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肾茶抗泌尿系统结石提取物及其制备方法.pdf

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肾茶抗 泌尿系统 结石 提取物 及其 制备 方法
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摘要
申请专利号:

CN200710069186.6

申请日:

20070605

公开号:

CN101066292A

公开日:

20071107

当前法律状态:

有效性:

失效

法律详情:
IPC分类号: A61K36/53,A61P13/04 主分类号: A61K36/53,A61P13/04
申请人: 浙江省亚热带作物研究所
发明人: 陶正明,蔡华芳,顾雪萍,李林
地址: 325005浙江省温州市景山公园雪山路334号
优先权: CN200710069186A
专利代理机构: 杭州丰禾专利事务所有限公司 代理人: 沈伾伾
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法律状态
申请(专利)号:

太阳城集团CN200710069186.6

授权太阳城集团号:

法律状态太阳城集团日:

法律状态类型:

摘要

太阳城集团本发明公开了肾茶抗泌尿系统结石提取物及其制备方法,属于中草药的提取物与应用技术领域。该方法包括:(1)将肾茶与甲醇按重量:体积1∶4~10的比例,浸泡、提取、浓缩得浸膏混合物;(2)将浸膏混合物与溶解液按重量:体积1∶1比例混合、溶解;(3)将溶解液先用石油醚萃取,再用乙酸乙酯萃取、浓缩后得到萃取物;(4)将萃取物层析、洗脱、收集并浓缩得肾茶提取物A组分。属脂溶性黄酮甙元类化合物,具明显改善泌尿系结石症状、减少结石量、增加尿量、有助于结石排出及消炎等效果。可直接、复合或进一步分离提取,用于泌尿系抗结石、排石、利尿和消炎等的药物。

权利要求书

太阳城集团1、肾茶提取物B组分,其特征在于可按以下方法制得:(1)将肾茶[C.spicatus(Thunb.)C.Y.Wu ex H.W.Li]干品粉碎后与甲醇按克重量∶毫升体积为1∶4~10的比例,共浸泡3次,每次10天,合并、浓缩浸提液得浸膏混合物;(2)先将水与甲醇按1∶5~12体积比混配成溶解液,再将步骤(1)浸膏混合物与溶解液按克重量∶毫升体积为1∶1比例混合、搅拌至充分溶解;(3)将步骤(2)浸膏溶解液先用石油醚和乙酸乙酯分别萃取3-5次,充分去除树脂、叶绿素低极性的杂质和脂溶性成分后,再用正丁醇萃取4次,合并、浓缩萃取物;(4)将步骤(3)萃取物进行硅胶柱层析、梯度洗脱、收集并浓缩得浅褐色粘稠状的肾茶提取物B组分。2、一种制备权利要求1所述肾茶提取物B组分的方法,其特征在于按以下步骤进行:(1)将肾茶[C.spicatus(Thunb.)C.Y.Wu ex H.W.Li]干品粉碎后与甲醇按克重量∶毫升体积为1∶4~10的比例,共浸泡3次,每次10天,合并、浓缩浸提液得浸膏混合物;(2)先将水与甲醇按1∶5~12体积比混配成溶解液,再将步骤(1)浸膏混合物与溶解液按克重量∶毫升体积为1∶1比例混合、搅拌至充分溶解;(3)将步骤(2)浸膏溶解液先用石油醚和乙酸乙酯分别萃取3-5次,充分去除树脂、叶绿素低极性的杂质和脂溶性成分后,再用正丁醇萃取4次,合并、浓缩萃取物;(4)将步骤(3)萃取物进行硅胶柱层析、梯度洗脱、收集并浓缩得肾茶提取物B组分产品。

说明书



【技术领域】

太阳城集团本发明涉及中草药的提取物与应用技术领域,尤其涉及肾茶抗泌尿系统 结石提取物及其制备方法。

【背景技术】

肾结石、膀胱结石、尿路结石等是泌尿系统的常见病,文献报道欧洲 为5%~9%,加拿大为12%,美国为13%左右,我国发病率9%~15%左右, 广东地区泌尿结石的发病率高达20%。发病随年龄增加,危险性也增大。气 候较热的地区、嗜食动物蛋白人群,尤其是男性30~50岁的青、中年,发 病率较高,男女之比为2~3∶1。近年的流行病学调查,其发病率呈上升趋势, 尤其中青年增加更明显,严重影响了人们的健康。

太阳城集团目前泌尿系结石,尤其是肾结石治疗主要运用体外冲击波碎石术 (ESWL)和腔内泌尿外科手术,常引起肾脏的损伤和严重的并发症,可使 肾组织退行性病变,产生肾小球玻璃样变和纤维化,间质充血,炎症细胞浸 润,且ESWL及手术治疗都难以根治肾结石,其术后复发率高约78%~80%。 如何采用药物无创排除结石、并防止结石的形成和复发,是近代医学领域的 重点研究课题。而我国的传统中医药资源为泌尿系药物排石、预防结石形成 和复发开辟了广阔的前景。

肾茶为唇形科肾茶属Clerodendranthus植物肾茶C.spicatus(Thunb.)C.Y. Wu ex H.W.Li,又名猫须草。为多年生草本;茎直立,高0.5~1m,四棱形; 叶对生,菱状卵形或卵状披针形,长3~10cm,宽1.5cm~5cm,叶缘具粗大 牙齿,两面被毛,具腺点,叶柄长达1.2cm;轮伞花序4~8朵排成顶生总状 花序,花唇形,花冠淡紫或白色,雄蕊4枚,2长2短,花丝超出花冠2~ 4cm;小坚果卵形,具皱纹;花果期5~10月。气淡,味微甘,稍苦。肾荼 喜欢温暖湿润的气候,原产地年平均气温19.6~23.8℃,年降雨量1157.6~ 2103mm,生长适宜温度为26~30℃。

肾茶全世界约有五种,广泛分布于印度东部、泰国、印度尼西亚与澳 大利亚等地。在印尼民间肾茶作为一种治疗糖尿病、高血压、风湿病、扁桃 体炎、月经不调等的有效药物;在越南肾茶地上部分被用于治疗泌尿系结石、 浮肿、急性发热、流感、肝炎和黄疸等;在缅甸肾茶被认为是一种抗糖尿病 药,干叶的水煎剂用于治疗尿道和肾脏疾病;在日本冲绳,肾茶被称作爪哇 茶可促进身体解毒。我国仅有一种即肾茶[C.spicatus(Thunb).C.Y.Wu ex H. W.Li],主产于广西、广东、云南、福建、台湾等地。我国民间使用肾茶历史 悠久,在西双版纳,傣医药名称“雅娜妙”。全草入药,认为有利尿、抗菌、 消炎、溶石、排石等作用,常用于急、慢性肾炎、膀胱炎、尿路结石、咽炎 及风湿性关节炎。从临床文献和民间用药跟踪调查,肾茶能预防和降低肾结 石复发,促进尿路结石排出,改善病人的生活质量。

目前已从肾茶的地上部分提取出14个黄酮类化合物,12个黄酮苷元,2 个为黄酮醇苷。8个酚酸类成分,即咖啡酸、咖啡酸的二聚体迷迭香酸、咖啡 酸与酒石酸的缩合物caffeoyl tartrate及dicaffeoyl tartrate和四个咖啡酸四聚 物。此外还有泽兰黄素、琥珀酸、苯甲酸、乳酸、胡萝卜苷、熊果酸、葡萄 糖、戊糖、油脂、酒石酸、柠檬烯、龙脑、麝香草酚、消旋肌醇和一个香豆 素等成分。

