太阳城集团

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异叶青兰有效部位的制备方法及用途.pdf

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异叶青兰 有效 部位 制备 方法 用途
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摘要
申请专利号:

太阳城集团CN201310031267.2

申请日:

20130125

公开号:

太阳城集团CN103070916B

公开日:

20140827

当前法律状态:

有效性:

失效

法律详情:
IPC分类号: A61K36/53,A61P9/12 主分类号: A61K36/53,A61P9/12
申请人: 中国科学院新疆理化技术研究所,新疆医科大学
发明人: 阿吉艾克拜尔·艾萨,萨迪克·诺莫诺夫,何雯,帕尔哈提·克力木,赵江瑜,邬丽娅·伊明,马晓玲,司丽君,闫冬,魏媛媛,程路峰,阿迪力·阿不都热合曼
地址: 830011 新疆维吾尔自治区乌鲁木齐市北京南路40号附1号
优先权: CN201310031267A
专利代理机构: 乌鲁木齐中科新兴专利事务所 代理人: 张莉
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法律状态
申请(专利)号:

CN201310031267.2

授权太阳城集团号:

法律状态太阳城集团日:

法律状态类型:

摘要

太阳城集团本发明涉及一种异叶青兰有效部位的制备方法及用途,该方法是将干燥的异叶青兰的地上部分经粉碎,采用有机溶剂乙醇提取,大孔树脂分离纯化获得异叶青兰有效部位,经初步的活性筛选试验证明:通过本发明所述的方法获得的异叶青兰有效部位具有能降低肾性高血压大鼠血压,增强心脏舒缩功能;同时还可以有效防治高血压并发症,包括心肌肥厚、肾损害和血管内皮损伤。本发明所述的方法工艺简单,不需要高温高压设备,生产成本低,有效成分质量稳定,易于控制。

权利要求书

1.一种异叶青兰有效部位在制备防治高血压的药物或保健品中的用途,其特征在于按下列步骤进行:a、将干燥的异叶青兰地上部分粉碎成2cm,用浓度为50-90%乙醇加热回流提取,温度为75-90℃,太阳城集团为1-5小时,冷却至室温,真空浓缩后,即得异叶青兰醇提物部位,其中异叶青兰与乙醇的体积比为1:5-30;b、将步骤a得到的醇提物采用树脂为AB-8、HPD-100、HPD-300、HPD-400、HPD-450、HPD-500、HPD-600、HP2MGL、SP-825、LD601、LS-303B、LX-28、LX-38或聚酰胺分离,先用3倍柱体积的水进行洗脱,再用浓度为50-90%乙醇洗脱,得到乙醇部位,真空浓缩后即可得到异叶青兰总黄酮部位。

说明书

技术领域

本发明涉及异叶青兰有效部位的制备方法及用途,具体涉及异叶青兰有效部位在防治高血压的药物的用途,属于民族医药技术领域。

背景技术

异叶青兰(Dracocephalum heterophyllum Benth.)是维吾尔族及藏族民间传统用药,全草入药,味辛、苦,性寒,具平肝、清热之功效,可治疗高血压、肺热咳嗽、支气管炎等疾病。成分分析发现异叶青兰中富含黄酮、萜类等物质,且无机元素(Ca、Fe、Mg)含量较高。

高血压病是一种常见病发病,是引起冠心病、脑卒中、肾功能衰竭的最危险因素。目前,治疗高血压的药物具有显效快疗、疗效明确等优势。但同时其也有副作用大、血压变化过快等缺点。因此积极寻找作用缓和,能通过多途径多靶点调节血压,且降压平稳,副作用小的降压药物具有十分重要的意义。心肌肥厚是高血压最常见的靶器官损害,长期心肌肥厚会导致心肌缺血、心肌纤维化,最终出现心力衰竭、心律失常甚至猝死。因此积极治疗高血压,使血压达到目标要求,可以明显减轻或逆转高血压性心肌肥厚,并且可以减少心血管事件发生率和病死率。然而,高血压性心肌肥厚以及其不断进展而导致的心力衰竭的发生率和病死率仍未得到有效控制。因此,我们不仅关心药物是否能有效控制血压,并且关心其是否能够抑制心肌肥厚。

