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一种银柴胡组培体系的建立方法.pdf

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一种 银柴胡 体系 建立 方法
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摘要
申请专利号:

太阳城集团CN201710965796.8

申请日:

20171017

公开号:

太阳城集团CN107691219A

公开日:

20180216

当前法律状态:

有效性:

审查中

法律详情:
IPC分类号: A01H4/00 主分类号: A01H4/00
申请人: 李正美
发明人: 李正美
地址: 537000 广西壮族自治区玉林市玉州区成均镇成均圩2号
优先权: CN201710965796A
专利代理机构: 玉林市振盛专利商标代理事务所 代理人: 卢翔飞
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法律状态
申请(专利)号:

CN201710965796.8

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法律状态太阳城集团日:

法律状态类型:

摘要

本发明公开了一种银柴胡组培体系的建立方法,银柴胡为石竹科杆物,8~10月茎叶枯萎时挖取根部,去根茎及须根,泥沙,晒干。药性:根呈圆柱形,偶有支根,表面淡黄色或黄白色,根头部有多数疣状突起的茎残基,质轻而脆,易折,折断面不平整,疏松,有裂隙,木质部束与射线黄白相间形成放射状纹理。银柴胡气微,味淡微甜。以根长均匀,外皮淡黄色。主要成份:含皂苷,环醇类,如二松醇等。功效:清虚热。用于阴虚发热,疳积发热等。本发明以带芽茎段为外植体,经过诱导、增殖、生根以及炼苗移栽等步骤成功地获得银柴胡组织培养再生植株,建立系统的银柴胡组织培养植株再生体系。繁殖系数高,成苗率高,收益大。

权利要求书

1.一种银柴胡组培体系的建立方法,其特征在于包括以下步骤:(1)外植体消毒:采集回来的银柴胡茎段以淸水冲洗6min后并用毛刷轻轻刷去上面的杂质,在超净工作台中用75%乙醇溶液中消毒6s,后用无菌水洗3次,再用4%安替富民溶液漂洗5min,用无菌水冲洗5次后用无菌滤纸吸去水分后备用;(2)诱导培养:将步骤(1)消毒好的银柴胡茎段按成对芽为一个单位切成约0.8cm长的茎段,剪去茎段底部处理过程中褐化部分,接种到诱导培养基中进行芽诱导培养,接种后先在25℃条件下全暗培养3天,然后置于每天光照6小时,光照强度为1900lx,置于培养温度为25℃的条件下培养直至形成不定芽;(3)增殖培养:将步骤(2)培养得到的芽苗,从基部切取芽并转入增殖培养基上进行继代培养,接种后先在25℃条件下全暗培养3天,然后置于每天光照7小时,光照强度为2900lx,置于培养温度为25℃的条件下培养,29天继代一次;(4)生根培养:将步骤(2)或(3)的芽苗长至1.0cm高时,切割成单芽并接种到生根培养基上进行生根培养,接种后先在25℃条件下全暗培养5天,然后置于每天光照11小时,光照强度为2900lx,培养温度为25℃的条件下培养至生根;(5)炼苗移栽:将长至3cm的生根试管苗的培养瓶瓶盖打开并置于自然光照下炼苗5天后,将试管苗从培养瓶中取出,洗掉根部培养基,尽量不伤害根部,栽入由泥炭土:蛭石=1:2混合成的基质中于每天光照10小时,光照强度为2900lx,培养温度为25℃,空气湿度为76%的培养箱中培养5天,然后移栽定植。2.根据权利要求1所述的一种银柴胡组培体系的建立方法,其特征在于步骤(2)所述的诱导培养基为:MS+0.15mg/L6-BA+12/L蔗糖+3.2g/L琼脂,pH为5.8。3.根据权利要求1所述的一种银柴胡组培体系的建立方法,其特征在于步骤(3)所述的增殖培养基为:MS+0.20mg/LNAA+0.16mg/L6-BA+15g/L蔗糖+3.5g/L琼脂,pH为5.8。4.根据权利要求1所述的一种银柴胡组培体系的建立方法,其特征在于步骤(4)所述的生根培养基为:MS+0.5mg/LIBA+15g/L蔗糖+3.5g/L琼脂,pH为5.8。

