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利用淡水鱼中提取的活性多肽制备复配物的方法.pdf

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利用 淡水鱼 提取 活性 多肽 制备 复配物 方法
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摘要
申请专利号:

太阳城集团CN201810600259.8

申请日:

20180612

公开号:

太阳城集团CN108887687A

公开日:

20181127

当前法律状态:

有效性:

审查中

法律详情:
IPC分类号: A23L33/165,A23L33/18,A23J1/04,A23J3/04 主分类号: A23L33/165,A23L33/18,A23J1/04,A23J3/04
申请人: 兰溪市沉默生物科技有限公司
发明人: 周建波
地址: 321102 浙江省金华市兰溪市兰江街道李渔路162号
优先权: CN201810600259A
专利代理机构: 北京国翰知识产权代理事务所(普通合伙) 代理人: 吕彩霞
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法律状态
申请(专利)号:

CN201810600259.8

授权太阳城集团号:

法律状态太阳城集团日:

法律状态类型:

摘要

太阳城集团本发明公开了利用淡水鱼中提取的活性多肽制备复配物的方法,包括:1提取,将鲫鱼骨粉加入蒸馏水匀浆后超滤,超滤液中加入氯仿、异丙醇与1,3,5‑三甲氧基苯萃取,然后经洗脱得鲫鱼活性多肽;2制备螯合亚铁,将鲫鱼活性多肽液与硫酸亚铁溶液震荡合成制得亚铁螯合肽;3制备螯合锌,取硫酸锌溶液与鲫鱼活性多肽液、泛内脂混合震荡合成制得锌螯合肽;4复配,最后将亚铁螯合肽、锌螯合肽与鲫鱼活性多肽液混合均匀并干燥粉碎即得复配物。有益效果为:本方法操作简单,不仅环保节约,而且实现了物料的全效利用与附加值的提升,复配物中多肽螯合亚铁与多肽螯合锌的螯合速度较快,螯合率较高,提高了金属离子的应用效率。

权利要求书

太阳城集团1.利用淡水鱼中提取的活性多肽制备复配物的方法,包括:提取、制备螯合亚铁、制备螯合锌、复配,其特征在于:所述提取步骤为:将鲫鱼碎骨与鳍冲洗干净,干燥后粉碎得骨粉,将骨粉溶于蒸馏水中并超声匀浆,离心收集上清,再经截留分子量为20KDa的中空纤维超滤柱超滤,在超滤液中加入氯仿、异丙醇与1,3,5-三甲氧基苯萃取;将萃取液透析、离心、真空干燥后得到活性多肽粗品,粗品水溶后离心取上清,再以氯化钠梯度溶液洗脱,得鲫鱼活性多肽。2.根据权利要求1所述的利用淡水鱼中提取的活性多肽制备复配物的方法,其特征在于:所述提取步骤中,氯仿的添加量为超滤液体积的1.5~2倍,异丙醇的添加量为超滤液体积的5~8倍,1,3,5-三甲氧基苯的添加量为超滤液重量的0.5~0.8‰。3.根据权利要求1所述的利用淡水鱼中提取的活性多肽制备复配物的方法,其特征在于:所述提取步骤中,氯化钠梯度溶液的浓度为0.1mol/L、0.2mol/L、0.4mol/L、0.6mol/L、0.8mol/L、1.0mol/L。4.根据权利要求1所述的利用淡水鱼中提取的活性多肽制备复配物的方法,其特征在于:所述制备螯合亚铁步骤为:将鲫鱼活性多肽粉复溶成肽液,取肽液,依次加入抗坏血酸与硫酸亚铁溶液震荡合成,离心浓缩,弃沉淀,上清液于旋转蒸发器真空浓缩,冷冻干燥后即得亚铁螯合肽。5.根据权利要求4所述的利用淡水鱼中提取的活性多肽制备复配物的方法,其特征在于:所述制备螯合亚铁步骤中,肽液为120~150重量份,抗坏血酸为0.0011-0.0013重量份,硫酸亚铁溶液为200~220重量份。6.根据权利要求4所述的利用淡水鱼中提取的活性多肽制备复配物的方法,其特征在于:所述制备螯合亚铁步骤中,震荡合成的pH为7.0~7.2,温度为25~28℃,震荡合成太阳城集团为15~30min。7.根据权利要求1所述的利用淡水鱼中提取的活性多肽制备复配物的方法,其特征在于:所述制备螯合锌步骤为:将硫酸锌溶液添加到鲫鱼活性多肽溶液中,再在混合溶液中添加泛内脂震荡合成;添加纯乙醇,使得乙醇体积分数达到85%,室温静置,离心去上清液,然后用纯乙醇反复冲洗沉淀物,至以双硫腙用作指示剂无游离锌离子检出为止,低温干燥即为锌螯合肽。8.根据权利要求7所述的利用淡水鱼中提取的活性多肽制备复配物的方法,其特征在于:所述制备螯合锌步骤中,硫酸锌溶液为10重量份,硫酸锌溶液的浓度为0.73~0.85mol/L;鲫鱼活性多肽溶液为55~80重量份,鲫鱼活性多肽溶液中的多肽质量浓度为30~33mg/mL;泛内脂为0.012~0.015重量份。9.根据权利要求7所述的利用淡水鱼中提取的活性多肽制备复配物的方法,其特征在于:所述制备螯合锌步骤中,震荡合成时的pH值为6~6.2,震荡合成温度为42~45℃,震荡合成太阳城集团为30~60min。10.根据权利要求1所述的利用淡水鱼中提取的活性多肽制备复配物的方法,其特征在于:所述复配步骤为:称取10~15重量份亚铁螯合肽、20~30重量份锌螯合肽溶解于300~350重量份12~14%鲫鱼活性多肽溶液中,混合均匀后置于旋转蒸发器中,以20~22℃真空浓缩,冷冻干燥后粉碎,过160~200目筛即得活性多肽复配物。

