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一种抗肿瘤的中药组合物及其制剂和制备方法.pdf

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一种 肿瘤 中药 组合 及其 制剂 制备 方法
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摘要
申请专利号:

CN200610065213.8

申请日:

20060320

公开号:

CN101040899A

公开日:

20070926

当前法律状态:

有效性:

有效

法律详情:
IPC分类号: A61K36/489,A61K9/08,A61K9/16,A61K9/20,A61K9/48,A61P35/00,A61K125/00 主分类号: A61K36/489,A61K9/08,A61K9/16,A61K9/20,A61K9/48,A61P35/00,A61K125/00
申请人: 周亚伟
发明人: 周亚伟
地址: 100080北京市海淀区北大蔚秀园17楼1门106室
优先权: CN200610065213A
专利代理机构: 代理人:
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法律状态
申请(专利)号:

CN200610065213.8

授权太阳城集团号:

法律状态太阳城集团日:

法律状态类型:

摘要

本发明属于中药新药研发领域。涉及一种抗肿瘤的中药组合物及其制剂和制备方法,具体涉及一种从传统中药山豆根中提取的山豆根总生物碱有效部位及其制备方法,该制备方法工艺简单,操作方便,制得的山豆根总生物碱有效部位中总生物碱的含量为50%以上,并进一步提供了以山豆根总生物碱为其药物有效成分的中药制剂。该药物对肿瘤,尤其是恶性肿瘤、消化道肿瘤的治疗有明显效果。

权利要求书

1.一种抗肿瘤的中药组合物,它是从山豆根药材中提取的总生物碱有效部位,该有效部位是通过以下制备方法得到的:(1)提取:山豆根药材粉碎,用水或C1-C5的低级醇或含水的C1-C5低级醇提取;(2)浓缩:提取后减压浓缩,蒸去水或如(1)所述的低级醇,得相对密度为1.10~1.15的浓缩液;(3)酸化:浓缩液用稀酸酸化至pH3~4之间,离心,得上清液;(4)除杂:上清液经树脂柱吸附,并用水或含水的C1-C5低级醇淋洗除去杂质;(5)碱化:用稀碱碱化树脂柱;(6)洗脱:用含水的C1-C5低级醇洗脱吸附于树脂柱上的山豆根总生物碱;(7)干燥:洗脱液经减压浓缩、干燥粉碎,得山豆根总生物碱有效部位;其中有效部位中总生物碱的含量在50%以上。2.根据权利要求1所述的抗肿瘤的中药组合物,其特征在于所述的山豆根总生物碱有效部位还可以通过以下方法进一步精制,包括:取山豆根总生物碱有效部位经水稀释至5倍体积,碱化,再用乙酸乙酯萃取进一步精制;或取山豆根总生物碱有效部位经过硅胶柱吸附,乙酸乙酯洗脱进一步精制,得到精制的山豆根总生物碱有效部位中总生物碱的含量在80%以上。3.根据权利要求1所述的抗肿瘤的中药组合物,其特征在于所述的制备方法中提取用的含水低级醇的碳数为C1-C5,浓度为X,0<X≤95%。4.根据权利要求3所述的抗肿瘤的中药组合物,其特征在于所述的制备方法中提取用的含水低级醇的碳数为C1-C5,浓度为X,0<X≤40%。5.根据权利要求1所述的抗肿瘤的中药组合物,其特征在于所述的制备方法中稀酸为盐酸或硫酸。6.根据权利要求1所述的抗肿瘤的中药组合物,其特征在于所述的制备方法中树脂可以为苯乙烯、二乙烯苯、丙烯酸酯或甲基丙烯酸酯中的任意一种或几种为骨架材料的极性或非极性树脂。7.根据权利要求6所述的抗肿瘤的中药组合物,其特征在于所述的制备方法中树脂可以为D101、D201、AB-8、HP-20、732、XAD-4或XAD-16。8.根据权利要求1所述的抗肿瘤的中药组合物,其特征在于所述的制备方法中除杂用的含水低级醇的碳数为C1-C5,浓度为X,0<X≤40%。9.根据权利要求8所述的抗肿瘤的中药组合物,其特征在于所述的制备方法中除杂用的含水低级醇的碳数为C1-C5,浓度为X,0<X≤20%。10.根据权利要求1所述的抗肿瘤的中药组合物,其特征在于所述的制备方法中稀碱为氨水或氢氧化钠。11.根据权利要求1所述的抗肿瘤的中药组合物,其特征在于所述的制备方法中洗脱用的含水低级醇的碳数为C1-C5,浓度为X,20≤X≤100%。12.根据权利要求11所述的抗肿瘤的中药组合物,其特征在于所述的制备方法中洗脱用的含水低级醇的碳数为C1-C5,浓度为X,30≤X≤80%。13.一种抗肿瘤的药物制剂,其特征在于该药物制剂以权利要求1~12任一权利要求所述的中药组合物,加入药剂学上可以接受的辅料,制成药剂学可以接受的剂型。14.根据权利要求13所述的药物制剂,其特征在于所述的辅料选自淀粉、蔗糖、乳糖、糖粉、葡萄糖、甘露醇、木糖醇、异丙醇、土温-80、甘油、丙二醇、微晶纤维素钠、糊精、氯化钠、维生素C、半胱氨酸、柠檬酸、硫代硫酸钠和亚硫酸钠中的任意一种或几种。15.根据权利要求13所述的药物制剂,其特征在于所述的药剂学可以接受的剂型是口服剂或注射剂,为片剂、丸剂、滴丸剂、胶囊剂、颗粒剂、注射剂。16.根据权利要求15所述的药物制剂,其特征在于所述的注射剂的优选剂型为冻干粉针剂。17.权利要求1~16任一权利要求所述的中药组合物或药物制剂在制备治疗肿瘤药物中的应用。