太阳城集团肾茶一直以来作为民间用药,用途广泛,其利尿、排石方面有显著的功 效,受到人们的广泛关注,医药界也对其进行了一定的研究。泰国的 Premgamone等对肾茶进行了长达18个月的临床研究表明肾茶治疗肾结石的 效果优于枸橼酸钾钠。黄荣桂等临床研究证明肾茶对泌尿系感染、治疗尿路 结石有较好疗效。近年来国内外对肾茶的化学成分及其生物活性的研究主要 集中在抗肿瘤、抗菌消炎、利尿和补肾的作用表面上,而对其在泌尿系的利 尿、排石、消炎等具体作用上究竟是什么活性化学成分起主导作用、其作用 的机理是什么等了解甚少。为了加深肾茶在排泌尿系结石方面的开发应用, 我们对肾茶与抗泌尿系结石有关的3种提取物的作用、作用机理作了深入的 研究。

【发明内容】

本发明的目的,是针对目前肾茶在抗泌尿系结石利用上存在不明其有效 主导成份是什么及其作用机理的缺陷,在探明肾茶提取物中与泌尿系的结 石、尿少、尿路感染和结石对脏器的损伤等症状有关物质的作用效果及其机 理基础上,提出3种分别对泌尿系的抗结石、排石、利尿、消炎、抗氧化损 伤等有效,可直接、复合或作为中间产品可进一步开发成药用产品的肾茶活 性提取物;本发明的另一目的是提出这3种肾茶活性提取物的具体制备方法。

太阳城集团本发明目的通过以下技术方案来实现:

太阳城集团(一)肾茶提取物A组分,可按以下方法制得:

太阳城集团(1)将肾茶[C.spicatus(Thunb.)C.Y.Wu ex H.W.Li]干品粉碎后与甲醇 按克重量∶毫升体积为1∶4~10的比例,浸泡3次,每次10天,合并、浓 缩浸提液得浸膏混合物;

太阳城集团(2)先将水与甲醇按1∶5~12体积比混配成溶解液,再将步骤(1) 浸膏混合物与溶解液按克重量∶毫升体积为1∶1比例混合、搅拌至充分溶 解;

太阳城集团(3)将步骤(2)浸膏溶解液先用石油醚萃取4次,充分去除树脂、叶 绿素等低极性的杂质成分后,再用乙酸乙酯萃取4次,合并、浓缩萃取物;

(4)将步骤(3)萃取物进行硅胶柱层析、梯度洗脱、收集并浓缩得黑 褐色粘稠状的肾茶提取物A组分。

太阳城集团肾茶提取物A组分,经过鉴定分析为脂溶性的黄酮甙元类化合物。

肾茶提取物A组分,具有明显改善结石症状,减少肾脏组织中钙和草酸 的含量,减轻肾脏组织病变程度,减少结石量;增加肾结石者的尿量,尤其 在0~4h时的作用点尿量增加较显著;增加膀胱平滑肌收缩幅度,加快节律, 松驰输尿管、尿道平滑肌,有助于对泌尿系结石的排出;消炎;在一定程度 上降低肾结石肾组织LPO含量,改善对肾组织的损伤等作用,可直接、复合 或作为中间体进一步分离提取出药用有效活性成份,用于泌尿系抗结石、排 石、利尿和消炎等的药物。

太阳城集团所述肾茶提取物A组分的制备方法,按以下步骤进行:

太阳城集团(1)将肾茶[C.spicatus(Thunb.)C.Y.Wu ex H.W.Li]干品粉碎后与甲醇 按克重量∶毫升体积为1∶4~10的比例,浸泡3次,每次10天,合并、浓 缩浸提液得浸膏混合物;

太阳城集团(2)先将水与甲醇按1∶5~12体积比混配成溶解液,再将步骤(1) 浸膏混合物与溶解液按克重量∶毫升体积为1∶1比例混合、搅拌至充分溶 解;

太阳城集团(3)将步骤(2)浸膏溶解液先用石油醚萃取4次,充分去除树脂、叶 绿素等低极性的杂质成分后,再用乙酸乙酯萃取4次,合并、浓缩萃取物;

(4)将步骤(3)萃取物进行硅胶柱层析、梯度洗脱、收集并浓缩得肾 茶提取物A组分产品。

(二)肾茶提取物B组分,可按以下方法制得:

(1)将肾茶[C.spicatus(Thunb.)C.Y.Wu ex H.W.Li]干品粉碎后与甲醇 按克重量∶毫升体积为1∶4~10的比例,共浸泡3次,每次10天,合并、 浓缩浸提液得浸膏混合物;

太阳城集团(2)先将水与甲醇按1∶5~12体积比混配成溶解液,再将步骤(1) 浸膏混合物与溶解液按克重量∶毫升体积为1∶1比例混合、搅拌至充分溶 解;

太阳城集团(3)将步骤(2)浸膏溶解液先用石油醚和乙酸乙酯分别萃取3-5次, 充分去除树脂、叶绿素等低极性的杂质和脂溶性成分后,再用正丁醇萃取4 次,合并、浓缩萃取物;

(4)将步骤(3)萃取物进行硅胶柱层析、梯度洗脱、收集并浓缩得浅 褐色粘稠状的肾茶提取物B组分。

太阳城集团肾茶提取物B组分,经过鉴定分析为脂溶性的黄酮醇甙类化合物。

肾茶提取物B组分,具有明显改善结石症状,减少肾脏组织中钙和草酸 的含量,减轻肾脏组织病变程度,减少结石量;增加肾结石者的尿量;增加 膀胱平滑肌收缩幅度,加快节律,松驰输尿管、尿道平滑肌,有助于对泌尿 系结石的排出;消炎;在一定程度上降低肾结石肾组织LPO含量,改善对肾 组织的损伤等作用,可直接、复合或作为中间体进一步分离出提取药用有效 活性成份,用于泌尿系抗结石、排石、利尿、消炎等的药物。

所述肾茶提取物B组分的制备方法,按以下步骤进行:

(1)将肾茶[C.spicatus(Thunb.)C.Y.Wu ex H.W.Li]干品粉碎后与甲醇 按克重量∶毫升体积为1∶4~10的比例,共浸泡3次,每次10天,合并、 浓缩浸提液得浸膏混合物;

太阳城集团(2)先将水与甲醇按1∶5~12体积比混配成溶解液,再将步骤(1) 浸膏混合物与溶解液按克重量∶毫升体积为1∶1比例混合、搅拌至充分溶 解;

(3)将步骤(2)浸膏溶解液先用石油醚和乙酸乙酯分别萃取3-5次, 充分去除树脂、叶绿素等低极性的杂质和脂溶性成分后,再用正丁醇萃取4 次,合并、浓缩萃取物;

(4)将步骤(3)萃取物进行硅胶柱层析、梯度洗脱、收集并浓缩得肾 茶提取物B组分产品。

(三)肾茶提取物C组分,可按以下方法制备获得:

太阳城集团(1)将肾茶[C.spicatus(Thunb.)C.Y.Wu ex H.W.Li]干品粉碎后与甲醇 按克重量∶毫升体积为1∶4~10的比例,浸泡2-3周后,滤去甲醇溶液至充 分挥发干燥,备用;

(2)将步骤(1)处理后肾茶,用水浸没后煮3-4次,每次4小时,合 并水煮液、浓缩;