说明书

技术领域

本发明涉及淡水鱼深加工领域,尤其是涉及利用淡水鱼中提取的活性多肽制备复配物的方法。

技术背景

广义的说,能生活在盐度为千分之三的淡水中的鱼类就可称为淡水鱼。狭义的说,系指在其生活史中部分阶段如只有「幼鱼期」或「成鱼期」,或是终其一生都必须在淡水域中渡过的鱼类即为淡水鱼。世界上已知鱼类约有26000多种,是脊椎动物中种类最多的一大类,约占脊椎动物总数的48.1%。它们绝大多数生活在海洋里,淡水鱼约有8600余种。我国现有鱼类近3千种,其中淡水鱼有1000余种。

太阳城集团鲫鱼(学名:Carassius auratus),简称鲫,俗名鲫瓜子、月鲫仔、土鲫、细头、鲋鱼、寒鲋、喜头、鲫壳、河鲫。常见于欧亚地区,为常见淡水鱼,属于辐鳍鱼亚纲鲤形目鲤科鲫属。鲫鱼经过人工养殖和选育,可以产生许多新品种,例如金鱼就是由此产生的一种观赏鱼类。鲫鱼主要是以植物为食的杂食性鱼,喜群集而行,择食而居。肉质细嫩,营养价值很高,每百克肉含蛋白质13克、脂肪11克,并含有大量的钙、磷、铁等矿物质。鲫鱼药用价值极高,其性平味甘,入胃、肾,具有和中补虚、除羸、温胃进食、补中生气之功效。鲫鱼分布广泛,全国各地水域常年均有生产,以2~4月份和8~12月份的鲫鱼最为肥美,为我国重要食用鱼类之一,最大体长约30厘米,栖息深度为0~20米,无毒,经济型食用鱼类,物美价廉,多产于黄河流域、长江流域、珠江流域一带,其中洱海鲫鱼较为出名。但是鲫鱼骨与鳍常常丢弃,不仅污染环境,而且降低了鲫鱼的经济价值。

发明内容

本发明的目的在于提供利用淡水鱼中提取的活性多肽制备复配物的方法,本方法操作简单,不仅避免了环境污染,节约了废弃物处理成本,而且实现了物料的全效利用与附加值的提升,复配物中多肽螯合亚铁与多肽螯合锌的螯合速度较快,螯合率较高,提高了金属离子的应用效率。

太阳城集团本发明针对背景技术中提到的问题,采取的技术方案为:

太阳城集团利用淡水鱼中提取的活性多肽制备复配物的方法,包括:提取、制备螯合亚铁、制备螯合锌、复配,具体包括以下步骤:

