太阳城集团

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用于抗微生物光动力疗法的糖取代的二羟基二氢卟酚和Β官能化二氢卟酚.pdf

关 键 词:
用于 微生物 动力 疗法 取代 羟基 二氢卟酚 官能 化二氢卟酚
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摘要
申请专利号:

太阳城集团CN201180038608.8

申请日:

20110722

公开号:

太阳城集团CN103096887A

公开日:

20130508

当前法律状态:

有效性:

有效

法律详情:
IPC分类号: A61K31/409,A61K31/19,A61K31/185,A61P31/04,A61P31/00 主分类号: A61K31/409,A61K31/19,A61K31/185,A61P31/04,A61P31/00
申请人: 拜欧利泰克医药销售公司,塞拉莫普泰克公司
发明人: D·艾澈,V·阿波切特,B·吉特,C·B·W·斯达克,A·维厄
地址: 马来西亚纳闽岛
优先权: 61/366,718
专利代理机构: 北京市铸成律师事务所 代理人: 孟锐
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法律状态
申请(专利)号:

CN201180038608.8

授权太阳城集团号:

法律状态太阳城集团日:

法律状态类型:

摘要

本发明提供了用于治疗和预防由人和动物中的病原微生物引起的传染性疾病的抗微生物分子缀合物。这些缀合物的关键是将二羟基二氢卟酚或β-官能化二氢卟酚连接于碳水化合物部分。经发现这些缀合物在防治由革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌(包括它们的抗性菌株)引起的细菌性感染方面是非常有效的。值得注意的是,它们在包括血液、血清及存在于患者身体中的其它体液在内的复杂环境中也是有效的。还提供了用来控制人和动物中的病原微生物的方法。

权利要求书

太阳城集团1.一种基于式1的用于消除微生物的碳水化合物和二羟基二氢卟酚的缀合物:其中:R是:包含一个或多个碳水化合物基团的取代基。2.一种基于式1或2的用于消除微生物的碳水化合物和二羟基二氢卟酚的缀合物:其中:R是:由1-15个碳原子组成的取代或未取代的烷基或氟烷基、苯基环或在邻位、间位或对位带有一个或多个取代基X的苯基环。其中X是:OH、-COOH、-NH、-CF、-F、-COOY、-NHY、-OY、-NH-Z-COOH或-CO-Z-NH;其中Y是:含有(CHCHO)部分且n=1-30的聚乙二醇残基;其中Z是:肽或寡肽。R是:包含一个或多个碳水化合物基团的取代基。3.一种基于式1的用于消除微生物的碳水化合物和二羟基二氢卟酚的缀合物:其中:R是:包含一个或多个碳水化合物基团的取代基。R是:由1-15个碳原子组成的取代或未取代的烷基、烯基、炔基或氟烷基、苯基环或在邻位、间位或对位带有一个或多个取代基X的苯基环;其中X是:OH、-COOH、-NH、-CF、-F、-COOY、-NHY、-OY、-NH-Z-COOH或-CO-Z-NH;其中Y是:含有(CHCHO)部分且n=1-30的聚乙二醇残基或碳水化合物部分;其中Z是:肽或寡肽。4.一种基于式1或2的用于消除微生物的碳水化合物和二羟基二氢卟酚的缀合物:其中:R是:由1-15个碳原子组成的取代或未取代的烷基、烯基、炔基或氟烷基、苯基环或在邻位、间位或对位带有一个或多个取代基X的苯基环;其中X是:OH、-COOH、-NH、-CF、-F、-COOY、-NHY、-OY、-NH-Z-COOH或-CO-Z-NH;其中Y是:含有(CHCHO)部分且n=1-30的聚乙二醇残基;其中Z是:肽或寡肽。R是:包含一个或多个碳水化合物基团的取代基。R是:由1-15个碳原子组成的取代或未取代的烷基、烯基、炔基或氟烷基、苯基环或在邻位、间位或对位带有一个或多个取代基X的苯基环;其中X是:OH、-COOH、-NH、-CF、-F、-COOY、-NHY、-OY、-NH-Z-COOH或-CO-Z-NH;其中Y是:含有(CHCHO)部分且n=1-30的聚乙二醇残基;其中Z是:肽或寡肽。5.一种基于式1或2的用于消除微生物的碳水化合物和二羟基二氢卟酚的缀合物:其中:R由4-15个碳原子组成的取代或未取代的烷基或氟烷基或者在间位或对位带有一个或多个取代基X的苯基环;其中X是:OH、-COOH、-NH、-CFR是:包含一个或多个碳水化合物基团的取代基。6.一种基于式1的用于消除微生物的碳水化合物和β-官能化二氢卟酚的缀合物:其中:R是:包含一个或多个碳水化合物基团的取代基。R是:由1-15个碳原子组成的取代或未取代的烷基、烯基、炔基或氟烷基或者在邻位、间位或对位被一个或多个CF-基团取代的苯基环。7.一种基于式1或2的用于消除微生物的碳水化合物和二羟基二氢卟酚的缀合物:其中:R是:由4-15个碳原子组成的取代或未取代的烷基或氟烷基或者在间位或对位带有一个或多个取代基X的苯基环;其中X是:OH、-COOH、-NH、-CFR是:包含一个或多个碳水化合物基团的取代基。R是:由1-15个碳原子组成的取代或未取代的烷基、烯基、炔基或氟烷基或者在邻位、间位或对位被一个或多个CF-基团取代的苯基环。8.一种基于式1的用于消除微生物的碳水化合物和二羟基二氢卟酚的缀合物:其中:R是:在间位或对位带有取代基X的苯基环;其中X是:葡糖基、半乳糖基、甘露糖基、2-乙酰胺基葡糖基、乳糖基、纤维素二糖基、麦芽糖基或3,4,6-三脱氧-3-(二甲基氨基)-D-木-已吡喃糖基取代基。9.一种基于式1或2的用于消除微生物的碳水化合物和二羟基二氢卟酚的缀合物:其中:R是:由4-15个碳原子组成的取代或未取代的烷基或氟烷基或者在间位或对位带有一个或多个取代基X的苯基环其中X是:OH、-COOH、-NH、-CF;R是:在间位或对位带有取代基X的苯基环;其中X是:葡糖基、半乳糖基、甘露糖基、2-乙酰胺基葡糖基、乳糖基、纤维素二糖基、麦芽糖基或3,4,6-三脱氧-3-(二甲基氨基)-D-木-已吡喃糖基取代基。10.一种基于式1的用于消除微生物的碳水化合物和β-官能化二氢卟酚的缀合物:其中:R是:在间位或对位带有取代基X的苯基环;其中X是:葡糖基、半乳糖基、甘露糖基、2-乙酰胺基葡糖基、乳糖基、纤维素二糖基、麦芽糖基或3,4,6-三脱氧-3-(二甲基氨基)-D-木-已吡喃糖基取代基。R是:由1-15个碳原子组成的取代或未取代的烷基、烯基、炔基或氟烷基或者在邻位、间位或对位被一个或多个CF-基团取代的苯基环。11.一种基于式1或2的用于消除微生物的碳水化合物和二羟基二氢卟酚的缀合物:其中:R是:由4-15个碳原子组成的取代或未取代的烷基或氟烷基或者在间位或对位带有一个或多个取代基X的苯基环;R是:在间位或对位带有取代基X的苯基环;其中X是:葡糖基、半乳糖基、甘露糖基、2-乙酰胺基葡糖基、乳糖基、纤维素二糖基、麦芽糖基或3,4,6-三脱氧-3-(二甲基氨基)-D-木-已吡喃糖基取代基。R是:由1-15个碳原子组成的取代或未取代的烷基、烯基、炔基或氟烷基或者在邻位、间位或对位被一个或多个CF-基团取代的苯基环。12.根据权利要求1-11所述的分子缀合物,其可有效破坏真实患者中的革兰氏阴性和革兰氏阳性微生物。13.根据权利要求1-11所述的分子缀合物,其中所述真实患者环境包括存在选自唾液、血液、血清、血浆及这些的组合的复杂环境。14.一种消除真实患者环境中的微生物的方法,包括步骤:选择根据权利要求1-11所述的分子缀合物,与靶向要消除的所述微生物的载体组分;对所述患者引入所述加载体的分子缀合物;给出太阳城集团使所述加载体的缀合物在所述靶向的微生物中积累;并以适当的波长照射所述靶向的微生物来活化所述分子缀合物以破坏所述微生物。

