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一种提高仔猪存活率的复方胸腺肽Α1注射液及制备方法.pdf

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一种 提高 仔猪 存活率 复方 胸腺肽 注射液 制备 方法
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摘要
申请专利号:

CN201310015887.7

申请日:

20130117

公开号:

太阳城集团CN103071148B

公开日:

20140312

当前法律状态:

有效性:

有效

法律详情:
IPC分类号: A61K38/22,A61K9/08,A61P37/04,A61P1/12,A61P31/04,A61K36/71,A61K31/185,A61K31/375 主分类号: A61K38/22,A61K9/08,A61P37/04,A61P1/12,A61P31/04,A61K36/71,A61K31/185,A61K31/375
申请人: 湖北武当动物药业有限责任公司
发明人: 张伟才,陈国明,张昌林
地址: 442100 湖北省十堰市房县城关镇桃园路
优先权: CN201310015887A
专利代理机构: 十堰博迪专利事务所 代理人: 宋志雄
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法律状态
申请(专利)号:

太阳城集团CN201310015887.7

授权太阳城集团号:

法律状态太阳城集团日:

法律状态类型:

摘要

发明提供一种提高仔猪存活率的复方胸腺肽α1注射液及其制备方法,其由胸腺肽α11-2份、牛磺酸3-5份、谷氨酰胺5-10份、维生素C10-15份、苦参20-35份、白头翁10-15份、白术5-10份、诃子3-5份制成。本发明兽药组合物疗效高、安全可靠、无毒、无害、无残留,能够显著提高仔猪免疫力,有效防治猪瘟、圆环病毒等引起的免疫抑制性疾病;能中和肠道内毒素和修复受损肠道黏膜,优化肠道内细菌群结构,缓解仔猪断奶应激反应,有效防治仔猪黄白痢、断奶应激性腹泻及其败血症。生产出的药物能够大大提高仔猪成活率,通过实际应用,仔猪注射使用后成活率可达98%以上。本发明运用壳聚糖作为絮凝剂研究开发提纯中药,成本低廉,安全无毒,操作简便。

权利要求书

太阳城集团1.一种提高仔猪存活率的复方胸腺肽α1注射液,其特征在于由下述重量份的原料制成:胸腺肽α1 1-2份、牛磺酸3-5份、谷氨酰胺5-10份、维生素C 10-15份、苦参20-35份、白头翁10-15份、白术5-10份、诃子3-5份。2.根据权利要求1所述的一种提高仔猪存活率的复方胸腺肽α1注射液,其特征在于:胸腺肽α1 1份、牛磺酸4份、谷氨酰胺8份、维生素C 12份、苦参25份、白头翁12份、白术7份、诃子4份。3.一种提高仔猪存活率的复方胸腺肽α1注射液的制备方法如下:(1)按重量份数称取苦参20-35份、白头翁10-15份、白术5-10份、诃子3-5份为原料;(2)将上述药材混合,加工成粗粉;(3)用符合国家卫生标准的饮用水按水和药的重量比为3:1,混合,在室温下浸泡2小时;(4)浸泡后,煎煮两次,第一次加水的重量是原称量药材重量的5-8倍,煎煮1.5小时;第二次加水的重量是原称量药材重量的4-6倍,煎煮1.0小时,合并两次煎液,过滤,取滤液,备用;(5)将(4)滤液合并煎煮,过滤,将滤液浓缩至与原药材比例为1:1时,冷却至40℃-50℃,加入壳聚糖量为药液体积的2%-4%,搅拌均匀,放置12小时,备用;(6)倒出(5)上清液,加入0.3%的注射级别的活性炭,加热至80℃,加热太阳城集团为30分钟,吸附脱色后,过滤;备用;(7)在(6)过滤液中用20%-40%氢氧化钠溶液调pH值,调至5.5-7.0,用4号滤棒过滤至澄清,备用;(8)称取胸腺肽α1 1-2份、牛磺酸3-5份、谷氨酰胺5-10份、维生素C 10-15份,加入注射用水30-50份中,加热至60-70℃,搅拌溶解,备用;(9)将(7)、(8)备用液进行合并,用20%-40%氢氧化钠溶液调 pH值,调至6.0-7.0,用加注射用水至每ml药液中含原生药1克,用4号滤棒过滤至澄清;(10)用灌封机将上述药液灌装在安瓿瓶内,采用121℃、0.15Mpa 流通蒸汽灭菌30分钟即成。

