太阳城集团

  • / 10
  • 下载费用:30 金币  

一种肋脉野豌豆的扩繁方法.pdf

关 键 词:
一种 野豌豆 方法
  专利查询网所有资源均是用户自行上传分享,仅供网友学习交流,未经上传用户书面授权,请勿作他用。
摘要
申请专利号:

太阳城集团CN201610885845.2

申请日:

20161010

公开号:

太阳城集团CN106234231B

公开日:

20180320

当前法律状态:

有效性:

有效

法律详情:
IPC分类号: A01H4/00 主分类号: A01H4/00
申请人: 内蒙古自治区农牧业科学院
发明人: 伊风艳,孙海莲,王晓娟,刘亚红,邱晓
地址: 010000 内蒙古自治区呼和浩特市玉泉区昭君路22号
优先权: CN201610885845A
专利代理机构: 北京高沃律师事务所 代理人: 王加贵
PDF完整版下载: PDF下载
法律状态
申请(专利)号:

CN201610885845.2

授权太阳城集团号:

法律状态太阳城集团日:

法律状态类型:

摘要

本发明涉及一种肋脉野豌豆的扩繁方法,属于植物扩繁技术领域。本发明的扩繁方法包括:1)将前处理后的种子置于培养基中进行培养,获得无菌苗;2)将所述无菌苗切割得到的茎段置于第一再分化培养基中进行培养,获得再生植株;3)将所述再生植株切割得到的茎段置于第二再分化培养基中进行完整植株的培养。本发明提供的肋脉野豌豆扩繁方法扩繁系数高,培养周期短,成活率高,能够大大提升肋脉野豌豆的扩繁效率。

权利要求书

1.一种肋脉野豌豆的扩繁方法,包括以下步骤:1)将前处理后的种子置于培养基中进行培养,获得无菌苗;所述步骤1)中的培养基为MS固体培养基或1/2MS固体培养基;2)将所述无菌苗切割得到的茎段置于第一再分化培养基中进行培养,获得再生植株;所述第一再分化培养基为包括0.5mg/L6-苄氨基腺嘌呤、1mg/L吲哚丁酸、质量分数0.7%琼脂和质量分数2%蔗糖的MS培养基,pH值为5.85;所述步骤2)中培养的条件为:温度为22~28℃,光照条件为白/昼=12h/12h,培养的太阳城集团为30~45d;3)将所述再生植株切割得到的茎段置于第二再分化培养基中进行完整植株的培养;所述第二再分化培养基为包括0.8mg/L1-萘乙酸、质量分数0.7%琼脂和质量分数3%蔗糖的1/2MS培养基,pH值为5.90;所述步骤3)中完整植株培养的温度为22~28℃,培养的太阳城集团为40~90d。2.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,所述步骤1)的前处理包括:破除种子硬实后冲洗;将冲洗后的种子在乙醇水溶液中浸泡;将浸泡后的种子消毒;将消毒后的种子采用无菌水冲洗。3.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,所述步骤2)和步骤3)中的茎段含有叶芽,所述茎段的长度独立地选为1~2cm。4.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,步骤3)得到完整植株后还包括:将所述完整植株进行炼苗和移栽,所述炼苗的太阳城集团为2~4d。5.根据权利要求4所述的方法,其特征在于,所述移栽具体为:将炼苗后的植株放入沙土与营养土质量比为(2~4)∶1的基质中,保湿保温培养9~12d。

说明书

技术领域

太阳城集团本发明涉及植物扩繁技术领域,尤其涉及一种肋脉野豌豆的扩繁方法。

背景技术

优良的牧草品种是畜牧业重要的生产资料,具有栽培和育种价值,但有些具有突出的野生种性,不利于栽培利用。

太阳城集团肋脉野豌豆是一种比较典型且珍贵的旱生豆科牧草种质资源,极其耐旱,在我国干旱地区能发挥重要的生态、经济价值。肋脉野豌豆是野生种,虽保留了珍贵的抗逆特性,但自身也有一些缺点,如:花期长且不一致,硬实,落粒性强导致种子收获产量低,种源缺乏,限制了肋脉野豌豆的推广应用。因此,提高肋脉野豌豆种子产量及繁殖系数有着重要的理论价值及现实意义。

太阳城集团目前,国内外对肋脉野豌豆的研究主要集中在栽培引种驯化、遗传多样性及抗性基因等方面,其中涉及种子发芽及繁殖体系的相关研究报导较少,肋脉野豌豆种植材料十分缺乏。