说明书



技术领域

太阳城集团本发明属于中药新药研发领域。涉及一种抗肿瘤的中药组合物及其制 剂和制备方法。

背景技术

恶性肿瘤,是机体局部组织细胞在各种内在和外在致癌因素的长期作 用下,逐渐发生持续性异常增生而形成的新生物。随着经济的不断进步、 环境工业化及城市化,人口构成的老年化及不良的生活方式和行为习惯, 恶性肿瘤的发病率和死亡率呈现逐年增高趋势,对恶性肿瘤的防治成为世 界各国关注的重要课题。据1980年世界估计每年新发恶性肿瘤有635万例, 其中发达国家313万例,发展中国家322万例,据世界卫生组织(WHO)估 计,目前每年世界新发的恶性肿瘤约为1000万例,死于癌症的人数600~ 700万例。发达国家和发展中国家肿瘤发病谱不同,前者以肺、直肠和乳 腺癌为主,近年来前列腺癌呈直线上升趋势,发展中国家则以宫颈癌、胃 癌、鼻咽癌、食管癌为主,即消化系统和女性生殖器肿瘤占主要地位,中 国肿瘤谱接近于发展中国家。

据统计,全世界肿瘤药市场销售额为每年180亿美元,中国市场为110 亿人民币,肿瘤药销售额增长幅度明显高于其他类药品。

太阳城集团目前,国际上临床常用的抗肿瘤药物约80余种,以化学药品居多,但 研究发现许多化学抗肿瘤药物在作用于靶细胞时往往累及正常细胞,且临 床上该类药物都有不同程度的致突变遗传毒性,为此治疗肿瘤的同时增加 了病人患第二种肿瘤的可能性。近年来,从中药中提取的抗肿瘤药物日益 得到人们的重视,其遗传毒性不明显,在肿瘤的治疗及辅助治疗方面取得 了很好的疗效,中药的抗肿瘤活性已得到国际公认。如已获得成功的长春碱 类、喜树碱类(喜树碱、羟基喜树碱)、榄香烯;从薏苡仁中提取的薏苡 仁油、猪苓多糖、仙灵多糖、黄芪多糖和人参皂甙;从中药青黛中提取的 有效成分对慢性白血病有效;从植物三尖杉中提取的三尖杉酯碱和高三尖 杉酯碱对急性非淋巴细胞白血病有突出疗效,目前国际上作为临床三线药 物。另外,尚有许多学者报道了一些中成药对肿瘤的抑制作用。例如:小柴 胡汤、四君子汤、十全大补汤、补中益气汤等,其疗效得到了充分的肯定。

我国古代很早就认识到山豆根的清热解毒、消肿止痛、去小虫等功能。 现代药理试验已经证明,山豆根具有良好的抗肿瘤活性。山豆根水提物对 小鼠宫颈癌U14、肉瘤S180、大鼠腹水型吉田肉瘤、腹水实体肝癌等多种试 验性肿瘤均有不同程度的抑制作用。张良等报道,复方山豆根注射液对B16黑色素瘤、lewis肺癌荷瘤有较好的抑瘤作用,有显著延长小鼠生存期的 效果。此外,山豆根对小鼠前胃鳞状上皮的癌变过程有阻断作用,它还能 抑制体外培养的人肝癌细胞的增殖,降低线粒体代谢活性。

太阳城集团山豆根来源于豆科植物越南槐Sophora tonkinesis Gapnep的干燥根 及根茎。其味苦、性寒,有毒。归肺、胃经。功能主治:可清热解毒,消 肿利咽。用于火毒蕴结,咽喉肿痛,齿龈肿痛。为清利咽喉,消肿止痛之 要药。山豆根功效始载于《开宝本草》:“主解诸药毒、止痛、消疮肿毒, 急黄发热咳嗽”。

