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一种用于构树组织培养的培养液.pdf

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一种 用于 组织培养 培养液
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摘要
申请专利号:

太阳城集团CN201710609868.5

申请日:

20170725

公开号:

CN107318650A

公开日:

20171107

当前法律状态:

有效性:

审查中

法律详情:
IPC分类号: A01H4/00 主分类号: A01H4/00
申请人: 贵州海铭巍杂交构树产业开发有限公司
发明人: 魏海明
地址: 552200 贵州省黔西南布依族苗族自治州册亨县者楼镇盘山路一号
优先权: CN201710609868A
专利代理机构: 北京科家知识产权代理事务所(普通合伙) 代理人: 陈娟
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法律状态
申请(专利)号:

太阳城集团CN201710609868.5

授权太阳城集团号:

法律状态太阳城集团日:

法律状态类型:

摘要

本发明属于生物技术领域,特别是涉及一种用于构树组织培养的培养液,每升培养液中含母液A80~120g、母液B0.8~1.2g、母液C0.8~1.2g、母液D8~12g、母液E3~7g、继代试剂或生根试剂0.8~1.2g、蔗糖25~35g、琼脂粉5~6g、麦饭石微粉4~6g、氧化铝微粉2~5g。采用本发明的培养液,生根率和移栽成活率达到可达99.6%以上,遗传稳定性好。

权利要求书

太阳城集团1.一种用于构树组织培养的培养液,其特征在于:每升培养液中含母液A80~120g、母液B0.8~1.2g、母液C0.8~1.2g、母液D8~12g、母液E3~7g、继代试剂或生根试剂0.8~1.2g、蔗糖25~35g、琼脂粉5~6g、麦饭石微粉4~6g、氧化铝微粉2~5g;所述母液A中CaCl·2HO浓度为4~5g/L、KNO浓度为18~20g/L、MgSO·7HO浓度为3~4g/L、NH4NO浓度为16~17g/L、KHPO浓度为1~2g/L;所述母液B中MgSO·4HO浓度为24~25g/L、ZnSO·7HO浓度为8~9g/L、HBO浓度为6.0~6.5g/L、KI浓度为0.8~0.9g/L、NeMoO·2HO浓度为0.2~0.3g/L、CuSO·5HO浓度为0.02~0.03g/L、CoCl·6HO浓度为0.02~0.03g/L;所述母液C中硫胺素浓度为0.4~0.6g/L、吡多醇浓度为0.3~0.5g/L、烟酸浓度为0.4~0.6g/L、甘氨酸浓度为1~3g/L;所述母液D是质量浓度为8~12g/L的肌醇溶液;所述母液E中FeSO·7HO浓度为5~6g/L、Na-EDTA浓度为7~8g/L。2.如权利要求1所述的用于构树组织培养的培养液,其特征在于:所述培养液中每升含母液A100g、母液B1g、母液C1g、母液D10g、母液E5g、继代试剂或生根试剂1g、蔗糖30g、琼脂粉5.5g、麦饭石微粉5g、氧化铝微粉3.6g。3.如权利要求1所述的用于构树组织培养的培养液,其特征在于:所述继代试剂由6-苄氨基嘌呤、萘乙酸和荔枝汁以(4~7):(1~2):(1.5~2.5)的重量比配制而成。4.如权利要求1所述的用于构树组织培养的培养液,其特征在于:所述生根试剂由吲哚乙酸、Vc、荔枝汁以(100~120):(1~2):(180~200)的重量比配制而成。5.如权利要求1所述的用于构树组织培养的培养液,其特征在于:所述母液A中CaCl·2HO浓度为4.4g/L、KNO浓度为19g/L、MgSO·7HO浓度为3.8g/L、NH4NO浓度为16.5g/L、KHPO浓度为1.8g/L。6.如权利要求1所述的用于构树组织培养的培养液,其特征在于:所述母液B中MgSO·4HO浓度为24.3g/L、ZnSO·7HO浓度为8.6g/L、HBO浓度为6.2g/L、KI浓度为0.82g/L、NeMoO·2HO浓度为0.25g/L、CuSO·5HO浓度为0.025g/L、CoCl·6HO浓度为0.025g/L。7.如权利要求1所述的用于构树组织培养的培养液,其特征在于:所述母液C中硫胺素浓度为0.5g/L、吡多醇浓度为0.4g/L、烟酸浓度为0.5g/L、甘氨酸浓度为2g/L。8.如权利要求1所述的用于构树组织培养的培养液,其特征在于:所述母液D是质量浓度为10g/L的肌醇溶液。9.如权利要求1所述的用于构树组织培养的培养液,其特征在于:所述母液E中FeSO·7HO浓度为5.4g/L、Na-EDTA浓度为7.4g/L。