发明内容

本发明的目的在于提供一种肋脉野豌豆的扩繁方法。本发明提供的扩繁方法繁殖速度快、成本低、培育周期短。

本发明提供了一种肋脉野豌豆的扩繁方法,包括以下步骤:

1)将前处理后的种子置于培养基中进行培养,获得无菌苗;

2)将所述无菌苗切割得到的茎段置于第一再分化培养基中进行培养,获得再生植株;

所述第一再分化培养基为包括0~1mg/L 6-苄氨基腺嘌呤、0~1.5mg/L吲哚丁酸、质量分数0.6~0.8%琼脂和质量分数2~4%蔗糖的MS培养基;

3)将所述再生植株切割得到的茎段置于第二再分化培养基中进行完整植株的培养;

所述第二再分化培养基为包括0~1.4mg/L 1-萘乙酸、质量分数0.6~0.8%琼脂和质量分数2~4%蔗糖的1/2MS培养基。

优选的是,所述步骤1)的前处理包括:破除种子硬实后冲洗;

太阳城集团将所述冲洗后的种子在乙醇水溶液中浸泡;

将所述浸泡后的种子消毒;

将所述消毒后的种子采用无菌水冲洗。

太阳城集团优选的是,所述步骤1)中的培养基为MS固体培养基或1/2MS固体培养基。

优选的是,所述步骤2)和步骤3)中的茎段含有叶芽,所述茎段的长度独立地选为1~2cm。

优选的是,所述步骤2)中培养的条件为:温度为22~28℃,光照条件为白/昼=12h/12h,培养的太阳城集团为30~45d。

太阳城集团优选的是,所述步骤3)中完整植株培养的温度为22~28℃,培养的太阳城集团为40~90d。

太阳城集团优选的是,所述步骤3)得到完整植株后还包括:将所述完整植株进行炼苗和移栽,所述炼苗的太阳城集团为2~4d。

优选的是,所述移栽具体为:将炼苗后的植株放入沙土与营养土质量比为(2~4):1的基质中,保湿保温培养9~12d。

本发明提供的肋脉野豌豆的扩繁方法通过前处理、第一再分化和第二再分化得到了扩繁后的肋脉野豌豆,肋脉野豌豆是野生种,其落粒性强导致种子收获产量低,种源缺乏,并且硬实性较强,本发明所述扩繁方法保证了较高的种子发芽率,且扩繁系数高。试验效果表明,本申请的扩繁方法对肋脉野豌豆种子的利用效率高,成活率高。

附图说明

图1是本发明实施例1得到的无菌苗示意图;

图2是本发明实施例1得到的再生植株示意图;

太阳城集团图3是本发明实施例1得到的完整植株示意图;

太阳城集团图4是本发明实施例4得到的完整植株移栽效果图;

图5是本发明实施例4得到的完整植株移栽效果图。

具体实施方式

本发明提供了一种肋脉野豌豆的扩繁方法,包括以下步骤:

太阳城集团1)将前处理后的种子置于培养基中进行培养,获得无菌苗;

太阳城集团2)将所述无菌苗切割得到的茎段置于第一再分化培养基中进行培养,获得再生植株;

所述第一再分化培养基为包括0~1mg/L 6-苄氨基腺嘌呤、0~1.5mg/L吲哚丁酸、质量分数0.6~0.8%琼脂和质量分数2~4%蔗糖的MS培养基;

3)将所述再生植株切割得到的茎段置于第二再分化培养基中进行完整植株的培养;

太阳城集团所述第二再分化培养基为包括0~1.4mg/L 1-萘乙酸、质量分数0.6~0.8%琼脂和质量分数2~4%蔗糖的1/2MS培养基。

太阳城集团本发明优选将肋脉野豌豆种子进行前处理。在本发明中,所述前处理优选包括:破除种子硬实后冲洗;

太阳城集团将所述冲洗后的种子在乙醇溶液中浸泡;

将所述浸泡后的种子消毒;

将所述消毒后的种子采用无菌水冲洗。

太阳城集团本发明优选先破除种子的硬实,本发明对所述破除种子硬实的方法没有特殊的限定,采用本领域技术人员熟知的方法即可,如利用砂纸打磨或刀片切割处理。

本发明破除种子硬实后,优选对种子用水进行冲洗,所述冲洗的太阳城集团优选为40~60min,更优选为50min。

得到冲洗后的种子后,本发明优选将所述冲洗后的种子在乙醇水溶液中浸泡。在本发明中,所述浸泡的目的为对种子进行杀毒。在本发明中,所述乙醇水溶液的体积分数优选为65~75%,更优选为70%;所述浸泡的太阳城集团优选为1~3min,更优选为1.5min。