提取:将鲫鱼碎骨与鳍冲洗干净,干燥后粉碎即得骨粉,按料液比1:10~13溶于蒸馏水中并超声匀浆,在0~1℃、1500~1800/min离心12~15min,收集上清,再经截留分子量为20KDa的中空纤维超滤柱超滤,在超滤液中加入1.5~2体积倍的氯仿及5~8体积倍的异丙醇,再加入超滤液重量0.5~0.8‰的1,3,5-三甲氧基苯,萃取2~3次;将萃取液透析、离心、真空干燥后得到活性多肽粗品,粗品水溶后离心取上清,再以0.1mol/L、0.2mol/L、0.4mol/L、0.6mol/L、0.8mol/L、1.0mol/L的氯化钠梯度溶液洗脱,得鲫鱼活性多肽;鲫鱼活性多肽提取工艺简单,利用鲫鱼消费后的鱼骨与鱼鳍制备活性多肽,不仅避免了污染环境,节约了废弃物处理成本,而且实现了变废为宝,实现了物料的全效利用与附加值增殖;提取时,1,3,5-三甲氧基苯能够与异丙醇发生氢键连接等作用,增强异丙醇的萃取能力,进而大大增强体系的萃取效率,提高活性多肽的纯度与得率;同时,1,3,5-三甲氧基苯还能够降解提取体系中的蛋白酶,防止蛋白酶对活性多肽造成进一步降解,保持活性多肽具有较高的活性,最大化地发挥活性多肽的生物学功效,所得鲫鱼活性多肽的主要氨基酸组成为甘氨酸和丙氨酸,对DPPH、·OH和·O2-具有较好的清除效果,同时可以显著降低血清和肝脏中总胆固醇、甘油三酯的浓度,促进NIH/3T3细胞生长,对NIH/3T3细胞胶原蛋白的分泌有显著的促进作用,还具有一定的抗氧化损伤能力、降低血糖、改善糖耐量的功效;

制备螯合亚铁:将鲫鱼活性多肽粉复溶成3~4%的肽液,调节pH值至7.0~7.2,取120~150重量份肽液,加入0.0011-0.0013的抗坏血酸,再加入200~220重量份0.5~1mol/L的硫酸亚铁溶液,在25~28℃温度下震荡合成15~30min,于1~2℃、8000~12000r/min条件下离心浓缩15~45min,弃沉淀,上清液于旋转蒸发器真空浓缩,冷冻干燥后即得亚铁螯合肽;亚铁螯合肽易于被机体吸收,避免了无机铁盐的稳定性差、胃肠刺激大、易受到肠内容物干扰、生物利用率低、存在一定毒副作用等缺点,不仅提高了亚铁离子的利用效率,而且鲫鱼活性多肽还可以增强机体体质,增强机体抗免疫能力,补充机体所需氨基酸;

太阳城集团制备螯合锌:将10重量份浓度为0.73~0.85mol/L的硫酸锌溶液添加到55~80重量份多肽质量浓度为30~33mg/mL的鲫鱼活性多肽溶液中,再在混合溶液中添加0.012~0.015重量份泛内脂,调节pH值至6~6.2,将混合物置于42~45℃恒温震荡合成30~60min;添加纯乙醇,使得乙醇体积分数达到85%,室温静置30~60min,于5000~6000r/min条件下离心15~30min,去上清液,然后用纯乙醇反复冲洗沉淀物,至以双硫腙用作指示剂无游离锌离子检出为止,低温干燥即为锌螯合肽;在本步骤的合适条件下,活性多肽与锌的螯合速度较快,螯合率较高,螯合物结构稳定,易于保存,同时提高了锌离子的利用效率;泛内脂的具有较强的电负性,可以将Zn2+吸附至周围,使泛内脂周边的Zn2+浓度增加,另外泛内脂还可与活性多肽分子通过氢键与氢键簇发生多重交叠,使得活性多肽分子团聚在泛内脂分子周围,从而增加了多肽分子与Zn2+的接触频率与几率,促使二者螯合,提高螯合速率与螯合率,增加活性多肽螯合锌的结构稳定性;锌是骨骼生长和骨形成中的重要营养因子,锌元素在体内可以增强大腿股骨的骨质量,提高骨硬度和生长板活性,促进成骨细胞的骨形成和矿化,无机锌不稳定、吸收率低,不适合长期摄入,而锌螯合肽可以有效避免上述一系列缺点,而且锌螯合肽对矿物质的生物利用率具有更好的作用,它通过载体介导的方式来维持矿物质的可溶性并提高其吸收能力;