说明书

技术领域

太阳城集团本发明属于兽药制剂领域,具体涉及一种提高仔猪存活率的复方胸腺肽α1注射液及制备方法。

背景技术

猪的生长阶段分为仔猪、保育猪和育肥猪,但仔猪阶段最容易受各类病原体侵袭,是猪群一生中死亡率最高的一个阶段,约占整个猪群死亡率的80%左右。仔猪由于自身免疫系统尚未发育完善,抗病力较差,因此极易感染如猪瘟、圆环病毒等引起的免疫抑制性疾病和仔猪黄、白痢等消化系统疾病。目前猪瘟、圆环病毒等引起的免疫抑制性疾病一直是危害我国养猪业的主要疾病之一,并且愈演愈烈,特别是对于仔猪危害性更大、引起的死亡率也更高,给养猪业造成了严重的经济损失。仔猪断奶后,由吃母乳变化为吃固体的饲料,由此极易磨损肠道黏膜,造成肠道黏膜的绒毛萎缩,营养成分必须通过小肠中绒毛吸收,因此营养成分不能被很好的消化吸收,造成肠道营养物质发酵、扰乱肠道正常菌群环境,常常引起严重的大肠杆菌、沙门氏菌感染,导致顽固性腹泻。大肠杆菌、沙门氏菌在代谢过程中产生肠道内毒素,极易进一步引起败血症,加剧仔猪的死亡。

目前,兽医临床上用于防治免疫抑制性疾病的药很少,并且效果不甚理想,很难满足临床需要。在控制腹泻方面一般采用抗生素、磺胺类药物,由于长期滥用抗生素、磺胺类药物,使得对很多菌株产生耐药性,这样用药剂量大大增加,肝肾毒性增强,不仅增加了用药成本,而且还增加了抗生素残留以及毒副作用对人体的危害。兽医临床上为了解决免疫抑制性疾病和腹泻类疾病,也有采用中药制剂进行防治,但多为散剂,气味大,用药量大,很难给仔猪口服给药,存在生物利用度差,造成药材浪费,治疗效果不理想的情况。

发明内容

本发明提供一种提高仔猪存活率的复方胸腺肽α1注射液及制备方法,能够显著提高仔猪免疫力,有效防治猪瘟、圆环病毒等引起的免疫抑制性疾病;能中和肠道内毒素和修复受损肠道黏膜,优化肠道内细菌群结构,缓解仔猪断奶应激反应,有效防治仔猪黄白痢、断奶应激性腹泻以及败血症的产生,通过控制仔猪以上两大类疾病,从而达到大大提高仔猪成活率的目的。

太阳城集团为解决上述技术问题,本发明采用的技术方案是:一种提高仔猪存活率的复方胸腺肽α1注射液,由下述重量份的原料制成:

太阳城集团胸腺肽α1 1-2份、牛磺酸3-5份、谷氨酰胺5-10份、维生素C 10-15份、苦参20-35份、白头翁10-15份、白术5-10份、诃子3-5份。

太阳城集团一种提高仔猪存活率的复方胸腺肽α1注射液,其特征在于:

胸腺肽α1 1份、牛磺酸4份、谷氨酰胺8份、维生素C 12份、苦参25份、白头翁12份、白术7份、诃子4份。

太阳城集团一种提高仔猪存活率的复方胸腺肽α1注射液,按如下制备方法进行:

太阳城集团(1)按重量份数称取苦参20-35份、白头翁10-15份、白术5-10份、诃子3-5份为原料;

(2)将上述药材混合,加工成粗粉;

(3)用符合国家卫生标准的饮用水按水和药的重量比为3:1,混合,在室温     

下浸泡2小时;

(4)浸泡后,煎煮两次。第一次加水的重量是原称量药材重量的5-8倍,煎煮1.5小时;第二次加水的重量是原称量药材重量的4-6倍,煎煮1.0小时,合并两次煎液,过滤,取滤液,备用;