(3)将步骤(2)浓缩液,分别用浓度为65%、75%、85%、95%的乙 醇进行分级沉降,收集后得黑色粘稠状的肾茶提取物C组分。

肾茶提取物C组分,经过鉴定分析为多糖类化合物。

肾茶提取物C组分,具有明显改善结石症状,减少肾脏组织中钙和草酸 的含量,减轻肾脏组织病变程度,减少结石量;可延长利尿的太阳城集团,明显增 加肾结石者的尿量;增加膀胱平滑肌收缩幅度,加快节律,松驰输尿管、尿 道平滑肌,有助于对泌尿系结石的排出;明显降低肾结石肾组织LPO含量, 改善对肾组织的损伤等作用,可直接、复合或作为中间体进一步分离提取出 药用有效活性成份,用于泌尿系抗结石、排石、利尿、抗肾结石损伤等的药 物。

所述肾茶提取物C组分的制备方法,按以下步骤进行:

(1)将肾茶[C.spicatus(Thunb.)C.Y.Wu ex H.W.Li]干品粉碎后与甲醇 按克重量∶毫升体积为1∶4~10的比例,浸泡2-3周后,滤去甲醇溶液至充 分挥发干燥,备用;

(2)将步骤(1)处理后肾茶,用水浸没后煮3-4次,每次4小时,合 并水煮液、浓缩;

(3)将步骤(2)浓缩液,分别用浓度为65%、75%、85%、95%的乙 醇进行分级沉降,收集后得肾茶提取物C组分产品。

本发明的有益效果是:

一、肾茶提取物A组分,通过动物试验明确:[1]在草酸钙肾结石模型试 验中,结石小鼠、大鼠在体重减轻,肾体比增加等的症状较对照得到明显改 善(见表1、表4、表5);肾脏组织中钙和草酸的含量较对照明显减少(表 2、表6);肾结石小鼠、大鼠肾脏组织病变程度,肾组织草酸钙结石评分较 对照明显减轻(表3、表7);上述肾组织中草酸和钙含量的测定与肾组织病 理切片观察的结果相一致,表明肾茶提取物A组分具有抗肾结石的作用。[2] 在对鼠尿量试验中,肾茶A组分对正常小鼠在0~4h时的作用点尿量增加较 显著,具有明显的统计学意义(P<0.01);而对肾结石小鼠的尿量有增加, 但与模型组比较无统计学意义(P>0.05)(见表9);此外,肾茶提取物A 组分可明显增加肾结石大鼠的尿量,与模型组比较具有统计学意义(P<0.05) (见表10)。[3]在对动物泌尿系平滑肌的试验中,肾茶A组分对豚鼠、新 西兰兔膀胱平滑肌有增加收缩幅度,加快节律的作用;而对输尿管、尿道平 滑肌均有松驰作用(见图1、图2、图3),这有助于对泌尿系结石的排出。 [4]在对小鼠二甲苯致耳炎的抗炎试验中,与对照组比较,肾茶A组分与消 炎痛组一样对耳炎肿胀度降低有明显的统计学意义(P<0.01)(见表11),具 较好的消炎作用。[5]在对肾结石小鼠抗过氧化脂质的试验中,小鼠形成肾结 石后,肾组织LPO含量明显上升,与对照组比较有统计学意义(P<0.05), 肾茶A组分和排石颗粒组一样可使肾结石小鼠的肾组织LPO含量下降,但 与模型组比较无统计学意义(P>0.05)(见表12)。因此,肾茶A组分可直 接、复合或作为中间体进一步分离提取出药用有效活性成份,用于泌尿系抗 结石、排石、利尿和消炎等的药物。

二、肾茶提取物B组分,通过动物试验明确:[1]在草酸钙肾结石模型试 验中,结石小鼠、大鼠在体重减轻,肾体比增加等的症状较对照得到明显改 善(见表1、表4、表5);肾脏组织中钙和草酸的含量较对照明显减少(表2、 表6);肾结石小鼠、大鼠肾脏组织病变程度,肾组织草酸钙结石评分较对照 明显减轻(见表3、表7);上述肾组织中草酸和钙含量的测定与肾组织病理 切片观察的结果相一致,表明肾茶提取物B组分具抗肾结石作用。[2]在对鼠 尿量试验中,小鼠形成肾结石后,尿量明显下降,肾茶B组分可增加肾结石 小鼠的尿量,但与模型组比较无统计学意义(P>0.05)(见表9);肾茶B组 分可明显增加肾结石大鼠的尿量,与模型组比较具有统计学意义(P<0.05) (见表10)。[3]在对动物泌尿系平滑肌的试验中,肾茶B组分对豚鼠、新西 兰兔膀胱平滑肌有增加收缩幅度,加快节律的作用;对输尿管、尿道平滑肌 均有松驰作用(见图1、图2、图3),这有助于对泌尿系结石的排出。[4]在 对小鼠二甲苯致耳炎的抗炎试验中,对照组小鼠二甲苯致炎后右耳明显肿 胀,而肾茶B组分与消炎痛组一样对耳炎肿胀度降低有明显的统计学意义 (P<0.01)(见表11),具较好的消炎作用。[5]在对肾结石小鼠抗过氧化脂 质的试验中,小鼠形成肾结石后,肾组织LPO含量明显上升,与对照组比较 有统计学意义(P<0.05);肾茶B组分与排石颗粒组一样可使肾结石小鼠的肾 组织LPO含量下降,但与模型组比较无统计学意义(P>0.05)(见表12)。因 此,肾茶B组分可直接、复合或作为中间体进一步分离提取出药用有效活性 成份,用于泌尿系抗结石、排石、利尿、消炎等的药物。

三、肾茶提取物C组分,通过动物试验明确:[1]在草酸钙肾结石模型试 验中,结石小鼠、大鼠在体重减轻,肾体比增加等的症状较对照得到明显改 善(见表1、表4、表5);肾脏组织中钙和草酸的含量较对照明显减少(见 表2、表6);肾结石小鼠、大鼠肾脏组织病变程度,肾组织草酸钙结石评分 较对照明显减轻(见表3、表7);上述肾组织中草酸和钙含量的测定与肾组 织病理切片观察的结果相一致,表明肾茶提取物C组分具抗肾结石作用。[2] 在对鼠尿量试验中,小鼠形成肾结石后,尿量明显下降,肾茶C组分可增加 肾结石小鼠的尿量,但与模型组比较无统计学意义(P>0.05)(见表9); 但肾茶C组分可明显增加肾结石大鼠的尿量,其作用太阳城集团较长,可持续24 小时有效(见表10),具有较好的利尿作用。[3]在对动物泌尿系平滑肌的 试验中,肾茶C组分对豚鼠、新西兰兔膀胱平滑肌均有增加收缩幅度,加快 节律的作用;对输尿管、尿道平滑肌均有松驰作用(见图1、图2、图3), 这有助于对泌尿系结石的排出。[4]在对小鼠二甲苯致耳炎的抗炎试验中, 对照组小鼠二甲苯致炎后右耳明显肿胀,肾茶C组分小鼠的耳廓肿胀度有所 下降,但不明显,与对照组比较无统计学意义(P>0.05)(见表11)。[5]在 对肾结石小鼠抗过氧化脂质的试验中,小鼠形成肾结石后,肾组织LPO含量 明显上升,与对照组比较有统计学意义(P<0.05),肾茶C组分与排石颗粒 组一样可使肾结石小鼠的肾组织LPO含量明显下降,与模型组比较具有统计 学意义(P<0.05)(见表12),对肾结石抗过氧化脂质具较好的作用。因此, 肾茶C组分可直接、复合或作为中间体进一步分离提取出药用有效活性成份, 用于泌尿系抗结石、排石、利尿、抗肾结石损伤等的药物。