得到浸泡后的种子后,本发明优选采用质量浓度为0.1~0.2%的HgCl2对种子进行浸泡消毒,所述消毒的太阳城集团优选为6~14min,更优选为8min。

本发明优选对消毒后的种子用无菌水冲洗3~5次,得到前处理后的种子。

完成前处理后,本发明优选将所述前处理后的种子置于培养基中进行培养,获得无菌苗。在本发明中,所述培养的温度优选为22~28℃,更优选为25℃;所述培养优选为光照培养,所述光照的条件优选为:白/昼=12/12h。所述培养基优选为MS固体培养基或1/2MS固体培养基,所述培养基的pH值优选为5.85~6.00,更优选为5.90。

太阳城集团在本发明中,所述种子的添加量优选为4~6粒/60mL培养基。

太阳城集团得到无菌苗后,本发明将所述无菌苗切割得到的茎段置于第一再分化培养基中进行培养,获得再生植株,所述第一再分化培养基为包括0~1mg/L 6-苄氨基腺嘌呤、0~1.5mg/L吲哚丁酸、质量分数0.6~0.8%琼脂和质量分数2~4%蔗糖的MS培养基。

在本发明中,用于切割的无菌苗的长度优选为10~12cm。所述切割得到的茎段优选含有叶芽,所述茎段的长度为1~2cm。

在本发明中,所述第一再分化培养的温度优选为22℃~28℃,更优选为25℃,光照条件优选为白/昼=12h/12h,培养的太阳城集团优选为30~45d,更优选为40d。

在本发明中,所述第一再分化培养基是在MS培养基的基础上添加其它组分,各组分的含量以MS培养基为基准。

在本发明中,所述第一再分化培养基包括0~1mg/L 6-苄氨基腺嘌呤,优选为0.6~0.8mg/L。在本发明中,所述6-苄氨基腺嘌呤能够有效促进芽的形成,茎和叶的生长。本发明对所述6-苄氨基腺嘌呤的来源没有特别的限定,采用本领域技术人员熟知的6-苄氨基腺嘌呤的市售产品即可。

所述第一再分化培养基包括0~1.5mg/L吲哚丁酸,优选为0.8~1.2mg/L。在本发明中,所述吲哚丁酸能够促进细胞的分裂及根的形成。本发明对所述吲哚丁酸的来源没有特别的限定,采用本领域技术人员熟知的吲哚丁酸市售产品即可。

太阳城集团所述第一再分化培养基包括质量分数为0.6~0.8%的琼脂,优选为0.7%。本发明对所述琼脂的来源没有特别的限定,采用本领域技术人员熟知的琼脂的市售产品即可。

太阳城集团所述第一再分化培养基包括质量分数为2~4%的蔗糖,优选为2.5~3%。本发明对所述蔗糖的来源没有特别的限定,采用本领域技术人员熟知的蔗糖市售产品即可。

所述第一再分化培养基的pH值优选为5.85~6.00,更优选为5.90。

获得再生植株后,本发明将所述再生植株切割得到的茎段置于第二再分化培养基中进行完整植株的培养,所述第二再分化培养基为包括0~1.4mg/L 1-萘乙酸、质量分数0.6~0.8%琼脂和质量分数2~4%蔗糖的1/2MS培养基。

太阳城集团在本发明中,所述完整植株培养的温度优选为22~28℃,更优选为24~26℃,更优选为25℃,培养的太阳城集团优选为40~90d,更优选为65~80d。光照条件优选为白/昼=12h/12h。

在本发明中,所述第二再分化培养基是在1/2MS培养基的基础上添加其它组分,各组分的含量以1/2MS培养基为基准。

太阳城集团在本发明中,所述第二再分化培养基包括0~1.4mg/L的1-萘乙酸,优选为0.6~1.0mg/L。在本发明中,所述1-萘乙酸能够诱发根系形成。本发明对所述1-萘乙酸的来源没有特别的限定,采用本领域技术人员熟知的1-萘乙酸的市售产品即可。