(5)将(4)中滤液合并煎煮,过滤,将滤液浓缩至与原药材比例为1:1时,冷却至40℃-50℃,加入壳聚糖量为药液体积的2%-4%,搅拌均匀,放置12小时,备用;

太阳城集团(6)倒出(5)上清液,加入0.3%的注射级别的活性炭,加热至80℃,加热太阳城集团为30分钟,吸附脱色后,过滤;备用;

(7)在(6)过滤液中用20%-40%氢氧化钠溶液调pH值,调至5.5-7.0,用4号滤棒过滤至澄清,备用;

(8)称取胸腺肽α1 1-2份、牛磺酸3-5份、谷氨酰胺5-10份、维生素C 10-15份,加入注射用水30-50份中,加热至60-70℃,搅拌溶解,备用;

(9)将(7)、(8)备用液进行合并,用20%-40%氢氧化钠溶液调  pH值,调至6.0-7.0,用加注射用水至每ml药液中含原生药1克。用4号滤棒过滤至澄清;

太阳城集团(10)用灌封机将上述药液灌装在安瓿瓶内,采用121℃、0.15Mpa 流通蒸汽灭菌30分钟即成。

本发明的优点和有益的效果为:

1. 本品无抗生素残留、无毒副作用,能够显著提高仔猪免疫力,能中和肠道内毒素和修复受损肠道黏膜,优化肠道内细菌群结构,缓解仔猪断奶应激反应。

2. 本品有效治疗猪瘟、圆环病毒等引起的免疫抑制性疾病和仔猪黄白痢、断奶应激性腹泻以及败血症。

3. 对于仔猪出生3天后每头注射本品0.2ml,可有效预防仔猪不得黄白痢;在断奶当天每头注射本品0.5ml, 可有效预防仔猪断奶应激性腹泻。通过以上两次注射后,可提高仔猪的抗病力,有效预防仔猪各种免疫抑制性疾病,大大提高仔猪存活率。

太阳城集团4. 在中药纯化方面,本发明运用新工艺研究开发提纯中药。传统中药提取采用水提醇沉法作为去除杂质的分离手段,水提醇沉法不仅浪费乙醇资源,污染环境,增加成本,而且有效成分损失严重,成品稳定性差。本发明使用壳聚糖作为絮凝剂,壳聚糖不但有良好的絮凝、澄清作用,成本低廉,安全无毒,操作简便,可用于大部分中草药的提取精制,而且可以提高机体的免疫力、无毒、无味、无副作用。

其疗效高、见效快、安全可靠、无抗生素残留、无毒副作用等优点,本发明运用新工艺研究开发提纯中药。使用壳聚糖作为絮凝剂,壳聚糖不但有良好的絮凝、澄清作用,成本低廉,安全无毒,操作简便,可用于大部分中草药的提取精制,而且可以提高机体的免疫力、无毒、无味、无副作用。

太阳城集团以上诸药通过合理的配伍,从多角度提高仔猪的免疫能力,排出及中和肠道内毒素和修复受损肠道黏膜,优化肠道内细菌群结构,缓解仔猪断奶应激反应。从而有效控制仔猪的各种免疫抑制性疾病和仔猪黄白痢、断奶应激性腹泻以及败血症,达到提高仔猪存活率的目的。

具体实施方式

实施例 :一种提高仔猪存活率的复方胸腺肽α1注射液,由下述重量份的原料制成:

胸腺肽α1 1-2份、牛磺酸3-5份、谷氨酰胺5-10份、维生素C 10-15份、苦参20-35份、白头翁10-15份、白术5-10份、诃子3-5份。

按如下制备方法进行:

(1)按重量份数称取苦参20-35份、白头翁10-15份、白术5-10份、诃子3-5份为原料;

太阳城集团(2)将上述药材混合,加工成粗粉;

(3)用符合国家卫生标准的饮用水按水和药的重量比为3:1,混合,在室温下浸泡2小时;

(4)浸泡后,煎煮两次。第一次加水的重量是原称量药材重量的5-8倍,煎煮1.5小时;第二次加水的重量是原称量药材重量的4-6倍,煎煮1.0小时,合并两次煎液,过滤,取滤液,备用;