四、肾茶提取物A、B、C组分仅是单一提取物,可根据不同需求从中 选择单独使用或以不同的组合入药来治疗和消除泌尿系的结石症状,如抗结 石、排石、利尿、抗炎、抗损伤等。

【附图说明】

太阳城集团图1肾茶提取物A、B、C组分对豚鼠膀胱平滑肌的作用曲线图;

太阳城集团图2肾茶提取物A、B、C组分对豚鼠输尿管平滑肌的作用曲线图;

太阳城集团图3肾茶提取物A、B、C组分对豚鼠尿道平滑肌的作用曲线图。

【具体实施方式】

通过以下实施例和试验例对本发明作进一步详细说明,但这并不是对本 发明的具体限定。

与以下实施例有关的材料、设备等作说明如下:

太阳城集团肾茶[C.spicatus(Thunb.)C.Y.Wu ex H.W.Li]

太阳城集团溶解液:水与甲醇按1∶5~12体积混合而成

石油醚:批号20030610,浙江巨化集团公司试剂厂生产

乙酸乙酯:批号20031009,浙江巨化集团公司试剂厂生产

正丁醇:批号20021217,浙江巨化集团公司试剂厂生产

甲醇:批号20021201,浙江巨化集团公司试剂厂生产

太阳城集团乙醇(95%):批号2003042012,安徽特酒总厂生产

柱层析硅胶:青岛海洋化工厂生产

旋转蒸发仪:R203B型,上海申生科技有限公司生产

太阳城集团辅剂:车前子、沉香、白芍、鸡内金均购自温州中药店,经鉴定分别为 Plantago asiatica L.(车前子)、Aquilaria sinensis(Lour.)Gilg(沉香)、Paeonia lactiflora Pall.(白芍)、Gallus gallus domesticus Brisson(鸡内金)。

浓缩:包括涉及的浸提液、萃取液和水煮液,均采用在40-60℃水温控 制下减压使水分充分蒸馏进行浓缩(特别说明除外)。

太阳城集团实施例1:(肾茶提取物A组分的制备1)

所述肾茶提取物A组分的制备,按以下步骤进行:

(1)将肾茶[C.spicatus(Thunb.)C.Y.Wu ex H.W.Li]干品粉碎后与甲醇 按重量(g)∶体积(ml)=1∶4的比例,共浸泡3次,每次10天,合并浸提液 在60℃水温控制下减压蒸馏浓缩后,得浸膏混合物;

太阳城集团(2)将步骤(1)浸膏混合物与水-甲醇按1∶5体积混合的溶解液按重 量(g)∶体积(ml)=1∶1比例混合、搅拌至充分溶解;

(3)将步骤(2)浸膏溶解液先用石油醚萃取4次,充分去除树脂、叶 绿素等低极性的杂质成分,再用乙酸乙酯萃取4次,合并、浓缩萃取物;

(4)将步骤(3)萃取物进行硅胶柱层析、梯度洗脱、收集并在60℃水 温控制下减压蒸馏浓缩后得黑褐色粘稠状的肾茶提取物A组分。

太阳城集团实施例2:(肾茶提取物A组分的制备2)

本制备例中,所述肾茶干品粉碎后与甲醇按重量(g)∶体积(ml)=1∶7 的比例浸泡;合并浸提液在50℃水温控制下减压蒸馏浓缩;水-甲醇按1∶9 体积混合成溶解液;层析、洗脱、收集液在50℃水温控制下减压蒸馏浓缩, 其余制备步骤与工艺条件均同于实施例1。

实施例3:(肾茶提取物A组分的制备3)

太阳城集团本制备例中,所述肾茶干品粉碎后与甲醇按重量(g)∶体积(ml)=1∶10 的比例浸泡;合并浸提液在40℃水温控制下减压蒸馏浓缩;水-甲醇按1∶ 12体积混合成溶解液;层析、洗脱、收集液在40℃水温控制下减压蒸馏浓 缩,其余制备步骤与工艺条件均同于实施例1。

实施例4:(肾茶消石汤A)

将车前子30克、沉香3克、白芍10克、鸡内金15克,加水1000ml浸 泡半小时,煎煮15分钟倒出煎剂,同法再煎煮1次,合并两次煎剂,用无 菌水补足至1200ml后,加入实施例1、2或3所制备的肾茶提取物A组分1 克,搅拌至溶解后即成肾茶消石汤A。每日1剂,服药后20分钟进行跳跃 运动15分钟,并尽量多饮水、多排尿,三个月为一疗程,具抗结石、排石 溶石、利尿、消炎止痛功效。

太阳城集团实施例5:(肾茶提取物B组分的制备1)

太阳城集团所述肾茶提取物B组分的制备,按以下步骤进行:

(1)将肾茶[C.spicatus(Thunb.)C.Y.Wu ex H.W.Li]干品粉碎后与甲醇 按重量(g)∶体积(ml)=1∶10的比例,共浸泡3次,每次10天,合并浸提液 在40℃水温控制下减压蒸馏浓缩后,得浸膏混合物;

太阳城集团(2)将步骤(1)浸膏混合物与水-甲醇(按1∶5体积混合)的溶解液 按重量(g)∶体积(ml)=1∶1比例混合、搅拌至充分溶解;

(3)将步骤(2)浸膏溶解液用石油醚和乙酸乙酯分别萃取3次,充分 去除树脂、叶绿素等低极性的杂质和脂溶性成分,再用正丁醇充分萃取4次, 合并浓缩萃取物;

太阳城集团(4)将步骤(3)萃取物进行硅胶柱层析、梯度洗脱、收集并在40℃水 温控制下减压蒸馏浓缩后得浅褐色粘稠状的肾茶提取物B组分。

实施例6:(肾茶提取物B组分的制备2)

太阳城集团本制备例中,所述肾茶干品粉碎后与甲醇按重量(g)∶体积(ml)=1∶8的 比例浸泡;合并浸提液在60℃水温控制下减压蒸馏浓缩;水-甲醇按1∶9体 积混合成溶解液;石油醚萃取浸膏溶解液4次;乙酸乙酯萃取浸膏溶解液4 次;层析、洗脱、收集液在50℃水温控制下减压蒸馏浓缩,其余制备步骤与 工艺条件均同于实施例5。

太阳城集团实施例7:(肾茶提取物B组分的制备3)

本制备例中,所述肾茶干品粉碎后与甲醇按重量(g)∶体积(ml)=1∶5的 比例浸泡;合并浸提液在50℃水温控制下减压蒸馏浓缩;水-甲醇按1∶12 体积混合成溶解液;石油醚萃取浸膏溶解液5次;乙酸乙酯萃取浸膏溶解液 5次;层析、洗脱、收集液在60℃水温控制下减压蒸馏浓缩,其余制备步骤 与工艺条件均同于实施例5。

实施例8:(肾茶消石汤B)

太阳城集团将车前子30克、沉香3克、白芍10克、鸡内金15克,加水1000ml浸 泡半小时,煎煮15分钟倒出煎剂,同法再煎煮1次,合并两次煎剂,用无 菌水补足至1200ml后,加入实施例5、6或7所制备的肾茶提取物B组分0.5 克,搅拌至溶解后即成肾茶消石汤B。每日1剂,服药后20分钟进行跳跃运 动15分钟,并尽量多饮水、多排尿,三个月为一疗程,具抗结石、排石溶 石、利尿、消炎止痛功效。