发明内容

太阳城集团本发明目的在于,提供一种异叶青兰有效部位的制备方法及用途,该方法是将异叶青兰的地上部分经粉碎,采用有机溶剂乙醇提取,大孔树脂分离纯化获得异叶青兰有效部位,经初步的活性筛选试验证明:通过本发明所述的方法获得的异叶青兰有效部位具有能降低肾性高血压大鼠血压,增强心脏舒缩功能;同时还可以有效防治高血压并发症,包括心肌肥厚、肾损害和血管内皮损伤。本发明所述的方法工艺简单,不需要高温高压设备,生产成本低,有效成分质量稳定,易于控制。

本发明所述的一种异叶青兰有效部位的制备方法,按下列步骤进行:

太阳城集团a、将干燥的异叶青兰地上部分粉碎成2cm,用浓度为50-90%乙醇加热回流提取,温度为75-90℃,太阳城集团为1-5小时,冷却至室温,真空浓缩后,即得异叶青兰醇提物部位;

b、将步骤a得到的醇提物采用树脂分离,先用3倍柱体积的水进行洗脱,再用浓度为50-90%乙醇洗脱,得到乙醇部位,真空浓缩后即可得到异叶青兰总黄酮部位。

太阳城集团步骤a中异叶青兰与乙醇的体积比为1:5-30。

步骤b中的树脂为AB-8、HPD-100、HPD-300、HPD-400、HPD-450、HPD-500、HP-600、HP2MGL、SP-825、LD601、LS-303B、LX-28、LX-38或聚酰胺。

所述方法获得的异叶青兰有效部位的用途,该有效部位用于在制备防治高血压的药物。

太阳城集团所述方法获得的异叶青兰有效部位的用途,该有效部位用于在制备防治高血压的保健品。

本发明所述的异叶青兰有效部位的制备方法,该方法是适合于工业生产的异叶青兰有效部位的方法;

本发明异叶青兰有效部位的用途,具体而言,通过该方法获得异叶青兰有效部位具有防治高血压的用途,主要表现在对肾性高血压大鼠血压和心脏的影响,还可以有效防止高血压并发症,包括心肌肥厚、肾损害和血管内皮损伤,改善因高血压引起的并发症症状的作用,可用于治疗高血压的药物或保健品的应用,以及该有效部位作为药物组合物的应用。

附图说明

图1为本发明异叶青兰总黄酮对高血压心脏肥大大鼠影响的代表型图片,其中A为调节心肌细胞交叉表面,B为间质纤维化(×200)。

具体实施方式

实施例1:异叶青兰有效部位的制备:

将干燥的异叶青兰地上部分12kg粉碎成2cm,加入5倍体积的浓度为50%乙醇加热回流提取,温度75℃,太阳城集团1小时,冷却至室温,真空浓缩后,即得异叶青兰醇提物部位;

太阳城集团将得到的醇提物采用AB-8大孔树脂分离,先用3倍柱体积的水进行洗脱,再用浓度为50%乙醇洗脱,得到乙醇部位,再真空浓缩后即可得到异叶青兰总黄酮部位205g。

实施例2:异叶青兰有效部位的制备:

将干燥的异叶青兰地上部分12kg粉碎成2cm,加入10倍体积的浓度为70%乙醇加热回流提取,温度90℃,太阳城集团2小时,冷却至室温,真空浓缩后,即得异叶青兰醇提物部位;

太阳城集团将得到的醇提物采用HPD-450大孔树脂分离,先用3倍柱体积的水进行洗脱,再用浓度为70%乙醇洗脱,得到乙醇部位,再真空浓缩后即可得到异叶青兰总黄酮部位187g。

实施例3:异叶青兰有效部位的制备:

太阳城集团将干燥的异叶青兰地上部分12kg粉碎成2cm,加入15倍体积的浓度为60%乙醇加热回流提取,温度80℃,太阳城集团3小时,冷却至室温,真空浓缩后,即得异叶青兰醇提物部位;

将得到的醇提物采用聚酰胺树脂分离,先用3倍柱体积的水进行洗脱,再用浓度为60%乙醇洗脱,得到乙醇部位,再真空浓缩后,即可得到异叶青兰总黄酮部位190g。

实施例4:异叶青兰有效部位的制备:

太阳城集团将干燥的异叶青兰地上部分12kg粉碎成2cm,加入5倍体积的浓度为70%乙醇加热回流提取,温度85℃,太阳城集团4小时,冷却至室温,真空浓缩后,即得异叶青兰醇提物部位;

将得到的醇提物采用HPD-600大孔树脂分离,先用3倍柱体积的水进行洗脱,再用浓度为70%乙醇洗脱,得到乙醇部位,再真空浓缩后,即可得到异叶青兰总黄酮部位195g。

实施例5:异叶青兰有效部位的制备:

将干燥的异叶青兰地上部分12kg粉碎成2cm,加入15倍体积的浓度为80%乙醇加热回流提取,温度85℃,太阳城集团2.5小时,冷却至室温,真空浓缩后,即得异叶青兰醇提物部位;

将得到的醇提物采用LD-601大孔树脂分离,先用3倍柱体积的水进行洗脱,再用浓度为80%乙醇洗脱,得到乙醇部位,再真空浓缩后,即可得到异叶青兰总黄酮部位178g。

实施例6:异叶青兰有效部位的制备:

将干燥的异叶青兰地上部分12kg粉碎成2cm,加入30倍体积的浓度为90%乙醇加热回流提取,温度90℃,太阳城集团5小时,冷却至室温,真空浓缩后,即得异叶青兰醇提物部位;

将得到的醇提物采用LX-38大孔树脂分离,先用3倍柱体积的水进行洗脱,再用浓度为90%乙醇洗脱,得到乙醇部位,真空浓缩后即可得到异叶青兰总黄酮部位198g。

实施例7:异叶青兰有效部位的制备:

将干燥的异叶青兰地上部分12kg粉碎成2cm,加入25倍体积的65%乙醇加热回流提取,温度85℃,太阳城集团5小时,冷却至室温,真空浓缩后,即得异叶青兰醇提物部位;

将得到的醇提物采用HPD-400树脂分离,先用3倍柱体积的水进行洗脱,再用浓度为65%乙醇洗脱,得到乙醇部位,再真空浓缩后,即可得到异叶青兰总黄酮部位180g。

太阳城集团实施例8:异叶青兰有效部位的制备:

太阳城集团将干燥的异叶青兰地上部分12kg粉碎成2cm,加入30倍体积的90%乙醇加热回流提取,温度90℃,太阳城集团4小时,冷却至室温,真空浓缩后,即得异叶青兰醇提物部位;

将得到的醇提物采用HPD-100大孔树脂分离,先用3倍柱体积的水进行洗脱,在用浓度为90%乙醇洗脱,得到乙醇部位,再真空浓缩后,即可得到异叶青兰总黄酮部位186g。

太阳城集团实施例9:异叶青兰有效部位的制备:

将干燥的异叶青兰地上部分12kg粉碎成2cm,加入20倍体积浓度为70%乙醇加热回流提取,温度75℃,太阳城集团3小时,冷却至室温,真空浓缩后,即得异叶青兰醇提物部位;

将得到的醇提物采用HPD-300大孔树脂分离,先用3倍柱体积的水进行洗脱,再用浓度为70%乙醇洗脱,得到乙醇部位,真空浓缩后即可得到异叶青兰总黄酮部位190g。

太阳城集团实施例10:异叶青兰有效部位的制备:

将干燥的异叶青兰地上部分12kg粉碎成2cm,加入10倍体积的80%乙醇加热回流提取,温度65℃,太阳城集团5小时,冷却至室温,真空浓缩后,即得异叶青兰醇提物部位;

太阳城集团将得到的醇提物采用LX-28大孔树脂分离,先用3倍柱体积的水进行洗脱,再用浓度为80%乙醇洗脱,得到乙醇部位,真空浓缩后即可得到异叶青兰总黄酮部位193g。

实施例11:异叶青兰有效部位的制备:

太阳城集团将干燥的异叶青兰地上部分12kg粉碎成2cm,用浓度为55%乙醇加热回流提取,温度为75℃,太阳城集团为1小时,冷却至室温,真空浓缩后,即得异叶青兰醇提物部位;

将得到的醇提物采用HPD-500树脂分离,先用3倍柱体积的水进行洗脱,再用浓度为55%乙醇洗脱,得到乙醇部位,真空浓缩后即可得到异叶青兰总黄酮部位200g。

实施例12:异叶青兰有效部位的制备:

将干燥的异叶青兰地上部分12kg粉碎成2cm,用浓度为75%乙醇加热回流提取,温度为80℃,太阳城集团为2小时,冷却至室温,真空浓缩后,即得异叶青兰醇提物部位;

将步得到的醇提物采用SP-825树脂分离,先用3倍柱体积的水进行洗脱,再用浓度为75%乙醇洗脱,得到乙醇部位,真空浓缩后即可得到异叶青兰总黄酮部位187g。

实施例13:异叶青兰有效部位的制备:

将干燥的异叶青兰地上部分12kg粉碎成2cm,用浓度为85%乙醇加热回流提取,温度为85℃,太阳城集团为3小时,冷却至室温,真空浓缩后,即得异叶青兰醇提物部位;

将得到的醇提物采用HP2MGL树脂分离,先用3倍柱体积的水进行洗脱,再用浓度为85%乙醇洗脱,得到乙醇部位,真空浓缩后即可得到异叶青兰总黄酮部位176g。

太阳城集团实施例14:异叶青兰有效部位的制备:

太阳城集团将干燥的异叶青兰地上部分12kg粉碎成2cm,用浓度为90%乙醇热回流提取,温度为90℃,太阳城集团为4小时,冷却至室温,真空浓缩后,即得异叶青兰醇提物部位;

太阳城集团将得到的醇提物采用LS-303B树脂分离,先用3倍柱体积的水进行洗脱,再用浓度为90%乙醇洗脱,得到乙醇部位,真空浓缩后即可得到异叶青兰总黄酮部位190g。

太阳城集团实施例15:实施例1-14中步骤a得到的异叶青兰醇提物部位对肾性高血压大鼠的影响:

材料:

实验动物:

太阳城集团雄性SD大鼠,体重160-200g,由新疆医科大学实验动物中心提供,饲养于新疆医科大学实验动物中心SPF;

药物、试剂及仪器:

戊巴比妥钠,地西泮注射液(天津金耀氨基酸),盐酸氯胺酮注射液(江苏恒瑞),硫酸阿托品注射液(天津新郑),异叶青兰全草(中国科学院新疆理化技术研究所提供),卡托普利片(中美上海施贵宝),大鼠一氧化氮测定试剂盒(南京建成生物工程研究所),大鼠一氧化氮合成酶测定试剂盒(南京建成生物工程研究所),大鼠内皮素ELISA检测试剂盒(上海研辉生物科技有限公司),大鼠血管紧张素ⅡELISA检测试剂盒(上海研辉生物科技有限公司),BP-6无创血压测试仪(成都泰盟),Power Lab四通道生理信号采集与处理系统(澳大利亚埃德仪器有限公司),内切式匀浆机(XHF-D宁波新芝生物科技股份有限公司);

方法:

模型建立及实验方案:大鼠以盐酸氯胺酮50mg·kg-1+地西泮5mg·kg-1+硫酸阿托品0.25mg·kg-1腹腔注射麻醉。麻醉后大鼠仰卧位固定,腹部手术野备皮,消毒,剑突下1-2cm处沿腹中线依次剪开皮肤层、肌层,用镊子稍稍移开组织,使左侧肾静脉暴露。肾静脉上可见一通向肾上腺的分支,与肾静脉形成一三角区,在此区小心地将肾动脉与静脉分开,肾动脉上套上U型银夹(内径为0.2mm),分层缝合手术创口,后肢肌肉注射8万单位青霉素钠,完成整个2K1C手术。假手术组(Sham组)只分离左肾动脉不套银夹,4周后用BP-6动物无创血压测定仪测定尾动脉收缩压,安静状态下测定3次取平均值,截至第5周,以收缩压≥140mmHg为筛选标准,连续2周血压超过140mmHg者,进入实验,低者剔除;

除假手术组外,造模成功的大鼠按收缩压水平随机分模型组、卡托普利组(20mg·kg-1)、低剂量组(300mg·kg-1)、高剂量组(600mg·kg-1),每组8只,药物均以蒸馏水配置,灌胃容积为1mL/100g,假手术和模型组给予等量蒸馏水,每天一次,连续给药5周;