(5)将(4)滤液合并煎煮,过滤,将滤液浓缩至与原药材比例为1:1时,冷却至40℃-50℃,加入壳聚糖量为药液体积的2%-4%,搅拌均匀,放置12小时,备用;

太阳城集团(6)倒出(5)上清液,加入0.3%的注射级别的活性炭,加热至80℃,加热太阳城集团为30分钟,吸附脱色后,过滤;备用;

太阳城集团(7)在(6)过滤液中用20%-40%氢氧化钠溶液调pH值,调至5.5-7.0,用4

太阳城集团号滤棒过滤至澄清,备用;

太阳城集团(8)称取胸腺肽α1 1-2份、牛磺酸3-5份、谷氨酰胺5-10份、维生素C 10-15份,加入注射用水30-50份中,加热至60-70℃,搅拌溶解,备用;

太阳城集团(9)将(7)、(8)备用液进行合并,用20%-40%氢氧化钠溶液调   pH值,调至6.0-7.0,用加注射用水至每ml药液中含原生药1克。用4号滤棒过滤至澄清;

(10)用灌封机将上述药液灌装在安瓿瓶内,采用121℃、0.15Mpa 流通蒸汽灭菌30分钟即成。

一、 制备的兽药制剂对大白鼠的急性毒性试验

1、   材料与方法

1.1 动物:大白鼠  Wister系,河北北方学院动物中心提供体重180-200g。

1.2  方法:取大白鼠50只,随机分成5组,每组10只,雌雄各半,实验前在恒定条件下饲养一周,健康状况良好。本兽药制剂按不同给药剂量分组,每日一次灌胃内服,连续观察7天。

结果:大白鼠内服本兽药制剂后,在7天的观察期间,饮水和采食量均正常,不出现任何临床中毒症状和死亡。

太阳城集团表2   兽药制剂对大白鼠的急性毒性试验

                                                 

 结论:大白鼠口服本制剂剂量达到16(ml/kg),临床推荐本制剂用量为0.1ml/kg,已超出临床推荐用量100倍以上仍不出现任何中毒症状和死亡,按照毒理学评价标准,认为本制剂属于无毒物质。

二、本发明复方胸腺肽α1注射液对防治仔猪黄白痢、断奶应激性腹泻和存活率的疗效验证如下:

  1 材料与方法 

太阳城集团  1.1 试验药品 

复方胸腺肽α1注射液  10ml*10支   

盐酸头孢噻呋注射液   10ml*10支  含量10ml :0.5g  批号:20120302,河南某动物药业公司生产,经本公司检测合格。

  1.2 试验动物及分组 

太阳城集团受试动物,窝三元杂交1日龄健康哺乳仔猪300头,随机分为试验组、阳性对照组和阴性对照组;每组100只。

  1.3 试验方法 

  在哺乳仔猪的3日龄和断奶当日,分别对试验组、阳性对照组和阴性对照组分别肌肉注射复方胸腺肽α1注射液 、盐酸头孢噻呋注射液和生理盐水,试验仔猪按照猪场管理进行常规饲养。具体用药量如下表:

表 1 试验仔猪分组及药物保健用量 

结果与分析 

复方胸腺肽α1注射液保健对仔猪存活率的影响 

太阳城集团由表1可以看出,对哺乳仔猪的3日龄和断奶当日肌肉注射复方胸腺肽α1注射液后,试验组仔猪的存活率达到97%,比阳性对照组高12%,差异极显著(P<0.01),比阴性对照组高24%,差异极显著(P<0.01)。

太阳城集团复方胸腺肽α1注射液保健对仔猪黄白痢的影响 

太阳城集团由表1可以看出,对哺乳仔猪的3日龄和断奶当日肌肉注射复方胸腺肽α1注射液后,试验组仔猪的黄白痢发生率为2%,比阳性对照组低6%,差异极显著(P<0.01),比阴性对照组低14%,差异极显著(P<0.01)。

复方胸腺肽α1注射液保健对仔猪断奶应激性腹泻的影响 

由表1可以看出,对哺乳仔猪的3日龄和断奶当日肌肉注射复方胸腺肽α1注射液后,试验组仔猪的断奶应激性腹泻率为1%,比阳性对照组低6%,差异极显著(P<0.01),比阴性对照组低14%,差异极显著(P<0.01)。