太阳城集团实施例9:(肾茶提取物C组分的制备1)

所述肾茶提取物C组分的制备,按以下步骤进行:

(1)将肾茶[C.spicatus(Thunb.)C.Y.Wu ex H.W.Li]干品粉碎后与甲醇 按重量(g)∶体积(ml)=1∶5的比例,浸泡2-3周后,滤去甲醇溶液至充分挥 发干燥,备用;

(2)将步骤(1)处理后肾茶,用水浸没后煮3次,每次4小时,合并 水煮液,在50℃水温控制下减压蒸馏浓缩;

太阳城集团(3)将步骤(2)浓缩液,分别用浓度为65%、75%、85%、95%的乙 醇进行分级沉降,收集后得黑色粘稠状的肾茶提取物C组分。

实施例10:(肾茶提取物C组分的制备2)

太阳城集团本制备例中,所述肾茶干品粉碎后与甲醇按重量(g)∶体积(ml)=1∶8 的比例浸泡;滤去甲醇溶液至充分挥发干燥后的肾茶,用水浸没后煮4次; 在60℃水温控制下减压蒸馏浓缩,其余制备步骤与工艺条件均同于实施例9。

太阳城集团实施例11:(肾茶提取物C组分的制备3)

本制备例中,所述肾茶干品粉碎后与甲醇按重量(g)∶体积(ml)=1∶10的 比例浸泡;滤去甲醇溶液至充分挥发干燥后的肾茶,用水浸没后煮4次;在 40℃水温控制下减压蒸馏浓缩,其余制备步骤与工艺条件均同于实施例9。

太阳城集团实施例12:(肾茶消石汤C)

太阳城集团将车前子30克、沉香3克、白芍10克、鸡内金15克,加水1000ml浸 泡半小时,煎煮15分钟倒出煎剂,同法再煎煮1次,合并两次煎剂,用无 菌水补足至1200ml后,加入实施例9、10或11所制备的肾茶提取物C组分 6克,搅拌至溶解后即成肾茶消石汤C。每日1剂,服药后20分钟进行跳跃 运动15分钟,并尽量多饮水、多排尿,三个月为一疗程,具利尿通淋、消 炎止痛、抗肾结石损伤功效。

太阳城集团与以下试验例有关的材料、设备等作说明如下:

1实验材料

1.1动物

太阳城集团ICR小鼠,SD大鼠,由浙江省实验动物中心提供,实验动物质量合格证 号码:SCXK(浙)2003-0001。新西兰兔,DPH豚鼠,实验动物质量合格证 号码:SCXK(浙)2003-0002。由浙江省实验动物中心提供。饲养条件:室 温18℃~20℃,相对湿度40%~70%,喂以全价营养颗粒饲料,自由饮水。

1.2药物

肾茶提取物A组分(实施例1、2或3产品):称取肾A适量,用1%羧 甲基纤维素钠(CMC-Na)碾磨均匀配成所需浓度,备用。(小鼠使用浓度 6.4mg/ml,灌胃体积0.5ml/20g,剂量为160mg/kg;大鼠使用浓度16mg/ml,灌胃 体积1ml/100g,剂量为160mg/kg。下同。)

太阳城集团肾茶提取物B组分(实施例5、6或7产品):称取肾B适量,用蒸馏水 碾磨均匀配成所需浓度,备用。

肾茶提取物C组分(实施例9、10或11产品):称取肾C适量,用蒸馏 水碾磨均匀配成所需浓度,备用。

太阳城集团吲哚美辛(消炎痛):原料药,宁波制药厂惠赠,临用以1%羧甲基纤维 素钠(CMC-Na)碾磨均匀配成所需浓度,备用。

呋塞米片(速尿):20mg/片,批号0311131,江苏林海药业有限公司制 造分公司,用1%羧甲基纤维素钠(CMC-Na)配成所需浓度,备用。

排石颗粒:20g/袋,批号050109,南京同仁堂药业有限责任公司,用蒸 馏水碾磨均匀配成所需浓度,备用。

1.3试剂

生理盐水,批号20040115,浙江平湖莎普爱思制药有限公司。

乙二醇,批号990332,余杭市城南化学试剂厂。

氯化铵,批号20030603,衢州巨化试剂有限公司。

钙测定试验盒(甲基百里酚蓝法):批号030927,宁波市慈城生化试剂 厂。

台氏液(自配):依次溶解8g NaCl、2ml10%KCl、2.6ml10%MgSO4·7H2O、 1g NaHCO3于500ml蒸馏水中(试剂I),1.8ml 1mol/L CaCl2单独溶于200ml 蒸馏水(试剂II),缓慢将试剂II加入试剂I中,边加边搅拌,并定容至1000ml (试剂III)。1g葡萄糖于临用时加入试剂III,即为台氏液。

丙二醛MDA测定试剂盒,批号20040219,南京建成生物工程研究所。

太阳城集团其它试剂均为分析纯。

1.4仪器

太阳城集团721型分光光度计,上海第三分析仪器厂。

太阳城集团离心机,LXJ-II,上海医用分析仪器厂。

电子分析天平,AEL-200,岛津。

Medlab-U/4cs生物信号采集处理系统,南京美易科技有限公司。

太阳城集团SC-15数控超级恒温槽,宁波天恒仪器厂。

Motic显微图像处理系统,麦克奥迪实业集团有限公司。

试验例1:(肾脏中草酸和钙含量的测定)

按以下步骤进行:

太阳城集团1)肾组织处理:取供试动物一侧肾组织加1M HCl,用匀浆器制成组织 匀浆,3000r/min离心10min,取上清液2ml用1M氢氧化钠调pH至5.0,补 充去离子水至5ml,摇匀;

太阳城集团2)肾脏中草酸含量的测定(高锰酸钾褪色法):取200μl步骤1)肾组 织处理液,加500mM氯化钙0.1ml混匀,加无水乙醇2ml充分混匀,4℃放 置过夜,3000r/min离心10min,弃上清液后加0.02M乙酸一草酸钙平衡液 5ml充分混匀。3000r/min离心10min,弃上清。加去离子水5ml,充分混匀, 3000r/min离心10min,弃上清。试管倒置于滤纸上沥干水分,沉淀加1mol/L 硫酸1ml及去离子水1ml充分混匀,溶解沉淀物。加高锰酸钾应用液3.0ml 混匀,60℃水浴10min,3000r/min离心10min。取上清液525nm比色。同时 做空白及标准测定管(标准管草酸1mM,1ml)。按下列公式计算:

测定管草酸浓度=(空白管A-测定管A)/(空白管A-标准管A)×1

3)肾脏中钙含量的测定(甲基百里酚蓝法):另取肾处理液50μl,加3ml 显色剂,混匀,同时作空白及标准管(标准钙2.5mM),用610nm波长,空 白管调零,读取测定管和标准管分吸光度(A),按下列公式计算:

测定管钙浓度=测定管A/标准管A×2.5

试验例2:(肾脏结石组织病理学观察)

太阳城集团供试动物末次药后水负荷法收集6h尿液。处死动物,肾脏称重后,取 一侧肾用10%甲醛固定,常规切片,HE染色后进行肾脏结石组织病理学观 察。其中,组织病理学观察肾脏结石评分标准为:0分:无结晶;1分:局 部或散在少到多量沙状结晶;2分:局部有单个细小结晶;3分:局部有多 量细小结晶或有1个大颗粒单晶;4分:仅有3~4个大颗粒单晶散在或多量 细小结晶;5分:局部有3~4处多量大结石积集成堆;6分:满视野多量大 结石积集成堆。

