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一种兽用板芩桔甘合剂.pdf

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一种 兽用板芩桔甘 合剂
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摘要
申请专利号:

CN201810952726.3

申请日:

20180821

公开号:

CN108853315A

公开日:

20181123

当前法律状态:

有效性:

审查中

法律详情:
IPC分类号: A61K36/8964,A61P31/14,A61K33/06 主分类号: A61K36/8964,A61P31/14,A61K33/06
申请人: 无锡正大生物股份有限公司
发明人: 冯静波,叶峰先
地址: 214112 江苏省无锡市梅村群兴路51号
优先权: CN201810952726A
专利代理机构: 无锡华源专利商标事务所(普通合伙) 代理人: 聂启新
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法律状态
申请(专利)号:

CN201810952726.3

授权太阳城集团号:

法律状态太阳城集团日:

法律状态类型:

摘要

本发明公开了一种兽用板芩桔甘合剂,所述兽用板芩桔甘合剂的制备方法为:以石膏、知母、黄芩、板蓝根、桔梗和甘草为主原料,经过水煎煮,之后过滤,收集滤液,将滤液浓缩后,再加入苯甲酸和纯化水,制成液体制剂,即为所述兽用板芩桔甘合剂。本发明产品具有防治鸡IB所致气喘、伸脖张口呼吸、咳嗽等症状的功效。

权利要求书

太阳城集团1.一种兽用板芩桔甘合剂,其特征在于,所述兽用板芩桔甘合剂的制备方法为:以石膏、知母、黄芩、板蓝根、桔梗和甘草为主原料,经过水煎煮,之后过滤,收集滤液,将滤液浓缩后,再加入苯甲酸和纯化水,制成液体制剂,即为所述兽用板芩桔甘合剂。2.根据权利要求1所述的兽用板芩桔甘合剂,其特征在于,所述板芩桔甘合剂主原料的用量为:3.根据权利要求1所述的兽用板芩桔甘合剂,其特征在于,所述石膏为硫酸盐类矿物硬石膏族石膏,主含含水硫酸钙,经采挖后,除去杂石及泥沙得到,产地为湖北,含含水硫酸钙不少于95.0%。4.根据权利要求1所述的兽用板芩桔甘合剂,其特征在于,所述知母为百合科植物知母的干燥根茎,春、秋二季采挖,除去须根和泥沙,晒干得到,习称“毛知母”,或除去外皮,晒干,产地为河北,本品按干燥品计算,含芒果苷不少于0.50%,含知母皂苷BⅡ不少于3.0%。5.根据权利要求1所述的兽用板芩桔甘合剂,其特征在于,所述黄芩为唇形科植物黄芩的干燥根,春、秋二季采挖,除去须根和泥沙,晒后撞去粗皮,晒干得到,产地为河北,本品按干燥品计算,含黄芩苷不少于9.0%。6.根据权利要求1所述的兽用板芩桔甘合剂,其特征在于,所述板蓝根为十字花科植物菘蓝的干燥根,秋季采挖,除去泥沙,晒干得到,本品按干燥品计算,含(R,S)-告依春不少于0.020%。7.根据权利要求1所述的兽用板芩桔甘合剂,其特征在于,所述桔梗为桔梗科植物桔梗的干燥根,春、秋二季采挖,洗净,除去须根,趁鲜剥去外皮或不去外皮,干燥得到,本品按干燥品计算,含桔梗皂苷D不少于0.10%。8.根据权利要求1所述的兽用板芩桔甘合剂,其特征在于,所述甘草为豆科植物甘草、胀果甘草或光果甘草的干燥根和根茎,春、秋二季采挖,除去须根,晒干得到,本品按干燥品计算,含甘草苷不少于0.45%,含甘草酸不少于1.8%。9.一种权利要求1所述兽用板芩桔甘合剂的制备方法,其特征在于,所述方法包括如下具体步骤:(1)称取石膏400g、知母160g、黄芩160g、板蓝根160g、桔梗140g、甘草60g,将其混合后,加10倍量水煎煮三次,每次1小时,滤过,合并煎液;(2)对步骤(1)合并的煎液进行减压浓缩,再在浓缩液中加5g苯甲酸钠,最后加纯化水,制成1000mL的制剂,经过滤过、灌装,即得所述兽用板芩桔甘合剂。10.根据权利要求9所述的制备方法,其特征在于,所述减压浓缩的条件为:-0.06~-0.08Mpa,80℃;所述浓缩液的相对密度不低于1.04,pH值为4.5~6.0。

说明书

技术领域

太阳城集团本发明涉及新兽药技术领域,尤其是涉及一种用于防治鸡传染性支气管炎所致气喘、伸脖张口呼吸、咳嗽等症状的兽用板芩桔甘合剂。

背景技术

鸡传染性支气管炎(Infectious bronehitis,IB)是由冠状病毒科的传染性支气管炎病毒(Infectious bronehitis virus,IBV)引起的急性、高度接触性传染病。病毒可通过呼吸、直接接触感染家禽及污染的垫料、设备或其他污染物传播。IBV主要侵害鸡呼吸系统、消化系统和泌尿生殖系统,出现打喷嚏流鼻液、咳嗽、呼吸困难、气管啰音、偶尔出现鼻窦肿胀、肾脏病变、尿酸盐沉积、产蛋下降等症状,给养禽业造成了严重的损失。该病呈世界性分布,血清型众多,不同型的病毒株间不能或不能完全交叉保护免疫失败的现象时有发生,这给该病的防治带来巨大困难。