说明书

发明背景

1.相关案例太阳城集团

本申请要求Daniel Aicher、Volker Albrecht、Burkhard Gitter、Christian B.W.Stark和Arno Wiehe于2010年7月22日提交的标题为“Glyco-substituted Dihydroxy-Chlorins and beta-functionalized Chlorins for Anti-Microbial Photodynamic Therapy”的第61/366,718系列号美国临时申请的权益及优先权,该申请的内容以引用的方式并入本文。

2.发明领域

本发明通常涉及光动力疗法,更具体地说,涉及使用糖取代的二羟基二氢卟酚或糖取代的β-官能化二氢卟酚衍生物作为用于治疗和预防人和动物中的微生物传染性疾病的光敏剂。

3.现有技术

光动力疗法(PDT)是目前正在开发用于多种医疗应用的最有前途的新技术之一,并且尤其是一种公认的破坏肿瘤的治疗方法。光动力疗法利用光和光敏剂(染料)达到其所需的医疗效果。

抗微生物光动力疗法是非常有前途的相对较新的方法,用于防治细菌性感染,即使是对于抗性菌株也是如此。幸运的是,尚没有报导细菌获得对光动力破坏的抗性,而且也没有这种可能性,因为“杀菌物质”是氧。用光敏剂处理的细菌细胞经显示成功地被光照杀灭。由于细菌与恶性细胞之间的差异明显,对于抗微生物PDT需要具有不同作用模式的光敏剂。

太阳城集团光敏剂的有效性极其地取决于细菌细胞壁,因为其成为了敏化剂渗透的限制性因素。虽然PDT可充分地杀灭革兰氏阳性细胞,但革兰氏阴性细胞对杀菌更具抗性。

太阳城集团采用抗微生物PDT的主要问题是血液组分的阻塞作用,血液组分的存在降低了光敏剂的活性。当添加血清或血液时,PBS缓冲液中的高杀菌光动力活性可以被显著地降低。

针对细菌性感染提高光敏剂的特异性和PDT的有效性的预期方法之一是使光敏剂与配体载体缀合,后者特异性地结合于靶细胞表面上的受体。在现有技术中,已经采用了不同的方法来有效地靶向病原体或感染的细胞。

Hasan等人的第6,977,075号美国专利公开了使用抗生素和PDT杀灭细胞内病原体的方法。使用缀合的光敏剂靶向细胞内病原体。使用的靶向部分为靶向巨噬细胞或与病原体相互作用的分子或大分子结构。没有公开缀合物针对革兰氏阴性菌以及在复杂环境中的有效性。

太阳城集团Bommer等人的第6,573,258号美国专利描述了阳离子性卟啉,其在以低得多的浓度存在和短得多的照射太阳城集团的情况下能有效地靶向革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌两者。所述的新型卟啉具有一个由至少一个长度在6与22个碳之间的烃链组成的疏水尾。。细菌靶向取决于碳链长度,并且不是非常有效。

Hasan等人的第6,462,070号美国专利公开了缀合于聚赖氨酸的光敏剂,其连接于组胺素(histatin)靶向部分以治疗口腔的微生物感染病症。这些物质在有体液(如唾液、血液等)存在的情况下起作用较困难。

第5,466,681号美国专利描述了适用于治疗由病原微生物所致的传染性疾病的多种缀合物。所述缀合物包含至少一种偶联于微生物受体的试剂,即碳水化合物载体,其能够选择性地结合于微生物。该专利公开了包含至少一种试剂的缀合物,所述试剂为偶联于微生物受体的抗感染剂。提到了诸如抗生素、合成药物和类固醇之类的试剂。由于光敏剂本身不与微生物相互作用,因此在该专利中未考虑将它们作为描述的试剂,并且也没在其中进行公开。

太阳城集团其它有前途的方法有太阳城集团卟啉和碳水化合物的缀合物。出版物:“Nitroglycosylated meso-arylporphyrins as Photoinhibitors of Gram positive Bacteria”V.Sol,P.Branland,R.Granet,C.Kaldapa,B.Verneuil,P.Krausz,Bioorg.Med.Chem.Lett.1998,8,3007-3010描述了糖基化硝基芳基取代的卟啉针对革兰氏阳性菌的光动力活性,但没有描述针对革兰氏阴性菌的效力和在复杂环境中的效力。此外,缀合物仅在当分子中存在硝基-基团时显示光动力活性。

在本发明中提到的二氢卟酚为卟啉衍生物,其中芳族系统在β-位的一个双键不存在。目前许多光敏剂并非足够有效,因为它们在光谱的红色区域吸收低。二氢卟酚具有的优点是,它们在电磁波谱的红色及近红外区域中具有强吸收,这使得光能够较深地渗透到组织当中。MacAlpine等人的第7,022,843B1号美国专利公开了多种作为光敏剂的β,β’-二羟基间位取代的二氢卟酚,但没有提供治疗微生物传染性疾病的指导。相反,Wiehe等人的第WO2010/033678号国际公开公开了不对称间位取代的卟啉和二氢卟酚,其用于诊断和PDT应用,包括病毒或传染疾病,然而没有明确地给出它们在复杂介质中对于革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌的有效性。

仍然迫切需要开发能够高活性地靶向革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌两者的分子缀合物。还有它们需要在通常有血液及其它体液存在的体内条件下起作用,以供患者直接来帮助他们免受微生物侵害。

