优选的实施方案中,注射器械并不是简单的皮下注射器,所以适用分别的容器以与注射装置配合,从而在使用中,容器中的液体组合物以流体状态与注射装置的出口相连。更优选地,分别的容器是双腔注射器。施用装置的实例包括但不限于皮下注射器和笔式注射器装置。特别优选的注射装置是其中容器是药筒、优选地一次性药筒的笔式注射器。

优选的试剂盒包含针和含有根据本发明的组合物和任选地还含有重构溶液的容器,容器适合于针。优选地,容器是双腔注射器。

太阳城集团本发明的其他方面涉及施用重构的rhGH聚合物前体药物组合物的方法。可以通过包括真皮内、皮下、肌肉内、静脉内、骨内和腹膜内的注射或者输注方法施用rhGH聚合物前体药物组合物。

太阳城集团另一方面是制备包含治疗有效量的rhGH聚合物前体药物、一种或多种冻干保护剂和任选地一种或多种可药用赋形剂的重构组合物的方法,其中生长激素与聚合物载体瞬时连接,该方法包括步骤

·将本发明的组合物与重构溶液接触。

太阳城集团另一方面是包含治疗有效量的rhGH聚合物前体药物、一种或多种冻干保护剂和任选地一种或多种可药用赋形剂的重构组合物,其中生长激素与可通过上述方法获得的聚合物载体瞬时连接。

在本发明的一个实施方案中,聚合物rhGH前体药物的干组合物不仅包含rhGH聚合物前体药物、冻干保护剂和任选地一种或多种赋形剂,还包含游离形式或者作为前体药物的其他生物学活性部分。此类生物学活性部分为例如:

-IGF-1

太阳城集团-促生长激素释放肽或促生长激素释放肽样化合物,

太阳城集团-促性腺激素释放激素类似物,例如如曲普瑞林或抗雄激素,如环丙孕酮或非甾类芳香酶抑制剂,如来曲唑;

-HIV联合疗法

-游离脂肪酸调节物,例如阿西莫司

太阳城集团-促蛋白合成类固醇,例如氧雄龙

太阳城集团-雌激素激动剂/拮抗剂

-普萘洛尔

太阳城集团-食欲抑制剂,例如西布曲明

太阳城集团如果本发明的rhGH聚合物前体药物的干组合物包含前体药物形式的其他生物学活性部分,则优选所述其他生物学活性部分与聚合物瞬时连接。还优选的是该瞬时连接包含任一前述连接体。

在备选的实施方案中,根据本发明的rhGH聚合物前体药物组合物与第二生物学活性化合物如下组合:首先将rhGH聚合物前体药物施用给需要其的患者,然后施用第二化合物。备选地,在将rhGH聚合物前体药物组合物施用给需要其的患者之前,将另一化合物施用给同一患者。

太阳城集团在优选的实施方案中,干rhGH聚合物前体药物的组合物具有以下组分(基于组合物的总重量):

更优选地,干rhGH聚合物前体药物的组合物具有以下组分(基于组合物的总重量):

最优选地,干rhGH聚合物前体药物的组合物具有以下组分(基于组合物的总重量):

优选地,如上所述的rhGH聚合物前体药物的组合物是冷冻干燥的。优选地,其在双腔注射器的第一个腔中冷冻干燥,其中将第二个腔用重构溶液填充。在一个实施方案中,重构溶液是含0.7-1.1%苯甲醇、更优选地0.9%苯甲醇的无菌水。在另一实施方案中,重构溶液含有0.2-0.4%甲酚、更优选地0.3%甲酚。优选地,重构溶液是无菌水。

可以将任意上述rhGH聚合物前体药物的组合物用于治疗或者预防可以通过rhGH治疗的疾病或病症,例如生长激素缺乏(GHD)、成人发作型生长激素缺乏、特纳综合征、普-威综合征、短肠综合征、慢性肾功能不全、小于胎龄儿(SGA)、艾滋病消瘦症候群(AIDS wasting)、抗衰老、类风湿性关节炎、特发性身材矮小症、身体矮小同源框基因和躯体停滞(somatopause)。尤其还包括与长期使用类固醇相关的身材矮小、奥斯科格综合征等。