1931年Schalk首次报道了鸡IB的发生。早期的IBV分离株主要以Beaudette株、M41株和Connecticut株为代表。1963年Cumming R B在澳大利亚分离出肾致病性毒株T株。1986年Elhouadfi M D等在摩洛哥首次分离到嗜肠型IBV毒株G株。1991年英国发现引起鸡死亡率升高和深层肌病的特殊IBV毒株793/B或4/91。1953年我国就有呼吸型IB的发生,1982年邝荣禄等在广东首次发现肾型IB。1996年朱国强、王永坤等在中国江苏及青岛等地区分离并鉴定出了腺胃型IBV毒株。目前世界上临床已分离的IBV有100多株,分属30种以上血清型,不同血清型毒株间交叉保护力弱,由于IBV属RNA病毒,缺乏作为单链RNA的互补链,RNA聚合酶缺乏校对机制,使得每一轮复制过程中都有可能诱发变异。我国的IBV流行株因地区不同而有差别。采用疫苗免疫失败的现象时有发生,故在免疫过的鸡群仍不断有IB的发生和流行,给养鸡业带来了巨大的经济损失。IB的防控已成为禽病科研的热点和难点。

中兽医认为IB主要是机体正气虚弱时,“疫疠”之气IBV,通过呼吸道感染,侵袭于肺卫,致使卫气郁闭,肺气不宣,出现恶寒发热、缩颈杂毛、鼻流清涕、咳嗽等症状。邪疫由表入里,肺主肃降、通调水道之功能受阻,肺气上逆,水湿不得及时下泻,郁而化痰,就会出现气喘、啰音。根据中兽医理论,IB的防治应以清肺化痰,止咳平喘为治疗原则。

因此研究发明一种有效防治鸡传染性支气管炎所致气喘、伸脖张口呼吸、咳嗽等症状的药剂是十分必要的。

发明内容

针对现有技术存在的上述问题,本发明申请提供了一种兽用板芩桔甘合剂。本发明产品具有防治鸡IB所致气喘、伸脖张口呼吸、咳嗽等症状的功效。

本发明的技术方案如下:

太阳城集团一种兽用板芩桔甘合剂,所述兽用板芩桔甘合剂的制备方法为:以石膏、知母、黄芩、板蓝根、桔梗和甘草为主原料,经过水煎煮,之后过滤,收集滤液,将滤液浓缩后,再加入苯甲酸和纯化水,制成液体制剂,即为所述兽用板芩桔甘合剂。

太阳城集团所述板芩桔甘合剂主原料的用量为:

太阳城集团所述石膏为硫酸盐类矿物硬石膏族石膏,主含含水硫酸钙,经采挖后,除去杂石及泥沙得到,产地为湖北,含含水硫酸钙不少于95.0%。

所述知母为百合科植物知母的干燥根茎,春、秋二季采挖,除去须根和泥沙,晒干得到,习称“毛知母”,或除去外皮,晒干,产地为河北,本品按干燥品计算,含芒果苷不少于0.50%,含知母皂苷BⅡ不少于3.0%。

太阳城集团所述黄芩为唇形科植物黄芩的干燥根,春、秋二季采挖,除去须根和泥沙,晒后撞去粗皮,晒干得到,产地为河北,本品按干燥品计算,含黄芩苷不少于9.0%。

所述板蓝根为十字花科植物菘蓝的干燥根,秋季采挖,除去泥沙,晒干得到,本品按干燥品计算,含(R,S)-告依春不少于0.020%。

太阳城集团所述桔梗为桔梗科植物桔梗的干燥根,春、秋二季采挖,洗净,除去须根,趁鲜剥去外皮或不去外皮,干燥得到,本品按干燥品计算,含桔梗皂苷D不少于0.10%。

太阳城集团所述甘草为豆科植物甘草、胀果甘草或光果甘草的干燥根和根茎,春、秋二季采挖,除去须根,晒干得到,本品按干燥品计算,含甘草苷不少于0.45%,含甘草酸不少于1.8%。

一种兽用板芩桔甘合剂的制备方法,所述方法包括如下具体步骤:

(1)称取石膏400g、知母160g、黄芩160g、板蓝根160g、桔梗140g、甘草60g,将其混合后,加10倍量水煎煮三次,每次1小时,滤过,合并煎液;

太阳城集团(2)对步骤(1)合并的煎液进行减压浓缩,再在浓缩液中加5g苯甲酸钠,最后加纯化水,制成1000mL的制剂,经过滤过、灌装,即得所述兽用板芩桔甘合剂。

太阳城集团所述减压浓缩的条件为:-0.06~-0.08Mpa,80℃;所述浓缩液的相对密度不低于1.04,pH值为4.5~6.0。

太阳城集团所得到的板芩桔甘合剂每1mL相当于原生药1.08g,本品每1mL含黄芩以黄芩苷(C21H18O11)计,不少于1.9mg;每1mL含甘草以甘草酸(C42H62O16)计,不少于340μg。

本发明有益的技术效果在于:

本发明采用的石膏、知母寒凉润燥,清肺泻火,使肺气宣肃有权,共为君药。黄芩清肺火,除痰热,板蓝根清热解毒,凉血利咽,助君药外散风热,内泄肺火,清肺化痰止咳,是为臣药。桔梗宣肺化痰止咳,为佐药。甘草甘平,润肺止咳,调和诸药,用为使药。诸药合用,有清肺化痰,止咳平喘之功。

石膏,甘、辛,大寒。归肺、胃经。清热泻火,除烦止渴。用于外感热病,高热烦渴,肺热喘咳,胃火亢盛,头痛,牙痛。本品性味辛甘寒,性寒清热泻火,辛寒解肌透热,甘寒清胃热、除烦渴,为清泄肺胃气分实热之要药。《神农本草经》:主中风寒热,心下逆气,惊喘,口干舌焦,不能息。

知母,苦、甘,寒。归肺、胃、肾经。清热泻火,生津润燥。用于热病烦渴,肺热燥咳,骨蒸潮热,内热消渴,肠燥便秘。本品味苦甘而性寒质润,苦寒能清热泻火除烦,甘寒质润能生津润燥止渴,善治外感热病,高热烦渴者,常与石膏相须为用,如白虎汤《伤寒论》。本品主入肺经而长于泻肺热、润肺燥,用治肺热燥咳,常配贝母用,如二母散《证治准绳》;若配杏仁、莱菔子,可治肺燥久嗽气急,如宁嗽煎《奇方类编》。《本草纲目》:知母之辛苦寒凉,下则润肾燥而滋阴,上则清肺金而泻火,乃二经气分药也。