试验例3:(肾茶提取物对小鼠草酸钙肾结石模型的影响)

太阳城集团取小鼠66只,随机分为6组,每组11只,除对照组小鼠每日饮用正常 水外,其它各组均饮用成石水(1%的乙二醇+1%氯化铵),连续饮用6周, 造成小鼠肾结石模型。造模同时各组按下述剂量给药。①对照组,ig水;② 模型组,ig水;③排石颗粒组,ig排石颗粒6g/kg;④肾茶A组,ig肾茶A 溶液160mg/kg;⑤肾茶B组,ig肾茶B溶液160mg/kg;⑥肾茶C组,ig 肾茶C溶液160mg/kg;每日给药1次,给药体积0.5ml/20g,连续6周。

末次药后水负荷法收集6h尿液,处死动物,肾脏称重后,一侧肾按试 验例1方法测定肾组织内草酸及钙含量;另一侧肾按试验例2方法进行肾脏 结石组织病理学观察,结果如下:

(1)一般情况:肾结石成分以草酸钙和磷酸钙结石为主,占全部尿路 结石的80%~84%,其中草酸钙结石占58.8%。乙二醇是草酸的前体,进入 体内后转化成羟乙酸,后者既可在羟乙酸氧化酶的作用下直接转化为草酸, 也可以通过乳酸脱氧酶的催化转化成乙醛酸,乙醛酸又可以直接在酶或非酶 促作用下转化为草酸。因此,给动物喂食乙二醇进入体内代谢后最终转化为 草酸,经尿排出,增加尿中草酸的浓度,加服氯化铵,肾内结石形成率极高。 实验结果表明,在饮水中加入1%乙二醇+1%氯化铵,可以形成理想的肾结 石模型以供实验研究。小鼠给予成石水4周后,精神萎靡,畏寒卷缩,体毛 干枯,无光泽,毛色变黄,呈耸毛状,体重减轻较明显,肾体比明显增加, 6周内部分动物因肾脏严重病变而死亡。而排石颗粒组与肾茶给药各组与模 型组相比,症状有所改善。结果见表1。

表1  肾茶对肾结石小鼠体重和肾脏重量的影响( x±s)   组别   动物数   剂量   (mg/kg)   死亡率   (%)   体重   (g)   肾体比   (mg/g)   对照组   模型组   排石颗   粒组   肾A组   肾B组   肾C组   11   11     11   11   11   11   -   -     6000   160   160   160   0   64     18   27   0   36   40.0±3.4   29.3±5.1***    32.3±2.6   34.0±4.1   33.6±4.1   32.4±2.6   17.2±2.8   24.2±4.5***    20.8±4.6   23.1±4.5   20.7±3.4   21.6±4.6

太阳城集团注:与对照组比较***P<0.001

太阳城集团(2)肾茶对肾结石小鼠肾脏钙和草酸含量的影响:小鼠饮用1%乙二醇 和1%氯化胺后,草酸钙结晶在肾内大量聚积,实验显示肾组织中钙、草酸 含量显著增加。而肾A、B、C组的肾钙、肾草酸含量明显少于模型组,其 中,肾A组的肾草酸含量与模型组比较有明显的差异(P<0.001),甚至明显优 于排石颗粒组。结果见表2。

太阳城集团表2  肾茶对肾结石小鼠肾脏钙和草酸含量的影响( x±s)   组别   动物数   剂量(mg/   kg)   肾钙含量(mg/g)   肾草酸含量(μg/g)   对照组     模型组   排石颗   粒组   肾A组   肾B组   肾C组   11     11     11   11   11   11   -     -     6000   160   160   160   4.36±1.66     10.89±1.02###     4.32±3.50***  5.89±2.11***  6.35±1.98***  8.14±3.50*   1.43±0.80     3.66±0.82###     2.10±0.94***  1.66±0.60***  2.09±0.92***  2.01±0.94***

注:与对照组比较###P<0.001;与模型组比较***P<0.001,*P<0.05

(3)肾组织形态学和肾组织草酸钙结晶观察:肾脏组织肉眼观察,模 型组动物肾脏水肿,表面苍白,质地变硬,肾脏表面可见散在白色小点。而 排石颗粒组与肾茶A、B、C各组症状较轻,表而红润,质地正常。病理切 片组织学观察,模型组动物肾脏病变程度较严重,肾皮质部、髓部、肾盏、 肾盂内存在大量草酸钙结石,严重者多量大结石积集成堆或满视野多量大结 石积集成堆。与模型组比较,排石颗粒组和肾茶A、B、C各组肾组织病变 程度较轻,肾组织草酸钙结石评分较低,表明有抗肾结石作用。结果见表3。

太阳城集团表3  肾茶对肾结石小鼠肾脏草酸钙结石形成的影响(n=11, x±s) 组别   剂量   (mg/kg)   结石率%   肾皮质部   肾髄质部   肾盏肾盂   总平均 对照组 模型组 排石颗粒组   肾A组 肾B组 肾C组   -   -     6000   160   160   160   0   100(11/11)     55(6/11)   64(7/11)   55(6/11)   64(7/11)   0.6±0.6   2.2±2.3     0.9±1.8   0.7±1.4*  0.5±0.6**  0.5±0.9*   0.3±0.5   4.7±1.3     1.7±2.0***  2.4±2.1***  1.4±1.6*  2.7±1.9**   0±0   3.0±2.3     0.3±1.0***  0.1±0.5***  0.1±0.25***  0.4±1.1***   0.9±0.8   9.9±4.2     2.8±3.3*  3.3±2.9***  2±1.9***  3.6±2.8***

注:与模型组比较***P<0.001,**P<0.01,*P<0.05

试验例4:(肾茶提取物对大鼠草酸钙肾结石模型的影响)

取雄性大鼠30只,随机分为6组,每组5只。除对照组大鼠每日饮用 正常水外,其它各组均饮用成石水(1%乙二醇+1%氯化铵),连续饮用10 天,造成大鼠肾结石模型。造模同时各组按下述剂量给药。①对照组,ig水; ②模型组,ig水;③排石颗粒组,ig排石颗粒6g/kg;④肾茶A组,ig肾茶 A溶液160mg/kg;⑤肾茶B组,ig肾茶B溶液160mg/kg;⑥肾茶C组ig 肾茶C溶液160mg/kg;每日给药1次,给药体积1ml/100g,连续10天。于 末次药后,大鼠代谢笼法收集24h尿液,测尿液量及尿液pH后,处死动物, 取肾脏称重,一侧肾按试验例1方法测定肾组织内草酸及钙含量;另一侧肾 按试验例2方法进行肾脏结石组织病理学观察,结果如下:

(1)一般情况:大鼠给予成石水5天后,开始出现精神萎靡,畏寒卷 缩,体毛干枯,无光泽,毛色变黄,呈耸毛状,个别动物尚有脱毛发生,体 重减轻较明显,肾体比明显增加。而排石颗粒组与肾茶A、B、C各组与模 型组相比,症状有所改善。结果见表4、5。

表4  肾茶对肾结石大鼠体重的影响( x±s)   组别   剂量   (mg/   kg)   n   体重(g)   0d   5d   10d   对照组     模型组       排石颗粒   组   肾A组   肾B组   肾C组   -     -         6000   160   160   160   5     5         5   5   5   5   171.2±10.1     172.2±11.2         171.6±10.4   170.8±13.8   170.0±10.3   172.4±14.1   196.6±15.9   168.8±16.8     #       179.8±12.2   176.0±27.8   167.6±13.2   188.6±9.6*   222.0±10.1   158.2±26.1##     #       189.2±15.0*  185.2±37.0   167.2±16.5   204.8±10.1**