据文献报道,山豆根中含有多种生物碱类成分,另外还有黄酮、三萜、 多糖、甾醇等。其中,生物碱类成分是其治疗恶性肿瘤的主要成分。

山豆根中主要含有生物碱:苦参碱(matrine)、氧化苦参碱 (oxymatrine)、臭豆碱(anagyrine)、甲基金雀花碱(methylcytisine)、 金雀花碱(cytisine)、槐根碱(sothocarpine)、槐根碱N-氧化物 (sophocarpine N-oxide)、槐胺碱(sophoramine)、槐花醇(sophoranol) 等。黄酮类成分:左旋山槐素(maackiain)、染料木素(genisterin)、 左旋三叶豆紫檀甙(trifolirhizin)、左旋紫檀素(pterocarpin)、山 豆根酮(sophoranone)、山豆根色烯(sophoranochromene)、山豆根查 耳酮(sophoradin)等。

现代药理研究表明,山豆根具有抗肿瘤、抗实验性心律失常、抗溃疡、 抗真菌、消炎镇痛等作用,对脑缺血再灌注损伤有明显保护作用。以山豆 根药材提取精制的山豆根总生物碱,具有抑制肿瘤生长的活性,是治疗肿 瘤的有效部位,(山豆根总生物碱抗肿瘤作用的初步研究,南京中医药大 学学报,2005,21(4):253-254)。山豆根多糖具有清除自由基、抗氧 化的作用,(山豆根多糖体外清除自由基作用的研究,中兽医医药杂志, 2004,5:6-8)。另有公开号为CN1306854的中国专利公开了山豆根水提 醇沉物的制备方法及治疗肝炎用途。但该方法采用常规提取方法制备的山 豆根水提醇沉物的活性成分不明确。另一个公开号为CN1457778A的中国专 利公开了山豆根口服制剂、制备方法及应用,主要涉及一种山豆根活性成 分提取物制成的保肝护肝的口服制剂,但其采用的方法为常规的酸碱调pH 值法,技术含量低,同时酸碱的使用量过大,对环境污染大。

发明内容

本发明要解决的技术问题在于提供一种抗肿瘤的中药组合物,其中的 有效成分是来自中药山豆根中的生物碱类成分,亦称山豆根总生物碱有效 部位。

本发明进一步提供了以所述山豆根总生物碱有效部位为活性成分,用 于抗肿瘤的纯中药制剂和相应的药物剂型,尤其是冻干粉针剂。并提供了 冻干粉针剂的制备方法。

本发明要解决的另一个技术问题在于提供用于抗肿瘤的该纯中药组合 物的制备方法,特别是山豆根总生物碱有效部位的制备方法。

太阳城集团为解决上述技术问题,本发明采用如下技术方案:

太阳城集团一种抗肿瘤的中药组合物,它是从山豆根药材中提取的总生物碱有效 部位,该有效部位是通过以下制备方法得到的:

(1)提取:山豆根药材粉碎,用水或C1-C5的低级醇或含水的C1-C5低 级醇提取;

太阳城集团(2)浓缩:提取后减压浓缩,蒸去水或如(1)所述的低级醇,得相对密 度为1.10~1.15的浓缩液;

太阳城集团(3)酸化:浓缩液用稀酸酸化至pH 3~4之间,离心(4000r/min,10min), 得上清液;

(4)除杂:上清液经树脂柱吸附并用水或含水的C1-C5低级醇淋洗除去 杂质;

(5)碱化:用稀碱碱化树脂柱;

太阳城集团(6)洗脱:用含水的C1-C5低级醇洗脱吸附于树脂柱上的山豆根总生物 碱;

太阳城集团(7)干燥:洗脱液经减压浓缩、干燥粉碎,得山豆根总生物碱有效部位; 其中有效部位中总生物碱的含量在50%以上。

所述提取用的含水低级醇的碳数为C1-C5,例如:甲醇、乙醇、丙醇、 正丁醇、异丁醇等;浓度为X,0<X≤95%,优选为0<X≤40%。

所述的制备方法中稀酸为盐酸或硫酸。

所述树脂可为以苯乙烯、二乙烯苯、丙烯酸酯或甲基丙烯酸酯中的任 意一种或几种为骨架材料的极性或非极性树脂,例如D101、D201、AB-8、 HP-20、732、XAD-4或XAD-16等,优选为苯乙烯型阳离子交换树脂,即732 型树脂。

太阳城集团所述除杂用的含水低级醇的碳数为C1-C5,例如:甲醇、乙醇、丙醇、 正丁醇、异丁醇等;浓度为X,0<X≤40%,优选为0<X≤20%,试验表明: 在该洗脱浓度下,杂质能够得到去除。所述的制备方法中稀碱为氨水或氢 氧化钠。