太阳城集团复配:称取10~15重量份亚铁螯合肽、20~30重量份锌螯合肽溶解于300~350重量份12~14%鲫鱼活性多肽溶液中,混合均匀后置于旋转蒸发器中,以20~22℃真空浓缩,冷冻干燥后粉碎,过160~200目筛即得活性多肽复配物;金属螯合肽可利用小肽配位体转运系统进行转运,具有转运耗能低、转运速度快和不易被饱和等优点,有利于促进金属元素吸收利用,金属螯合肽能抑制小肠刷状缘细胞中肽酶活性,有助于完整多肽作为金属元素配体通过小肽转运系统进入肠黏膜细胞,提高金属螯合肽的稳定性,并能减少金属元素间的拮抗作用;同时鲫鱼活性多肽具有优异的抗氧化损伤功能,同时可以降低血糖、改善糖耐量,可以有效强化机体免疫系统,还具有延缓衰老、抗肿瘤、抗疲劳、抗凝血等功能,同时也可以为机体补充氨基酸,是一种高效、安全的利用淡水鱼中提取的活性多肽制备的复配物。

与现有技术相比,本发明的优点在于:

1)提取时,1,3,5-三甲氧基苯能够与异丙醇发生氢键连接等作用,增强异丙醇的萃取能力,进而大大增强体系的萃取效率,提高活性多肽的纯度与得率;

太阳城集团2)提取过程中,1,3,5-三甲氧基苯还能够降解提取体系中的蛋白酶,防止蛋白酶对活性多肽造成进一步降解,保持活性多肽具有较高的活性,最大化地发挥活性多肽的生物学功效;

太阳城集团3)多肽与锌螯合时,泛内脂具有较强的电负性,可以将Zn2+吸附至周围,使泛内脂周边的Zn2+浓度增加,还可与使得活性多肽分子团聚在泛内脂分子周围,从而增加了多肽分子与Zn2+的接触频率与几率,促使二者螯合,提高螯合速率与螯合率,增加活性多肽螯合锌的结构稳定性;

太阳城集团4)鲫鱼活性多肽提取工艺简单,利用鲫鱼消费后的鱼骨与鱼鳍制备活性多肽,不仅避免了污染环境,节约了废弃物处理成本,而且实现了变废为宝,实现了物料的全效利用与附加值增殖。

具体实施方式

下面通过实施例对本发明方案作进一步说明:

实施例1:

太阳城集团利用淡水鱼中提取的活性多肽制备复配物的方法,包括以下步骤:

太阳城集团S1:将鲫鱼碎骨与鳍制成骨粉,溶于蒸馏水并超声匀浆,离心取上清,超滤,在超滤液中加入1.5体积倍的氯仿及5体积倍的异丙醇,再加入超滤液重量0.5‰的1,3,5-三甲氧基苯,萃取2次;将萃取液透析、离心、真空干燥后得到活性多肽粗品,粗品水溶后离心取上清,再以氯化钠梯度溶液洗脱,得鲫鱼活性多肽;

太阳城集团S2:将鲫鱼活性多肽粉复溶成3%的肽液,调节pH值至7.0,取120重量份肽液,加入0.0011的抗坏血酸,再加入200重量份0.5mol/L的硫酸亚铁溶液,在25℃温度下震荡合成15min,于1℃、8000r/min条件下离心浓缩15min,弃沉淀,上清液于旋转蒸发器真空浓缩,冷冻干燥后即得亚铁螯合肽;

S3:将10重量份浓度为0.73mol/L的硫酸锌溶液添加到55重量份多肽质量浓度为30mg/mL的鲫鱼活性多肽溶液中,pH为6、温度为42℃条件下震荡合成30min;添加纯乙醇使其体积分数达到85%,室温静置30min,5000r/min离心15min,去上清液,然后用纯乙醇反复冲洗沉淀物,至以双硫腙用作指示剂无游离锌离子检出为止,低温干燥即为锌螯合肽;