无创血压测定:灌胃5周期间,采用无创尾套法每周连续测定尾动脉收缩压3次,取其平均值为该周血压,测定太阳城集团均选在每日灌胃给药后,在安静的环境中,BP-6无创血压测试仪加热至36.5度恒温后,将大鼠置恒温加热箱中预热20分钟后测收缩压;

血流动力学指标测定:灌胃5周后,动物麻醉,钝性分离右侧颈总动脉,在右侧颈总动脉插入充满肝素化生理盐水的PE50导管,将导管连接压力换能器,信号输入至Power lab生物信号处理系统,稳定后,经Charts生物信号记录分析系统记录颈总动脉收缩压、舒张压,再经右侧颈总动脉向左心室内推送导管,至出现明显的心室压波形,分别记录和测定分别记录和测定左室收缩压、左室舒张末期压、收缩太阳城集团、舒张太阳城集团、收缩指数、等容舒张期太阳城集团常数、室内压最大上升速率、室内压最大下降速率;既往有研究证实室内压最大速率与左室内压密切相关,因此我们分别用左心室内压对数值最大变化速率来表示左室收缩舒张功能;

太阳城集团指标测定:灌胃5周后腹主动脉取血制备血清血浆;取心室肌和右肾组织制备组织匀浆;硝酸还原酶法测定血清、心肌组织和肾组织中一氧化氮水平,化学比色法测定血清、心肌组织和肾组织中一氧化氮合成酶水平,ELISA法测定血浆、心肌组织和肾组织中内皮素水平、心肌组织和肾组织中血管紧张素Ⅱ水平以及血管紧张素转化酶活力;

统计学分析方法:

太阳城集团组间对照数据用均数±标准差表示,采用SPSS17.0软件单因素方差分析方法进行多组样本均数的比较,经方差齐性检验后,方差不齐的采用Dunnett’s T3方法进行检验多组间两两比较差异的显著性;方差齐同的则采用LSD检验各组间差异的显著性;

结果:

异叶青兰醇提物对肾性高血压大鼠血压的影响:给药前,除假手术组组,测得各组大鼠血压平均值较术前明显升高,且稳定。各给药组用药1周后血压开始下降,连续给药5周,每周测定尾动脉收缩压。模型组大鼠的尾动脉收缩压较假手术组组显著升高,差异有统计学意义(P<0.01),与模型组比较,高剂量组剂量组大鼠收缩压明显降低(P<0.01)。见结果见表1:

表1.给于异叶青兰醇提物前后各组大鼠收缩压变化(n=8)

太阳城集团与假手术组比较,##P<0.01;与模型组比较,*P<0.05,**P<0.01;

异叶青兰醇提物对肾性高血压大鼠血流动力学的影响:

太阳城集团表2.给药后各组大鼠血流动力学参数的变化(n=8)

与假手术组比较,##P<0.01;与模型组比较,*P<0.05,**P<0.01;

如表2所示,与假手术组组相比,模型组总动脉收缩压、舒张压、平均动脉压、左室收缩压、左室舒张末期压都显著升高(P<0.01,P<0.05);舒张太阳城集团、等容舒张期太阳城集团常数缩短(P<0.01)、心率加快(P<0.01);左室收缩功能和左室舒张功能显著降低(P<0.01);收缩指数显著降低(P<0.05),与模型组相比,高剂量组组总动脉收缩压、舒张压、平均动脉压、左室收缩压、左室舒张末期压都显著降低(P<0.01,P<0.05);舒张太阳城集团、等容舒张期太阳城集团常数延长(P<0.01,P<0.05);心率减慢(P<0.01);左室收缩功能和左室舒张功能显著升高(P<0.01,P<0.05);收缩指数显著升高(P<0.05);异叶青兰醇提物对各组大鼠血管紧张素Ⅱ含量的影响:给药5周后,ELISA法测定各组心肌和肾组织中血管紧张素Ⅱ的含量,在心肌和肾组织中,与假手术组组比较,模型组血管紧张素Ⅱ含量显著升高(P<0.01),与模型组相比,各给药组血管紧张素Ⅱ含量下降,差异有显著性(P<0.01,P<0.05)。结果见表3。

表3.给予异叶青兰醇提物后各组大鼠血管紧张素Ⅱ含量(n=8)

太阳城集团与假手术组比较’##P<0.01;与模型组比较,*P<0.05,**P<0.01;

