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一种 具有 抗癌 效果 组合
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摘要
申请专利号:

CN201310053667.3

申请日:

20130219

公开号:

太阳城集团CN103070875B

公开日:

20150128

当前法律状态:

有效性:

失效

法律详情:
IPC分类号: A61K31/7004,A61K31/58,A61K31/56,A61P35/00,A61P1/16,A61P35/04 主分类号: A61K31/7004,A61K31/58,A61K31/56,A61P35/00,A61P1/16,A61P35/04
申请人: 福州大学
发明人: 邵敬伟,李园芳,王继闯
地址: 350108 福建省福州市闽侯县上街镇大学城学园路2号福州大学新区
优先权: CN201310053667A
专利代理机构: 福州元创专利商标代理有限公司 代理人: 蔡学俊
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法律状态
申请(专利)号:

太阳城集团CN201310053667.3

授权太阳城集团号:

法律状态太阳城集团日:

法律状态类型:

摘要

太阳城集团本发明提供了一种具有抗癌效果的组合物,该组合主要包含了以下活性成分:2-脱氧-D-葡萄糖和熊果酸衍生物,该组合物能有效提高肿瘤部位的有效药物浓度,有效杀伤肝癌细胞,并降低对正常细胞的毒副作用,从而提高肿瘤治疗的整体效果,在实体肿瘤的治疗具有很大的应用前景。

权利要求书

太阳城集团1.一种具有抗癌效果的组合物,其特征在于所述组合物主要包含了以下活性成分:2-脱氧-D-葡萄糖和熊果酸衍生物,所述的熊果酸衍生物为[3β-乙酰氧基-熊果烷-12-烯-28-酰]-氨基己二胺,结构如如式(I)所示(I);所述的熊果酸衍生物与2-脱氧-D-葡萄糖的物质的量的比为1-10:4000-80000。2.如权利要求1所述的一种具有抗癌效果的组合物,其特征在于所述的熊果酸衍生物与2-脱氧-D-葡萄糖的物质的量的比优选为4:20000。3.如权利要求1或2所述的一种具有抗癌效果的组合物,其特征在于所述组合物由2-脱氧-D-葡萄糖和所述的熊果酸衍生物组成。4.如权利要求1所述的一种具有抗癌效果的组合物,其特征在于所述组合物在制备治疗肝癌的药物中的应用。

说明书

技术领域

太阳城集团本发明涉及一种具有抗癌效果的组合物,具体涉及具有肿瘤靶向的脱氧葡萄糖和抗肿瘤化合物的联合应用。 

背景技术

太阳城集团选择性杀伤肿瘤细胞而减轻对正常组织的损伤是目前治疗肿瘤策略所面临的重大挑战。区别于正常细胞,肿瘤细胞即使在有氧条件下,也主要通过糖酵解方式分解葡萄糖获能,且肿瘤的恶性程度越高,糖酵解特征就越明显。因此,靶向糖代谢异常的肿瘤细胞可能会成为选择性杀伤肿瘤细胞的一个新策略。利用糖酵解抑制剂等阻断糖酵解的进行,从而使得肿瘤细胞因能量供应缺乏而死亡,但正常细胞不受影响。 

太阳城集团 熊果酸(Ursolic acid,UA),萜类化合物,其相对分子量为456.68,分子式为C30H48O3,在自然界中资源丰富,主要以游离或糖苷的形式存在。研究发现,熊果酸具有广泛的生物学效应,如抗癌、抗肝损伤、抗疟、抗HIV、抗炎杀菌等,其中以抗癌活性最为显著,其抗癌谱广,不仅对多种致癌物有抵抗作用,而且对多种肿瘤细胞在体内、外均有抑制作用。因其副作用小,毒性低,显示出较大的临床应用潜力。发明者的课题组近年来对熊果酸的结构改造方面做了大量的研究工作,以改善其生物利用度并提高其抗癌活性,并发表过相关专利。但是,修饰后的熊果酸衍生物活性有所提高,但是对正常细胞的毒性也相应提高。 

将酵解抑制剂和化疗药物联合使用,一方面化疗药物针对增殖活跃的肿瘤细胞起杀伤作用,而糖酵解抑制剂靶向治疗增殖慢的乏氧肿瘤细胞,从而提高肿瘤治疗的整体效果,在实体肿瘤的治疗具有很大的应用前景。 