太阳城集团所述洗脱用的含水低级醇的碳数为C1-C5,例如:甲醇、乙醇、丙醇、 正丁醇、异丁醇等;浓度为X,20≤X≤100%,优选为30≤X≤80%。

提取方法包括煎煮、回流、浸渍、渗漉等。干燥方法为真空干燥、冷 冻干燥、喷雾干燥等,最好为真空干燥或冷冻干燥。

所述方法制备得到的山豆根总生物碱有效部位还可以通过以下方法进 一步精制,包括:取山豆根总生物碱有效部位经水稀释至5倍体积,碱化, 再用乙酸乙酯萃取进一步精制;或取山豆根总生物碱有效部位经过硅胶柱 吸附,乙酸乙酯洗脱进一步精制,得到精制的山豆根总生物碱有效部位中 总生物碱的含量在80%以上。

一种抗肿瘤的药物制剂,将所述的中药组合物,即山豆根总生物碱有 效部位作为主要活性成分,加入药剂学上可以接受的辅料,制成药剂学可 以接受的剂型。所述的辅料选自淀粉、蔗糖、乳糖、糖粉、葡萄糖、甘露 醇、木糖醇、微晶纤维素钠、糊精、氯化钠、维生素C、半胱氨酸、柠檬 酸、硫代硫酸钠和亚硫酸钠中的任意一种或几种。所述的药剂学可以接受 的剂型是口服剂或注射剂,为片剂、丸剂、滴丸剂、胶囊剂、颗粒剂、注 射液或冻干粉针剂。

本发明所述的注射剂的优选剂型为冻干粉针剂。该制剂的制备方法如 下:取山豆根总生物碱有效部位,加入辅料及注射用水,溶解后过滤除菌, 滤液冷冻干燥,制成冻干粉针剂。制剂的后期制备工艺及设备均属制药领 域的常规技术,本发明对此不作限定,故在此不予详述。

太阳城集团本发明的创造性在于:本发明所提供的山豆根总生物碱有效部位,其 制备工艺简单,制得的山豆根总生物碱有效部位中总生物碱的含量为50% 以上,并进一步通过精制,得到了含量较高的山豆根总生物碱(总生物碱 含量可达80%以上),操作方便,不需要高温高压和特殊设备、成本低廉。

太阳城集团为保证药物的质量,在生产过程中需要对洗脱液和最终提取物中的有 效成分含量随时进行检测。用于检测所述生物碱类化合物的方法可以借助 任何可行的检测手段和公知的方法,本发明在此提出了一套可行的检测方 法。

山豆总生物碱有效部位中苦参碱的HPLC测定:

HPLC条件:流动相∶乙腈-0.025mol/L硫酸氨溶液(37∶63),每100ml 加0.6g十二烷基硫酸钠,用硫酸调pH至3;检测波长:207nm;流速:1ml/min

1、标准曲线

太阳城集团取苦参碱对照品约12.4mg,精密称取,置10ml棕色量瓶中,加甲醇 溶解并定容至刻度,摇匀,即得。精密量吸取0.25、0.5、1、1.5、2.0ml, 分别置于10ml容量瓶中,用甲醇稀释至刻度,分别精密吸取10μl,注入 液相色谱仪,按上述色谱条件测定。以峰面积为纵坐标,苦参碱进样量(μ g)为横坐标作图,绘制标准曲线。

太阳城集团回归方程:Y=1703737.6279X+115487.4085

相关系数:γ=0.9996

线性范围:苦参碱在0.31~2.48μg范围内线性关系良好。

2、山豆总生物碱有效部位中苦参碱的测定

对照品溶液的制备  取苦参碱对照品约6mg,精密称定,置50ml棕色 量瓶中,加甲醇溶解并定容至刻度,摇匀,即得。

太阳城集团供试品溶液的制备  取山豆总生物碱有效部位约5mg,精密称定,置 25ml量瓶中,加水溶解并定容至刻度,摇匀。用微孔滤膜(0.22μm)滤 过,取续滤液,即得。

测定法  分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl,注入液相 色谱仪,测定,照外标一点法计算,即得。本品含苦参碱(C15H24N2O),不 得少于40%。

为便于理解本发明所述的组合物在抗肿瘤方面的药用价值,发明人使 用上述方法或实施例的山豆根总生物碱有效部位完成了以下药效学试验:

1.山豆根总生物碱抗肿瘤作用的体外研究

山豆根总生物碱有效部位:山豆根总生物碱的含量以苦参碱计为81%。

为体外观察山豆根总生物碱的抗肿瘤活性,选择胃癌BGC-823、结肠 癌Colo 205和肝癌SMMC 7721细胞作为受试细胞株,应用不同浓度的山豆 根总生物碱作用于上述三种细胞48h后,用MTT法(检测胃癌和肝癌细胞) 和SRB法(检测结肠癌细胞)观察不同浓度的该药物对三种细胞的生长抑 制情况,同时设置不加药无细胞的空白对照组及不加药的细胞对照组平行 操作,本实验每种肿瘤株重复三批。试验结果见表1,表2,表3。

