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一种结合瓶外生根技术的那坡报春苣苔的组培快繁方法.pdf

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一种 结合 外生 技术 那坡 报春苣苔 组培快繁 方法
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摘要
申请专利号:

CN201810664389.8

申请日:

20180625

公开号:

CN108834890A

公开日:

20181120

当前法律状态:

有效性:

审查中

法律详情:
IPC分类号: A01H4/00,A01G22/00,A01G24/28,A01G24/15,A01G24/12,A01G24/20,A01G24/10 主分类号: A01H4/00,A01G22/00,A01G24/28,A01G24/15,A01G24/12,A01G24/20,A01G24/10
申请人: 广西壮族自治区农业科学院花卉研究所
发明人: 闫海霞,关世凯,陶大燕,黄昌艳,何荆洲,崔学强,张自斌,卜朝阳,邓杰玲
地址: 530007 广西壮族自治区南宁市西乡塘区大学东路174号
优先权: CN201810664389A
专利代理机构: 北京中誉威圣知识产权代理有限公司 代理人: 朱志宽
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法律状态
申请(专利)号:

太阳城集团CN201810664389.8

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法律状态类型:

摘要

本发明涉及植物组织培养技术领域,具体的是一种结合瓶外生根技术的那坡报春苣苔的组培快繁方法。一种结合瓶外生根技术的那坡报春苣苔的组培快繁方法,包括以下步骤:(1)外植体的消毒灭菌、(2)不定芽的诱导、(3)增殖培养、(4)幼株的选取以及预处理、(5)基质配制、(6)种植和(7)移栽后管理。本发明的方法缩短了那坡报春苣苔育苗周期,节约成本、节约室内培养空间,具有组培苗生根率高,成活率高的优点。