说明书

技术领域

本发明涉及农业生物技术中植物组织培养的方法,具体地说,涉及一种银柴胡组培体系的建立方法。

背景技术

银柴胡为石竹科杆物,主产宁夏、陕西、内蒙古等地,此外,东北地区亦产。8~10月茎叶枯萎时挖取根部,去根茎及须根,泥沙,晒干。药性:根呈圆柱形,偶有支根,长15~45cm,直径1~3cm。表面淡黄色或黄白色,有明显的纵皱纹,常向左扭转,有时可见支根痕,呈凹陷的棕色小点状;根头部有多数疣状突起的茎残基。质轻而脆,易折,折断面不平整,疏松,有裂隙,木质部束与射线黄白相间形成放射状纹理。银柴胡气微,味淡微甜。以根长均匀,外皮淡黄色,断面黄白色者为佳。主要成份:含皂苷,环醇类,如二松醇等。具有清虚热。用于阴虚发热,疳积发热等。我国对于银柴胡的进一步研究己取得一定的成绩,但是仍然存在着优良品种引进与驯化的相关问题,对于适宜我国大部分地区环境生长的品种开发以及银柴胡的大量快速繁殖的报道仍然较少。银柴胡繁殖较为困难,其主要繁殖方式包括种子繁殖、扦插繁殖以及压条繁殖等。利用种子繁殖时,其种子存在发芽难和发芽率低的问题,大大减少了成活率及成苗率,成本较高,收益少;利用扦插的方式进行繁殖时,其扦插的枝条不易生根或者较为缓慢,不容易成活,也造成了银柴胡成苗率的问题。因此,急需建立了系统的银柴胡组织培养植株再生体系,以提高其繁殖速度和规模,从而实现银柴胡种苗的工厂化生产,解决市场供应问题。

发明内容

太阳城集团本发明的目的在于提供出一种以带芽茎段为外植体,经过诱导、增殖、生根以及炼苗移栽等步骤成功地获得银柴胡组织培养再生植株,建立系统的银柴胡组织培养植株再生体系,技术易撑握,种子种苗清纯,粗壮,生长快速的一种银柴胡组培体系的建立方法。

太阳城集团本发明的一种银柴胡组培体系的建立方法,包括以下的步骤:

(1)外植体消毒:采集回来的银柴胡茎段以淸水冲洗6min后并用毛刷轻轻刷去上面的杂质,在超净工作台中用75%乙醇溶液中消毒6s,后用无菌水洗3次,再用4%安替富民溶液漂洗5min,用无菌水冲洗5次后用无菌滤纸吸去水分后备用;

(2)诱导培养:将步骤(1)消毒好的银柴胡茎段按成对芽为一个单位切成约0.8cm长的茎段,剪去茎段底部处理过程中褐化部分,接种到诱导培养基中进行芽诱导培养,接种后先在25℃条件下全暗培养3天,然后置于每天光照6小时,光照强度为1900lx,置于培养温度为25℃的条件下培养直至形成不定芽;

太阳城集团(3)增殖培养:将步骤(2)培养得到的芽苗,从基部切取芽并转入增殖培养基上进行继代培养,接种后先在25℃条件下全暗培养3天,然后置于每天光照7小时,光照强度为2900lx,置于培养温度为25℃的条件下培养,29天继代一次;

(4)生根培养:将步骤(2)或(3)的芽苗长至1.0cm高时,切割成单芽并接种到生根培养基上进行生根培养,接种后先在25℃条件下全暗培养5天,然后置于每天光照11小时,光照强度为2900lx,培养温度为25℃的条件下培养至生根;

(5)炼苗移栽:将长至3cm的生根试管苗的培养瓶瓶盖打开并置于自然光照下炼苗5天后,将试管苗从培养瓶中取出,洗掉根部培养基,尽量不伤害根部,栽入由泥炭土:蛭石=1:2混合成的基质中于每天光照10小时,光照强度为2900lx,培养温度为25℃,空气湿度为76%的培养箱中培养5天,然后移栽定植。

太阳城集团步骤(2)所述的诱导培养基为:MS+0.15mg/L 6-BA+12/L蔗糖+3.2g/L琼脂,pH为5.8。

步骤(3)所述的增殖培养基为:MS+0.20mg/L NAA+0.16mg/L 6-BA+15g/L蔗糖+3.5g/L琼脂,pH为5.8。

步骤(4)所述的生根培养基为:MS+0.5mg/L IBA+15g/L蔗糖+3.5g/L琼脂,pH为5.8。

本发明的优点是:本发明以银柴胡带芽茎段为外植体,经过诱导、增殖、生根以及炼苗移栽等步骤成功地获得了银柴胡组织培养再生植株,建立了系统的银柴胡组织培养植株再生体系。从而获得的种子繁殖系数高、成苗率高、成本低、收益大,利用植物组织培养技术提高其繁殖速度和规模,实现银柴胡种苗的工厂化生产。