太阳城集团还包括慢性肾病、幼年型类风湿性关节炎;囊性纤维化、接受HAART治疗儿童的HIV感染(HIV/HALS儿童);非SGA的非常低出生体重儿童(VLBW)的身材矮小;骨髂发育异常;软骨发育不良;软骨发育不全;特发性身材矮小症(ISS);成年人GHD;长骨中的或长骨的骨折(fractures in or of long bones),例如胫骨、腓骨、股骨、肱骨、桡骨、尺骨、锁骨、掌骨(matacarpea)、跖骨(matatarsea)和指(趾)骨;松质骨中或松质骨的骨折,例如颅骨、手底(base of hand)和足底;例如手、膝或肩中的腱或韧带外科手术后的患者;牵张成骨(distraction oteogenesis);由髋或关节盘置换、半月板修复、脊柱融合或假体固定所致的障碍,例如在膝、髋、肩、肘、腕或颚中;由固定骨合成材料如钉、螺钉和板所致障碍;骨折不愈合或愈合不良(non-union or mal-union of fractures);骨切除术(osteatomia)如胫骨或第一趾所致的障碍;移植物植入所致障碍;因创伤或关节炎导致的膝中关节软骨变性;特纳综合征患者的骨质疏松症;男性骨质疏松症;长期透析的成年患者(APCD);APCD中与营养不良相关的心血管疾病;APCD中恶病质的逆转;APCD中的癌症;APCD中的慢性阻塞性肺病;APCD中的HIV;具有APCD的老年人;APCD中的慢性肝病;APCD中的疲劳综合征;局限性回肠炎;肝功能受损;具有HIV感染的男性;短肠综合征;中心性肥胖(central obesity);HIV-相关的脂质营养不良综合征(HALS);男性不育症;大的选择性外科手术、酒精/药物解毒或神经创伤后的患者;衰老;虚弱老人;骨关节炎;创伤损害的软骨;勃起机能障碍;纤维肌痛;记忆障碍;抑郁症;创伤性脑损伤;蛛网膜下出血;极低出生体重;代谢综合征;糖皮质激素肌病;或因儿童糖皮质激素治疗导致的身材矮小症。

太阳城集团图1显示类型(AA1、AAA1)的示例性结构1,其中将包含Ga和BS1和BS2的S0的至少5kDa聚合物链标记为S0;得自La和hGH的伯氨基的氨基甲酸酯基团标记为La;BS1包含标记为S1的至少4kDa聚合物链,其中S1包含BS3,所述BS3包含标记为S3的至少4kDa聚合物链。BS2包含标记为S2的至少4kDa聚合物链。

实施例

太阳城集团实施例1:hGH聚合物前体药物的合成

太阳城集团如WO-A 2009/133137所述合成具有c~500的hGH聚合物前体药物(1)。

实施例2:含hGH聚合物前体药物的组合物的稳定性测试

太阳城集团制备了hGH聚合物前体药物的五种不同的冷冻干燥组合物(C1、C2、C3、C4和C5)。每种组合物含有一定量的hGH聚合物前体药物1,以在重构后产生5mg/ml的浓度。将制剂直立放置在设定为40℃/75%RH的温育箱中。17天后,从各个温育箱中取出每种制剂的一个小瓶,用无菌注射用水重构,用于分析。

实施例3:含hGH聚合物前体药物的组合物的稳定性测试

制备了hGH聚合物前体药物的三种不同的冷冻干燥组合物(C6、C7和C8)。每种组合物含有一定量的hGH聚合物前体药物1,以在重构后产生30mg/ml的浓度。将制剂直立放置在设定为40℃/75%RH的温育箱和设定为2-8℃的温育箱中。在每一太阳城集团点,从各个温育箱中取出每种制剂的一个小瓶,用无菌注射用水重构并进行分析。

太阳城集团实施例4:含hGH聚合物前体药物的组合物的稳定性测试

太阳城集团制备了hGH聚合物前体药物的冷冻干燥组合物(C9)。该组合物含有一定量的hGH聚合物前体药物1,以在重构后产生30mg/ml的浓度。将制剂直立放置在设定为40℃/75%RH的温育箱中。在每一太阳城集团点后,从各个温育箱中取出一个小瓶,用无菌注射用水重构,并进行分析。

太阳城集团实施例5:含hGH聚合物前体药物的组合物的稳定性测试

太阳城集团制备了hGH聚合物前体药物的冷冻干燥组合物(C20)。组合物含有一定量的hGH聚合物前体药物1,以在重构后产生30mg/ml的浓度。将制剂直立放置在分别设定为5±3℃的温育箱和设定为25±2℃的温育箱中。在每一太阳城集团点后,从各个温育箱中取出一个小瓶,用无菌注射用水重构,并进行分析。