发明目的及简述

本发明的一个目的是提供用于靶向引起传染性疾病的病原微生物的生物活性缀合物。

本发明的另一目的是开发光动力方法,用于在像血液、血清和唾液之类的复杂环境中灭活/减少细菌(革兰氏阳性和革兰氏阴性两者)。

本发明的又一目的是使用二羟基二氢卟酚-糖缀合物,用于抗微生物光动力疗法的应用。

太阳城集团本发明的再一目的是使用β-官能化二氢卟酚衍生物和碳水化合物的化学稳定的缀合物,用于抗微生物光动力疗法的应用。

太阳城集团本发明进一步的目的是提供制备和纯化糖取代的二氢卟吩衍生物的方法。

太阳城集团简单地说,本发明提供用于治疗和预防由人和动物中的病原微生物引起的传染性疾病的抗微生物分子缀合物。这些缀合物的关键是将二羟基二氢卟酚和β-官能化二氢卟酚连接于碳水化合物部分。本发明有效地起作用以防治由革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌(包括它们的抗性菌株)引起的感染。值得注意的是,它们在包括血液、血清及存在于患者身体中的其它体液在内的复杂环境中也是有效的。还提供了用来控制人和动物中的病原微生物的方法。

结合附图阅读,由以下的说明书将显而易见本发明的上述及其它目的、特征和优点。

附图说明

太阳城集团图1.-显示使用5,10,15-三-(3-β-D-葡糖基苯基)-20-[3,5-双-(三氟甲基)-苯基]-卟啉的光动力灭活的一个实施方案

太阳城集团图2.-显示使用5,10,15-三-(3-β-D-葡糖基苯基)-20-[3,5-双-(三氟甲基)-苯基]-17,18-二羟基-17,18-二氢卟酚的光动力灭活的一个实施方案。

图3.-显示使用5,10,15-三-(3-β-D-半乳糖基苯基)-20-[3,5-双-(三氟甲基)-苯基]-17,18-二羟基-17,18-二氢卟酚的光动力灭活的一个实施方案。

图4.-显示使用5,10,15-三-(3-α-D-甘露糖基苯基)-20-[3,5-双-(三氟甲基)-苯基]-17,18-二羟基-17,18-二氢卟酚的光动力灭活的一个实施方案。

太阳城集团图5.-显示使用5,10,15-三-(3-β-D-乳糖基苯基)-20-[3,5-双-(三氟甲基)-苯基]-17,18-二羟基-17,18-二氢卟酚的光动力灭活的一个实施方案。

图6.-显示使用5,10,15,20-四-(3-β-D-葡糖基苯基)-7,8-二羟基-7,8-二氢卟酚的光动力灭活的一个实施方案。

图7.-显示使用5,10,15,20-四-(3-β-D-葡糖基苯基)-7,8-二羟基-7,8-双-(三氟甲基)-7,8-二氢卟酚的光动力灭活的一个实施方案。

优选实施方案详述

在本发明中公开了在复杂环境中灭活/减少细菌的光动力方法。如在现有技术中所见,已表明在像血清血浆或血液之类的体内存在的复杂介质中成功地防治细菌性感染是最困难的目标之一。本文中,抗微生物光动力疗法用来利用缀合的光敏剂靶向病原微生物以治疗各种传染性疾病,并且还用于在通常见于真实患者体内的复杂介质中诱导光破坏。本文所公开的分子缀合物的主要优点之一是它们能够靶向革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌两者,包括它们的抗性菌株。分子缀合物包含连接于碳水化合物部分的光敏剂。已经意外地发现,二羟基二氢卟酚和β-官能化二氢卟酚衍生物的存在对缀合物活性产生关键性影响。如图1中所示,卟啉和碳水化合物部分的缀合物仅在高浓度时显示显著的细菌光动力灭活。

太阳城集团本文所公开的碳水化合物的缀合物用于提高对微生物的特异性。缀合物的靶向部分的选择性使得能提高光敏剂的靶向效果,最大限度地减少剂量和潜在的不良副作用。

太阳城集团此外,本发明缀合的光敏剂提高现有技术的生物活性化合物的有效性,由于它们在电磁波谱的红色及近红外区域的长波长处有较高的吸收而提供较深的渗透。

太阳城集团此外,本发明提供的缀合物具有容易制备的优点。由化学稳定的卟啉或β-官能化-二氢卟酚衍生物开始,可以通过使用三氯乙酰亚胺酯作为糖基供体实现糖基化

太阳城集团在优选的实施方案中,用于消除/减少/破坏真实患者的复杂环境中的病原微生物的碳水化合物和二羟基二氢卟酚缀合化合物具有通式:

其中B和C选自:

且R是包含一个或多个碳水化合物基团的取代基。

在另一实施方案中,用于消除微生物的碳水化合物和二羟基二氢卟酚的缀合物基于式1或2:

在此实施方案中,R是包含一个或多个碳水化合物基团的取代基;R1是由1-15个碳原子组成的取代或未取代的烷基或氟烷基、苯基环或者在苯基环的邻位、间位或对位带有一个或多个取代基X的苯基环。取代基X是OH、-COOH、-NH2、-CF3、-F、-COOY、-NHY、-OY、-NH-Z-COOH和-CO-Z-NH2,取代基Y是含有(CH2CH2O)n部分且n=1-30的聚乙二醇残基,且取代基Z是肽或寡肽。

太阳城集团在另一实施方案中,用于消除微生物的碳水化合物和二羟基二氢卟酚的缀合物基于式3:

太阳城集团在此式中,R是包含一个或多个碳水化合物基团的取代基;R1是由1-15个碳原子组成的取代或未取代的烷基、烯基、炔基或氟烷基、苯基环或者带有一个或多个取代基X的苯基环。苯基环的取代基X在苯基环的邻位、间位或对位,并且是OH、-COOH、-NH2、-CF3、-F、-COOY、-NHY、-OY、-NH-Z-COOH或-CO-Z-NH2。取代基Y是含有(CH2CH2O)n部分且n=1-30的聚乙二醇残基或碳水化合物部分;且Z是肽或寡肽。或者,为了具有基于式3的用于消除病原微生物的碳水化合物和β-官能化二氢卟酚,R1是由1-15个碳原子组成的取代或未取代的烷基、烯基、炔基或氟烷基或者在苯基环的邻位、间位或对位被一个或多个CF3-基团取代的苯基环。

太阳城集团在另一实施方案中,用于消除病原微生物的碳水化合物和二羟基二氢卟酚缀合化合物基于式4或5:

太阳城集团在此实施例中,R是包含一个或多个碳水化合物基团的取代基;R1是由1-15个碳原子组成的取代或未取代的烷基、烯基、炔基或氟烷基、苯基环或者在苯基环的邻位、间位或对位带有一个或多个取代基X的苯基环。取代基X是OH、-COOH、-NH2、-CF3、-F、-COOY、-NHY、-OY、-NH-Z-COOH或-CO-Z-NH2,Y是含有(CH2CH2O)n部分且n=1-30的聚乙二醇残基,且Z是肽或寡肽。

太阳城集团在另一实施方案中,用于破坏、消除和/或减少复杂环境中的病原微生物的缀合化合物基于式1或2;其中R是包含一个或多个碳水化合物基团的取代基;R1是由4-15个碳原子组成的取代或未取代的烷基或氟烷基或者在苯基环的间位或对位带有一个或多个取代基X的苯基环。取代基X是OH、-COOH、-NH2或-CF3。