太阳城集团异叶青兰醇提物对各组大鼠内皮素含量的影响:给药5周后,与假手术组组比较,模型组血浆和组织中内皮素水平显著升高(P<0.01);与模型组相比,低剂量组、中剂量组组血浆内皮素水平显著降低(P<0.05);心肌组织和肾组织中,各剂量组内皮素水平显著降低(P<0.01,P<0.05)。结果见表4。

太阳城集团表4.异叶青兰醇提物后各组大鼠ET含量(n=8)

与假手术组比较,##P<0.01;与模型组比较,*P<0.05,**P<0.01;

异叶青兰醇提物对各组大鼠一氧化氮水平的影响:与假手术组组比较,模型组血清和组织中一氧化氮水平显著下降(P<0.01,P<0.05),与模型相比,异叶青兰醇提物组血清和心肌组织中一氧化氮水平显著升高(P<0.01,P<0.05),而肾组织中,仅高剂量组组一氧化氮水平升高(P<0.05),结果见表5:

表5.异叶青兰醇提物后各组大鼠一氧化氮含量(n=8)

太阳城集团与假手术组比较,#P<0.05,##P<0.01;与模型组比较,*P<0.05,**P<0.01。

异叶青兰醇提物对各组大鼠一氧化氮合酶水平的影响:与假手术组组比较,模型组血清和组织中一氧化氮合酶水平显著下降(P<0.01),与模型组相比,低剂量组血浆和心肌组织中一氧化氮合酶水平显著升高(P>0.05),而肾组织中一氧化氮合酶水平无显著性差异(P>0.05);高剂量组血清和组织中一氧化氮合酶水平显著升高(P<0.01)。结果见表6:

太阳城集团表6.给予异叶青兰醇提物后各组大鼠一氧化氮合酶活力(n=8)

与假手术组比较,##P<0.01;与模型组比较,*P<0.05,**P<0.01;

结果:

本实验结果显示异叶青兰醇提物对肾性高血压大鼠有降低血压和改善心功能的作用,三个剂量组都能降低模型大鼠的颈动脉收缩压、舒张压、平均动脉压减慢心率;中高剂量组较模型组降低左心室收缩压、左心室舒张末压,升高左室收缩舒张功能,延长收缩太阳城集团、等容舒张期太阳城集团常数,升高收缩指数,由此可见中高剂量组明显改善模型大鼠的心脏舒张和收缩功能,且其心率的减慢主要体现在舒张太阳城集团的减慢,利于降低心肌耗氧量,延长冠脉充盈太阳城集团,改善心肌血供。

实施例16:异叶青兰总黄酮对高血压大鼠心脏的保护作用:

材料:

实验动物:

太阳城集团雄性SD大鼠,体重180-200g,购自新疆医科大学实验动物中心,饲养于新疆医科大学一附院科技楼标准环境;

药物、试剂及仪器:

戊巴比妥钠(SolarBio),地西泮注射液(天津金耀氨基酸),盐酸氯胺酮注射液(江苏恒瑞),硫酸阿托品注射液(天津新郑),异叶青兰总黄酮(中国科学院新疆理化技术研究所提供),卡托普利片(中美上海施贵宝),Bp-6无创血压测试仪(成都泰盟),PowerLab四通道生理信号采集与处理系统(澳大利亚埃德仪器有限公司),B超为HP-5500型超声显像仪,探头频率为3.5MHz;

方法:

模型建立及实验方案:同实施例15;

无创血压测定:同实施例15;

超声心动图检查:6周之后,大鼠用戊巴比妥钠45mg·kg-1腹腔注射麻醉后,进行超声心动图检查,探头频率3.5MHz,大鼠仰卧位,在胸骨旁左心室短轴二维超声图像引导下的M型超声心动图左心室中部切面上,测量左心室舒张末期内径、左心室收缩末期内径、室间隔舒张末期厚度、左心室后壁舒张末期厚度,测量3个周期,取平均值,并进一步计算左心室内径缩短率、射血分数,左心室重量=1.05×[(左心室舒张末期内径+左心室后壁舒张末期厚度+室间隔舒张末期厚度)3-左心室舒张末期内径]×0.8};

太阳城集团血流动力学检查:同实施例15;