权利要求书

1.一种结合瓶外生根技术的那坡报春苣苔的组培快繁方法,其特征在于,包括以下步骤:(1)外植体的消毒灭菌:取经过驯化栽培的那坡报春苣苔的成熟叶片,用自来水冲洗25-30min。在超净工作台上,在0.2%的次氯酸钠溶液中浸泡5-10min,无菌水冲洗3-5次,在距离叶片中脉两侧0.5-1.0cm处进行平行于中脉的切割,将中脉切成长4-5cm,宽1-2cm;再用75%酒精中浸泡叶脉10s,无菌水冲洗3-5次,最后用0.1%升汞浸泡4-6min,无菌水冲洗3-5次;叶脉灭菌后备用;(2)不定芽的诱导:将经过灭菌的叶脉按照叶面朝上,叶背朝下方式的接入诱导培养基中培养50-60d,培养温度22-24℃,光照:10-12h/d,光照强度1000-1500lx;(3)增殖培养:将萌发的新芽切取下来,接入增殖培养基中培养45-60d,培养温度22-24℃,光照:10-12h/d,光照强度1000-1500lx;(4)幼株的选取以及预处理:将经过增殖培养的瓶苗在室温下封盖炼苗3-5d,光照为10-12h/d,光照强度2000-2500lx;在超净工作台上切取具有2-4对叶片的组培苗用于瓶外生根,而未达到瓶外生根要求的小苗则继续进行增殖培养;将切取下来的组培苗在50%多菌灵可湿性粉剂800-1200倍液中浸泡5-10min,再将其基部放在生根液中速蘸2-3s,生根液为0.3-0.5%等量IBA和NAA混合溶液;(5)基质配制:配制基质,将基质的pH值调节为7.5-8.5;基质混合均匀后采用0.01-0.05%的高锰酸钾溶液浇灌淋透,分装入50孔或者72孔的穴盘中;(6)种植:事先在已经浇好水的移栽基质上用镊子戳成一个0.5-1.0cm深的小孔,然后用镊子夹住把小苗插入孔中,左手扶苗,右手把小苗基部的基质压实,浇透定根水,并根据基质的流失情况适当添加相应的基质;(7)移栽后管理:将种植好的穴盘苗放在有遮阳网的荫棚下,遮光率在60-70%,保持良好的通风;采用间歇性喷雾系统控制空气湿度,每天从上午9时-下午17时,每隔2小时喷雾10-15s,保持空气湿度在75-85%;小苗的浇水根据基质的干湿程度进行,当基质面发白时,表明需要补水,每次补水都要求浇透基质;移栽后在第7、14、21d分别进行一次叶面肥的喷施,叶面肥5000-6000倍液;移植后管理期间,温度为20-30℃,光照强度2000-2500lx;移栽35-40d即可生根;待植株叶面铺满一个穴盘孔时,即可进行上盆移栽。2.根据权利要求1所述的结合瓶外生根技术的那坡报春苣苔的组培快繁方法,其特征在于,步骤(1)中所述的成熟叶片为第2-3轮叶片。3.根据权利要求1所述的结合瓶外生根技术的那坡报春苣苔的组培快繁方法,其特征在于,步骤(1)中0.1%升汞中加入2-3滴吐温20。4.根据权利要求1所述的结合瓶外生根技术的那坡报春苣苔的组培快繁方法,其特征在于,步骤(2)中所述的诱导培养基为N+KT1.0-3.0mg/L+IBA0.5-1.5mg/L,pH7.0-7.5。5.根据权利要求1所述的结合瓶外生根技术的那坡报春苣苔的组培快繁方法,其特征在于,步骤(3)中所述的增殖培养基为N+6-BA1.0-3.0mg/L+ZT1.0-3.0mg/L+IBA0.5-1.5mg/L,pH7.0-7.5。6.根据权利要求1所述的结合瓶外生根技术的那坡报春苣苔的组培快繁方法,其特征在于,步骤(4)中0.3-0.5%等量IBA和NAA混合溶液:由相等质量的IBA和NAA混合配制而成。7.根据权利要求1所述的结合瓶外生根技术的那坡报春苣苔的组培快繁方法,其特征在于,步骤(5)中的基质由泥炭、珍珠岩、蛭石和细河沙构成,体积比为1:1:1:1,或由食用菌的下脚料、细河沙和蛭石混合,体积比为1:1:1,或由食用菌的下脚料、蛭石、稻壳炭构成,体积比为1:1:1。8.根据权利要求1所述的结合瓶外生根技术的那坡报春苣苔的组培快繁方法,其特征在于,步骤(7)中的叶面肥中N:PO:KO=10:30:20。

说明书

技术领域

本发明涉及植物组织培养技术领域,具体的是一种结合瓶外生根技术的那坡报春苣苔的组培快繁方法。

背景技术

那坡报春苣苔(Primulina napoensis)为苦苣苔科报春苣苔属的多年生草本植物。分布于广西的那坡、靖西,生于石灰岩山谷崖壁,海拔约600m。花期5月。那坡报春苣苔的原生境条件要求苛刻,居群更新困难,且居群个体数量极少。随着环境日渐恶化,已知的模式产地居群已经消亡,居群数量逐渐较少,目前IUCN等级为极危。那坡报春苣苔株型独特,花型优美,是极具观赏价值的喀斯特地区野生花卉,开发前景广阔。

太阳城集团但通过传统的播种、扦插繁殖获得的种苗远远无法满足当今市场的需求。随着组培快繁技术在苦苣苔科植物上的应用,其繁殖速度快、繁殖系数大、繁殖后代整齐一致、能保持母本的优良特性、可进行周年工厂化生产的优点得到了充分的体现。当前组培快繁技术包括了外植体的消毒灭菌、初代培养、增殖培养、生根培养、炼苗移栽的过程,程序复杂繁琐,周期较长,成品苗生产成本也较高。因此简化组培程序,降低生产成本对该物种的开发利用具有重要意义。在组培快繁中,将生根培养和炼苗移栽这两个步骤简化为一个步骤,即瓶外直接生根,一方面减少了配制培养基和转瓶的步骤,缩短了育苗周期,节约了人力物力,另一方面也有效控制了生产成本,同时为该物种的种质资源保存提供了技术支持,对物种保护具有重要意义。