太阳城集团在另一实施方案中,缀合化合物基于式4或5:

太阳城集团R是包含一个或多个碳水化合物基团的取代基;R1是由4-15个碳原子组成的取代或未取代的烷基或氟烷基或者在苯基环的间位或对位带有一个或多个取代基X的苯基环。取代基X是OH、-COOH、-NH2或-CF3。且R2是由1-15个碳原子组成的取代或未取代的烷基、烯基、炔基或氟烷基或者在邻位、间位或对位被一个或多个CF3-基团取代的苯基环。

在另一实施方案中,用于消除/减少微生物的化合物基于式1:

在该式中,R1为在间位或对位带有取代基X的苯基环,并且是葡糖基、半乳糖基、甘露糖基、2-乙酰胺基葡糖基、乳糖基、纤维素二糖基、麦芽糖基或3,4,6-三脱氧-3-(二甲基氨基)-D-木-已吡喃糖基取代基。

在另一实施方案中,用于消除/减少微生物的化合物基于式1或2:

在所述式中,R1是由4-15个碳原子组成的取代或未取代的烷基或氟烷基或者在间位或对位带有一个或多个取代基X的苯基环。取代基X选自OH、-COOH、-NH2和-CF3。R2为在间位或对位带有取代基Y的苯基环,并且是葡糖基、半乳糖基、甘露糖基、2-乙酰胺基葡糖基、乳糖基、纤维素二糖基、麦芽糖基或3,4,6-三脱氧-3-(二甲基氨基)-D-木-已吡喃糖基取代基。

在另一实施方案中,碳水化合物和β-官能化二氢卟酚化合物基于式1:

这里,R1为在间位或对位带有取代基X的苯基环,并且是葡糖基、半乳糖基、甘露糖基、2-乙酰胺基葡糖基、乳糖基、纤维素二糖基、麦芽糖基或3,4,6-三脱氧-3-(二甲基氨基)-D-木-已吡喃糖基取代基。R2是由1-15个碳原子组成的取代或未取代的烷基、烯基、炔基或氟烷基或者在邻位、间位或对位被一个或多个CF3-基团取代的苯基环。

在另一实施方案中,用于消除/破坏/减少病原微生物的缀合化合物基于式1或2:

其中R1是由4-15个碳原子组成的取代或未取代的烷基或氟烷基或者在间位或对位带有一个或多个取代基X的苯基环;且R2是在间位或对位带有取代基Y的苯基环。取代基Y是葡糖基、半乳糖基、甘露糖基、2-乙酰胺基葡糖基、乳糖基、纤维素二糖基、麦芽糖基或3,4,6-三脱氧-3-(二甲基氨基)-D-木-已吡喃糖基取代基。且R3是由1-15个碳原子组成的取代或未取代的烷基、烯基、炔基或氟烷基或者在邻位、间位或对位被一个或多个CF3-基团取代的苯基环。

太阳城集团在优选的实施方案中,灭活/减少/消除像血液、血清和唾液之类的真实患者复杂环境中的病原微生物(包括革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌)的光动力方法包括以下步骤:选择分子缀合物,所述分子缀合物选自之前描述的缀合化合物,与靶向要消除的微生物的载体组分;对含有病原微生物的环境引入或施用加载体的分子缀合物;给出太阳城集团使加载体的缀合物在靶向的微生物或污染的环境中积累;并以适当的波长照射治疗部位以活化分子缀合物和破坏病原微生物。温育太阳城集团依赖于多种因素而有所不同。在本文作为灭活/减少/消除微生物的光动力方法的实施例而描述的实验中,将污染的介质温育90分钟,之后才用652nm激光以100J/cm2照射以引发细菌细胞的光破坏。可以通过全身施加或在患处进行局部注射来施用缀合的光敏剂。或者,对于皮肤或皮肤附近的感染,可以局部施用缀合的光敏剂。

给出以下的实施例以对本领域普通技术人员提供有关如何制备本发明的二羟基二氢卟酚和β-官能化二氢卟酚衍生物的示例性公开和描述,并显示它们的抗微生物光动力活性,并且所述实施例不旨在限制发明人所认为的本发明的范围。已经努力地确保所用数字(例如,量、温度等)的准确性。但应考虑到有一些实验误差和偏差。此外,已采取最佳措施用化合物的系统IUPAC名称对其进行命名,然而基本参考的是基于实验光谱数据给出的结构式。

实施例

使用的所有试剂均购自商业供应商。二氯甲烷在使用之前经K2CO3蒸馏纯化。使用预涂在铝片上的Merck硅胶60(无荧光指示剂)进行薄层色谱法(TLC)。使用Fluka硅胶60,0.040-0.063mm(230-400目)实施快速色谱法。用Bruker AC250、AC500、ECX400、AMX500或AV700MHz仪器以CDCl3、(CD3)2CO、CD3OD或(CD3)2SO记录1H和13C NMR谱。化学位移d相对于作为内标的TMS或相对于残留溶剂峰的共振以ppm给出,J值以Hz给出。用Varian MAT771、Varian IonSpec QFT-7或Agilent6210ESI-TOF仪器记录质谱。使用二氯甲烷、丙酮或乙醇作为溶剂,以Specord S300(Analytik Jena)分光光度计记录电子吸收谱。

实施例1

制备糖取代的卟啉

1.1制备of5,10,15-三-[3-(2,3,4,6-四乙酰基-β-D-葡糖基)-苯基]-20-[3,5-双-(三氟甲基)-苯基]-卟啉

在典型的实验中,在氩气氛下,将Zn(II)-5,10,15-三-(3-羟苯基)-20-[3,5-双-(三氟甲基)-苯基]-卟啉(300mg,0.35mmol)溶解在40ml无水二氯甲烷中。然后加2,3,4,6-四乙酰基-D-葡萄糖三氯乙酰亚胺酯(1.5g,3mmol)和BF3·Et2O(10μl,0.08mmol)。搅拌1小时后,将混合物转移到分液漏斗中。用水洗涤有机层(2×50ml)并在减压下蒸发溶剂。为除去锌,将残留物溶解在40ml THF中,并加3ml盐酸(25%)。搅拌10分钟后,加水(50ml)和二氯甲烷(75ml)。分离有机层并用水洗涤(2×50ml)。用Na2SO4干燥后,在减压下蒸发溶剂。使用二氯甲烷/甲醇95:5作为洗脱剂,通过快速色谱法实现进一步的纯化。从二氯甲烷/甲醇水溶液中重结晶后得到为紫色结晶固体的分析纯产物(560mg,90%)。