说明书

技术领域

本发明涉及生物技术领域,具体来说,涉及一种用于构树组织培养的培养液。

背景技术

构树属桑科,系多年生阔叶乔木。主要分布于我国黄河、长江及珠江流域,在贵州安顺有分布,多为野生,有少量栽培,属当地乡土树种。具有速生、适应性强、分布广、热量高、轮伐期短的特点。其树皮、木材、枝桠、叶、花、果实、种子、根、乳汁等皆可综合利用,经济效益潜力很大。构树全身都能利用:树皮纤维洁白、细长,是高档的造纸和纺织原料,价值高,市场需求量大;木杆是生产纸张、纤维板的好原料;树叶含有丰富的粗蛋白、氨基酸、微量元素,是动物的优质饲料原料。采用高密度栽培技术种植构树,亩产韧皮纤维200公斤,木杆1500公斤,优质饲料树叶1500公斤。由于构树具有绿化和其他经济价值,市场对于构树种苗的需求非常大,每年将达到2000万株。

目前构树的种苗制备主要靠扦插和组培苗供应。扦插存在着季节性、场地占用面积大、效率低等问题。常规组培方法存在着人工成本高、劳动量大、成本高等问题。在组培过程中易引起组培苗污染、材料死亡、玻璃化、黄化、褐化、变异、增值率低下或过盛、组培苗不生根或生根异常、组培苗瘦弱或徒长、瓶苗出瓶死亡率高等。

发明内容

太阳城集团有鉴于此,本发明的目的是提供一种用于构树组织培养的培养液,以解决现有构树组培方法易引起组培苗污染、材料死亡、玻璃化、黄化、褐化、变异、增值率低下或过盛、组培苗不生根或生根异常、组培苗瘦弱或徒长、瓶苗出瓶死亡率高等问题。

太阳城集团本发明通过以下技术方案解决上述技术问题:

一种用于构树组织培养的培养液,每升培养液中含母液A80~120g、母液B0.8~1.2g、母液C0.8~1.2g、母液D8~12g、母液E3~7g、继代试剂或生根试剂0.8~1.2g、蔗糖25~35g、琼脂粉5~6g、麦饭石微粉4~6g、氧化铝微粉2~5g;

所述母液A中CaCl2·2H2O浓度为4~5g/L、KNO3浓度为18~20g/L、MgSO4·7H2O浓度为3~4g/L、NH4NO3浓度为16~17g/L、KH2PO4浓度为1~2g/L;

所述母液B中MgSO4·4H2O浓度为24~25g/L、ZnSO4·7H2O浓度为8~9g/L、H3BO3浓度为6.0~6.5g/L、KI浓度为0.8~0.9g/L、NeMoO4·2H2O浓度为0.2~0.3g/L、CuSO4·5H2O浓度为0.02~0.03g/L、CoCl·6H2O浓度为0.02~0.03g/L;

太阳城集团所述母液C中硫胺素浓度为0.4~0.6g/L、吡多醇浓度为0.3~0.5g/L、烟酸浓度为0.4~0.6g/L、甘氨酸浓度为1~3g/L;

所述母液D是质量浓度为8~12g/L的肌醇溶液;