太阳城集团黄芩,苦,寒。归肺、胆、脾、胃、大肠、小肠经。清热燥湿,泻火解毒,止血,安胎。用于湿温、暑湿,胸闷呕恶,湿热痞满,泻痢,黄疸,肺热咳嗽,高热烦渴,血热吐衄,痈肿疮毒,胎动不安。本品性味苦寒,功能清热燥湿,善清肺胃胆及大肠之湿热,尤长于清中上焦湿热。本品主入肺经,善清泻肺火及上焦实热,用治肺热壅遏所致咳嗽痰稠。《本草纲目》:治风热湿热头疼,奔豚热痛,火咳肺痿喉腥,诸失血。《本经逢原》:苦寒,无毒。中空者为枯芩入肺,细实者为子芩入大肠,并煮熟酒炒用。

板蓝根,苦,寒。归心、胃经。清热解毒,凉血,利咽。用于温疫时毒,发热咽痛,温毒发斑,痄腮,烂喉丹痧,大头瘟疫,丹毒,痈肿。本品苦寒,入心、胃经,善于清解实热火毒,有类似于大青叶的清热解毒之功,而更以解毒利咽散结见长。本品苦寒,有清热解毒,凉血消肿之功,主治多种瘟疫热毒之证。用治时行温病,温毒发斑,舌绛紫暗者,常与生地、紫草、黄芩同用,如神犀丹《温热经纬》。《中药志》:清火解毒,凉血止血。治热病发斑,丹毒,咽喉肿痛,大头瘟,及吐血、衄血等症。

太阳城集团桔梗,苦,辛,平。归肺经。宣肺,利咽,祛痰,排脓。用于咳嗽痰多,胸闷不畅,咽痛音哑,肺痈吐脓。本品辛散苦泄,宣开肺气,祛痰,无论寒热皆可应用。《神农本草经》:主胸胁痛如刀刺,腹满肠鸣幽幽,惊恐悸气。《珍珠囊药性赋》:其用有四,止咽痛,兼除鼻塞;利膈气,仍治肺痈;一为诸药之舟楫;一为肺部之引经。《本草纲目》:肺痈,排脓养血,不内漏。仲景治胸满振寒,咽干吐浊唾,久久吐脓血,同甘草煎服,吐尽脓血愈。《本草蒙筌》:开胸膈,除上气壅,清头目,散表寒邪,驱胁下刺痛,通鼻中窒塞,咽喉肿痛急觅,逐肺热,住咳,下痰,治肺痈排脓,养血。

甘草,甘,平。归心、肺、脾、胃经。补脾益气,清热解毒,祛痰止咳,缓急止痛,调和诸药。用于脾胃虚弱,倦怠乏力,心悸气短,咳嗽痰多,脘腹、四肢挛急疼痛,痈肿疮毒,缓解药物毒性、烈性。《本草汇言》:甘草,和中益气,补虚解毒之药也。健脾胃,固中气之虚羸,协阴阳,和不调之营卫。故治劳损内伤,脾气虚弱,元阳不足,肺气衰虚,其甘温平补,效与参、芪并也。

太阳城集团知母皂苷BⅡ可以在mRNA和蛋白质水平上减少炎性细胞因子如白介素-1β,肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素-6(IL-6)的生成,且呈现剂量依赖性,知母皂苷BⅡ还可以抑制核因子NF-κB的活性。黄芩素可通过NF-κB通路,调节雌性激素的活动,抑制脂多糖诱导的炎症反应。汉黄芩素可抑制炎症介质一氧化氮、前列腺素E2以及促炎性细胞因子TNF-α、IL-6释放,阻滞一氧化氮合酶、环氧化酶-2、TNF-α、IL-6基因表达。桔梗水提液可使氨水诱导小鼠咳嗽潜伏期显著延长,咳嗽次数明显减少,且小鼠气管酚红排泌量显著增加。桔梗皂苷胶囊能延长组胺引喘及枸橼酸致咳的潜伏期,减少咳喘次数,同时增加呼吸道的酚红排泌量。桔梗水提物可使豚鼠引喘潜伏期明显延长,并有效地升高支气管哮喘豚鼠血清IFN-γ的水平,通过增强细胞免疫功能和非特异性抗感染能力,抑制B淋巴细胞增殖及IgE的分泌,从而防止呼吸道感染诱发的支气管哮喘。甘草口服后能覆盖在发炎的咽部粘膜上,缓和炎性刺激而镇咳。甘草次酸胆碱盐对豚鼠吸入氨水引起的咳嗽有明显的抑制作用。甘草还能促进咽部和支气管粘膜分泌,使痰易于咳出,呈现祛痰镇咳作用。

附图说明

图1为知母薄层图;

太阳城集团图中,G为板芩桔甘合剂;Y为知母阴性对照;S1为知母对照药材;S为知母皂苷BⅡ;点样量分别为2μl、4μl;

图2为知母薄层图;

太阳城集团图中,G为板芩桔甘合剂;Y为知母阴性对照;S1为知母对照药材;S为知母皂苷BⅡ;点样量分别为2μl、4μl

图3为知母薄层图;

太阳城集团图中,G为板芩桔甘合剂;S为知母皂苷BⅡ;点样量为2μl

图4为黄芩薄层图;

图中,G为板芩桔甘合剂;Y为黄芩阴性对照;S1为黄芩对照药材;S为黄芩苷;点样量分别为4μl、6μl;

图5为黄芩薄层图;

图中,G为板芩桔甘合剂;S1为黄芩对照药材溶液;S为黄芩苷;点样量为4μl;