太阳城集团mp:215°C;1H-NMR(500MHz,CDCl3):δ=-2.89(s,2H,NH),1.34-1.54(m,9H,3×OAc),1.98-2.09(m,27H,9×OAc),3.76-3.88(m,3H,H’ose’),4.01-4.10(m,3H,H’ose’),4.13-4.22(m,3H,H’ose’),5.14-5.21(m,3H,H’ose’),5.29-5.40(m,9H,H’ose’),7.43-7.46(m,3H,Ar),7.66-7.72(m,3H,Ar),7.84-7.97(m,6H,Ar),8.35(br s,1H,Ar),8.65-8.72,8.88-8.95(2m,10H,8×β-H,2×Ar)ppm;HRMS(ESI):C88H82F6N4O30Na+([M+Na]+):要求:1811.4810;实测:1811.4796;UV/Vis(CH2Cl2):λmax/nm(ε/dm3mol-1cm-1):419(196100),514(18900),589(5500),645(2500)。

太阳城集团1.2制备5,10,15-三-[3-(2,3,4,6-四乙酰基-β-D-半乳糖基)-苯基]-20-[3,5-双-(三氟甲基)-苯基]-卟啉

在典型的实验中,在氩气氛下,将Zn(II)-5,10,15-三-(3-羟苯基)-20-[3,5-双-(三氟甲基)-苯基]-卟啉(245mg,0.28mmol)溶解在40ml无水二氯甲烷中。然后加2,3,4,6-四乙酰基-D-半乳糖三氯乙酰亚胺酯(2.5g,5mmol)和BF3·Et2O(10μl,0.08mmol)。搅拌2天后,将混合物转移到分液漏斗中。用水洗涤有机层(2×50ml)并在减压下蒸发溶剂。为了除去锌,将残留物溶解在40ml THF中,并加3ml盐酸(25%)。搅拌10分钟后,加水(50ml)和二氯甲烷(75ml)。分离有机层并用水洗涤(2×50ml)。用Na2SO4干燥后,在减压下蒸发溶剂。使用二氯甲烷/甲醇95:5作为洗脱剂,通过快速色谱法实现进一步的纯化。从二氯甲烷/甲醇水溶液中重结晶后得到为紫色结晶固体的分析纯产物(243mg,48%)。

mp:180°C;1H-NMR(500MHz,CDCl3):δ=-2.87(s,2H,NH),1.25-1.43(m,9H,3×OAc),2.00-2.16(m,27H,9×OAc),3.97-4.17(m,9H,H’ose’),5.11-5.16(m,3H,H’ose’),5.29-5.36(m,3H,H’ose’),5.40-5.44(m,3H,H’ose’),5.57-5.62(m,3H,H’ose’),7.41-7.43(m,3H,Ar),7.66-7.72(m,3H,Ar),7.85-7.97(m,6H,Ar),8.35(br s,1H,Ar),8.65-8.71,8.88-8.95(2m,10H,8×β-H,2×Ar)ppm;HRMS(ESI):C88H83F6N4O30+([M+H]+):要求:1789.4991;实测:1789.5020;UV/Vis(CH2Cl2):λmax/nm(ε/dm3mol-1cm-1):418(179800),514(18100),548(5900),589(5400),645(2300)。

太阳城集团1.3制备5,10,15-三-[3-(2,3,4,6-四乙酰基-α-D-甘露糖基)-苯基]-20-[3,5-双-(三氟甲基)-苯基]-卟啉

在典型的实验中,在氩气氛下,将Zn(II)-5,10,15-三-(3-羟苯基)-20-[3,5-双-(三氟甲基)-苯基]-卟啉(300mg,0.35mmol)溶解在40ml无水二氯甲烷中。然后加2,3,4,6-四乙酰基-α-D-甘露糖三氯乙酰亚胺酯(1.75g,3.55mmol)和BF3·Et2O(10μl,0.08mmol)。搅拌4小时后,将混合物转移到分液漏斗中。用水洗涤有机层(2×50ml)并在减压下蒸发溶剂。为了除去锌,将残留物溶解在40ml THF中,并加1ml盐酸(25%)。搅拌10分钟后,加水(50ml)和二氯甲烷(75ml)。分离有机层并用水洗涤(2×50ml)。用Na2SO4干燥后,在减压下蒸发溶剂。使用二氯甲烷/甲醇95:5作为洗脱剂,通过快速色谱法实现进一步的纯化。从二氯甲烷/甲醇水溶液中重结晶后得到为紫色结晶固体的分析纯产物(472mg,76%)。

太阳城集团mp:150°C;1H-NMR(500MHz,CDCl3):δ=-2.87(s,2H,NH),1.72-1.78(m,9H,3×OAc),2.01-2.19(m,27H,9×OAc),4.08-4.15(m,3H,H’ose’),4.26-4.35(m,6H,H’ose’),5.34-5.42(m,3H,H’ose’),5.56-5.59(m,3H,H’ose’),5.62-5.66(m,3H,H’ose’),5.79-5.82(m,3H,H’ose’),7.53-7.57(m,3H,Ar),7.67-7.72(m,3H,Ar),7.91-8.01(m,6H,Ar),8.34(br s,1H,Ar),8.67-8.71,8.87-8.94(2m,10H,8×β-H,2×Ar)ppm;HRMS(ESI):C88H82F6N4O30Na+([M+Na]+):要求:1811.4810;实测:1811.4807;UV/Vis(CH2Cl2):λmax/nm(ε/dm3mol-1cm-1):418(508300),514(26900),549(9200),590(8100),646(3800)。

1.4制备of5,10,15-三-[3-(2,3,4,6,2’,3’,6’-七乙酰基-β-D-乳糖基)-苯基]-20-[3,5-双-(三氟甲基)-苯基]-卟啉

太阳城集团在典型的实验中,在氩气氛下,将Zn(II)-5,10,15-三-(3-羟苯基)-20-[3,5-双-(三氟甲基)-苯基]-卟啉(250mg,0.29mmol)溶解在40ml无水二氯甲烷中。然后加2,3,4,6,2’,3’,6’-七乙酰基-α-D-乳糖三氯乙酰亚胺酯(2.2g,2.82mmol)和BF3·Et2O(10μl,0.08mmol)。搅拌5小时后,将混合物转移到分液漏斗中。用水洗涤有机层(2×50ml)并在减压下蒸发溶剂。为了除去锌,将残留物溶解在40ml THF中,并加1ml盐酸(25%)。搅拌10分钟后,加水(50ml)和二氯甲烷(75ml)。分离有机层并用水洗涤(2×50ml)。用Na2SO4干燥后,在减压下蒸发溶剂。使用二氯甲烷/甲醇95:5作为洗脱剂,通过快速色谱法实现进一步的纯化。从二氯甲烷/甲醇水溶液中重结晶后得到为紫色结晶固体的分析纯产物(499mg,66%)。

太阳城集团mp:150°C;1H-NMR(400MHz,CDCl3):δ=-2.90(s,2H,NH),1.17-1.46(m,9H,3×OAc),1.82-2.16(m,54H,18×OAc),3.67-3.79(m,3H,H’ose’),3.82-3.93(m,6H,H’ose’),3.98-4.14(m,9H,H’ose’),4.28-4.50(m,6H,H’ose’),4.88-4.94(m,3H,H’ose’),5.02-5.08(m,3H,H’ose’),5.25-5.37(m,12H,H’ose’),7.41-7.44(m,3H,Ar),7.59-7.71(m,3H,Ar),7.80-7.96(m,6H,Ar),8.34(br s,1H,Ar),8.65-8.71,8.87-8.94(2m,10H,8×β-H,2×Ar)ppm;HRMS(ESI):C124H130F6N4O54Na+([M+Na]+):要求:2676.7385;实测:2676.7395;UV/Vis(CH2Cl2):λmax/nm(ε/dm3mol-1cm-1):418(361700),514(18200),548(5900),590(5600),645(2600)。