三、复方胸腺肽α1注射液对猪瘟与猪圆环病毒Ⅱ型的混合感染的临床疗效观察

1 发病情况 

广东省某养殖户共养猪103头,均为肉用猪,体重约15—20 kg。出现了一种以咳嗽、喘气、发热为主要特征的疾病。自发病日起, 5 d内已死亡25头。场主曾用磺胺、青霉素等抗菌药治疗,效果不明显。经流行病学调查、临床症状和实验室诊断,最后确诊为猪瘟与猪圆环病毒Ⅱ型的混合感染。

2 临床症状 

病猪精神委靡,被毛粗乱,皮肤苍白,有的可见豆状黑斑,高热稽留,体温41 ℃左右,食欲减退,渴欲增加,大便干硬或呈糊状。咳嗽,呼吸迫促,眼结膜潮红,病程较长的猪有的衰竭死亡,有的成为僵猪。 

3 剖检变化 

各肠段充血、出血,肠系膜淋巴结和腹股沟淋巴结肿大、出血,切面呈大理石样;扁桃体肿大;肾肿大、淤血,表面呈沟回状,颜色呈土黄色,有点状出血;膀胱黏膜有较多出血点;胃黏膜有的水肿,肝脂肪变性而带

太阳城集团黄色,肺充血、水肿、淤血。 

4 实验室诊断 

太阳城集团4.1 猪瘟直接免疫荧光抗体试验 

剖检病猪,取其扁桃体、肾脏、淋巴结等组织。速冻1 min后,进行冰冻切片,厚度为6 μm,切片展贴于洁净载玻片上;经丙酮固定15 min后,用PBS缓冲液漂洗,自然风干;用猪瘟、猪细小病毒、猪病毒性腹泻的三价荧光抗体(购自中国兽药监察所)滴加于切片表面,于37 ℃下作用0.5 h后,轻漂洗,自然干燥;封固盖片,镜检。于荧光显微镜视野中,可见组织上皮细胞浆内呈现黄色、绿色或黄绿色,细胞核不着色,细胞轮廓分明,为猪瘟病毒感染阳性。 

太阳城集团4.2 圆环病毒多重聚合酶链式反应(PCR)检测 

采用农业部兽医诊断中心的圆环病毒PCR检测试剂盒。取血清,经蛋白酶、RNA酶等55 ℃消化过夜后,提取病毒模板DNA,进行多重PCR扩增,PCR结束后,取15 μL反应产物于10 g/L的琼脂糖凝胶中电泳,紫外透射仪中观察结果。结果显示,圆环病毒Ⅱ型阳性。

疗效评价指标:

临床疗效标准:痊愈  三天内临床症状消失,粪便颜色等性状及精神食欲正常;有效  三天内临床症状明显减轻,精神食欲好转;无效  三天内临床症状为消失,精神食欲差,病情继续发展和死亡。

表3  本发明对猪瘟与猪圆环病毒Ⅱ型的混合感染的临床疗效统计

太阳城集团试验结果表明:本发明的药物有十分确切和显著的临床疗效,对猪瘟与猪圆环病毒Ⅱ型的混合感染治愈率为95.1%,有效率为98%。

三、复方胸腺肽α1注射液对仔猪免疫功能的影响试验

1.1 试验动物分组及试验方法

太阳城集团受试动物,浙江某大型猪场,窝三元杂交1日龄健康哺乳仔猪20头,随机分为试验组和对照组,每组10只。在哺乳仔猪的3日龄和断奶当日,对试验组和对照组分别肌肉注射复方胸腺肽α1注射液和生理盐水分别为0.2ml/头,0.5ml/头。试验仔猪按照猪场管理进行常规饲养。断奶后12天采血,分离血清,测定血清IgG、溶血素,同时分离白细胞,进行玫瑰花环形成试验。

表4  复方胸腺肽α1注射液对仔猪免疫功能检测结果

结果与分析:

太阳城集团三个检测的指标都表明本发明药物对仔猪免疫功能有显著的增强作用,试验组与对照组相比成环率、溶血素OD值、IgG含量三个指标,P<0.05,表明实验组与对照组在提高仔猪免疫力方面差异显著。