太阳城集团表1  山豆根总生物碱对胃癌BGC-823细胞的体外抑制作用实验结果   药物浓度   (mg/ml)   第一批   第二批   第三批   OD值( x±s)   抑制率   OD值( x±s)   抑制率   OD值( x±s)   抑制率   10   5   2.5   1.25   0.625   0.313   细胞对照   空白对照   0.094±0.004   0.104±0.006   0.351±0.014   0.463±0.012   0.523±0.026   0.547±0.015   0.566±0.010   0.064±0.007   94%   92%   43%   20%   8%   4%   空白   空白   0.091±0.004   0.096±0.006   0.213±0.032   0.346±0.026   0.400±0.041   0.435±0.027   0.447±0.022   0.063±0.004   93%   92%   61%   26%   12%   3%   空白   空白   0.095±0.004   0.100±0.004   0.214±0.010   0.321±0.016   0.385±0.042   0.409±0.013   0.411±0.026   0.081±0.005   96%   94%   60%   27%   8%   1%   空白   空白

注:第一批实验IC50为2.2903±0.0259mg/ml;第二批实验IC50为1.9382±0.026mg/ml; 第三批实验IC50为1.9498±0.024mg/ml。

表2  山豆根总生物碱对结肠癌Colo205细胞的体外抑制作用实验结果   药物浓度   (mg/ml)   第一批   第二批   第三批   OD值( x±s)   抑制率   OD值( x±s)   抑制率   OD值( x±s)   抑制率   5   2.5   1.25   0.625   0.313   细胞对照   空白对照   0.133±0.007   0.141±0.014   0.199±0.056   0.300±0.030   0.315±0.040   0.325±0.084   0.045±0.004   69%   66%   45%   9%   4%   空白   空白   0.107±0.004   0.145±0.025   0.177±0.031   0.275±0.044   0.288±0.018   0.348±0.056   0.045±0.004   79%   67%   56%   24%   20%   空白   空白   0.166±0.026   0.176±0.043   0.239±0.027   0.295±0.030   0.306±0.026   0.343±0.025   0.048±0.003   60%   57%   35%   16%   12%   空白   空白

注:第一批实验IC50为2.0113±0.034mg/ml;第二批实验IC50为1.3±0.0404mg/ml; 第三批实验IC50为2.5717±0.0531mg/ml。

表3  山豆根总生物碱对肝癌SMMC7721细胞的体外抑制作用实验结果   药物浓度   (mg/ml)   第一批   第二批   第三批   OD值( x±s)   抑制率   OD值( x±s)   抑制率   OD值( x±s)   抑制率   5   3.75   2.5   0.091±0.015   0.106±0.010   0.116±0.028   86%   80%   77%   0.096±0.010   0.099±0.019   0.209±0.017   91%   90%   60%   0.090±0.006   0.109±0.005   0.137±0.011   92%   85%   76%   1.875   1.25   0.9   细胞对照   空白对照   0.119±0.018   0.143±0.018   0.202±0.014   0.321±0.048   0.054±0.001   76%   67%   45%   空白   空白   0.225±0.020   0.240±0.020   0.400±0.035   0.434±0.063   0.062±0.005   56%   52%   9%   空白   空白   0.162±0.010   0.213±0.006   0.269±0.036   0.362±0.018   0.064±0.007   67%   50%   31%   空白   空白

太阳城集团注:第一批实验IC50为0.7932±0.0727mg/ml;第二批实验IC50为1.6964±0.0197mg/ml; 第三批实验IC50为1.3193±0.0277mg/ml。

三批实验山豆根提取物对胃癌BGC-823细胞的半数抑制浓度(IC50)平 均值为1.2696±0.0400mg/ml。以上结果提示,山豆根总生物碱体外对上 述三种肿瘤细胞的生长均具有一定的抑制作用。

2.山豆根总生物碱对小鼠H22肝癌实体瘤的治疗作用

太阳城集团山豆根总生物碱有效部位:山豆根总生物碱的含量以苦参碱计为75 %。

为研究山豆根总生物碱的体内抗肿瘤活性,取状态良好的H22腹腔荷瘤 小鼠,无菌抽取腹水(内含大量H22肿瘤细胞),以生理盐水稀释成浓度5× 107/ml,接种于正常小鼠前肢皮下,每只接种0.2ml。接种24h后,按体重 随机分为荷瘤对照组、5-氟尿嘧啶注射液(5-FU)组(30mg/kg)、山豆根 总生物碱小(12.5mg/kg)、中(25mg/kg)、大(50mg/kg)剂量组。每组 12只动物,接种后次日起,每天给药1次,连续给药10天。末次给药后 24h,小鼠称重后脱臼处死,剥瘤称重,计算抑瘤率(%),试验结果见表4。