1.5制备5,10,15,20-四-[3-(2,3,4,6-四乙酰基-β-D-葡糖基)-苯基]-卟啉

太阳城集团在典型的实验中,在氩气氛下,将Zn(II)-5,10,15,20-四-(3-羟苯基)-卟啉(250mg,0.34mmol)溶解在36ml无水二氯甲烷/乙腈/四氢呋喃10:1:1中。然后加2,3,4,6-四乙酰基-D-葡萄糖三氯乙酰亚胺酯(3g,6mmol)和BF3·Et2O(15μl,0.12mmol)。搅拌4小时后,将混合物转移到分液漏斗中。用水洗涤有机层(2×50ml)并在减压下蒸发溶剂。为了除去锌,将残留物溶解在40ml THF中,并加2ml盐酸(25%)。搅拌10分钟后,加水(50ml)和二氯甲烷(75ml)。分离有机层并用水洗涤(2×50ml)。用Na2SO4干燥后,在减压下蒸发溶剂。使用二氯甲烷/甲醇95:5作为洗脱剂,通过快速色谱法实现进一步的纯化。从二氯甲烷/甲醇水溶液中重结晶后得到为紫色结晶固体的分析纯产物(471mg,70%)。

太阳城集团mp:216°C;1H-NMR(400MHz,(CD3)2CO):δ=-2.86(s,2H,NH),1.16-1.21(m,9H,3×OAc),1.91-2.16(m,39H,13×OAc),3.98-4.06(m,4H,H’ose’),4.09-4.15(m,8H,H’ose’),5.06-5.12(m,4H,H’ose’),5.27-5.33(m,4H,H’ose’),5.36-5.42(m,4H,H’ose’),5.74-5.79(m,4H,H’ose’),7.51-7.56(m,4H,Ar),7.73-7.79(m,4H,Ar),7.91-8.02(m,8H,Ar),8.89-8.97(m,8H,β-H)ppm;HRMS(ESI):C100H102N4O40Na+([M+Na]+):要求:2022.5996;实测:2022.5900;UV/Vis(CH2Cl2):λmax/nm(ε/dm3mol-1cm-1):418(346600),514(17000),548(6000),589(5100),645(2700)。

实施例2

制备糖基化的脱乙酰化二羟基二氢卟酚

太阳城集团2.1制备5,10,15-三-(3-β-D-葡糖基苯基)-20-[3,5-双-(三氟甲基)-苯基]-17,18-二羟基-17,18-二氢卟酚

太阳城集团在典型的实验中,将四氧化锇(100mg,0.39mmol)加到5,10,15-三-[3-(2,3,4,6-四乙酰基-β-D-葡糖基)-苯基]-20-[3,5-双-(三氟甲基)-苯基]-卟啉(469mg,0.26mmol)在二氯甲烷/吡啶1:1(26ml)中的搅拌溶液里。在0°C搅拌30分钟并在室温再搅拌2小时后,加亚硫酸氢钠在水/甲醇1:1(25ml)中的饱和溶液并将混合物搅拌18小时。反应混合物通过硅藻土过滤并经无水硫酸钠干燥。蒸发溶剂并以二氯甲烷/甲醇95:5为洗脱剂通过快速色谱法、接着通过从二氯甲烷/甲醇水溶液中重结晶来纯化残留物。从二氯甲烷/甲醇水溶液中重结晶后得到紫色结晶固体的5,10,15-三-[3-(2,3,4,6-四乙酰基-β-D-葡糖基)-苯基]-20-[3,5-双-(三氟甲基)-苯基]-17,18-二羟基-17,18-二氢卟酚(254mg,53%),为区位异构(regioisomeric)混合物。

太阳城集团在氩气氛下向5,10,15-三-[3-(2,3,4,6-四乙酰基-β-D-葡糖基)-苯基]-20-[3,5-双-(三氟甲基)-苯基]-17,18-二羟基-17,18-二氢卟酚(50mg,27μmol)在无水四氢呋喃/甲醇1:1(10ml)中的搅拌溶液里加入甲醇钠在无水甲醇中的溶液(1.5ml,0.06N)。4小时后,在减压下蒸发溶剂并使用RP18硅胶和用甲醇/水85:15作为洗脱剂,通过快速色谱法纯化粗产物。用二氯甲烷洗涤后得到为紫色结晶固体的标题产物(28mg,94%)。

mp:180°C;1H-NMR(400MHz,CD3OD):δ=3.34-3.87(m,18H,H’ose’),5.07-5.18(m,3H,H’ose’),6.11-6.35(m,2H,β-H),7.39-8.78(m,21H,6×β-H,15×Ar)ppm;HRMS(ESI):C64H61F6N4O20+([M+H]+):要求:1319.3778;实测:1319.3816;UV/Vis(EtOH):λmax/nm(ε/dm3mol-1cm-1):406(90900),515(7700),540(7200),593(3100),646(14800)。

太阳城集团2.2制备5,10,15-三-(3-β-D-半乳糖基苯基)-20-[3,5-双-(三氟甲基)-苯基]-17,18-二羟基-17,18-二氢卟酚

在典型的实验中,将四氧化锇(100mg,0.39mmol)加到5,10,15-三-[3-(2,3,4,6-四乙酰基-β-D-半乳糖基)-苯基]-20-[3,5-双-(三氟甲基)-苯基]-卟啉(300mg,0.17mmol)在二氯甲烷/吡啶1:1(26ml)中的搅拌溶液里。在0°C搅拌30分钟并在室温再搅拌2小时后,加亚硫酸氢钠在水/甲醇1:1(25ml)中的饱和溶液并将混合物搅拌18小时。反应混合物通过硅藻土过滤并经无水硫酸钠干燥。蒸发溶剂并以二氯甲烷/甲醇95:5为洗脱剂通过快速色谱法、接着通过从二氯甲烷/甲醇水溶液中重结晶来纯化残留物。从二氯甲烷/甲醇水溶液中重结晶后得到紫色结晶固体的5,10,15-三-[3-(2,3,4,6-四乙酰基-β-D-半乳糖基)-苯基]-20-[3,5-双-(三氟甲基)-苯基]-17,18-二羟基-17,18-二氢卟酚(129mg,42%),为区位异构混合物。