太阳城集团所述第二再分化培养基包括质量分数为0.6~0.8%的琼脂,优选为0.7%。本发明对所述琼脂的来源没有特别的限定,采用本领域技术人员熟知的琼脂的市售产品即可。

太阳城集团所述第二再分化培养基包括质量分数为2~4%的蔗糖,优选为3%。本发明对所述蔗糖的来源没有特别的限定,采用本领域技术人员熟知的蔗糖的市售产品即可。

所述第二再分化培养基的pH值优选为5.85~6.00,更优选为5.90。

在本发明中,得到完整植株后,优选将所述完整植株进行炼苗和移栽,所述炼苗的太阳城集团为2~4d。

太阳城集团本发明对所述炼苗的方法没有特殊的限定,采用本领域技术人员熟知的炼苗方法即可,如将固体培养基打碎,加入蒸馏水,在通风的条件下,放置于室温进行培养。

在本发明中,所述移栽优选具体为:将所述炼苗后的植株放入沙土与营养土质量比为(2~4):1的基质中,保湿保温培养9~12d;在本发明中,所述沙土与营养土的质量比更优选为3:1,所述保湿保温培养的太阳城集团更优选为10d。本发明对所述保温保湿的方法没有特别的限定,采用本领域技术人员熟知的保温保湿方法即可,如通过添加遮阴网保温保湿等,所述遮荫网在保温保湿培养结束后移除即可。

下面结合实施例,对本发明提供的一种肋脉野豌豆的扩繁方法进行详细的描述,但是不能将它们理解为对本申请保护范围的限定。

实施例1

太阳城集团肋脉野豌豆无菌的扩繁过程

本实施例中的肋脉野豌豆无菌的扩繁过程在内蒙古农牧业科学综合楼牧草遗传育种实验室进行,具体操作步骤为:

1)通过砂纸打磨或刀片切割处理破除种子硬实后,将种子在流水条件下冲洗60min,用70%的乙醇浸泡1min,浓度为0.1%HgCl2浸泡8min,无菌水冲洗,置于1/2MS固体培养基中,在GZX-系列光照培养箱中进行萌发,获得无菌苗,所述无菌苗如图1所示;

2)待无菌苗生长高度达10cm后,将其分割成2cm左右的茎段(含叶芽),转接到第一再分化培养基上培养,如图2所示,30天后获得再生植株,所述第一再分化培养基为包括0.5mg/L 6-苄氨基腺嘌呤、1mg/L吲哚丁酸、质量分数0.7%琼脂和质量分数2%蔗糖的MS培养基,pH值为5.85;

3)将再生植株分割成2cm左右的茎段(含叶芽),转接到第二再分化培养基上培养45天,得到完整植株,如图3所示。所述第二再分化培养基为包括0.8mg/L 1-萘乙酸、质量分数0.7%琼脂和质量分数3%蔗糖的1/2MS培养基,pH值为5.90。

增殖系数=单位种子扩繁植株数目/单位种子数

成活率(%)=移栽成活无菌幼苗数目/移栽无菌幼苗总数

每粒正常萌发的种子待生长到一定高度后,通过再分化,均能被切割成16~24个含叶芽的茎段,每个茎段在第二再分化培养基中能够形成完整植株。单粒种子最大增殖系数为21,成活率为85%。

实施例2

太阳城集团肋脉野豌豆无菌的扩繁过程

本实施例中的肋脉野豌豆无菌的扩繁过程在内蒙古农牧业科学综合楼牧草遗传育种实验室进行,具体操作步骤为:

1)通过砂纸打磨或刀片切割处理破除种子硬实后,将种子在流水条件下冲洗50min,用65%的乙醇浸泡3min,浓度为0.2%HgCl2浸泡10min,无菌水冲洗,置于1/2MS固体培养基中,在GZX-系列光照培养箱中进行萌发,获得无菌苗;

2)待无菌苗生长高度达12cm后,将其分割成1.5cm左右的茎段(含叶芽),转接到第一再分化培养基上培养35天,获得再生植株,所述第一再分化培养基为包括0.8mg/L 6-苄氨基腺嘌呤、1.2mg/L吲哚丁酸、质量分数0.5%琼脂和质量分数3%蔗糖的MS培养基,pH值为6.00;

3)将再生植株分割成2cm左右的茎段(含叶芽),转接到第二再分化培养基上培养60天,得到完整植株。所述第二再分化培养基为包括1.0mg/L 1-萘乙酸、质量分数0.8%琼脂和质量分数4%蔗糖的1/2MS培养基,pH值为5.90。