目前,太阳城集团那坡报春苣苔的组培快繁以及瓶外生根技术的研究尚未有报道。

发明内容

本发明的目的是提供一种结合瓶外生根技术的那坡报春苣苔的组培快繁方法,解决了常规那坡报春苣苔以试管内生根为主,但生产成本高、育苗周期长、占用室内空间大的问题。

太阳城集团本发明所提供的技术方案是:

太阳城集团一种结合瓶外生根技术的那坡报春苣苔的组培快繁方法,包括以下步骤:

(1)外植体的消毒灭菌:取经过驯化栽培的那坡报春苣苔的成熟叶片,用自来水冲洗25-30min。在超净工作台上,在0.2%的次氯酸钠溶液中浸泡5-10min,无菌水冲洗3-5次,在距离叶片中脉两侧0.5-1.0cm处进行平行于中脉的切割,将中脉切成长4-5cm,宽1-2cm;再用75%酒精中浸泡叶脉10s,无菌水冲洗3-5次,最后用0.1%升汞浸泡4-6min,无菌水冲洗3-5次;叶脉灭菌后备用;

(2)不定芽的诱导:将经过灭菌的叶脉按照叶面朝上,叶背朝下方式的接入诱导培养基中培养50-60d,培养温度22-24℃,光照:10-12h/d,光照强度1000-1500lx;

太阳城集团(3)增殖培养:将萌发的新芽切取下来,接入增殖培养基中培养45-60d,培养温度22-24℃,光照:10-12h/d,光照强度1000-1500lx;

(4)幼株的选取以及预处理:将经过增殖培养的瓶苗在室温下封盖炼苗3-5d,光照为10-12h/d,光照强度2000-2500lx;在超净工作台上切取具有2-4对叶片的组培苗用于瓶外生根,而未达到瓶外生根要求的小苗则继续进行增殖培养;将切取下来的组培苗在50%多菌灵可湿性粉剂800-1200倍液中浸泡5-10min,再将其基部放在生根液中速蘸2-3s,生根液为0.3-0.5%等量IBA和NAA混合溶液;

太阳城集团(5)基质配制:配制基质,将基质的pH值调节为7.5-8.5;基质混合均匀后采用0.01-0.05%的高锰酸钾溶液浇灌淋透,分装入50孔或者72孔的穴盘中;

(6)种植:事先在已经浇好水的移栽基质上用镊子戳成一个0.5-1.0cm深的小孔,然后用镊子夹住把小苗插入孔中,左手扶苗,右手把小苗基部的基质压实,浇透定根水,并根据基质的流失情况适当添加相应的基质;

(7)移栽后管理:将种植好的穴盘苗放在有遮阳网的荫棚下,遮光率在60-70%,保持良好的通风;采用间歇性喷雾系统控制空气湿度,每天从上午9时-下午17时,每隔2小时喷雾10-15s,保持空气湿度在75-85%;小苗的浇水根据基质的干湿程度进行,当基质面发白时,表明需要补水,每次补水都要求浇透基质;移栽后在第7、14、21d分别进行一次叶面肥的喷施,叶面肥5000-6000倍液;移植后管理期间,温度为20-30℃,光照强度2000-2500lx;移栽35-40d即可生根;待植株叶面铺满一个穴盘孔时,即可进行上盆移栽。