图6为桔梗薄层图;

图中,G为板芩桔甘合剂;Y为桔梗阴性对照;S为桔梗对照药材;点样量为4μl;

图7为桔梗薄层图;

图中,G为板芩桔甘合剂;S为桔梗对照药材;点样量为6μl。

具体实施方式

太阳城集团下面结合附图和实施例,对本发明进行具体描述。

本发明申请所用主原料均购自江苏福源中药饮片有限公司,经本公司质检部门参照2015年版《中华人民共和国药典》一部中“石膏”、“知母”、“黄芩”、“板蓝根”、“桔梗”和“甘草”药材标准鉴定后均为正品药材。

太阳城集团石膏为硫酸盐类矿物硬石膏族石膏,主含含水硫酸钙,经采挖后,除去杂石及泥沙得到,产地为湖北,含含水硫酸钙不少于95.0%。

知母为百合科植物知母的干燥根茎,春、秋二季采挖,除去须根和泥沙,晒干得到,习称“毛知母”,或除去外皮,晒干,产地为河北,本品按干燥品计算,含芒果苷不少于0.50%,含知母皂苷BⅡ不少于3.0%。

黄芩为唇形科植物黄芩的干燥根,春、秋二季采挖,除去须根和泥沙,晒后撞去粗皮,晒干得到,产地为河北,本品按干燥品计算,含黄芩苷不少于9.0%。

板蓝根为十字花科植物菘蓝的干燥根,秋季采挖,除去泥沙,晒干得到,本品按干燥品计算,含(R,S)-告依春不少于0.020%。

桔梗为桔梗科植物桔梗的干燥根,春、秋二季采挖,洗净,除去须根,趁鲜剥去外皮或不去外皮,干燥得到,本品按干燥品计算,含桔梗皂苷D不少于0.10%。

太阳城集团甘草为豆科植物甘草、胀果甘草或光果甘草的干燥根和根茎,春、秋二季采挖,除去须根,晒干得到,本品按干燥品计算,含甘草苷不少于0.45%,含甘草酸不少于1.8%。

实施例1

太阳城集团一种兽用板芩桔甘合剂的制备方法,包括如下具体步骤:

(1)称取石膏400g、知母160g、黄芩160g、板蓝根160g、桔梗140g、甘草60g,将其混合后,加10倍量水煎煮三次,每次1小时,滤过,合并煎液;

太阳城集团(2)对步骤(1)合并的煎液进行减压浓缩只相对密度为1.04,pH为5,再在浓缩液中加5g苯甲酸钠,最后加纯化水,制成1000mL的制剂,经过滤过、灌装,即得所述兽用板芩桔甘合剂,经检测其黄芩苷含量2.36mg/ml,提取率15.13%;甘草酸铵含量429.65μg/ml,提取率为22.08%。

实施例2

一种兽用板芩桔甘合剂的制备方法,包括如下具体步骤:

(1)称取石膏400g、知母160g、黄芩160g、板蓝根160g、桔梗140g、甘草60g,将其混合后,加10倍量水煎煮三次,每次1小时,滤过,合并煎液;

(2)对步骤(1)合并的煎液进行减压浓缩只相对密度为1.04,pH为4.5,再在浓缩液中加5g苯甲酸钠,最后加纯化水,制成1000mL的制剂,经过滤过、灌装,即得所述兽用板芩桔甘合剂。

实施例3

太阳城集团一种兽用板芩桔甘合剂的制备方法,包括如下具体步骤:

太阳城集团(1)称取石膏400g、知母160g、黄芩160g、板蓝根160g、桔梗140g、甘草60g,将其混合后,加10倍量水煎煮三次,每次1小时,滤过,合并煎液;

(2)对步骤(1)合并的煎液进行减压浓缩只相对密度为1.04,pH为6.0,再在浓缩液中加5g苯甲酸钠,最后加纯化水,制成1000mL的制剂,经过滤过、灌装,即得所述兽用板芩桔甘合剂。

对比例1

一种兽用药剂A的制备方法,包括如下具体步骤:

(1)称取石膏240g、知母150g、黄芩150g、鱼腥草150g、麦冬150g、葶苈子150g、甘草50g,将其混合后,加10倍量水煎煮三次,每次1小时,滤过,合并煎液;

太阳城集团(2)对步骤(1)合并的煎液进行减压浓缩只相对密度为1.04,pH为4.5~6.0,再在浓缩液中加5g苯甲酸钠,最后加纯化水,制成1000mL的制剂,经过滤过、灌装,即得所述兽用药剂。

其中,知母寒凉润燥,清肺泻火,使肺气宣肃有权,共为君药。黄芩、鱼腥草清肺火,除痰热,麦冬养阴润燥,除肺中伏火,以上三味助君药内泄肺火,清肺化痰止咳,是为臣药。葶苈子泄肺降气,祛痰平喘,为佐药。甘草化痰止咳,调和诸药,用为使药。诸药合用,有清热化痰,止咳平喘之功。

对比例2

太阳城集团一种兽用药剂B的制备方法,包括如下具体步骤:

太阳城集团(1)称取鱼腥草240g、黄芩180g、麻黄180g、前胡180g、枳壳160g、甘草50g,将其混合后,加10倍量水煎煮三次,每次1小时,滤过,合并煎液;

太阳城集团(2)对步骤(1)合并的煎液进行减压浓缩只相对密度为1.04,pH为4.5~6.0,再在浓缩液中加5g苯甲酸钠,最后加纯化水,制成1000mL的制剂,经过滤过、灌装,即得所述兽用药剂。

其中,鱼腥草长于清肺解毒,为君药。黄芩清泻肺热,为臣药。麻黄宣肺降气,止咳平喘;前胡宣降肺气,止咳平喘;枳壳理气,使气行则痰化津复,共为佐药,甘草化痰止咳,调和诸药,为佐使药。诸药合用,有清热化痰,宣肺止咳之功。