太阳城集团增殖系数=单位种子扩繁植株数目/单位种子数

太阳城集团成活率(%)=移栽成活无菌幼苗数目/移栽无菌幼苗总数

太阳城集团每粒正常萌发的种子待生长到一定高度后,通过再分化,均能被切割成16~24个含叶芽的茎段,每个茎段在第二再分化培养基中能够形成完整植株。单粒种子最大增殖系数为19,成活率为84%。

实施例3

肋脉野豌豆无菌的扩繁过程

太阳城集团本实施例中的肋脉野豌豆无菌的扩繁过程在内蒙古农牧业科学综合楼牧草遗传育种实验室进行,具体操作步骤为:

1)通过砂纸打磨或刀片切割处理破除种子硬实后,将种子在流水条件下冲洗45min,用75%的乙醇浸泡2min,浓度为0.1%HgCl2浸泡14min,无菌水冲洗,置于MS固体培养基中,在GZX-系列光照培养箱中进行萌发,获得无菌苗;

2)待无菌苗生长高度达10cm后,将其分割成1cm左右的茎段(含叶芽),转接到第一再分化培养基上培养40天,获得再生植株,所述第一再分化培养基为包括1mg/L 6-苄氨基腺嘌呤、1.5mg/L吲哚丁酸、质量分数0.6%琼脂和质量分数2.5%蔗糖的MS培养基,pH值为5.85;

3)将再生植株分割成2cm左右的茎段(含叶芽),转接到第二再分化培养基上培养50天,得到完整植株。所述第二再分化培养基为包括1.4mg/L 1-萘乙酸、质量分数0.7%琼脂和质量分数3%蔗糖的1/2MS培养基,pH值为5.90。

太阳城集团增殖系数=单位种子扩繁植株数目/单位种子数

太阳城集团成活率(%)=移栽成活无菌幼苗数目/移栽无菌幼苗总数

每粒正常萌发的种子待生长到一定高度后,通过再分化,均能被切割成16~24个含叶芽的茎段,每个茎段在第二再分化培养基中能够形成完整植株。单粒种子最大增殖系数为18,成活率为86.5%。

实施例4

太阳城集团肋脉野豌豆的扩繁方法扩繁效果分析

通过本申请扩繁方法可以在短期内可获得大量的肋脉野豌豆再生苗。根据统计显示:每粒种子可扩繁出完整幼苗16~24株,有效的提高了肋脉野豌豆种子的利用效率。

实施例5

肋脉野豌豆扩繁根系诱导效果分析

太阳城集团通过对完整植株培养基的分化效果进行分析,第二再分化培养基激素的含量对无菌扦插苗产生的影响如表1所示。由表1我们可以看出,将材料置于pH值为5.90的1/2MS+0.8mg/LNAA(1-萘乙酸)+2%蔗糖+0.7%琼脂的培养基中,培养约40~90d,可形成完整植株,完整植株形成率高达60%。

表1:第二再分化培养基对完整植株生根效果分析

实施例6

肋脉野豌豆炼苗移栽效果

太阳城集团本实施例在内蒙古农牧业科学院综合楼牧草遗传育种实验室进行,具体操作步骤为:1)将三角瓶中已形成完整植株的封口膜去掉,对于长势过高的幼苗顶部剪去,利用镊子轻轻的将瓶底培养基打碎,切记勿伤到根系;2)向三角瓶中加入无菌水,开口状态下在室内放置2d后,从瓶中取出幼苗,洗净根部培养基;3)将放置2天的幼苗移栽到基质组成为:沙土:营养土=2:1口径为5~10cm的塑料盆中,覆上遮阴网,保湿保温,经10d后,去掉遮阴网,幼苗便可成活,成活率可达80%以上,移栽效果如图4和图5所示。

以上所述仅是本发明的优选实施方式,应当指出,对于本技术领域的普通技术人员来说,在不脱离本发明原理的前提下,还可以做出若干改进和润饰,这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。

太阳城集团本文
本文标题:一种肋脉野豌豆的扩繁方法.pdf
链接地址:http://zh228.com/p-6570797.html
太阳城集团我们 - 网站声明 - 网站地图 - 资源地图 - 友情链接 - - 联系我们

copyright@ 2017-2018 zhuanlichaxun.net网站版权所有
经营许可证编号:粤ICP备17046363号-1 
 


收起
展开
葡京赌场|welcome document.write ('');