太阳城集团在氩气氛下向5,10,15-三-[3-(2,3,4,6-四乙酰基-β-D-半乳糖基)-苯基]-20-[3,5-双-(三氟甲基)-苯基]-17,18-二羟基-17,18-二氢卟酚(46mg,25μmol)在无水四氢呋喃/甲醇1:1(10ml)中的搅拌溶液里加入甲醇钠在无水甲醇中的溶液(1ml,0.1N)。4小时后,在减压下蒸发溶剂并使用RP18硅胶和用甲醇/水85:15作为洗脱剂,通过快速色谱法纯化粗产物。用二氯甲烷洗涤后得到为紫色结晶固体的标题产物(33mg,99%)。

mp:>300°C;1H-NMR(500MHz,CD3OD):δ=3.54-3.88(m,18H,H’ose’),5.02-5.12(3H,H’ose’),6.13-6.36(m,2H,β-H),7.39-8.79(m,21H,6×β-H,15×Ar)ppm;HRMS(ESI):C64H60F6N4O20Na+([M+Na]+):要求:1341.3597;实测:1341.3594;UV/Vis((CH3)2CO):λmax/nm(ε/dm3mol-1cm-1):407(32200),515(3400),541(3100),594(1500),646(6000)。

2.3制备5,10,15-三-(3-α-D-甘露糖基苯基)-20-[3,5-双-(三氟甲基)-苯基]-17,18-二羟基-17,18-二氢卟酚

在典型的实验中,将四氧化锇(100mg,0.39mmol)加到5,10,15-三-[3-(2,3,4,6-四乙酰基-α-D-甘露糖基)-苯基]-20-[3,5-双-(三氟甲基)-苯基]-卟啉(350mg,0.2mmol)在二氯甲烷/吡啶1:1(26ml)中的搅拌溶液里。在0°C搅拌30分钟并在室温再搅拌2小时后,加亚硫酸氢钠在水/甲醇1:1(25ml)中的饱和溶液并将混合物搅拌18小时。反应混合物通过硅藻土过滤并经无水硫酸钠干燥。蒸发溶剂并以二氯甲烷/甲醇95:5为洗脱剂通过快速色谱法、接着通过从二氯甲烷/甲醇水溶液中重结晶来纯化残留物。从二氯甲烷/甲醇水溶液中重结晶后得到紫色结晶固体的5,10,15-三-[3-(2,3,4,6-四乙酰基-α-D-甘露糖基)-苯基]-20-[3,5-双-(三氟甲基)-苯基]-17,18-二羟基-17,18-二氢卟酚(151mg,42%),为区位异构混合物。

在氩气氛下向5,10,15-三-[3-(2,3,4,6-四乙酰基-α-D-甘露糖基)-苯基]-20-[3,5-双-(三氟甲基)-苯基]-17,18-二羟基-17,18-二氢卟酚(40mg,22μmol)在无水四氢呋喃/甲醇1:1(10ml)中的搅拌溶液里加入甲醇钠在无水甲醇中的溶液(1.5ml,0.1N)。4小时后,在减压下蒸发溶剂并使用RP18硅胶和用甲醇/水85:15作为洗脱剂,通过快速色谱法纯化粗产物。用二氯甲烷洗涤后得到为紫色结晶固体的标题产物(28mg,97%)。

mp:>300°C;1H-NMR(400MHz,CD3OD):δ=3.65-3.89(m,12H,H’ose’),3.92-3.98(m,3H,H’ose’),4.06-4.10(m,3H,H’ose’),5.63-5.72(m,3H,H’ose’),6.08-6.32(m,2H,β-H),7.38-8.79(m,21H,6×β-H,15×Ar)ppm;HRMS(ESI):C64H60F6N4O20Na+([M+Na]+):要求:1341.3597;实测:1341.3616;UV/Vis((CH3)2CO):λmax/nm(ε/dm3mol-1cm-1):415(73100),514(6900),541(6300),593(2900),646(12100)。

2.4制备5,10,15-三-(3-β-D-乳糖基苯基)-20-[3,5-双-(三氟甲基)-苯基]-17,18-二羟基-17,18-二氢卟酚

在典型的实验中,将四氧化锇(100mg,0.39mmol)加到5,10,15-三-[3-(2,3,4,6,2’,3’,6’-七乙酰基-β-D-乳糖基)-苯基]-20-[3,5-双-(三氟甲基)-苯基]-卟啉(350mg,0.13mmol)在二氯甲烷/吡啶1:1(15ml)中的搅拌溶液里。在0°C搅拌30分钟并在室温再搅拌2小时后,加亚硫酸氢钠在水/甲醇1:1(25ml)中的饱和溶液并将混合物搅拌18小时。反应混合物通过硅藻土过滤并经无水硫酸钠干燥。蒸发溶剂并以二氯甲烷/甲醇95:5为洗脱剂通过快速色谱法、接着通过从二氯甲烷/甲醇水溶液中重结晶来纯化残留物。从二氯甲烷/甲醇水溶液中重结晶后得到紫色结晶固体的5,10,15-三-[3-(2,3,4,6,2’,3’,6’-七乙酰基-β-D-乳糖基)-苯基]-20-[3,5-双-(三氟甲基)-苯基]-7,8-二羟基-7,8-二氢卟酚(39mg,8%),为区位异构混合物。

在氩气氛下向5,10,15-三-[3-(2,3,4,6,2’,3’,6’-七乙酰基-β-D-乳糖基)-苯基]-20-[3,5-双-(三氟甲基)-苯基]-7,8-二羟基-7,8-二氢卟酚(32mg,12μmol)在无水四氢呋喃/甲醇1:1(10ml)中的搅拌溶液里加入甲醇钠在无水甲醇中的溶液(1.5ml,0.1N)。4小时后,在减压下蒸发溶剂并使用RP18硅胶和用甲醇/水85:15作为洗脱剂,通过快速色谱法纯化粗产物。用二氯甲烷洗涤后得到为紫色结晶固体的标题产物(21mg,98%)。

mp:>300°C;1H-NMR(500MHz,CD3OD):δ=3.43-3.84(m,36H,H’ose’),4.31-4.38(m,3H,H’ose’),5.17-5.25(m,3H,H’ose’),6.13-6.32(m,2H,β-H),7.39-8.80(m,21H,6×β-H,15×Ar)ppm;HRMS(ESI):C82H90F6N4O35Na+([M+Na]+):要求:1827.5182;实测:1827.5282;UV/Vis(EtOH):λmax/nm(ε/dm3mol-1cm-1):415(83400),514(7200),541(6700),594(3100),646(13200)。

2.5制备5,10,15,20-四-(3-β-D-葡糖基苯基)-20-[3,5-双-(三氟甲基)-苯基]-17,18-二羟基-17,18-二氢卟酚

太阳城集团在典型的实验中,将四氧化锇(100mg,0.39mmol)加到5,10,15,20-四-[3-(2,3,4,6-四乙酰基-β-D-葡糖基)-苯基]-卟啉(455mg,0.23mmol)在二氯甲烷/吡啶1:1(26ml)中的搅拌溶液里。在0°C搅拌30分钟并在室温再搅拌2小时后,加亚硫酸氢钠在水/甲醇1:1(25ml)中的饱和溶液并将混合物搅拌18小时。反应混合物通过硅藻土过滤并经无水硫酸钠干燥。蒸发溶剂并以二氯甲烷/甲醇95:5为洗脱剂通过快速色谱法、接着通过从二氯甲烷/甲醇水溶液中重结晶来纯化残留物。从二氯甲烷/甲醇水溶液中重结晶后得到紫色结晶固体的5,10,15,20-四-[3-(2,3,4,6-四乙酰基-β-D-葡糖基)-苯基]-7,8-二羟基-7,8-二氢卟酚(184mg,40%),为区位异构混合物。