测试例:

测试例1临床动物实验

(1)给药量

《中国兽药典》中规定成年鸡每天使用上述处方药材量为0.5~3g,本发明实施例和对比例通过提取制备成合剂(每1mL含原生药材约1g),中药通过配伍和提取可提高药物疗效,结合中药合剂一般临床使用剂量及用药成本,拟定给药量为每1kg体重灌服0.5mL供试品溶液。患病鸡群42周龄,体重1.89kg左右(相当于灌服1mL供试品溶液),每天饮水量200mL,因此给药组给药方式换算成饮水给药的剂量为每1mL供试品溶液兑水200mL,全天饮水,连续给药5天,阳性对照组不给药。

(2)实验分组

选自宜兴万丰畜禽养殖技术服务专业合作社蛋鸡场,自然感染患传染性支气管炎产蛋鸡群,42周龄,品种为海兰灰,全群共68组笼,4列分布,每列17组笼,每组90只,共5802只。分别抽取前3列头2组鸡笼和第4列头1组鸡笼,共计7组鸡笼,每组90只,共计630只,分为4组,实验组对第1列前两组的鸡给予本发明实施例1的板芩桔甘合剂、对比A组对第2列前两组给予对比例1的药剂A、对比B组给予对第3列前两组的鸡给予比例2的药剂B、阳性对照组对第4列第一组的鸡不给药,给予等量的水。按上述给药剂量饮水给药。未纳入试验的患病鸡,按照鸡场常规治疗方案进行,但不作实验观察。

太阳城集团(3)临床疗效的观察

太阳城集团(3.1)试验期间,每天观察并记录鸡的临床表现,如精神、食欲、呼吸道症状(主要观察张脖喘,流涎,“呼噜声”,咳嗽,打喷嚏)。观察期间,对死亡病例逐只剖检,观察记录呼吸道及肺脏的病理变化。

(3.2)试验期间,每天记录各组死亡鸡只数、产蛋率和破蛋率。

(4)疗效评价标准

治愈:试验期间,经用药后患病鸡临床症状消失,精神及饮食欲恢复正常判为治愈。每组治愈鸡数占每组试验鸡数的百分比为治愈率。

有效:凡试验期间,经用药后临床症状减轻,精神及饮食欲没有恢复到发病前的状态判为有效。每组有效鸡数占每组试验鸡数的百分比为有效率。

无效:凡在试验期间临床症状无改善者判为无效,无效鸡数占每组试验鸡数的百分比为无效率。

(5)疗效综合判定

主要依据治疗后临床症状消失、产蛋率等指标,对该药物的疗效做出评定。

(6)数据分析

利用PASW Statistics 18.0软件,对试验数据进行统计分析,P<0.05表示差异显著,P<0.01表示差异极显著。

(7)试验结果

(7.1)对死亡率、产蛋率和破蛋率的影响,测试结果如表1所示;

表1

注:经χ2检验,同列数据后小写字母不同表示差异显著(P<0.05);大写字母不同表示差异极显著(P<0.01),以下相同。死亡率=死亡鸡数÷试验鸡数×100%;平均产蛋率=产蛋数÷5÷试验鸡数×100%;畸、破、软蛋率=畸、破、软蛋数÷5÷平均产蛋数×100%。

从表1可知,连续治疗5天后,给药组的死亡率与阳性对照组比较分别降低4.45、5.56和5个百分点,对比A组、对比B组的死亡率与阳性对照组比较差异显著(P﹤0.05),实验组的死亡率与阳性对照组比较差异极显著(P﹤0.01)。给药组的平均产蛋率与阳性对照组比较分别提高13.22、17.67和15个百分点,对比A组的平均产蛋率与阳性对照组比较差异显著(P﹤0.05),实施组和处对比B组的平均产蛋率与阳性对照组比较差异极显著(P﹤0.01)。给药组的畸、破、软蛋率与阳性对照组比较分别降低0.9、1.05和0.78个百分点,各组间比较差异不显著。

太阳城集团(7.2)板芩桔甘合剂祛痰的作用,测试结果如表2所示;

表2

从表2可知,连续治疗5天后,对比A组、实施组、对比B组的治愈率分别为49.44%、53.33%和50%,与阳性对照组比较差异极显著(P﹤0.01)。对比A组、实施组、对比B组的总有效率分别为94.44%、97.22%和95.56%,与阳性对照组比较差异极显著(P﹤0.01)。

测试例2微生物限度测试

(1)供试菌液的制备

接种大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌的新鲜培养物至营养肉汤培养基中,培养18~24小时;接种白色念珠菌的新鲜培养物至改良马丁培养基中,培养24~48小时。上述培养物用0.9%无菌氯化钠溶液制成每1mL含菌数为50~100cfu的菌悬液,备用。接种黑曲霉的新鲜培养物至改良马丁琼脂斜面培养基上,培养5~7天,加入3~5mL含0.05%(mL/mL)聚山梨酯80的0.9%无菌氯化钠溶液,将孢子洗脱。然后,吸出孢子悬液至无菌试管内,用含0.05%(mL/mL)聚山梨酯80的0.9%无菌氯化钠溶液制成每1mL含孢子数50~100cfu的孢子悬液,备用。

(2)供试液的制备

量取10mL本发明实施例1制得的板芩桔甘合剂作为供试液,加pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液至100mL,混匀,作为1:10的供试液,备用。

(3)细菌、霉菌和酵母菌验证方法

(3.1)试验组取供试液1mL分别注入平皿中,加入供试菌液,倾注琼脂培养基,每株试验菌平行制备2个平皿,按平皿法测定其菌落数。

太阳城集团(3.2)菌液组取供试菌液1mL,每株试验菌平行制备2个平皿,测定所加的试验菌数。

(3.3)供试液对照组取供试液1mL分别注入平皿中,平行制备2个平皿,按菌落计数法测定供试液本底菌数。

太阳城集团(3.4)稀释剂对照组用pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液1mL代替供试液,其它方法同试验组操作、培养,计数。