所述母液E中FeSO4·7H2O浓度为5~6g/L、Na2-EDTA浓度为7~8g/L。

太阳城集团所述培养液中含母液A100g、母液B1g、母液C1g、母液D10g、母液E5g、继代试剂或生根试剂1g、蔗糖30g、琼脂粉5.5g、麦饭石微粉5g、氧化铝微粉3.6g。

所述继代试剂由6-苄氨基嘌呤、萘乙酸和荔枝汁以(4~7):(1~2):(1.5~2.5)的重量比配制而成。

所述生根试剂由吲哚乙酸、Vc、荔枝汁以(100~120):(1~2):(180~200)的重量比配制而成。

所述麦饭石微粉为麦饭石的纳米微粉。

所述氧化铝微粉为氧化铝的纳米微粉。

太阳城集团所述母液A的配制方法为:取CaCl2·2H2O0.4~0.5g溶于300mL蒸馏水中,取KNO318~20g、MgSO4·7H2O3.5~4g、NH4NO316~17g、KH2PO41.5~2g混合溶于500mL蒸馏水中,将获得的两种溶液混合后,再定溶至1L,即得母液A。

所述母液B的配制方法为:取MgSO4·4H2O24~25g、ZnSO4·7H2O8~9g、H3BO36.0~6.5g、KI0.8~0.9g、NeMoO4·2H2O0.2~0.3g、CuSO4·5H2O0.02~0.03g、CoCl·6H2O0.02~0.03g溶于800mL蒸馏水中,再定溶至1000mL,即得母液B。

所述母液C的配制方法为:取硫胺素0.04~0.06g、吡多醇0.03~0.05g、烟酸0.04~0.06g、甘氨酸0.1~0.3g溶于80mL蒸馏水中,再定溶至100mL,即得母液C;

太阳城集团所述母液E的配制方法为:取FeSO4·7H2O2.5~3g溶于400mL蒸馏水中,再加入Na2-EDTA3.5~4g加热至80~120℃溶解5~8min,再定溶至500mL,即得母液E。

所述母液A中CaCl2·2H2O浓度为4.4g/L、KNO3浓度为19g/L、MgSO4·7H2O浓度为3.8g/L、NH4NO3浓度为16.5g/L、KH2PO4浓度为1.8g/L。

太阳城集团所述母液B中MgSO4·4H2O浓度为24.3g/L、ZnSO4·7H2O浓度为8.6g/L、H3BO3浓度为6.2g/L、KI浓度为0.82g/L、NeMoO4·2H2O浓度为0.25g/L、CuSO4·5H2O浓度为0.025g/L、CoCl·6H2O浓度为0.025g/L。

所述母液C中硫胺素浓度为0.5g/L、吡多醇浓度为0.4g/L、烟酸浓度为0.5g/L、甘氨酸浓度为2g/L。

所述母液D是质量浓度为10g/L的肌醇溶液。

所述母液E中FeSO4·7H2O浓度为5.4g/L、Na2-EDTA浓度为7.4g/L。

本发明的有益效果在于:首先,在培养液中添加麦饭石微粉和氧化铝微粉,可以降低多酚氧化酶的活性,减轻氧化的发生率,可以有效的吸收培养液中的酚类以及醌类有害物质,避免玻璃化、黄化、褐化、变异、增值率低下等情况的发生,而且还能帮助分解培养物中的代谢产物,并且有效抑制外植体内生菌类造成的污染;其次,添加荔枝汁促进构树不定芽的生长,繁殖系数高,且在增殖的同时诱导生根,缩短培育周期;再次,采用本发明的培养液,生根率和移栽成活率达到可达99.6%以上,遗传稳定性好。

具体实施方式

为了方便本领域的技术人员理解,下面将结合实施例对本发明做进一步的描述。实施例仅仅是对该发明的举例说明,不是对本发明的限定,实施例中未作具体说明的步骤均是已有技术,在此不做详细描述。