太阳城集团作为优选,步骤(1)中所述的成熟叶片为第2-3轮叶片。

作为优选,步骤(1)中0.1%升汞中加入2-3滴吐温20。

作为优选,步骤(2)中所述的诱导培养基为N6+KT1.0-3.0mg/L+IBA0.5-1.5mg/L,pH7.0-7.5。

作为优选,步骤(3)中所述的增殖培养基为N6+6-BA1.0-3.0mg/L+ZT1.0-3.0mg/L+IBA0.5-1.5mg/L,pH7.0-7.5。

作为优选,步骤(4)中0.3-0.5%等量IBA和NAA混合溶液:由相等质量的IBA和NAA混合配制而成。

作为优选,步骤(5)中的基质由泥炭、珍珠岩、蛭石和细河沙构成,体积比为1:1:1:1,或由食用菌的下脚料、细河沙和蛭石混合,体积比为1:1:1,或由食用菌的下脚料、蛭石、稻壳炭构成,体积比为1:1:1。

作为优选,步骤(7)中的叶面肥中N:P2O5:K2O=10:30:20。

与现有技术相比,本发明具有的有益效果如下:

太阳城集团本发明的方法缩短了那坡报春苣苔的育苗周期,既节约成本又节约室内培养空间,经该方法得到的组培苗生根率高,成活率高。

具体实施方式

下面结合具体例对本发明作进一步详细的说明。

实施例1:

一种结合瓶外生根技术的那坡报春苣苔的组培快繁方法,包括以下步骤:

(1)外植体的消毒灭菌:取经过驯化栽培的那坡报春苣苔的成熟叶片,用自来水冲洗25min;在超净工作台上,在0.2%的次氯酸钠溶液中浸泡5min,无菌水冲洗3次,在距离叶片中脉两侧0.5cm处进行平行于中脉的切割,将中脉切成长4cm,宽1cm;再用75%酒精中浸泡叶脉10s,无菌水冲洗3次,最后用0.1%升汞浸泡4min,无菌水冲洗3次;叶脉灭菌后备用;所述的成熟叶片为第2轮叶片;所述的0.1%升汞中加入2滴吐温20;

(2)不定芽的诱导:将经过灭菌的叶脉按照叶面朝上,叶背朝下方式的接入诱导培养基中培养50d,培养温度22℃,光照:10h/d,光照强度1000lx;所述的诱导培养基为N6+KT1.0mg/L+IBA0.5mg/L,pH7.0;

(3)增殖培养:将萌发的新芽切取下来,接入增殖培养基中培养45d,培养温度22℃,光照:10h/d,光照强度1000lx;所述的增殖培养基为N6+6-BA1.0mg/L+ZT1.0mg/L+IBA0.5mg/L,pH7.0;

(4)幼株的选取以及预处理:将经过增殖培养的瓶苗在室温下封盖炼苗3d,光照为10h/d,光照强度2000lx;在超净工作台上切取具有2对叶片的组培苗用于瓶外生根,而未达到瓶外生根要求的小苗则继续进行增殖培养;将切取下来的组培苗在50%多菌灵可湿性粉剂800倍液中浸泡5min,再将其基部放在生根液中速蘸2-3s,生根液为0.3%等量IBA和NAA混合溶液;所述的0.3%等量IBA和NAA混合溶液由相等质量的IBA和NAA混合配制而成;

(5)基质配制:配制基质,将基质的pH值调节为7.5;基质混合均匀后采用0.01%的高锰酸钾溶液浇灌淋透,分装入50孔或者72孔的穴盘中;所述的基质由泥炭、珍珠岩、蛭石和细河沙构成,体积比为1:1:1:1;

(6)种植:事先在已经浇好水的移栽基质上用镊子戳成一个0.5cm深的小孔,然后用镊子夹住把小苗插入孔中,左手扶苗,右手把小苗基部的基质压实,浇透定根水,并根据基质的流失情况适当添加相应的基质;

(7)移栽后管理:将种植好的穴盘苗放在有遮阳网的荫棚下,遮光率在60%,保持良好的通风;采用间歇性喷雾系统控制空气湿度,每天从上午9时开始至下午17时,每隔2小时喷雾10s,保持空气湿度在75%;小苗的浇水根据基质的干湿程度进行,当基质面发白时,表明需要补水,每次补水都要求浇透基质;移栽后在第7、14、21d分别进行一次叶面肥的喷施,叶面肥5000倍液;移植后管理期间,温度为20℃,光照强度2000lx;移栽35d即可生根;待植株叶面铺满一个穴盘孔时,即可进行上盆移栽;所述的叶面肥中N:P2O5:K2O=10:30:20。