S4:称取10重量份亚铁螯合肽、20重量份锌螯合肽溶解于300重量份12%鲫鱼活性多肽溶液中,混合均匀后置于旋转蒸发器中,以20℃真空浓缩,冷冻干燥后粉碎,过160目筛即得活性多肽复配物;

实施例2:

利用淡水鱼中提取的活性多肽制备复配物的方法,具体包括以下步骤:

太阳城集团提取:将鲫鱼碎骨与鳍冲洗干净,干燥后粉碎即得骨粉,按料液比1:13溶于蒸馏水中并超声匀浆,在1℃、1800/min离心15min,收集上清,再经截留分子量为20KDa的中空纤维超滤柱超滤,在超滤液中加入2体积倍的氯仿及8体积倍的异丙醇;将萃取液透析、离心、真空干燥后得到活性多肽粗品,粗品水溶后离心取上清,再以0.1mol/L、0.2mol/L、0.4mol/L、0.6mol/L、0.8mol/L、1.0mol/L的氯化钠梯度溶液洗脱,得鲫鱼活性多肽;鲫鱼活性多肽提取工艺简单,利用鲫鱼消费后的鱼骨与鱼鳍制备活性多肽,不仅避免了污染环境,节约了废弃物处理成本,而且实现了变废为宝,实现了物料的全效利用与附加值增殖;所得鲫鱼活性多肽的主要氨基酸组成为甘氨酸和丙氨酸,对DPPH、·OH和·O2-具有较好的清除效果,同时可以显著降低血清和肝脏中总胆固醇、甘油三酯的浓度,促进NIH/3T3细胞生长,对NIH/3T3细胞胶原蛋白的分泌有显著的促进作用,还具有一定的抗氧化损伤能力、降低血糖、改善糖耐量的功效;

制备螯合亚铁:将鲫鱼活性多肽粉复溶成4%的肽液,调节pH值至7.2,取150重量份肽液,加入0.0013的抗坏血酸,再加入220重量份1mol/L的硫酸亚铁溶液,在28℃温度下震荡合成30min,于2℃、12000r/min条件下离心浓缩45min,弃沉淀,上清液于旋转蒸发器真空浓缩,冷冻干燥后即得亚铁螯合肽;亚铁螯合肽易于被机体吸收,避免了无机铁盐的稳定性差、胃肠刺激大、易受到肠内容物干扰、生物利用率低、存在一定毒副作用等缺点,不仅提高了亚铁离子的利用效率,而且鲫鱼活性多肽还可以增强机体体质,增强机体抗免疫能力,补充机体所需氨基酸;

制备螯合锌:将10重量份浓度为0.85mol/L的硫酸锌溶液添加到80重量份多肽质量浓度为33mg/mL的鲫鱼活性多肽溶液中,再在混合溶液中添加0.015重量份泛内脂,调节pH值至6.2,将混合物置于45℃恒温震荡合成60min;添加纯乙醇,使得乙醇体积分数达到85%,室温静置60min,于6000r/min条件下离心30min,去上清液,然后用纯乙醇反复冲洗沉淀物,至以双硫腙用作指示剂无游离锌离子检出为止,低温干燥即为锌螯合肽;在本步骤的合适条件下,活性多肽与锌的螯合速度较快,螯合率较高,螯合物结构稳定,易于保存,同时提高了锌离子的利用效率;泛内脂的具有较强的电负性,可以将Zn2+吸附至周围,使泛内脂周边的Zn2+浓度增加,另外泛内脂还可与活性多肽分子通过氢键与氢键簇发生多重交叠,使得活性多肽分子团聚在泛内脂分子周围,从而增加了多肽分子与Zn2+的接触频率与几率,促使二者螯合,提高螯合速率与螯合率,增加活性多肽螯合锌的结构稳定性;锌是骨骼生长和骨形成中的重要营养因子,锌元素在体内可以增强大腿股骨的骨质量,提高骨硬度和生长板活性,促进成骨细胞的骨形成和矿化,无机锌不稳定、吸收率低,不适合长期摄入,而锌螯合肽可以有效避免上述一系列缺点,而且锌螯合肽对矿物质的生物利用率具有更好的作用,它通过载体介导的方式来维持矿物质的可溶性并提高其吸收能力;