表4  山豆根总生物碱给药10天对小鼠H22肝癌实体瘤的影响( x±s)   组别   剂量   (mg/kg)   只数(n)   体重(g)   瘤重(g)   抑瘤   率   (%)   药前   药后   药前   药后   荷瘤对照组   5-Fu组   总小剂量组   -   30   12.5   12   12   12   12   12   12   22.14±1.20   22.45±1.60   22.45±1.18   29.13±2.72   25.62±3.01**  30.77±3.38   1.59±0.57   0.45±0.17***  1.04±0.39*   -   71.4   34.2   生   物   碱   中剂量组   大剂量组   25   50   12   12   12   12   22.37±1.19   22.41±1.26   30.62±2.02   29.97±2.55   0.91±0.37**  0.78±0.26***   42.5   51.1

太阳城集团注:与荷瘤对照组比较,明显降低,*P<0.05,**P<0.01,***P<0.01。

太阳城集团由表4结果可知,各组与荷瘤对照组比较,药前体重无明显差异,经 统计学处理,差异均未见显著性(P>0.05)。5-FU组与荷瘤对照组比较, 药后体重明显降低,经统计学处理,差异具有非常显著性(P<0.01);山豆 根总生物碱小、中、大剂量组与荷瘤对照组比较,药后体重无明显变化, 经统计学处理,差异未见显著性(P>0.05)。

太阳城集团5-FU组与荷瘤对照组比较,瘤重明显降低,经统计学处理,差异具有 极显著性(P<0.001);山豆根总生物碱小、中、大剂量组与荷瘤对照组比 较,瘤重均明显降低,经统计学处理,差异具有显著性(P<0.05,P<0.01 或P<0.001)。5-FU组的抑瘤率为71.4%,山豆根总生物碱小、中、大剂 量组的抑瘤率分别为34.2%,42.5%,51.1%,具有较好的剂量-效应关 系。以上结果提示山豆根总生物碱可明显抑制小鼠H22肝癌实体瘤的增长。

太阳城集团3.山豆根总生物碱对裸鼠移植性胃癌的治疗作用

山豆根总生物碱有效部位:山豆根总生物碱的含量以苦参碱计为80 %。

为研究山豆根总生物碱对裸鼠移植性胃癌人源性肿瘤是否具有治疗作 用,采用注射浓度为5×106/ml的BGC-823细胞至裸鼠腋部皮下的方法, 接种肿瘤细胞0.2ml/只,接种后24h,将动物随机分为荷瘤对照组(生理 盐水)、阳性对照组(5-FU 30mg/kg),山豆根总生物碱小(12.5mg/kg)、 中(25mg/kg)和大(50mg/kg)剂量组,另增设未接种肿瘤细胞的裸鼠作 为空白对照组,除荷瘤对照组与5-FU组为13只动物以外,其余各组动物 数均为11只。在可摸到肿瘤小块(即接种肿瘤后7天),各组药物开始给 药。阳性药采取腹腔注射途径,隔2日给药一次,其余各组均灌胃给药, 每天一次,连续28天,3天称量一次体重、测定肿瘤长、短径,并于末次 给药后取瘤称瘤重。试验结果见表5,表6,表7。

表5  山豆根总生物碱对裸鼠移植性胃癌实体瘤体积的影响( x±s) 组别   荷瘤对照组 5-FU组     山豆根总生物碱     小剂量组     中剂量组 大剂量组 剂量(mg/kg) 动物数(n) 肿瘤体积(mm3)   -   13 30 13     12.5     11     25     11 50 11 给 药 后  5d  9d  13d  16d    18d    20d  22d  24d  26d  28d   178.54±56.33   464.03±113.37   933.47±214.55   1356.95±462.88     1746.67±499.67     2239.62±587.96   2488.75±578.42   2907.57±688.81   3467.96±1059.62   4166.07±1432.38 154.09±70.77 300.35±109.02***587.53±208.34***753.31±226.59***  925.66±276.16***  1073.22±291.70***1277.75±350.02***1528.49±422.19***1745.89±456.33***1994.76±498.26***     170.64±56.49     358.68±110.97*    719.90±241.31*    961.53±310.66*      1229.90±372.98**      1611.26±559.96*    1903.62±595.55*    2194.72±658.34*    2522.57±708.76*    3088.42±761.05*   163.98±49.89   330.58±123.95*  584.95±196.08***  788.23±246.90**    1107.24±397.08**    1402.53±538.95**  1704.39±718.85**  2026.92±837.08*  2409.35±963.99*  2844.03±963.99* 160.33±49.25 319.82±120.06**540.57±318.40**737.61±384.30**   946.42±477.76**  1210.93±471.40***1542.65±602.23***1859.48±683.79**2192.75±722.12**2644.22±884.26**

太阳城集团注:与荷瘤对照组比较,明显降低,*P<0.05,**P<0.01,***P<0.001

表6  山豆根总生物碱给药28天后对裸鼠移植性胃癌实体瘤瘤重的影响( x±s)     组别    剂量(mg/kg)   动物数(n)    瘤重(g)   抑瘤率(%)     空白对照组     荷瘤对照组     5-FU组     山豆根总生物碱     小剂量组    -    -    30      12.5   11   13   13     11    -    3.2358±0.9662    1.7821±0.4958**     2.4596±0.7591*   -   -   44.93     23.99   中剂量组   大剂量组   25   50   11   11   2.1445±0.7773**  2.0093±0.7521**   33.72   37.90