实施例2:

一种结合瓶外生根技术的那坡报春苣苔的组培快繁方法,包括以下步骤:

太阳城集团(1)外植体的消毒灭菌:取经过驯化栽培的那坡报春苣苔的成熟叶片,用自来水冲洗28min。在超净工作台上,在0.2%的次氯酸钠溶液中浸泡8min,无菌水冲洗4次,在距离叶片中脉两侧0.8cm处进行平行于中脉的切割,将中脉切成长5cm,宽1.5cm;再用75%酒精中浸泡叶脉10s,无菌水冲洗4次,最后用0.1%升汞浸泡5min,无菌水冲洗4次;叶脉灭菌后备用;所述的成熟叶片为第2轮叶片;所述的0.1%升汞中加入3滴吐温20;

太阳城集团(2)不定芽的诱导:将经过灭菌的叶脉按照叶面朝上,叶背朝下方式的接入诱导培养基中培养55d,培养温度23℃,光照:11h/d,光照强度1200lx;所述的诱导培养基为N6+KT 2.0mg/L+IBA1.0mg/L,pH7.2;

太阳城集团(3)增殖培养:将萌发的新芽切取下来,接入增殖培养基中培养45-60d,培养温度23℃,光照:11h/d,光照强度1300lx;所述的增殖培养基为N6+6-BA2.0mg/L+ZT 2.0mg/L+IBA 1.0mg/L,pH7.2;

(4)幼株的选取以及预处理:将经过增殖培养的瓶苗在室温下封盖炼苗4d,光照为11h/d,光照强度2300lx;在超净工作台上切取具有3对叶片的组培苗用于瓶外生根,而未达到瓶外生根要求的小苗则继续进行增殖培养;将切取下来的组培苗在50%多菌灵可湿性粉剂1000倍液中浸泡8min,再将其基部放在生根液中速蘸2-3s,生根液为0.4%等量IBA和NAA混合溶液;所述的0.4%等量IBA和NAA混合溶液由相等质量的IBA和NAA混合配制而成;

太阳城集团(5)基质配制:配制基质,将基质的pH值调节为8.0;基质混合均匀后采用0.02%的高锰酸钾溶液浇灌淋透,分装入50孔或者72孔的穴盘中;所述的基质由食用菌的下脚料、细河沙和蛭石混合,体积比为1:1:1;

太阳城集团(6)种植:事先在已经浇好水的移栽基质上用镊子戳成一个0.8cm深的小孔,然后用镊子夹住把小苗插入孔中,左手扶苗,右手把小苗基部的基质压实,浇透定根水,并根据基质的流失情况适当添加相应的基质;

(7)移栽后管理:将种植好的穴盘苗放在有遮阳网的荫棚下,遮光率在65%,保持良好的通风;采用间歇性喷雾系统控制空气湿度,每天从上午9时开始至下午17时,每隔2小时喷雾12s,保持空气湿度在80%;小苗的浇水根据基质的干湿程度进行,当基质面发白时,表明需要补水,每次补水都要求浇透基质;移栽后在第7、14、21d分别进行一次叶面肥的喷施,叶面肥6000倍液;移植后管理期间,温度为20-30℃,光照强度2300lx;移栽38d即可生根;待植株叶面铺满一个穴盘孔时,即可进行上盆移栽;所述的叶面肥中N:P2O5:K2O=10:30:20。

实施例3:

太阳城集团一种结合瓶外生根技术的那坡报春苣苔的组培快繁方法,包括以下步骤:

(1)外植体的消毒灭菌:取经过驯化栽培的那坡报春苣苔的成熟叶片,用自来水冲洗30min。在超净工作台上,在0.2%的次氯酸钠溶液中浸泡10min,无菌水冲洗5次,在距离叶片中脉两侧1.0cm处进行平行于中脉的切割,将中脉切成长5cm,宽2.0cm;再用75%酒精中浸泡叶脉10s,无菌水冲洗5次,最后用0.1%升汞浸泡6min,无菌水冲洗5次;叶脉灭菌后备用;所述的成熟叶片为第3轮叶片;所述的0.1%升汞中加入3滴吐温20;

(2)不定芽的诱导:将经过灭菌的叶脉按照叶面朝上,叶背朝下方式的接入诱导培养基中培养60d,培养温度24℃,光照:12h/d,光照强度1500lx;所述的诱导培养基为N6+KT3.0mg/L+IBA1.5mg/L,pH7.5;

(3)增殖培养:将萌发的新芽切取下来,接入增殖培养基中培养45-60d,培养温度24℃,光照:12h/d,光照强度1500lx;所述的植株培养基为N6+6-BA3.0mg/L+ZT3.0mg/L+IBA1.5mg/L,pH7.5;

(4)幼株的选取以及预处理:将经过增殖培养的瓶苗在室温下封盖炼苗5d,光照为12h/d,光照强度2500lx;在超净工作台上切取具有4对叶片的组培苗,而未达到瓶外生根要求的小苗则继续进行增殖培养;将切取下来的组培苗在50%多菌灵可湿性粉剂1200倍液中浸泡10min,再将其基部放在生根液中速蘸2-3s,生根液为0.5%等量IBA和NAA混合溶液;所述的0.5%等量IBA和NAA混合溶液由相等质量的IBA和NAA混合配制而成;

太阳城集团(5)基质配制:配制基质,将基质的pH值调节为8.5;基质混合均匀后采用0.05%的高锰酸钾溶液浇灌淋透,分装入50孔或者72孔的穴盘中;所述的基质由食用菌的下脚料、蛭石、稻壳炭构成,体积比为1:1:1;

(6)种植:事先在已经浇好水的移栽基质上用镊子戳成一个1.0cm深的小孔,然后用镊子夹住把小苗插入孔中,左手扶苗,右手把小苗基部的基质压实,浇透定根水,并根据基质的流失情况适当添加相应的基质;

太阳城集团(7)移栽后管理:将种植好的穴盘苗放在有遮阳网的荫棚下,遮光率在60-70%,保持良好的通风;采用间歇性喷雾系统控制空气湿度,每天从上午9时-下午17时,每隔2小时喷雾15s,保持空气湿度在85%;小苗的浇水根据基质的干湿程度进行,当基质面发白时,表明需要补水,每次补水都要求浇透基质;移栽后在第7、14、21d分别进行一次叶面肥的喷施,叶面肥6000倍液;移植后管理期间,温度为30℃,光照强度2500lx;移栽40d即可生根;待植株叶面铺满一个穴盘孔时,即可进行上盆移栽;所述的叶面肥中N:P2O5:K2O=10:30:20。

对实施例1-3中那坡报春苣苔不定芽的诱导、不定芽的增殖培养及瓶外生根情况进行调查和统计,详见表1-3。

表1不定芽的诱导

表2不定芽的继代增殖

表3瓶外生根

太阳城集团由表1-3可知,本发明的方法得到那坡报春苣苔不定芽诱导率均为100%;不定芽的继代增殖情况良好,新芽数芽点非常多,具2对以上叶片的组培芽数均在254个以上;瓶外生根苗移栽生根率均在85%以上,生根太阳城集团为35-40天之间。

前述对本发明的具体示例性实施方案的描述是为了说明和例证的目的。这些描述并非想将本发明限定为所公开的精确形式,并且很显然,根据上述教导,可以进行很多改变和变化。对示例性实施例进行选择和描述的目的在于解释本发明的特定原理及其实际应用,从而使得本领域的技术人员能够实现并利用本发明的各种不同的示例性实施方案以及各种不同的选择和改变。本发明的范围意在由权利要求书及其等同形式所限定。

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