上述验证方法重复3次,验证结果见表3、4、5。

表3

试验的菌回收率(%)=(试验组-供试液对照组)的平均菌落数÷菌液组的平均菌落数×100%,以下相同。

表4

表5

太阳城集团通过上述试验结果得出:各试验检测菌的回收率均在74.4%以上。说明常规法-平皿法可以适用于板芩桔甘合剂细菌、霉菌和酵母菌检查法。

太阳城集团(4)控制菌(大肠埃希菌)检查方法的验证

太阳城集团取供试液1mL接种至100mL的胆盐乳糖培养基中,加1mL大肠埃希菌液,置于35~37℃的环境下培养18~24h,取上述培养物0.2mL,接种至含5mLMUG培养基的试管内,置于35~37℃环境下培养5~24h,取出后在366nm紫外光下观察,然后加数滴靛基质试液进行观察。同时以金黄色葡萄球菌液和无菌生理盐水替代大肠埃希菌液进行上述试验过程,分别为阴性对照和供试液对照,共做3次试验。验证结果见表6。

表6

通过上述试验结果得出:试验组均能检出大肠埃希菌,而阴性对照组和供试液对照组均未检出大肠埃希菌。证明验证成立,常规法适用于板芩桔甘合剂控制菌的检查。

(5)微生物限度检查结果

采用经验证的方法检查3批采用实施例1方法制得的板芩桔甘合剂中微生物限度,结果见表7。

表7

太阳城集团 批号 细菌数 霉菌及酵母菌数 大肠埃希菌数 161214 15 未检出 未检出 161215 26 未检出 未检出 161216 22 未检出 未检出

测试例3药效学研究

(1)板芩桔甘合剂主要药效学研究

抗炎试验:采用二甲苯致小鼠耳廓肿胀模型,观察板芩桔甘合剂对小鼠耳廓肿胀的影响。结果与阳性对照组比较,板芩桔甘合剂各剂量组均能够有效抑制二甲苯所致的小鼠耳肿胀。

止咳试验:采用氨水诱发小鼠咳嗽模型,观察板芩桔甘合剂对小鼠咳嗽的抑制作用。结果与阳性对照组比较,板芩桔甘合剂高、中剂量组均能有效延长氨水诱发小鼠咳嗽的潜伏期,减少咳嗽次数。

太阳城集团祛痰试验:采用酚红小鼠气管分泌模型,观察板芩桔甘合剂对小鼠气管分泌酚红的影响。结果与阳性对照组比较,板芩桔甘合剂各剂量组均能够促进小鼠呼吸道排泌酚红。

(2)板芩桔甘合剂的急性毒性研究

拟通过预试验测出板芩桔甘合剂对小鼠0~100%的致死量范围。预实验结果表明无小鼠死亡,进行最大耐受量试验:选用体重为20±2g昆明系小鼠20只(小鼠的给药体重均按20g计算),于试验开始24h内分2次给每只小鼠灌胃板芩桔甘合剂,剂量为80mL/kg(1.6mL,每次每只0.8mL)。在规定太阳城集团内观察小鼠的精神状况,饮水、食欲及死亡情况。研究结果表明:板芩桔甘合剂对小鼠实际无毒,使用安全。

太阳城集团(3)板芩桔甘合剂的长期毒性研究

太阳城集团选用5~6周龄、体重为150±10g,健康SD大鼠80只,随机分为4组,即空白对照组(纯净水)、板芩桔甘合剂高剂量组(20mL/kg·bw)、中剂量组(10mL/kg·bw)和低剂量组(5mL/kg·bw),每组20只。连续灌胃给药30天。观察临床表现,计算体重及饲料利用率,分析血常规和血液生化指标,进行病理组织学检查,将所得结果与空白对照组进行差异性比较。研究结果表明:板芩桔甘合剂在临床上应用是安全的,其临床用药的安全范围较大。

测试例4稳定性测试

(1)加速试验

随机抽取取3瓶规格为100mL/瓶的实施例1制得的板芩桔甘合剂,在40±2℃,相对湿度为75±5%的环境下存放6个月,分别于0、1、2、3、6个月取样考察。检测指标为:性状、鉴别、相对密度、pH值、微生物限度、黄芩苷和甘草酸的含量。

(2)影响因素试验

(2.1)强光试验

太阳城集团随机抽取取3瓶规格为100mL/瓶的实施例1制得的板芩桔甘合剂,装入无色透明容器内,在光照4500±500Lx下放置10天,分别于5、10天定期取样观测,并与第0天数据进行比较。检测指标为:性状、鉴别、相对密度、pH值、微生物限度、黄芩苷和甘草酸的含量。

(2.2)长期试验

太阳城集团随机抽取取3瓶规格为100mL/瓶的实施例1制得的板芩桔甘合剂,在温度为25±2℃,相对湿度为60±10%的环境下存放24个月,分别于3、6、9、12、18、24个月定期取样观测,并与第0天数据进行比较。检测指标为:性状、鉴别、相对密度、pH值、微生物限度、黄芩苷和甘草酸的含量。

(3)试验结果

太阳城集团(3.1)加速试验结果:3瓶实验样品的检测结果分别见表8、表9、表10。

表8

检测太阳城集团 0天 1个月 2个月 3个月 6个月 性状 棕黑色液体 棕黑色液体 棕黑色液体 棕黑色液体 棕黑色液体 鉴别① + + + + + 鉴别② + + + + + 鉴别③ + + + + + 相对密度 1.05 1.05 1.05 1.05 1.05 pH值 5.2 5.2 5.1 5.0 4.8 微生物限度 符合要求 符合要求 符合要求 符合要求 符合要求 黄芩苷含量(mg/mL) 2.4 2.4 2.3 2.3 2.2 甘草酸含量(μg/mL) 429 421 417 414 405