复配:称取15重量份亚铁螯合肽、30重量份锌螯合肽溶解于350重量份14%鲫鱼活性多肽溶液中,混合均匀后置于旋转蒸发器中,以22℃真空浓缩,冷冻干燥后粉碎,过200目筛即得活性多肽复配物;金属螯合肽可利用小肽配位体转运系统进行转运,具有转运耗能低、转运速度快和不易被饱和等优点,有利于促进金属元素吸收利用,金属螯合肽能抑制小肠刷状缘细胞中肽酶活性,有助于完整多肽作为金属元素配体通过小肽转运系统进入肠黏膜细胞,提高金属螯合肽的稳定性,并能减少金属元素间的拮抗作用;同时鲫鱼活性多肽具有优异的抗氧化损伤功能,同时可以降低血糖、改善糖耐量,可以有效强化机体免疫系统,还具有延缓衰老、抗肿瘤、抗疲劳、抗凝血等功能,同时也可以为机体补充氨基酸,是一种高效、安全的利用淡水鱼中提取的活性多肽制备的复配物。

实施例3:

利用淡水鱼中提取的活性多肽制备复配物的方法,包括:提取、制备螯合亚铁、制备螯合锌、复配,具体包括以下步骤:

提取:将鲫鱼碎骨与鳍冲洗干净,干燥后粉碎即得骨粉,按料液比1:12溶于蒸馏水中并超声匀浆,在1℃、1600/min离心14min,收集上清,再经截留分子量为20KDa的中空纤维超滤柱超滤,在超滤液中加入2体积倍的氯仿及6体积倍的异丙醇,再加入超滤液重量0.7‰的1,3,5-三甲氧基苯,萃取3次;将萃取液透析、离心、真空干燥后得到活性多肽粗品,粗品水溶后离心取上清,再以0.1mol/L、0.2mol/L、0.4mol/L、0.6mol/L、0.8mol/L、1.0mol/L的氯化钠梯度溶液洗脱,得鲫鱼活性多肽;鲫鱼活性多肽提取工艺简单,利用鲫鱼消费后的鱼骨与鱼鳍制备活性多肽,不仅避免了污染环境,节约了废弃物处理成本,而且实现了变废为宝,实现了物料的全效利用与附加值增殖;提取时,1,3,5-三甲氧基苯能够与异丙醇发生氢键连接等作用,增强异丙醇的萃取能力,进而大大增强体系的萃取效率,提高活性多肽的纯度与得率;同时,1,3,5-三甲氧基苯还能够降解提取体系中的蛋白酶,防止蛋白酶对活性多肽造成进一步降解,保持活性多肽具有较高的活性,最大化地发挥活性多肽的生物学功效,所得鲫鱼活性多肽的主要氨基酸组成为甘氨酸和丙氨酸,对DPPH、·OH和·O2-具有较好的清除效果,同时可以显著降低血清和肝脏中总胆固醇、甘油三酯的浓度,促进NIH/3T3细胞生长,对NIH/3T3细胞胶原蛋白的分泌有显著的促进作用,还具有一定的抗氧化损伤能力、降低血糖、改善糖耐量的功效;

制备螯合亚铁:将鲫鱼活性多肽粉复溶成3.5%的肽液,调节pH值至7.1,取140重量份肽液,加入0.0011重量份的抗坏血酸,再加入200重量份1mol/L的硫酸亚铁溶液,在28℃温度下震荡合成15min,于1℃、10000r/min条件下离心浓缩30min,弃沉淀,上清液于旋转蒸发器真空浓缩,冷冻干燥后即得亚铁螯合肽;亚铁螯合肽易于被机体吸收,避免了无机铁盐的稳定性差、胃肠刺激大、易受到肠内容物干扰、生物利用率低、存在一定毒副作用等缺点,不仅提高了亚铁离子的利用效率,而且鲫鱼活性多肽还可以增强机体体质,增强机体抗免疫能力,补充机体所需氨基酸;