因此,发明者选择阻断糖酵解途径作为选择性杀伤肿瘤细胞的靶点,以Hep G2肝癌细胞作为研究对象,通过糖酵解抑制剂2-脱氧-D-葡萄糖和熊果酸及其衍生物、类似物的联合用药,对Hep G2细胞进行体外抗癌活性测试,结果表明,熊果酸及其衍生物和糖酵解抑制剂2-脱氧-D-葡萄糖联合使用能够选择性杀伤肿瘤细胞,而对正常细胞的毒性作用较低。 

发明内容

太阳城集团本发明目的是在克服现有技术不足的前提下,提供一种能够有效杀伤肝癌细胞的组合物。 

太阳城集团本发明提供了一种具有抗癌效果的组合物,其特征在于所述组合物主要包含了以下活性成分:2-脱氧-D-葡萄糖和熊果酸衍生物,所述的熊果酸衍生物为一种如式(I)所示的化合物或多种如式(I)所示的的化合物的混合物,式(I)中R1为羟基或乙酰氧基,R2为羟基、-NH(CH2)nNH2或以下式(II)~式(IV)之一,其中-NH(CH2)nNH2中n为2-12的偶数。熊果酸衍生物优选为N-[3β-乙酰氧基-熊果烷-12-烯-28-酰]-氨基己二胺(以下简写为“USW-006”),其结构式如式(V)所示。 

   (V)

其中熊果酸衍生物与2-脱氧-D-葡萄糖的物质的量的比为1-10:4000-80000,优选的比例为4:20000。

更具体的为一种具有抗癌效果的组合物,其特征在于所述组合物由2-脱氧-D-葡萄糖和熊果酸衍生物组成。 

太阳城集团 所述具有抗癌效果的组合物,其特征在于其在制备治疗肿瘤和肿瘤转移的药物的应用。 

本发明中提供该抗癌组合物对Hep G2细胞的体外活性试验,并提供正常肝癌细胞L02作为对照试验。 

太阳城集团其中如式(I)所示的的化合物,当式(I)中R1为羟基或乙酰氧基,R2为-NH(CH2)nNH2时的制备方法为: 

(1)1 重量份的熊果酸搅拌溶解于40-50 重量份的吡啶中,滴加入2-3 重量份的醋酸酐,加入少量的DMAP,室温下搅拌16-18 h,反应结束后,用2 mol/L HCl 调pH 3-4,蒸除溶剂,抽滤,水洗滤饼至中性,干燥,干燥后的产物干法上样,柱层析纯化,无水乙醇热溶,冷却重结晶,得白色粉末状的3-O-乙酰基熊果酸;

(2)1 重量份3-O-乙酰基熊果酸溶解于30-35 重量份CH2Cl2 中,分批次、逐滴加入1-2重量份的草酰氯,室温下搅拌反应12-24 h,蒸除溶剂及反应产生的气体,得3-O-乙酰基UA酰氯中间体的粗品,直接进入下一步反应;在上述中间体中加入20-30 重量份的CH2Cl2,三乙胺调节溶液pH 8-9,加入1-2 重量份的NH2(CH2)nNH2 (n=4、6、8、10或12),室温下搅拌反应12-24 h,反应结束后,反应液中加5-10 重量份的水,以2 mol/L HCl 调pH3-4,过滤,水洗滤饼至滤液pH 为中性,干燥,干燥后的产物干法上样,柱层析纯化,无水乙醇热溶,冷却重结晶,得白色粉末状,即为如式(I)所示的当R1为乙酰氧基时R2为-NH(CH2)nNH2 (n=4、6、8、10或12)的化合物;

太阳城集团(3)称取1-2 重量份的如式(I)所示的当R1为乙酰氧基时,R2为-NH(CH2)nNH2 (n=4、6、8、10或12)的化合物;溶于20-30 重量份的CH3OH-THF 中,所述CH3OH 与THF 的体积比为1 :1.5-2.5 ;加入4-8 重量份的4mol/LNaOH,室温下搅拌反应3-5h,向反应液中加入5-10 重量份的水,2mol/L HCl 调节pH 3-4,减压蒸除溶剂,水洗沉淀至中性,干燥;干燥后的产物干法上样,柱层析纯化,无水乙醇热溶,冷却重结晶,得为如式(I)所示的当R1为羟基时R2为-NH(CH2)nNH2 (n=4、6、8、10或12)的化合物。