注:鉴别①“+”表示供试品溶液所显主斑点的位置和颜色与对照品溶液的主斑点相同;鉴别②“+”表示供试品溶液所显主斑点的位置和颜色与对照药材和对照品溶液的主斑点相同;鉴别③“+”表示供试品溶液所显主斑点的位置和颜色与对照药材溶液的主斑点相同。以下同上。

表9

太阳城集团 检测太阳城集团 0天 1个月 2个月 3个月 6个月 性状 棕黑色液体 棕黑色液体 棕黑色液体 棕黑色液体 棕黑色液体 鉴别① + + + + + 鉴别② + + + + + 鉴别③ + + + + + 相对密度 1.05 1.05 1.05 1.05 1.05 pH值 5.3 5.2 5.2 5.1 4.9 微生物限度 符合要求 符合要求 符合要求 符合要求 符合要求 黄芩苷含量(mg/mL) 2.3 2.2 2.2 2.1 2.0 甘草酸含量(μg/mL) 429 422 419 415 407

表10

太阳城集团 检测太阳城集团 0天 1个月 2个月 3个月 6个月 性状 棕黑色液体 棕黑色液体 棕黑色液体 棕黑色液体 棕黑色液体 鉴别① + + + + + 鉴别② + + + + + 鉴别③ + + + + + 相对密度 1.05 1.05 1.05 1.05 1.05 pH值 5.3 5.2 5.2 5.1 4.8 微生物限度 符合要求 符合要求 符合要求 符合要求 符合要求 黄芩苷含量(mg/mL) 2.4 2.3 2.3 2.2 2.1 甘草酸含量(μg/mL) 431 424 420 417 409

(3.2)强光试验结果:3瓶实验样品的检测结果分别见表11、表12、表13所示。

表11

太阳城集团 检测太阳城集团 0天 5天 10天 性状 棕黑色液体 棕黑色液体 棕黑色液体 鉴别① + + + 鉴别② + + + 鉴别③ + + + 相对密度 1.05 1.05 1.05 pH值 5.2 5.2 5.1 微生物限度 符合要求 符合要求 符合要求 黄芩苷含量(μg/mL) 2.4 2.3 2.3 甘草酸含量(μg/mL) 429 425 421

表12

检测太阳城集团 0天 5天 10天 性状 棕黑色液体 棕黑色液体 棕黑色液体 鉴别① + + + 鉴别② + + + 鉴别③ + + + 相对密度 1.05 1.05 1.05 pH值 5.3 5.3 5.2 微生物限度 符合要求 符合要求 符合要求 黄芩苷含量(μg/mL) 2.3 2.3 2.2 甘草酸含量(μg/mL) 429 426 422

表13

太阳城集团 检测太阳城集团 0天 5天 10天 性状 棕黑色液体 棕黑色液体 棕黑色液体 鉴别① + + + 鉴别② + + + 鉴别③ + + + 相对密度 1.05 1.05 1.05 pH值 5.3 5.2 5.2 微生物限度 符合要求 符合要求 符合要求 黄芩苷含量(μg/mL) 2.4 2.3 2.3 甘草酸含量(μg/mL) 431 428 425

太阳城集团(3.3)长期试验结果:3瓶实验样品的检测结果分别见表14、表15、表16。

表14

检测太阳城集团 0天 3个月 6个月 9个月 12个月 性状 棕黑色液体 棕黑色液体 棕黑色液体 棕黑色液体 棕黑色液体 鉴别① + + + + + 鉴别② + + + + + 鉴别③ + + + + + 相对密度 1.05 1.05 1.05 1.05 1.05 pH值 5.2 5.2 5.1 5.0 4.9 微生物限度 符合要求 符合要求 符合要求 符合要求 符合要求 黄芩苷含量(μg/mL) 2.4 2.3 2.3 2.2 2.2 甘草酸含量(μg/mL) 429 423 419 415 412

表15

表16

检测太阳城集团 0天 3个月 6个月 9个月 12个月 性状 棕黑色液体 棕黑色液体 棕黑色液体 棕黑色液体 棕黑色液体 鉴别① + + + + + 鉴别② + + + + + 鉴别③ + 相对密度 1.05 1.05 1.05 1.05 1.05 pH值 5.3 5.3 5.2 5.2 5.1 微生物限度 符合要求 符合要求 符合要求 符合要求 符合要求 黄芩苷含量(μg/mL) 2.4 2.3 2.3 2.2 2.2 甘草酸含量(μg/mL) 431 425 421 417 414

太阳城集团由表8~16可以看出,本发明产品市售包装下,在温度为40℃±2℃,相对湿度为75%±5%的环境下加速放置6个月,板芩桔甘合剂的性状未发生明显变化,定性鉴别均能检出相应斑点,相对密度未发生变化,pH值由5.3下降到4.8,微生物限度符合规定,黄芩苷含量由2.4mg/mL下降到2.1mg/mL,甘草酸含量由430μg/mL下降到407μg/mL。中药合剂含有较多化学成分,在高温环境中易发生化学反应,造成制剂理化性质发生改变,有效成分含量降低,建议将板芩桔甘合剂保存于“阴凉处”。在光照试验中,将板芩桔甘合剂装入无色透明塑料瓶内,放置在光照强度为4500±500Lx的环境中10天,板芩桔甘合剂的性状、相对密度未发生变化,定性鉴别均能检出相应斑点,pH值由5.3下降到5.2,微生物限度符合规定,黄芩苷含量由2.4mg/mL下降到2.3mg/mL,甘草酸含量由430μg/mL下降到423μg/mL。板芩桔甘合剂在市售包装下,在温度为25℃±2℃,相对湿度为60%±10%的环境内进行长期稳定性试验,放置12个月后,板芩桔甘合剂的性状、相对密度未发生变化,定性鉴别均能检出相应斑点,pH值由5.3下降到5.0,微生物限度符合规定,黄芩苷含量由2.4mg/mL下降到2.2mg/mL,甘草酸含量由430μg/mL下降到413μg/mL。在市售包装下,板芩桔甘合剂在室温环境中放置12个月,其各项指标变化不显著,均在可控范围内,因此继续进行长期稳定性试验。通过上述研究,说明温度对板芩桔甘合剂的稳定性有影响,因此在市售包装条件下,建议板芩桔甘合剂的储藏条件为“密封,置阴凉处”。

