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一种同时测定人血清氧化脂蛋白(A)和氧化低密度脂蛋白的化学发光成像免疫分析方法.pdf

摘要
申请专利号:

CN201310589176.0

申请日:

2013.11.20

公开号:

太阳城集团CN103630695A

公开日:

2014.03.12

当前法律状态:

驳回

有效性:

无权

法律详情: 发明专利申请公布后的驳回IPC(主分类):G01N 33/68申请公布日:20140312|||实质审查的生效IPC(主分类):G01N 33/68申请日:20131120|||公开
IPC分类号: G01N33/68 主分类号: G01N33/68
申请人: 中国人民解放军南京军区南京总医院
发明人: 汪俊军; 于瑞杰; 宋佳希; 吴嘉; 牛冬梅; 马丽娟
地址: 210002 江苏省南京市玄武区中山东路305号
优先权:
专利代理机构: 南京天华专利代理有限责任公司 32218 代理人: 夏平;李晓峰
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法律状态
申请(专利)号:

CN201310589176.0

授权太阳城集团号:

||||||

法律状态太阳城集团日:

2017.02.15|||2014.04.09|||2014.03.12

法律状态类型:

太阳城集团发明专利申请公布后的驳回|||实质审查的生效|||公开

摘要

本发明公开了一种同时测定人血清氧化脂蛋白(a)和氧化低密度脂蛋白的方法。该分析体系以硅烷化修饰的多组分免疫传感器为固相载体,通过在载体上包被捕获抗体,制成固相抗体;向固相抗体中加入待测样品或标准系列溶液,充分反应后,再加入辣根过氧化物酶标记的抗体,形成夹心免疫复合物;最后,加入化学发光底物鲁米诺-过氧化氢进行反应,通过用高分辨率的电荷耦合器件检测发光强度,从而对人血清的氧化脂蛋白(a)和氧化低密度脂蛋白进行同时定量,并对免疫反应条件、酶结合物稀释度及检测太阳城集团等进行了优化,且对该方法的线性范围、精密度、准确性及检测限等指标进行考察。该分析方法具有操作简单、灵敏度高、线性范围窄、稳定性好等优点,具有一定的临床应用价值。

权利要求书

权利要求书
1.  一种同时检测血清样品中多种氧化脂蛋白含量的化学发光成像免疫分析方法,其特征在于包含以下步骤:
步骤1:在硅烷化修饰的载玻片阵列上,包被捕获抗体,温育、洗涤、封闭,制成固相抗体;
步骤2:向步骤1制备的固相抗体的微孔中加入相应的标准系列溶液,温育、洗涤;加入相应的辣根过氧化物酶标记的抗体,温育、洗涤;然后加入化学发光底物鲁米诺-过氧化氢,通过CCD进行化学发光图像的检测;根据标准溶液浓度及对应的化学发光强度值绘制标准曲线;
步骤3:向步骤1制备的固相抗体的微孔中加入相应的待测血清样品,温育、洗涤,加入相应的辣根过氧化物酶标记的抗体,温育、洗涤;然后加入化学发光底物鲁米诺-过氧化氢,通过CCD进行化学发光图像的检测;根据步骤2绘制的标准曲线,计算出样品中不同氧化脂蛋白的浓度。

2.  根据权利要求1所述的化学发光成像免疫分析方法,其特征在于,步骤1中所述的捕获抗体为兔抗人氧化低密度脂蛋白抗体。

3.  根据权利要求2所述的化学发光成像免疫分析方法,其特征在于,所述兔抗人氧化低密度脂蛋白抗体的浓度为0.33μg/mL。

4.  根据权利要求1所述的化学发光成像免疫分析方法,其特征在于,所述的多种氧化脂蛋白为氧化脂蛋白(a)和氧化低密度脂蛋白。

5.  根据权利要求1所述的化学发光成像免疫分析方法,其特征在于,步骤2中所述的标准系列溶液为新鲜混合血清原液及其倍比稀释溶液。

6.  根据权利要求5所述的化学发光成像免疫分析方法,其特征在于,新鲜混合血清原液中氧化脂蛋白(a)和氧化低密度脂蛋白的含量由纯化的Cu2+氧化的脂蛋白(a)和Cu2+氧化的低密度脂蛋白标定。

7.  根据权利要求1所述的化学发光成像免疫分析方法,其特征在于,步骤2和3中所述的辣根过氧化物酶标记的抗体分别为辣根过氧化物酶标记的载脂蛋白(a)单克隆抗体和辣根过氧化物酶标记的载脂蛋白B多克隆抗体。

8.  根据权利要求7所述的化学发光成像免疫分析方法,其特征在于,所述辣根过氧化物酶标记的载脂蛋白(a)单克隆抗体和辣根过氧化物酶标记的载脂蛋白B多克隆抗体的稀释度均为1:100。

9.  根据权利要求1所述的化学发光成像免疫分析方法,其特征在于,步骤1中封闭所 使用的封闭液为含10%胎牛血清的0.01M磷酸盐缓冲液,pH 7.4;步骤1、2、3中洗涤所使用的洗涤液均为pH 7.4,0.01M磷酸盐缓冲液。

10.  根据权利要求1所述的化学发光成像免疫分析方法,其特征在于,步骤2和步骤3中第一步温育反应的太阳城集团为1h,第二步温育反应的太阳城集团为1.5h。

关 键 词:
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