制备螯合锌:将10重量份浓度为0.8mol/L的硫酸锌溶液添加到60重量份多肽质量浓度为32mg/mL的鲫鱼活性多肽溶液中,再在混合溶液中添加0.014重量份泛内脂,调节pH值至6,将混合物置于44℃恒温震荡合成45min;添加纯乙醇,使得乙醇体积分数达到85%,室温静置45min,于5500r/min条件下离心25min,去上清液,然后用纯乙醇反复冲洗沉淀物,至以双硫腙用作指示剂无游离锌离子检出为止,低温干燥即为锌螯合肽;在本步骤的合适条件下,活性多肽与锌的螯合速度较快,螯合率较高,螯合物结构稳定,易于保存,同时提高了锌离子的利用效率;泛内脂的具有较强的电负性,可以将Zn2+吸附至周围,使泛内脂周边的Zn2+浓度增加,另外泛内脂还可与活性多肽分子通过氢键与氢键簇发生多重交叠,使得活性多肽分子团聚在泛内脂分子周围,从而增加了多肽分子与Zn2+的接触频率与几率,促使二者螯合,提高螯合速率与螯合率,增加活性多肽螯合锌的结构稳定性;锌是骨骼生长和骨形成中的重要营养因子,锌元素在体内可以增强大腿股骨的骨质量,提高骨硬度和生长板活性,促进成骨细胞的骨形成和矿化,无机锌不稳定、吸收率低,不适合长期摄入,而锌螯合肽可以有效避免上述一系列缺点,而且锌螯合肽对矿物质的生物利用率具有更好的作用,它通过载体介导的方式来维持矿物质的可溶性并提高其吸收能力;

复配:称取12重量份亚铁螯合肽、24重量份锌螯合肽溶解于326重量份14%鲫鱼活性多肽溶液中,混合均匀后置于旋转蒸发器中,以20℃真空浓缩,冷冻干燥后粉碎,过200目筛即得活性多肽复配物;金属螯合肽可利用小肽配位体转运系统进行转运,具有转运耗能低、转运速度快和不易被饱和等优点,有利于促进金属元素吸收利用,金属螯合肽能抑制小肠刷状缘细胞中肽酶活性,有助于完整多肽作为金属元素配体通过小肽转运系统进入肠黏膜细胞,提高金属螯合肽的稳定性,并能减少金属元素间的拮抗作用;同时鲫鱼活性多肽具有优异的抗氧化损伤功能,同时可以降低血糖、改善糖耐量,可以有效强化机体免疫系统,还具有延缓衰老、抗肿瘤、抗疲劳、抗凝血等功能,同时也可以为机体补充氨基酸,是一种高效、安全的利用淡水鱼中提取的活性多肽制备的复配物。

试验例:

太阳城集团1.依据下式计算多肽得率:

,

式中,η为多肽的得率,C为多肽浓度(mg/mL),V为多肽溶液的体积(mL),M为鲫鱼鱼骨粉的质量(g)。

太阳城集团2.锌螯合肽中锌含量测试:称取0.1g锌螯合肽样品,溶于50mL纯水中,摇匀后取10mL于100mL锥形瓶中,加入氯化铵缓冲溶液(pH10.0),滴加两滴铬黑T指示剂,然后用0.01mol/LNa2EDTA滴定,溶液颜色由紫色变为淡蓝色,0.5min内不褪色为滴定终点,记录消耗的Na2EDTA体积并计算,锌螯合肽含锌量按下式计算:

,

太阳城集团式中:X为锌螯合肽含锌量,%;M为锌的摩尔质量,g/mol;C为Na2EDTA的浓度,mol/L;V为滴定Na2EDTA的体积,mL;m为所称取的胶原肽螯合锌的质量,g。

太阳城集团经测定,实施例1~3中的鲫鱼活性多肽与锌螯合肽的相关测定结果如表1所示。由表1可知,实施例1与实施例3中的鲫鱼活性多肽的得率保持一致,并且显著高于实施例2;实施例2与实施例3中的锌螯合肽中的锌含量也明显高于实施例1中锌螯合肽中的锌含量。

表1.实施例1~3中的相关测定结果

本发明操作步骤中的常规操作为本领域技术人员所熟知,在此不进行赘述。

以上所述的实施例对本发明的技术方案进行了详细说明,应理解的是以上所述仅为本发明的具体实施例,并不用于限制本发明,凡在本发明的原则范围内所做的任何修改、补充或类似方式替代等,均应包含在本发明的保护范围之内。

太阳城集团本文
本文标题:利用淡水鱼中提取的活性多肽制备复配物的方法.pdf
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