实施例一

一种用于构树组织培养的培养液,其包括继代培养液和生根培养液,所述继代培养液中每升(L)培养液含母液A80g、母液B0.8g、母液C0.8g、母液D8g、母液E3g、继代试剂0.8g、蔗糖25g、琼脂粉5g、麦饭石微粉4g、氧化铝微粉2g,继代培养液的配制方法为:取母液A80g、母液B0.8g、母液C0.8g、母液D8g、母液E3g、继代试剂0.8g、蔗糖25g、琼脂粉5g、麦饭石微粉4g、氧化铝微粉2g充分混合后,定溶至1L,即得;所述生根培养液中每升(L)培养液含母液A80g、母液B0.8g、母液C0.8g、母液D8g、母液E3g、生根试剂0.8g、蔗糖25g、琼脂粉5g、麦饭石微粉4g、氧化铝微粉2g,生根培养液的配制方法为:取母液A80g、母液B0.8g、母液C0.8g、母液D8g、母液E3g、生根试剂0.8g、蔗糖25g、琼脂粉5g、麦饭石微粉4g、氧化铝微粉2g充分混合,再定溶至1L,即得。

太阳城集团所述母液A中CaCl2·2H2O浓度为4g/L、KNO3浓度为18g/L、MgSO4·7H2O浓度为3g/L、NH4NO3浓度为16g/L、KH2PO4浓度为1g/L;母液A的配制方法为:取CaCl2·2H2O0.4g溶于300mL蒸馏水中,取KNO318g、MgSO4·7H2O3.5g、NH4NO316g、KH2PO41.5g混合溶于500mL蒸馏水中,待两种溶液中看不见固体物质时,将获得的两种溶液混合后,再定溶至1L,即得母液A。

所述母液B中MgSO4·4H2O浓度为24g/L、ZnSO4·7H2O浓度为8g/L、H3BO3浓度为6.0g/L、KI浓度为0.8g/L、NeMoO4·2H2O浓度为0.2g/L、CuSO4·5H2O浓度为0.02g/L、CoCl·6H2O浓度为0.02g/L;所述母液B的配制方法为:取MgSO4·4H2O24g、ZnSO4·7H2O8g、H3BO36.0g、KI0.8g、NeMoO4·2H2O0.2g、CuSO4·5H2O0.02g、CoCl·6H2O0.02g溶于800mL蒸馏水中,待上述物质完全溶解于蒸馏水中,再定溶至1000mL,即得母液B。

所述母液C中硫胺素浓度为0.4g/L、吡多醇浓度为0.3g/L、烟酸浓度为0.4g/L、甘氨酸浓度为1g/L;所述母液C的配制方法为:取硫胺素0.04g、吡多醇0.03g、烟酸0.04g、甘氨酸0.1g溶于80mL蒸馏水中,待上述物质完全溶解于水中后再定溶至100mL,即得母液C。

所述母液D是质量浓度为8g/L的肌醇溶液。

所述母液E中FeSO4·7H2O浓度为5g/L、Na2-EDTA浓度为7g/L。所述母液E的配制方法为:取FeSO4·7H2O2.5g溶于400mL蒸馏水中,再加入Na2-EDTA3.5g加热至80℃溶解5min,待上述物质完全溶解于水中,再定溶至500mL,即得母液E。

太阳城集团所述继代试剂由6-苄氨基嘌呤、萘乙酸和荔枝汁以4:1:1.5的重量比配制而成。

所述生根试剂由吲哚乙酸、Vc、荔枝汁以100:1:180的重量比配制而成。

所述麦饭石微粉为麦饭石的纳米微粉。

所述氧化铝微粉为氧化铝的纳米微粉。

实施例二

一种用于构树组织培养的培养液,其包括继代培养液和生根培养液,所述继代培养液中每升(L)培养液含母液A120g、母液B1.2g、母液C1.2g、母液D12g、母液E7g、继代试剂1.2g、蔗糖35g、琼脂粉6g、麦饭石微粉6g、氧化铝微粉5g,继代培养液的配制方法为:取母液A120g、母液B1.2g、母液C1.2g、母液D12g、母液E7g、继代试剂1.2g、蔗糖35g、琼脂粉6g、麦饭石微粉6g、氧化铝微粉5g混合均匀,再定溶至1L,即得;所述生根培养液中每升(L)培养液含母液A120g、母液B1.2g、母液C1.2g、母液D12g、母液E7g、生根试剂1.2g、蔗糖35g、琼脂粉6g、麦饭石微粉6g、氧化铝微粉5g,生根培养液的配制方法为:取母液A120g、母液B1.2g、母液C1.2g、母液D12g、母液E7g、生根试剂1.2g、蔗糖35g、琼脂粉6g、麦饭石微粉6g、氧化铝微粉5g混合均匀,即得。