太阳城集团心脏重量/体重比值测定和组织学检查:推注10%氯化钾2mL处死大鼠,打开胸腔,快速取下心脏,沿房室交界处去除心房和大血管及右心室游离壁,置于预冷的生理盐水中,用滤纸吸干水份,电子天平准确称量,将左心室和室间隔准确称质量,作为左心室质量,计算左心室重量/体重比值。称重完毕,将心脏从心尖至心底切为等厚的5个切片(每片厚度约1.5mm),中间切片固定于10%甲醛,石蜡包埋,切为4μm厚切片,行HE染色测量左心室心肌细胞大小,行Massion染色测量心肌间质纤维化及血管周围纤维化,心肌细胞横截面积测定:心脏HE染色切片于摄影显微镜下拍照(×400),每个切片随机选取80-100个横切的左心室心肌细胞(要求尽量呈圆形),测量其横截面积,取平均值。采用图像分析软件IPP6.0测量;

统计学处理:同实施例15;

结果:

太阳城集团异叶青兰总黄酮对高血压大鼠血流动力学的影响:

表7总黄酮对高血压大鼠血流动力学的影响

**P<0.01,*P<0.05vs

太阳城集团如表7所示,与假手术组相比,模型组颈总动脉收缩压、舒张压、左室收缩压、左室舒张末期压都显著升高(P<0.01);左室收缩功能和左室舒张功能显著升高(P<0.01);舒张太阳城集团、等容舒张期太阳城集团常数缩短(P<0.01);收缩指数显著升高(P<0.01)。与模型组相比,总黄酮低剂量组左室收缩压、左室舒张末期压都显著降低(P<0.01,P<0.05);左室收缩功能显著降低(P<0.05);高剂量组颈总动脉收缩压、、左室收缩压、左室舒张末期压都显著降低(P<0.01,P<0.05);舒张太阳城集团、等容舒张期太阳城集团常数延长(P<0.05);左室收缩功能显著降低(P<0.01);收缩指数显著降低(P<0.01);

太阳城集团异叶青兰总黄酮对高血压大鼠心肌肥厚的影响:

太阳城集团超声心动图资料:2K1C术后12周,与假手术组比较,模型组左心室舒张末期内径、室间隔舒张末期厚度、左心室后壁舒张末期厚度增大(P<0.01),左心室内径缩短率、射血分数也升高(P<0.01)。根据心室厚度等计算得到左心室重量/体重比值也升高(P<0.01);

异叶青兰总黄酮对高血压大鼠左心室重量/体重比值的影响:模型组大鼠心重/体重较假手术组组显著增加,高剂量组处理后,则显著降低15%(P<0.05),卡托普利组显著降低27%(P<0.01),见表8;

太阳城集团表8总黄酮对高血压大鼠心肌肥厚的影响-超声心动图资料

**P<0.01,*P<0.05vs

异叶青兰总黄酮对高血压大鼠左心室心肌细胞大小和心肌纤维化的影响:

如附图A(HE染色)可见,与假手术组组比较,其他四组心肌细胞明显肥大增宽,细胞增大,细胞间距增大,单位面积内心肌细胞数较假手术组组减少,血管壁增厚,血管周围有较多胶质沉积,出现炎症细胞浸润如巨噬细胞、淋巴细胞、粒细胞等,较假手术组明显增多。如图1B(Masson染色),可见模型组出现细胞间质纤维化(天蓝色染色区),总黄酮低剂量出现极少的纤维化,假手术组、总黄酮高剂量、卡托普利组均未见纤维化;

结果说明:

给药6周后,模型组大鼠左心室室壁厚度、左心室/体重及左心室心肌间质纤维化程度较假手术组组显著升高,给予异叶青兰总黄酮600mg·kg-1·d-1后,左心室肥厚及心肌纤维化较假手术组组显著降低,心肌收缩和舒张功能改善(P<0.01),异叶青兰总黄酮能改善高血压大鼠心肌肥厚及心肌纤维化程度,改善心功能。

太阳城集团实施例17:异叶青兰总黄酮对高血压大鼠血管内皮的保护作用

材料:

动物:同实施例16;