太阳城集团注:与对照组比较###P<0.001,#P<0.05;与模型组比较***P<0.001,**P<0.01, *P<0.05

太阳城集团表5  肾茶对肾结石大鼠肾体比的影响( x±s)   组别   动物   数   剂量   (mg/kg)   体重   (g)   肾脏重量   (g)   肾体比   (mg/g)   对照组   模型组   排石颗粒   组   肾A组   肾B组   肾C组   5   5     5   5   5   5   -   -     6000   160   160   160   222.0±10.1   158.2±26.1     189.2±15.0   185.2±37.0   167.2±16.5   204.8±10.1   1.57±0.28   1.61±0.32     1.70±0.34   2.01±0.65   1.73±0.19   1.88±0.17   7.0±0.6   10.4±2.3     9.0±2.1   10.3±2.9   10.4±1.0   9.2±1.2

太阳城集团(2)肾茶对肾结石大鼠肾脏钙和草酸含量的影响:大鼠饮用乙二醇和 氯化胺后,肾内草酸钙结晶大量聚积,显示肾组织中钙、草酸含量显著增加。 肾A、B、C组肾钙、肾草酸含量明显下降(大鼠比小鼠有更明显的效果), 与模型组比较肾A、C组有显著差异。结果见表6。

太阳城集团表6  肾茶对肾结石大鼠肾脏钙和草酸含量的影响( x±s)   组别   动物数   剂量(mg/   kg)   肾钙含量(mg/g)   肾草酸含量(μg/g)   对照组   模型组   排石颗   粒组   肾A组   肾B组   肾C组   5   5     5   5   5   5   -   -     6000   160   160   160   3.76±0.93   18.75±6.33###     8.74±6.21*  3.94±3.92**  4.65±3.28**  3.69±2.00***   0.53±0.27   1.59±0.14###     0.81±0.27***  0.64±0.1***  0.64±0.15***  0.69±0.2***

注:与对照组比较###P<0.001;与模型组比较***P<0.001,**P<0.01, *P<0.05

太阳城集团(3)肾组织形态学检查和肾组织草酸钙结晶观察:肾脏组织肉眼观察, 模型组动物肾脏水肿,表面苍白,肾脏表面可见散在白色小点。而排石颗粒 组与肾茶各组症状较轻,表面红润。肾脏组织病理学观察,模型组动物肾脏病 变程度较严重,肾皮质部、髓部、肾盏、肾盂内存在大量草酸钙结石,严重 者多量大结石积集成堆或满视野多量大结石积集成堆。与模型组比较,排石 颗粒组和肾茶各组肾组织病变程度较轻,肾组织草酸钙结石评分较低,表明 有抗肾结石作用。结果见表7。

表7  肾茶对肾结石大鼠肾脏草酸钙结石形成的影响(n=5, x±s)   组别   剂量   (mg/   kg)   结石率   %   肾皮质   部   肾髓质   部   肾盏肾盂   总平均   对照组   模型组   排石颗   粒组   肾A组   肾B组   肾C组   -   -   6000     160   160   160   0(0/5)   80(4/5)   40(2/5)     100(5/5)   40(2/5)   80(4/5)   0.0±0.0   2.6±2.4#   1.0±1.7     2.6±1.5   0.8±1.8   0.6±0.9   0.0±0.0   4.0±2.5##   1.8±2.5     3.0±1.4   0.0±0.0*   1.4±1.3   0±0   0.6±1.3   1.8±2.5     1.8±1.8   1.4±1.9   1.6±2.2   0.0±0.0   7.0±5.2#   4.6±6.4     7.4±3.4   2.2±3.2   3.6±3.0

注:与模型组比较***P<0.001,**P<0.01,*P<0.05

试验例5:(肾茶提取物对小、大鼠尿量的影响)

(1)肾茶提取物对正常小鼠利尿作用的影响:取正常小鼠55只随机分为 5组,每组11只。①对照组,ig等体积水;②速尿组,ig 25mg/kg;③肾茶A 组,ig 160mg/kg;④肾茶B组,ig 160mg/kg;⑤肾茶C组,ig 160mg/kg。各 组连续灌胃给药3次,第1天上、下午各1次(8:30AM,4:30PM),次日上 午1次。实验前禁食16h(前1天5:00PM~次日9:00AM),腹腔注射0.9%氯化钠 溶液1ml/只给予水负荷,并挤压小鼠下腹部,使膀胱排空。水负荷0.5小时后 开始给药,给药完毕,立即将小鼠放入350ml的广口瓶内,瓶底放已称重的 棉球,每隔2h收集棉球称重,以其重量差为小鼠排尿量,连续6h,比较组间 差异,结果如下:

与对照组比较,小鼠给予速尿25mg/kg后小鼠排尿量增加,利尿作用 强,作用太阳城集团长,差异非常显著,具有明显的统计学意义(P<0.001);而小 鼠给予肾茶A、B、C后,只有肾茶A的0~4h作用点尿量增加较显著,具 有明显的统计学意义(P<0.01);肾茶B、C作用不明显。肾茶A、B、C各 组比较,利尿作用A>C>B,但三组间比较无明显的统计学意义(P>0.05)。 结果见表8。

太阳城集团表8  肾茶提取物对正常小鼠的利尿作用( x±s)   组别 剂量 (mg/kg)   6h尿量   (ml)   18h尿量   (ml)   24h尿量   (ml)   对照组   速尿组   肾A组   肾B组   肾C组 - 25 160 160 160   0.47±0.33   1.86±0.34***  0.59±0.28   0.39±0.28   0.64±0.27   1.04±0.37   2.68±0.27***  1.33±0.23**  1.11±0.45   1.27±0.30   1.67±0.37   3.07±0.24***  1.87±0.23   1.69±0.49   1.84±0.30

注:与对照组比较**P<0.01;***P<0.001

(2)肾茶提取物对肾结石小鼠尿量的影响:取小鼠66只,随机分为6 组,每组11只。除对照组小鼠每日饮用正常水外,其它各组均饮用成石水 (1%的乙二胺+1%氯化铵),连续饮用6周,造模同时各组按下述剂量给药。 ①对照组,ig等体积水;②模型组,ig等体积水;③排石颗粒组,ig 600mg/kg; ④肾茶A组,ig 160mg/kg;⑤肾茶B组,ig 160mg/kg;⑥肾茶C组,ig 160mg/kg, 末次给药以后进行利尿实验,方法同上,结果如下:

太阳城集团表9  肾茶对肾结石小鼠尿量的影响( x±s)   组别   剂量   (mg/kg)   n   尿量   (ml)   对照组   模型组   排石颗粒组   肾A组   肾B组   肾C组   -   -   6000   160   160   160   10   9   10   10   10   10   2.0450±0.6229   0.9542±0.5995***   1.0721±0.4986   1.2206±0.5739   1.2013±0.5752   1.2904±0.6579

注:与对照组比较***P<0.001

太阳城集团小鼠形成肾结石后,尿量明显下降,与对照组比较有显著的统计学意义 (P<0.001)。肾茶各组分可增加肾结石小鼠的尿量,但与模型组比较无统计 学意义(P>0.05)。结果见表9。