如式(I)所示的当R1为乙酰氧基时R2为-NH(CH2)2NH2时的化合物的制备已在专利《一种具有抗癌活性的熊果酸衍生物及其制备方法》 申请号:201110373561.2中公开了。 

太阳城集团当如式(I)所示,当式(I)中R2如以下式(II)~式(IV)所示的化合物的制备方法已在专利《抗肿瘤活性的熊果酸含氮杂环类结构修饰物及其制备方法》申请号:201210180483.9中公开了。 

 附图说明  

图1为  熊果酸衍生物USW-006、2DG单独使用和联合使用对肝癌细胞HepG2存活率的影响

图2为   熊果酸衍生物USW-006和2DG单独使用和联合使用对正常肝细胞L02存活率的影响

具体实施方式

现结合实施例,对本发明做进一步具体说明,但本发明的范围不限于以下实施例。 

实施例 1

提供该抗癌组合物对Hep G2细胞的体外活性试验,并提供正常肝癌细胞L02作为对照试验。

熊果酸衍生物USW-006、2-DG及其组合物体外抗癌活性--MTT法检测药物对Hep G2细胞的增殖抑制作用 

① 取处于对数生长期状态的Hep G2细胞一瓶,用胰蛋白酶消化,制成1×104个/mL的细胞悬液。

② 将细胞悬液移入96孔板,每孔100 ??L,周围一圈用PBS封板,置37℃, 5% CO2培养箱中培养24 h。 

太阳城集团③ 将2-DG按照浓度分为10mmol/L、20mmol/L、40mmol/L、60mmol/L及80mmol/L 5组;将USW-006按照浓度分为1μmol/L、2μmol/L、4μmol/L、6μmol/L、8μmol/L及10μmol/L 5组;联合用药组按照浓度分为10mmol/L 2-DG联合2μmol/L USW-006、20mmol/L 2-DG联合4μmol/L USW-006、40mmol/L 2-DG联合6μmol/L USW-006、60mmol/L 2-DG联合8μmol/L USW-006、80mmol/L 2-DG联合10μmol/L UA5 组。 

太阳城集团④ 移去培养基,按照浓度梯度加入受试组合物,每孔100??L,另设空白对照组。每组设4个复孔。药物作用24 h后,去除含药培养基,于每孔中加入无血清、无酚红1640培养基90 ??L,再加入MTT溶液10 ??L,继续孵育4 h后,终止培养。 

⑤ 弃去96孔板孔内上清液,每孔加入100 ??L DMSO,振荡20 min,于570 nm波长处测定各孔光吸收值(OD值),计算细胞的存活率:存活率(%)=(用药组平均OD值÷空白对照组平均OD值)×100%。实验结果如表1和表2所示,应用GraphPad Prism软件进行实验结果处理,如图1和图2所示。 

表1. 熊果酸衍生物USW-006、2DG单独使用和联合使用对肝癌细胞HepG2存活率的影响 

 表2. 熊果酸衍生物USW-006和2DG单独使用和联合使用对正常肝细胞L02存活率的影响

    

图1中, 白色图例为HepG2细胞经USW-006(2, 4, 6, 8, 10 ??M)处理24h后的存活率,灰色图例为HepG2细胞经2DG (10, 20, 40, 60, 80 mM)处理24h后的存活率,黑色图例为HepG2细胞经USW-006和2DG联合作用处理24h后的存活率。

图2中, 白色图例为L02细胞经USW-006(2, 4, 6, 8, 10 ??M)处理24h后的存活率,灰色图例为L02细胞经2DG (10, 20, 40, 60, 80 mM)处理24h后的存活率,黑色图例为L02细胞经USW-006和2DG联合作用处理24h后的存活率。 

    如表1、表2、图1和图2所示,当2-DG和USW-006单独使用时,对HepG2肝癌细胞和肝正常细胞L02均具有不同程度的增殖抑制作用,并呈剂量依赖性。当USW-006和2-DG联合使用时,其对肝癌细胞HepG2具有显著的增殖抑制作用,并呈协同相加效应,而联合用药对肝正常细胞L02协同效应不明显。 

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