各原料的药理药效简介如下:

胸腺肽α1:是胸腺分泌的具有生物活性的多肽类物质。是一种免疫调节剂,主要有增强免疫功能的作用。可提高各种原因诱导所致的免疫抑制动物的免疫功能。具有调节T淋巴细胞发育、分化和成熟的作用,同时修复受损的T淋巴细胞,在机体免疫系统中发挥着重要作用。

太阳城集团牛磺酸:①一种调节机体正常生理活动的活性物质,具有调节脂类消化与吸收,提高机体免疫力,增强细胞膜抗氧化能力,牛磺酸还是肠道内双歧菌的促生因子,优化肠道内细菌群结构等功能,缓解仔猪断奶应激反应;②防治缺铁性贫血有明显效果,它不仅可以促进肠道对铁的吸收,能提高仔猪的生长速度和饲料转化率;③牛磺酸可镇静、镇痛和消炎、强肝利胆作用,对肾毒性有保护作用。

谷氨酰胺:①维持肠道屏障的结构及功能,谷氨酰胺是肠道粘膜细胞代谢必需的营养物质,对维持肠道粘膜上皮结构的完整性起着十分重要的作用。在应激状态下,肠道粘膜上皮细胞内谷氨酰胺很快耗竭。当肠道缺乏谷氨酰胺时,肠道粘膜萎缩、绒毛变稀、变短甚至脱落,隐窝变浅,肠粘膜通透性增加,肠道免疫功能受损。临床实践证明,提供谷氨酰胺均可有效地防止肠道粘膜萎缩,改善肠道免疫功能,减少肠道细菌及内毒素。②谷氨酰胺具有重要的免疫调节作用,它是淋巴细胞分泌、增殖及其功能

维持所必需的。

太阳城集团维生素C:①提高机体的免疫力:参与免疫球蛋白的合成,白细胞含有丰富的VC,当机体感染时白细胞内的VC急剧减少,VC可增强中性粒细胞的趋化性和变形能力,提高杀菌能力。 ②提高机体的抗应激能力:机体受到异常的刺激,会引发交感神经兴奋、肾上腺髓质和皮质激素分泌增多。肾上腺髓质所分泌的肾上腺素和去甲肾上腺素是有酪氨酸转化而来,在此过程需要VC的参与。③中和细菌内毒素,大剂量能仰制病毒复制,增强机体抵抗力,同时还有抗组胺,抗缓激肽,慢性疾病

苦参:清热燥湿;祛风杀虫。主湿热泻痢;肠风便血;黄疸;小便不利;水肿;带下;阴痒;疥癣;麻风;皮肤瘙痒;湿毒疮疡。

白头翁:清热解毒;凉血止痢;燥湿杀虫

白术:健脾益气、燥湿利水、止汗、安胎。用于脾虚泄泻,水肿、自汗、胎动不安。

太阳城集团诃子:药性:苦、酸、涩、平,归肺、大肠经;功效:敛肺止咳,涩肠止泻,是治久泻久痢之常用药。

本发明选用胸腺肽α1、牛磺酸、谷氨酰胺、维生素C,从多角度全方位提高机体免疫能力,增强仔猪的抗病能力,达到有效防治仔猪免疫抑制性疾病,大大提高仔猪存活率的目的。

牛磺酸、维生素C均可提高机体的抗应激能力,有效防治仔猪断奶应激性反应,从而可以大大提高仔猪存活率。

谷氨酰胺、维生素C均可排出、中和机体内毒素,有效缓解仔猪的黄白痢和断奶应激性腹泻以及避免由内毒素引发的败血症,从而可以大大提高仔猪存活率。

太阳城集团牛磺酸、谷氨酰胺修复肠道受损黏膜,改善肠道菌群环境,有效防治仔猪的黄白痢和断奶应激性腹泻,从而可以大大提高仔猪存活率。

苦参、白头翁、白术、诃子,分别从多角度防治仔猪因各种原因引起的腹泻。

使用壳聚糖作为絮凝剂,壳聚糖不但有良好的絮凝、澄清作用,成本低廉,安全无毒,操作简便,可用于大部分中草药的提取精制,而且可以提高机体的免疫力、无毒、无味、无副作用。

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