在氩气氛下向5,10,15,20-四-[3-(2,3,4,6-四乙酰基-β-D-葡糖基)-苯基]-7,8-二羟基-7,8-二氢卟酚(40mg,20μmol)在无水甲醇(10ml)中的搅拌溶液里加入甲醇钠在无水甲醇中的溶液(1.5ml,0.08N)。3小时后,在减压下蒸发溶剂并使用RP18硅胶和用甲醇/水85:15作为洗脱剂,通过快速色谱法纯化粗产物。用二氯甲烷洗涤后得到为紫色结晶固体的标题产物(26mg,97%)。

太阳城集团mp:250°C;1H-NMR(400MHz,CD3OD):δ=3.36-3.57(m,16H,H’ose’),3.59-3.70(m,4H,H’ose’),3.74-3.86(m,4H,H’ose’),5.05-5.20(m,4H,H’ose’),6.18-6.43(m,2H,β-H),7.35-8.95(m,22H,6×β-H,16×Ar)ppm;HRMS(ESI):C68H72N4O26Na+([M+Na]+):要求:1383.4327;实测:1383.4352;UV/Vis(EtOH):λmax/nm(ε/dm3mol-1cm-1):416(79800),515(5200),543(4200),593(2200),645(7100)。

实施例3

制备糖基化的β-官能化二氢卟酚

太阳城集团3.1制备5,10,15,20-四-[3-(2,3,4,6-四乙酰基-β-D-葡糖基)-苯基]-7,8-二羟基-7,8-双-(三氟甲基)-7,8-二氢卟酚

太阳城集团在典型的实验中,在氩气氛下,将Zn(II)-5,10,15,20-四-(3-羟苯基)-7,8-二羟基-7,8-双-(三氟甲基)-7,8-二氢卟酚(30mg,33μmol)溶解在10ml无水二氯甲烷/四氢呋喃30:1中。然后加2,3,4,6-四乙酰基-D-葡萄糖三氯乙酰亚胺酯(2,3,4,6-tetraacetyl-D-glucosetrichloracetimidat)(300mg,0.6mmol)和BF3·Et2O(4μl,0.04mmol)。搅拌3小时后,将混合物转移到分液漏斗中。用水洗涤有机层(2×25ml)并在减压下蒸发溶剂。为了除去锌,将残留物溶解在10ml THF中,并加入0.3ml盐酸(25%)。搅拌10分钟后加水(25ml)和二氯甲烷(40ml)。分离有机层并用水洗涤(2×25ml)。用Na2SO4干燥后,在减压下蒸发溶剂。通过快速色谱法实现进一步的纯化使用二氯甲烷/甲醇95:5作为洗脱剂。从二氯甲烷/甲醇水溶液中重结晶后得到为紫色结晶固体的分析纯产物(55mg,77%)。

mp:155°C;1H-NMR(400MHz,CDCl3):δ=-1.63--1.53(s,2H,NH),0.68-2.16(m,48H,16×OAc),3.56-4.33(m,14H,H’ose’),5.02-5.41(m,14H,H’ose’),7.34-7.70(m,12H,Ar),7.83-8.03(m,6H,2×β-H,4×Ar),8.42-8.45(m,2H,β-H),8.57-8.62(m,2H,β-H)ppm;HRMS(ESI):C102H102F6N4O42Na+([M+Na]+):要求:2192.5798;实测:2192.5726;UV/Vis(CH2Cl2):λmax/nm(ε/dm3mol-1cm-1):408(167600),518(12900),547(13000),599(5700),653(25100)。

3.2制备5,10,15,20-四-(3-β-D-葡糖基苯基)-7,8-二羟基-7,8-双-(三氟甲基)-7,8-二氢卟酚

在氩气氛下向5,10,15,20-四-[3-(2,3,4,6-四乙酰基-β-D-葡糖基)-苯基]-7,8-二羟基-7,8-双-(三氟甲基)-7,8-二氢卟酚(35mg,16μmol)在无水四氢呋喃/甲醇1:1(10ml)中的搅拌溶液里加入甲醇钠在无水甲醇中的溶液(1.5ml,0.1N)。15小时后,在减压下蒸发溶剂并使用RP18硅胶和用甲醇/水9:1作为洗脱剂,通过快速色谱法纯化粗产物。用二氯甲烷洗涤后得到为紫色结晶固体的标题产物(24mg,99%)。

mp:>300°C;HRMS(ESI):C70H70F6N4O26Na+([M+Na]+):要求:1519.4075;实测:1519.4110;UV/Vis(EtOH):λmax/nm(ε/dm3mol-1cm-1):407(142900),518(10400),547(10300),600(4600),654(19200)。

实施例4

细菌细胞悬浮液的光动力灭活

在我们的研究中使用的生物体为微生物菌群伤口的两个成员;金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)DSM11729,革兰氏阳性;和绿脓假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)DSM1117,革兰氏阴性。

太阳城集团若干研究已经表明,革兰氏阳性菌特别易遭受光动力灭活,而革兰氏阴性菌对许多常用的光敏剂具有显著更强的抗性。此外,已经发现革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌细胞在复杂介质(例如血液、血浆、血清、唾液)中对标准光敏剂缀合物的易感性要低得多。

将培养物细胞悬浮在无菌磷酸盐缓冲盐水(PBS)或补充有10%无菌马血清的无菌PBS中。在600nm处的最终OD(光密度)(在所有情况下均为lcm)是0.03。将细菌悬浮液放入带有透明底的无菌黑孔板里。研究中采用的光敏剂浓度如下:100μM、10μM和1μM。

太阳城集团经90分钟的温育时期后,使样本暴露于功率设置为0.5W的652nm激光,照射太阳城集团为85s。采用该照射太阳城集团,由此产生的能量流为约100J/cm2。对照板不含光敏剂,并且不暴露于激光。使用于黑暗毒性的对照样本仅接触光敏剂而没有任何照明。

照射后,取出样本并再次悬浮于培养基中。经足够的温育时期后计算菌落形成单位数(CFU/ml)。

此实施例示出选定的光敏剂在PBS-缓冲液和补充有10%无菌马血清的PBS中针对金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)DSM11729和绿脓假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)DSM1117的光动力灭活。图1显示卟啉糖缀合物的活性,图2-7显示二氢卟酚糖缀合物的活性。

已经参照附图描述了本发明优选的实施方案,要理解的是,本发明并不限于所述精确的实施方案,本领域技术人员在不偏离由所附权利要求书确定的发明范围的情况下可以在其中进行各种变动和修改。

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本文标题:用于抗微生物光动力疗法的糖取代的二羟基二氢卟酚和Β官能化二氢卟酚.pdf
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