具体实施方式

太阳城集团以下实施例是对本发明的进一步说明,不是对本发明的限制。

实施例1

太阳城集团(1)外植体消毒:采集回来的银柴胡茎段以淸水冲洗5min后并用毛刷轻轻刷去上面的杂质,在超净工作台中用75%乙醇溶液中消毒5s,后用无菌水洗6次,再用5%安替富民溶液漂洗7min,用无菌水冲洗6次后用无菌滤纸吸去水分后备用。

(2)诱导培养:将步骤(1)消毒好的银柴胡茎段按成对芽为一个单位切成约2.0cm长的茎段,剪去茎段底部处理过程中褐化部分,接种到诱导培养基中进行芽诱导培养。接种后先在26℃条件下全暗培养5天,然后置于每天光照10小时,光照强度为2100lx,置于培养温度为25℃的条件下培养直至形成不定芽,诱导率为92%。所述的诱导培养基为:MS+0.2mg/L 6-BA+12g/L蔗糖+3.2g/L琼脂,pH为5.5。

(3)增殖培养:将步骤(2)培养得到的芽苗,从基部切取芽并转入增殖培养基上进行继代培养,接种后先在26℃条件下全暗培养3天,然后置于每天光照12小时,光照强度为2500lx,置于培养温度为25℃的条件下培养,30天继代一次,增殖系数为5.9。所述的增殖培养基为:MS+0.12mg/L NAA+1.2mg/L 6-BA+20g/L蔗糖+3.3g/L琼脂,pH为5.5。

太阳城集团(4)生根培养:将步骤(2)或(3)的芽苗长至1.25cm高时,切割成单芽并接种到生根培养基上进行生根培养,接种后先在26℃条件下全暗培养2天,然后置于每天光照9小时,光照强度为3300lx,培养温度为26℃的条件下培养至生根。所述的生根培养基为:MS+1.6mg/L IBA+21g/L蔗糖+4.0g/L琼脂,pH为5.5。

(5)炼苗移栽:将长至1cm的生根试管苗的培养瓶瓶盖打开并置于自然光照下炼苗2天后,将试管苗从培养瓶中取出,洗掉根部培养基,尽量不伤害根部,栽入由泥炭土:蛭石=1:2混合成的基质中于每天光照9小时,光照强度为2900lx,培养温度为26℃,空气湿度为78%的培养箱中培养2天,然后移栽定植,移栽成活率为93%。

实施例2

太阳城集团(1)外植体消毒:采集回来的银柴胡茎段以淸水冲洗8min后并用毛刷轻轻刷去上面的杂质,在超净工作台中用75%乙醇溶液中消毒16s,后用无菌水洗2次,再用5%安替富民溶液漂洗4min,用无菌水冲洗2次后用无菌滤纸吸去水分后备用。

(2)诱导培养:将步骤(1)消毒好的银柴胡茎段按成对芽为一个单位切成约1.0cm长的茎段,剪去茎段底部处理过程中褐化部分,接种到诱导培养基中进行芽诱导培养。接种后先在26℃条件下全暗培养2天,然后置于每天光照9小时,光照强度为2400lx,置于培养温度为26℃的条件下培养直至形成不定芽,诱导率为93%。所述的诱导培养基为:MS+1.0mg/L 6-BA+16g/L蔗糖+3.0g/L琼脂,pH为5.6。

太阳城集团(3)增殖培养:将步骤(2)培养得到的芽苗,从基部切取芽并转入增殖培养基上进行继代培养,接种后先在26℃条件下全暗培养1天,然后置于每天光照10小时,光照强度为3900lx,置于培养温度为26℃的条件下培养,26天继代一次,增殖系数为5.3。所述的增殖培养基为:MS+0.2mg/L NAA+1.0mg/L 6-BA+22g/L蔗糖+4.2g/L琼脂,pH为5.8。

太阳城集团(4)生根培养:将步骤(2)或(3)的芽苗长至1.0cm高时,切割成单芽并接种到生根培养基上进行生根培养,接种后先在26℃条件下全暗培养2天,然后置于每天光照11小时,光照强度为3900lx,培养温度为25℃的条件下培养至生根。所述的生根培养基为:MS+2.6mg/L IBA+20g/L蔗糖+3.0g/L琼脂,pH为5.5。

太阳城集团(5)炼苗移栽:将长至1cm的生根试管苗的培养瓶瓶盖打开并置于自然光照下炼苗3天后,将试管苗从培养瓶中取出,洗掉根部培养基,尽量不伤害根部,栽入由泥炭土:蛭石=2:1混合成的基质中于每天光照8小时,光照强度为2900lx,培养温度为25℃,空气湿度为78%的培养箱中培养3天,然后移栽定植,移栽成活率为97%。

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