太阳城集团注:与荷瘤对照组比较,明显降低,*P<0.05,**P<0.01

表7  山豆根总生物碱对裸鼠体重的影响( x±s)   组别   空白对照组   荷瘤对照组   5-FU组   山豆根总生物碱   小剂量组   中剂量组   大剂量组   剂量(mg/kg)   动物数(n)   裸鼠体重(g)   -   11   -   13   30   13   12.5   11   25   11   50   11   给   药   后   1d   4d   7d   10d   13d   16d   19d   22d   25d   28d   17.33±2.05   18.01±1.61   20.23±1.90   21.20±2.03   21.27±2.21   22.66±2.52   23.53±3.01   23.85±3.46   24.49±2.73   23.48±2.81   17.46±1.54   19.14±1.61   19.91±1.89   21.18±2.16   22.28±2.22   23.50±2.17   24.06±2.09   24.28±1.79   24.73±1.97   23.75±2.04   17.98±1.37   19.42±1.67   20.59±2.11   21.78±1.96   21.96±2.17   22.20±1.78   22.89±1.90   23.20±1.39   23.45±1.66   22.49±1.53   17.42±1.62   19.19±2.33   20.07±2.17   21.54±2.10   22.44±2.27   23.97±2.14   24.64±2.29   25.03±1.91   25.06±1.96   24.15±1.90   17.62±1.77   19.51±2.69   19.99±2.80   21.22±2.60   22.77±2.71   23.94±2.78   24.35±2.57   24.85±2.56   25.65±2.66   25.05±2.27   17.60±1.67   19.35±1.81   19.85±1.60   21.22±1.51   22.44±1.17   23.79±1.29   24.22±0.48   24.80±0.72   25.42±0.93   24.87±1.00

太阳城集团山豆根总生物碱小、中、大剂量组从给药的第9至28天,即表现出明 显的抑制肿瘤生长的作用,其肿瘤体积与荷瘤对照组比较明显降低 (P<0.05),其中中、大剂量组的抑瘤率均大于30%;山豆根总生物碱小、 中、大剂量组与荷瘤对照组比较,瘤重均明显降低(P<0.05),且中、大剂 量组的抑瘤率大于30%,山豆根总生物碱各剂量组对裸鼠体重无明显影响 (P>0.05)。试验结果表明,山豆根总生物碱对裸鼠移植性胃癌实体瘤具有 明显的治疗作用。

具体实施例

太阳城集团以下通过实施例详细说明本发明技术方案的实施,但不应以此限定本 发明的实施范围。

实施例1:山豆根总生物碱有效部位的制备方法

药材粉碎成过20目筛的粗粉,每次以8倍药材重量(V/W)的水回流提 取1h,共3次,提取液合并后经减压回收溶剂得相对密度为1.10~1.15 的浓缩液,此浓缩液以盐酸酸化至pH 3~4后离心(4000r/min,10min), 所得上清液载于处理好的732阳离子交换树脂柱,先依次用13倍药材重量 (V/W)的水,及7.8倍药材重量(V/W)的30%的乙醇洗脱杂质,再用1.3倍 药材重量(V/W)的25%的氨水,碱化732阳离子交换树脂,最后用7.8倍药 材重量(V/W)的30%的乙醇洗脱,解吸,收集解吸液,减压浓缩后真空干燥 至恒重,得山豆根总生物碱有效部位。其中总生物碱的含量大于50%,苦 参碱的含量大于40%。

实施例2:山豆根总生物碱有效部位的制备方法

药材粉碎成过20目筛的粗粉,用5倍药材重量(V/W)的40%乙醇浸泡2h, 装入渗漉桶,以40%乙醇渗漉,收集渗漉液,经减压回收溶剂得相对密度 为1.10~1.15的浓缩液,此浓缩液以盐酸酸化至pH 3~4后离心(4000 r/min,10min),所得上清液载于处理好的AB-8树脂柱,先依次用15倍药 材重量(V/W)的水,及10倍药材重量(V/W)的10%的乙醇洗脱杂质,再用2 倍药材重量(V/W)的20%的氨水,碱化AB-8树脂,最后用8倍药材重量(V/W) 的20%的乙醇洗脱,解吸,收集解吸液,减压浓缩后喷雾干燥至恒重,得 山豆根总生物碱有效部位。其中总生物碱的含量大于50%,苦参碱的含量 大于40%。