所述母液A中CaCl2·2H2O浓度为5g/L、KNO3浓度为20g/L、MgSO4·7H2O浓度为4g/L、NH4NO3浓度为17g/L、KH2PO4浓度为2g/L;母液A的配制方法为:取CaCl2·2H2O0.5g溶于300mL蒸馏水中,取KNO320g、MgSO4·7H2O4g、NH4NO317g、KH2PO42g混合溶于500mL蒸馏水中,待两种溶液中看不见固体物质时,将获得的两种溶液混合后,再定溶至1L,即得母液A。

所述母液B中MgSO4·4H2O浓度为25g/L、ZnSO4·7H2O浓度为9g/L、H3BO3浓度为6.5g/L、KI浓度为0.9g/L、NeMoO4·2H2O浓度为0.3g/L、CuSO4·5H2O浓度为0.03g/L、CoCl·6H2O浓度为0.03g/L;所述母液B的配制方法为:取MgSO4·4H2O25g、ZnSO4·7H2O9g、H3BO36.5g、KI0.9g、NeMoO4·2H2O0.3g、CuSO4·5H2O0.03g、CoCl·6H2O0.03g溶于800mL蒸馏水中,待上述物质完全溶解于蒸馏水中,再定溶至1000mL,即得母液B。

所述母液C中硫胺素浓度为0.6g/L、吡多醇浓度为0.5g/L、烟酸浓度为0.6g/L、甘氨酸浓度为3g/L;所述母液C的配制方法为:取硫胺素0.06g、吡多醇0.05g、烟酸0.06g、甘氨酸0.3g溶于80mL蒸馏水中,待上述物质完全溶解于水中后再定溶至100mL,即得母液C。

太阳城集团所述母液D是质量浓度为12g/L的肌醇溶液。

所述母液E中FeSO4·7H2O浓度为6g/L、Na2-EDTA浓度为8g/L。所述母液E的配制方法为:取FeSO4·7H2O3g溶于400mL蒸馏水中,再加入Na2-EDTA4g加热至120℃溶解8min,待上述物质完全溶解于水中,再定溶至500mL,即得母液E。

所述继代试剂由6-苄氨基嘌呤、萘乙酸和荔枝汁以7:2:2.5的重量比配制而成。

所述生根试剂由吲哚乙酸、Vc、荔枝汁以120:2:200的重量比配制而成。

所述麦饭石微粉为麦饭石的纳米微粉。

太阳城集团所述氧化铝微粉为氧化铝的纳米微粉。

实施例三

太阳城集团一种用于构树组织培养的培养液,其包括继代培养液和生根培养液,所述继代培养液中每升(L)培养液含母液A100g、母液B1g、母液C1g、母液D10g、母液E5g、继代试剂或生根试剂1g、蔗糖30g、琼脂粉5.5g、麦饭石微粉5g、氧化铝微粉3.6g,继代培养液的配制方法为:取母液A100g、母液B1g、母液C1g、母液D10g、母液E5g、继代试剂1g、蔗糖30g、琼脂粉5.5g、麦饭石微粉5g、氧化铝微粉3.6g混合均匀,再定溶至1L,即得;所述生根培养液中每升(L)培养液含母液A100g、母液B1g、母液C1g、母液D10g、母液E5g、生根试剂1g、蔗糖30g、琼脂粉5.5g、麦饭石微粉5g、氧化铝微粉3.6g,生根培养液的配制方法为:取母液A100g、母液B1g、母液C1g、母液D10g、母液E5g、生根试剂1g、蔗糖30g、琼脂粉5.5g、麦饭石微粉5g、氧化铝微粉3.6g混合均匀,再定溶至1L,即得。