实施例6:含hGH聚合物前体药物的组合物的稳定性测试

制备了hGH聚合物前体药物的冷冻干燥组合物(C10)。组合物含有一定量的hGH聚合物前体药物1,以在重构后产生44mg/ml的浓度。将制剂直立放置在分别设定为40±2℃、相对湿度为75±5%的温育箱中。在每一太阳城集团点后,从各个温育箱中取出一个小瓶,用无菌注射用水重构,并进行分析。

实施例7:含hGH聚合物前体药物的组合物的稳定性测试

太阳城集团制备了hGH聚合物前体药物的冷冻干燥组合物(C11)。组合物含有一定量的hGH聚合物前体药物1,以在重构后产生52mg/ml的浓度。将制剂直立放置在设定为40±2℃、相对湿度为75±5%的温育箱中。在每一太阳城集团点后,从各个温育箱取出一个小瓶,用无菌注射用水重构,并进行分析。

方法:

太阳城集团冷冻干燥组合物:应用超滤/渗滤或者透析,从柱洗脱物中获得含hGH聚合物前体药物的浓缩水溶液。进行针对含分别通过三羟甲基氨基甲烷或氢氧化钠调整pH的琥珀酸或磷酸以及海藻糖二水合物和/或甘露醇和/或甘氨酸的缓冲液的缓冲液交换,以获得含所需浓度hGH聚合物前体药物的含水缓冲溶液,将其随后冰冻并冷冻干燥。

RP-HPLC检测游离hGH:流动相A由0.05% TFA水溶液(例如999.5mL HPLC级水中的0.5mL TFA)组成,流动相B由0.04%TFA的乙腈溶液组成(例如在999.6mL乙腈中0.4mL TFA)。使用Waters UPLC C18BEH1.7μm 2.1x50mm柱。流速设定为0.4mL/分钟,在215nm波长检测,柱运行温度为30℃(±5℃)。将样品冷却器温度设定为4℃,样品注射装载量为100μg(10μL 10mg/mL样品)。将样品转移到0.22-μm PVDF离心滤膜上(Millipore,#UFC30GVNB),通过在9,000×g离心1分钟过滤。用制剂缓冲液将经过滤的样品稀释到10mg/mL。

太阳城集团聚合物hGH前体药物的胰蛋白酶消化和肽图谱:以胰蛋白酶/hGH比率=1∶20(w/w)进行hGH缀合物的胰蛋白酶消化。用蛋白裂解缓冲液浓缩物将pH调整至pH=7.0,以最小化消化期间hGH从瞬时hGH-PEG缀合物中切割。在37℃温育8小时后,通过添加5%(w/w)磷酸溶液终止消化。通过RP-HPLC在C18柱上以300A孔径和1.7μm颗粒直径分离所得的肽混合物。以0.05体积%的含水TFA和乙腈中的0.04%TFA的梯度组合作为洗脱剂,在215nm处检测。用合适的溶液洗脱的胰蛋白酶片段通过LC-MS表征,并与理论的单同位素质量比较。蛋白质序列覆盖为96%(191个氨基酸中的184个)。

将杂质定量为相对于对应的未修饰胰蛋白酶肽的峰面积的、基于其各个峰面积的胰蛋白酶肽。在胰蛋白酶消化和随后的RP-HPLC-MS条件下,可以将琥珀酰亚胺中间物和异天冬氨酸用于定量聚合物hGH前体药物的ASP130。

太阳城集团在胰蛋白酶消化和随后RP-HPLC-MS条件下,可以将由于ASN149和ASN152脱酰胺产生的天冬氨酸的形成用于定量聚合物hGH前体药物。

太阳城集团在胰蛋白酶消化和随后RP-HPLC-MS条件下,可以将MET14的亚砜降解产物的形成用于定量hGH聚合物前体药物。

LC-MS-液相层析偶联质谱

PVDF-聚偏1,1-二氟乙烯

RH-相对湿度

RP-HPLC-反相高效液相层析

TFA-三氟乙酸

太阳城集团Tris-三羟甲基氨基甲烷

UPLC-超高效液相层析

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本文标题:瞬时连接于聚合物载体的干生长激素组合物.pdf
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