实施例3:山豆根总生物碱有效部位的制备方法

药材粉碎成过20目筛的粗粉,用10倍药材重量(V/W)的20%乙醇浸渍 12h,过滤,滤渣再以30%乙醇浸渍12h,合并两次浸泡液,经减压回收溶 剂得相对密度为1.10~1.15的浓缩液,此浓缩液以5%硫酸酸化至pH 3~4 后离心(4000r/min,10min),所得上清液载于处理好的D101树脂柱,先 依次用10倍药材重量(V/W)的水,及8倍药材重量(V/W)的20%乙醇洗脱 杂质,再用1.5倍药材重量(V/W)的15%氢氧化钠溶液,碱化D101树脂, 最后用6倍药材重量(V/W)的50%的乙醇洗脱,解吸,收集解吸液,减压浓 缩后喷雾干燥至恒重,得山豆根总生物碱有效部位。其中总生物碱的含量 大于50%,苦参碱的含量大于40%。

实施例4:山豆根总生物碱有效部位的制备方法

太阳城集团药材粉碎成过20目筛的粗粉,每次以8倍药材重量(V/W)的60%乙醇 回流提取2h,共3次,提取液合并后经减压回收溶剂得相对密度为1.10~ 1.15的浓缩液,此浓缩液以盐酸酸化至pH 3~4后离心(4000r/min, 10min),所得上清液载于处理好的XAD-4树脂柱,先依次用16倍药材重量 (V/W)的水,及6倍药材重量(V/W)的40%的乙醇洗脱杂质,再用1倍药材 重量(V/W)的30%的氨水,碱化XAD-4树脂,最后用5倍药材重量(V/W)的 80%乙醇洗脱,解吸,收集解吸液,减压浓缩后冷冻干燥至恒重,得山豆根 总生物碱有效部位。其中总生物碱的含量大于50%,苦参碱的含量大于40 %。

实施例5:山豆根总生物碱有效部位的制备方法

太阳城集团药材粉碎成过20目筛的粗粉,用5倍药材重量(V/W)的90%乙醇浸泡 4h,装入渗漉桶,以10倍药材重量的水渗漉,收集渗漉液,经减压回收溶 剂得相对密度为1.10~1.15的浓缩液,此浓缩液以盐酸酸化至pH 3~4 后离心(4000r/min,10min),所得上清液载于处理好的734阳离子交换树 脂柱,先依次用10倍药材重量(V/W)的水,及8倍药材重量(V/W)的30% 的乙醇洗脱杂质,再用2倍药材重量(V/W)的10%氢氧化钠溶液,碱化734 阳离子交换树脂,最后用5倍药材重量(V/W)的无水乙醇洗脱,解吸,收集 解吸液,减压浓缩后真空干燥至恒重,得山豆根总生物碱有效部位。其中 总生物碱的含量大于50%,苦参碱的含量大于40%。

太阳城集团实施例6:山豆根总生物碱有效部位的精制方法

太阳城集团取山豆根总生物碱,加水稀释至5倍体积,加0.05倍氢氧化钠碱化, 再以每次15倍量的乙酸乙酯萃取3次,合并萃取液,减压浓缩,真空干燥, 得到精制山豆根总生物碱,其中山豆根总生物碱的含量大于80%,苦参碱 的含量大于75%。

太阳城集团实施例7:山豆根总生物碱有效部位的精制方法

取山豆根总生物碱,加入5倍重量的无水乙醇,载于处理好的硅胶柱, 再以乙酸乙酯洗脱,洗脱液减压浓缩,真空干燥,得到精制山豆根总生物 碱,其中山豆根总生物碱的含量大于80%,苦参碱的含量大于75%。

实施例8:山豆根总生物碱冻干粉针的制备

实施例6方法制备的山豆根总生物碱100g与100g甘露醇投料,加注 射用水5L使溶解,其中山豆根总生物碱的浓度为20mg/ml;溶液分级过滤 (0.8μm,0.45μm,0.22μm),分装,冷冻干燥,得山豆根总生物碱冻干粉 针,其中含山豆根总生物碱40mg/支。

实施例9:山豆根总生物碱冻干粉针的制备

实施例6方法制备的山豆根总生物碱100g与50g葡萄糖投料,加注射 用水5L使溶解,其中山豆根总生物碱的浓度为20mg/ml;溶液分级过滤(0.8 μm,0.45μm,0.22μm),分装,冷冻干燥,得山豆根总生物碱冻干粉针, 其中含山豆根总生物碱40mg/支。

太阳城集团实施例10:山豆根总生物碱片剂的制备

太阳城集团实施例6方法制备的山豆根总生物碱30g,加淀粉40g,微晶纤维素 10g,加入适量10%淀粉浆制粒,干燥,整粒,压片。

太阳城集团实施例11:山豆根总生物碱胶囊剂的制备

实施例1方法制备的山豆根总生物碱100g,加入淀粉100g,搅拌使混 合均匀,喷入10%的聚维酮K30稀乙醇溶液,制软材,过40目筛制粒,60 ℃干燥,装于胶囊中,即得。

太阳城集团本文
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