所述母液A中CaCl2·2H2O浓度为4.4g/L、KNO3浓度为19g/L、MgSO4·7H2O浓度为3.8g/L、NH4NO3浓度为16.5g/L、KH2PO4浓度为1.8g/L;母液A的配制方法为:取CaCl2·2H2O0.44g溶于300mL蒸馏水中,取KNO319g、MgSO4·7H2O3.8g、NH4NO316.5g、KH2PO41.8g混合溶于500mL蒸馏水中,待两种溶液中看不见固体物质时,将获得的两种溶液混合后,再定溶至1L,即得母液A。

所述母液B中MgSO4·4H2O浓度为24.3g/L、ZnSO4·7H2O浓度为8.6g/L、H3BO3浓度为6.2g/L、KI浓度为0.82g/L、NeMoO4·2H2O浓度为0.25g/L、CuSO4·5H2O浓度为0.025g/L、CoCl·6H2O浓度为0.025g/L;所述母液B的配制方法为:取MgSO4·4H2O24.3g、ZnSO4·7H2O8.6g、H3BO36.2g、KI0.82g、NeMoO4·2H2O0.25g、CuSO4·5H2O0.025g、CoCl·6H2O0.025g溶于800mL蒸馏水中,待上述物质完全溶解于蒸馏水中,再定溶至1000mL,即得母液B。

所述母液C中硫胺素浓度为0.5g/L、吡多醇浓度为0.4g/L、烟酸浓度为0.5g/L、甘氨酸浓度为2g/L;所述母液C的配制方法为:取硫胺素0.5g、吡多醇0.4g、烟酸0.5g、甘氨酸2g溶于800mL蒸馏水中,待上述物质完全溶解于水中后再定溶至1000mL,即得母液C。

太阳城集团所述母液D是质量浓度为10g/L的肌醇溶液。

所述母液E中FeSO4·7H2O浓度为5.4g/L、Na2-EDTA浓度为7.4g/L。所述母液E的配制方法为:取FeSO4·7H2O2.7g溶于400mL蒸馏水中,再加入Na2-EDTA3.7g加热至100℃溶解6min,待上述物质完全溶解于水中,再定溶至500mL,即得母液E。

所述继代试剂由6-苄氨基嘌呤、萘乙酸和荔枝汁以5:1.5:2的重量比配制而成。

太阳城集团所述生根试剂由吲哚乙酸、Vc、荔枝汁以110:1.5:190的重量比配制而成。

太阳城集团所述麦饭石微粉为麦饭石的纳米微粉。

太阳城集团所述氧化铝微粉为氧化铝的纳米微粉。

对比例一

培养液中不含麦饭石微粉以及氧化铝微粉,其他组分与实施例三一样。

对比例二

培养液中不含氧化铝微粉,其他组分与实施例三一样。

对比例三

培养液中不含麦饭石微粉,其他组分与实施例三一样。

对比例四

太阳城集团培养液中不含荔枝汁,其他组分与实施例三一样。

将上述配制的培养液用来对构树进行组织培养,采用常规培养方法,即采集构树组织培养的外植体,采集带腋芽的嫩枝;对室外采集的外植体进行清洗及消毒;经消毒处理后的外植体愈伤组织诱导;愈伤组织的再分化及继代培养;脱毒苗生根培养;炼苗;大田种植。结果见表1:

表1

从表1可以看出,在培养液中添加麦饭石微粉和氧化铝微粉,可以有效的吸收培养液中的酚类以及醌类有害物质,避免玻璃化、黄化、褐化、变异、增值率低下等情况的发生,而且还能帮助分解培养物中的代谢产物,并且有效抑制外植体内生菌类造成的污染;添加荔枝汁促进构树不定芽的生长,繁殖系数高,且在增殖的同时诱导生根。

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