(3)肾茶提取物对肾结石大鼠尿量的影响:取大鼠30只,随机分为6 组,每组5只。除对照组大鼠每日饮用正常水外,其它各组均饮用成石水 (1%的乙二胺+1%氯化铵),连续饮用10天造成肾结石模型。造模同时各 组按下述剂量给药,连续10天。①对照组,ig等体积水;②模型组,ig等 体积水;③排石颗粒组,ig 600mg/kg;④肾茶A组,ig 160mg/kg;⑤肾茶 B组,ig 160mg/kg;⑥肾茶C组,ig 160mg/kg,末次给药以后进行利尿实 验,方法同上,结果如下:

肾茶提取物A、B、C可明显增加肾结石大鼠的尿量,其中肾C作用时 间较长,可持续24小时有效。结果见表10。

表10  肾茶对肾结石大鼠尿量的影响( x±s) 组别   动   物   数   剂量   (mg   /kg)   6h尿量   (ml)   18h尿量   (ml)   24h尿量   (ml) 对照组 模型组 排石颗粒组 肾A组 肾B组 肾C组   5   5   5   5   5   5   -   -   6000   160   160   160   2.04±0.98   2.16±0.81   2.26±0.81   4.01±1.49*  3.72±0.84*  4.10±1.78*   9.04±5.1   3.80±0.29#   5.26±2.51   5.37±0.25   5.58±2.48   10.82±3.38**   11.08±5.76   9.58±4.41   7.52±2.58   13.51±6.78   9.30±3.19   14.92±5.07

注:与对照组比较#P<0.05;与模型组比较**P<0.01,*P<0.05

现代医学认为肾结石病的病因,一方面是由于尿量减少、脱水或尿浓缩 等原因引起尿液中的晶体物质浓度增高,使尿液中晶体(如草酸钙、磷酸钙 等物质)和胶体(如粘蛋白等物质)之间的平衡失调,导致尿中晶体物质的析 出,沉积而形成结石。因此尿量增加可以降低尿中晶体物质的浓度,及时排 出尿中晶体,预防尿中晶体物质沉淀、附着,凝聚成肾结石,其作用可能是 排石的机理之一。

太阳城集团试验例6:(肾茶提取物对动物泌尿系平滑肌的影响)

太阳城集团实验使用豚鼠或新西兰兔,雌雄不拘。处死后迅速取出膀胱、输尿管、 尿道置于37℃台氏液中,去除表面的脂肪和其他结缔组织。制成膀胱环和输 尿管、尿道条,用手术线结扎两端,一端固定在标本钩上,另一端则与10g 张力换能器相连,并置于含8ml台氏液的麦氏浴槽中,37℃保温,通氧。静 止张力0.5g,稳定30min后通过Medlab-U/4cs生物信号采集处理系统记录平 滑肌的舒缩变化。待基线平稳后,在浴槽中加入药物(肾A/或肾B/或肾C), 观察并记录平滑肌反应约5~10min,用预温的台氏液洗去药物,连续3次, 约稳定15min待基线基本恢复后,再加药物观察。其它处理同上。记录观察 肾A、肾B、肾C对豚鼠(新西兰兔)膀胱、输尿管、尿道平滑肌的影响。

结果如下:

太阳城集团肾茶A、B、C三个组分对豚鼠、新西兰兔膀胱平滑肌均有增加收缩幅 度,加快节律的作用。而三者对输尿管、尿道平滑肌均有松驰作用,如说明 书附图图1、图2、图3所示。肾茶可能通过扩张输尿管-收缩膀胱-扩张尿道, 从而使泌尿道通畅排出结石。

试验例7:(肾茶提取物对小鼠抗炎作用二甲苯致耳炎的影响)

太阳城集团取小鼠60只随机分成5组,12只/组,,雌雄各半。①对照组,ig等体积水; ②消炎痛组,ig 20mg/kg;③肾茶A组,ig 160mg/kg;④肾茶B组,ig 160mg/kg; ⑤肾茶C组,ig 160mg/kg。连续给药5天,于末次给药后30min,用二甲苯涂擦 小鼠右耳致炎,致炎后15min处死小鼠,剪下左右耳片,用9mm打孔器在相同 部位打下圆耳片,计算左右耳片重量之差作为肿胀度。结果如下:

对照组小鼠二甲苯致炎后右耳明显肿胀,而各组小鼠的耳廓肿胀度均有 下降。与对照组比较,消炎痛组、肾茶A和B组的肿胀度降低有明显的统计学 意义(P<0.01)。但肾茶C组肿胀度降低不明显,无统计学意义(P>0.05)。结 果见表11。

太阳城集团表11  肾茶提取物对小鼠抗炎作用的影响( x±s)   组别   剂量(mg/kg)   动物数   耳廓肿胀度   (mg)   对照组   消炎痛组   肾A组   肾B组   肾C组   -   20   160   160   160   12   12   12   12   12   7.6±2.4   4.9±1.9**  5.7±1.9*  5.6±2.1*  7.3±3.7

注:与对照组比较**P<0.01,*P<0.05

太阳城集团试验例8:(肾茶提取物对肾结石小鼠抗过氧化脂质的影响)

太阳城集团取小鼠60只,随机分为6组,每组10只。除对照组小鼠每日饮用正 常水外,其它各组均饮用成石水(1%乙二胺+1%氯化铵),连续饮用6周, 同时各组按下述剂量给药。①对照组,ig等体积水;②模型组,ig等体积水; ③排石颗粒组,ig 600mg/kg;④肾茶A组,ig 160mg/kg;⑤肾茶B组,ig 160mg/kg;⑥肾茶C组,ig 160mg/kg,末次给药以后,处死动物,解剖小鼠, 肾脏称重,取一侧肾脏加预冷的生理盐水,用玻璃匀浆器研磨均匀,制成10% 的匀浆,吸取匀浆0.1mL测LPO(过氧化脂质)含量(按丙二醛MDA测定 试剂盒方法进行)。实验数据以 x±s表示。经t检验,P<0.05为有统计学 意义。结果如下:

小鼠形成肾结石后,肾组织LPO含量明显上升,与对照组比较有统计学 意义(P<0.05)。肾茶各组和排石颗粒可使肾结石小鼠的肾组织LPO含量下降, 与模型组比较肾C组有统计学意义(P<0.05),而其它组均无统计学意义 (P>0.05)。结果见表12。

太阳城集团表12  肾茶提取物对肾结石小鼠LPO的影响( x±s)   组别   剂量(mg/   kg)   n   LPO(nmol/mgprot)   对照组   模型组   排石颗粒组   肾A组   肾B组   肾C组   -   -   600   160   160   160   10   9   10   10   10   10   2.705±0.4173   3.9433±1.3622#   3.3511±0.8111   2.9702±1.1329   3.1647±0.4341   2.7241±1.0958*

注:与对照组比较#P<0.05;与模型组比较*P<0.05

正常人的肾小管上皮细胞可抵制晶体的粘附,尿液中也含有草酸钙结晶 生长和聚集的抑制物和促进物。当肾小管上皮细胞损伤时,晶体可粘附于肾 盂内壁、输尿管内壁等处粘膜,结石机械刺激可致组织的充血、水肿等炎症 反应。本实验证明了肾茶提取物有抗炎作用,提示其可能通过抑制肾脏组织 的损伤,减少晶体在肾上皮细胞的粘附机率,利于小结晶的排出,达到抑制 肾结石的作用。

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本文标题:肾茶抗泌尿系统结石提取物及其制备方法.pdf
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