药品、试剂及仪器:戊巴比妥钠,地西泮注射液(天津金耀氨基酸),盐酸氯胺酮注射液(江苏恒瑞),硫酸阿托品注射液(天津新郑),异叶青兰总黄酮(中国科学院新疆理化技术研究所提供),卡托普利片(中美上海施贵宝),大鼠一氧化氮测定试剂盒(南京建成生物工程研究所),内皮素放射免疫分析药盒(北京北方生物技术研究所),血管紧张素II放射免疫分析药盒(北京北方生物技术研究所),醛固酮放射免疫分析药盒(北京北方生物技术研究所),血栓素B2放射免疫分析药盒(北京北方生物技术研究所),6-酮-前列腺素F1a放射免疫分析药盒(北京北方生物技术研究所),BP-6无创血压测试仪(成都泰盟);

方法:

模型建立及实验方案:同实施例16;

无创血压测定:同实施例16;

指标测定:腹主动脉取血,离心后取上清,硝酸还原酶法测定血清中一氧化氮水平,放射免疫法测定心肌中内皮素的含量、血浆中血管紧张素II、醛固酮、血栓素B2、6-酮-前列腺素含量;

统计学处理:

应用SPSS17.0统计软件进行统计学处理,多组间比较采用方差分析,两两比较采用LSD-t检验,检验水准α=0.05;

结果:

异叶青兰总黄酮对各组大鼠收缩压的影响:术后第5周,除假手术组,测得各组大鼠血压平均值较术前明显升高,且稳定。各给药组用药1周后血压开始下降,连续给药6周,每周测定尾动脉收缩压。模型组大鼠的尾动脉收缩压较假手术组显著升高,差异有统计学意义(P<0.01)。与模型组比较,异叶青兰各剂量组大鼠收缩压明显降低(P<0.05,P<0.01),见结果见表9:

太阳城集团表9.给予异叶青兰物总黄酮前后各组大鼠收缩压变化(n=10)

与假手术组比较,##P<0.01;与模型组比较,*P<0.05,**P<0.01;

太阳城集团异叶青兰总黄酮对高血压大鼠一氧化氮和内皮素水平的影响:与假手术组组比较,模型组血清中一氧化氮水平显著下降而心肌中内皮素水平显著升高,有统计学意义(P<0.01),与模型组相比,异叶青兰总黄酮和卡托普利组血清中一氧化氮水平显著升高而心肌中内皮素水平显著降低,差异有统计学意义(P<0.01,P<0.05);见表10;

表10.给予异叶青兰总黄酮后各组大鼠一氧化氮和内皮素含量(n=8)

与假手术组比较,#P<0.05,##P<0.01;与模型组比较,*P<0.05**P<0.01

太阳城集团异叶青兰总黄酮对高血压大鼠血管紧张素II和醛固酮水平的影响:与假手术组组比较,模型组血中血管紧张素II、醛固酮水平显著升高,有统计学意义(P<0.01),与模型组相比,异叶青兰总黄酮和卡托普利给药组血管紧张素II、醛固酮显著降低,差异有统计学意义(P<0.01,P<0.05)见表11;

表11.给予异叶青兰总黄酮后各组大鼠血管紧张素II和醛固酮含量(n=8)

与假手术组比较,#P<0.05,##P<0.01;与模型组比较,*P<0.05,**P<0.01;

异叶青兰总黄酮对高血压大鼠血栓素B2和6-酮-前列腺素水平的影响:与假手术组组比较,模型组血中血栓素B2、6-酮-前列腺素水平显著升高,有统计学意义(P<0.01)与模型组相比,异叶青兰总黄酮和卡托普利给药组血栓素2和6-酮-前列腺素显著降低,差异有统计学意义(P<0.01,P<0.05);与模型组相比,异叶青兰总黄酮和卡托普利给药组6-酮-前列腺素与血栓素B2比值升高,差异有统计学意义(P<0.05),见表12;

表12.给予异叶青兰总黄酮后各组大鼠血栓素和6-酮-前列腺素含量(n=8)

与假手术组比较,#P<0.05,##P<0.01;与模型组比较,*P<0.05,**P<0.01

结果说明:

异叶青兰醇提物给药组能显著降低肾性高血压大鼠尾动脉收缩压;升高一氧化氮水平,降低内皮素水平;降低醛固酮水平,对血管紧张素II水平影响不大;降低血栓素B2水平,升高6-酮-前列腺素与血栓素B2比值。

太阳城集团本文
本文标题:异叶青兰有效部位的制备方法及用途.pdf
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