太阳城集团测试例5芩桔甘合剂的质量检测

(1)知母薄层鉴别:

参照2015年版《中国药典》中“知母”薄层鉴别方法,取板芩桔甘合剂5mL(相当于知母药材0.8g),蒸干,残渣加甲醇10mL洗脱至具塞锥形瓶中,超声处理20分钟,滤过,滤液蒸干,残渣加30%丙酮10mL使溶解,作为供试品溶液;取缺知母药材的阴性溶液,按供试品溶液制备项下方法制得阴性对照溶液;另取知母对照药材0.2g,加30%丙酮10mL,超声处理20分钟,取上清液作为对照药材溶液;再取知母皂苷BⅡ对照品,加30%丙酮制成每1mL含1mg的溶液,作为对照品溶液。吸取上述4种溶液各2~4μl,分别点于同一硅胶G薄层板上,以正丁醇-冰醋酸-水(4:1:5)的上层溶液为展开剂,展开,取出,晾干,喷以香草醛硫酸试液,在105℃加热至斑点显色清晰,在日光下检视,见图1。

在薄层图中,对照药材与对照品色谱相应位置有一黄色斑点,供试品与阴性对照在相同位置也有斑点出现,但斑点颜色与对照品不相符,且供试品色谱背景颜色较深,无法判断与对照品相同位置的斑点颜色。

采用过柱纯化的方法对供试品溶液进行处理,具体方法如下:取本品5mL,加甲醇30mL,超声处理20分钟,滤过,滤液浓缩至5mL,加在中性氧化铝柱(200~300目,5g,内径为1cm)上,用50%甲醇50mL洗脱,收集洗脱液,蒸干,残渣加30%丙酮10mL溶解,作为供试品溶液;同法制备缺知母的阴性对照溶液。按上述薄层鉴别方法进行,见图2。

在薄层图中,供试品在与对照药材和对照品色谱相应位置有且仅有一个黄色斑点,阴性对照无此黄色斑点,说明该方法可以对板芩桔甘合剂中知母药材进行专属性鉴别,在供试品色谱中只有与知母皂苷BⅡ相对应的黄色斑点,故只将知母皂苷BⅡ作为对照纳入标准中,点样量为2~4μl(见图3)。

(2)黄芩薄层鉴别:

参照2015年版《中国药典》“葛根芩连丸”标准中“黄芩”的薄层鉴别方法,取板芩桔甘合剂2mL(相当于黄芩药材0.32g),加水20mL,摇匀,用稀盐酸调节pH值至3.0~3.5,再用乙酸乙酯振摇提取2次,每次20mL,由于乙酸乙酯液分层太阳城集团较长,可采用离心法取乙酸乙酯层,合并乙酸乙酯液,浓缩至1mL,作为供试品溶液;取缺黄芩药材的阴性溶液,按供试品溶液制备项下方法制得阴性对照溶液;另取黄芩对照药材0.1g,加水50mL,回流提取1小时,滤过,滤液自“用稀盐酸调节pH值至3.0~3.5”起,同法制成对照药材溶液。再取黄芩苷对照品,加无水乙醇制成每1mL含0.5mg的溶液,作为对照品溶液。吸取上述4种溶液各4~6μl,分别点于同一硅胶G薄层板上,以乙酸乙酯-丁酮-冰醋酸-水(5:2:1:1)为展开剂,展开,取出,晾干,喷以1%三氯化铁乙醇溶液,在日光下检视,见图4。

在薄层图中,供试品与对照药材色谱相应位置有三个相同颜色的斑点,与对照品色谱相应位置有一个相同颜色的斑点,阴性对照色谱在相应位置上没有相同颜色的斑点出现,说明该方法可以对板芩桔甘合剂中黄芩药材进行专属性鉴别,在供试品色谱中与对照药材和对照品均有相对应的斑点,故将黄芩对照药材与黄芩苷作为对照纳入标准中,点样量为4~6μl(见图5)。

(3)桔梗薄层鉴别:

参照文献“瓜桔止嗽丸薄层鉴别及桔梗皂苷D的含量测定”中“桔梗”薄层鉴别方法,取板芩桔甘合剂2mL(相当于桔梗药材0.28g),加甲醇20mL,超声处理20分钟,滤过,滤液蒸干,残渣加水5mL使溶解,加在D101大孔树脂柱(长5cm,内径3cm)上,分别用水25mL、20%乙醇25mL、50%乙醇50mL洗脱,收集50%乙醇洗脱液,蒸干,残渣加甲醇2mL溶解,作为供试品溶液;取缺桔梗药材的阴性溶液,按供试品溶液制备项下方法制得阴性对照溶液;另取桔梗对照药材0.5g,同法制的对照药材溶液。吸取上述3种溶液各4~6μl,分别点于同一硅胶G薄层板上,以三氯甲烷-甲醇-水(7:3:0.5)为展开剂,展开,取出,晾干,喷以10%硫酸乙醇溶液,在105℃加热至斑点显色清晰,在日光下检视,见图6。

太阳城集团在薄层图中,供试品在与对照药材色谱相应位置有一褐色斑点,阴性对照无此褐色斑点,说明该方法可以对板芩桔甘合剂中桔梗药材进行专属性鉴别,故将桔梗对照药材作为对照纳入标准中,点样量为4~6μl时斑点清晰可见,且条带点样斑点更清晰(见图7)。

太阳城集团本文
本文标题:一种兽用板芩桔甘合剂.pdf
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