太阳城集团

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一种抗感染药物的检测方法.pdf

摘要
申请专利号:

太阳城集团CN201310480945.3

申请日:

2013.10.15

公开号:

CN103630648A

公开日:

2014.03.12

当前法律状态:

授权

有效性:

有权

法律详情: 授权|||实质审查的生效IPC(主分类):G01N 30/90申请日:20131015|||公开
IPC分类号: G01N30/90; G01N30/88; G01N30/06 主分类号: G01N30/90
申请人: 滨州医学院附属医院
发明人: 丁长玲; 崔俊凤; 高华; 赵永德; 丁召兴; 胡丽敏
地址: 256600 山东省滨州市黄河二路661号
优先权:
专利代理机构: 济南舜源专利事务所有限公司 37205 代理人: 侯绪军
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法律状态
申请(专利)号:

太阳城集团CN201310480945.3

授权太阳城集团号:

||||||

法律状态太阳城集团日:

2015.04.01|||2014.04.09|||2014.03.12

法律状态类型:

授权|||实质审查的生效|||公开

摘要

本发明提供了一种抗感染药物的检测方法,包括黄芩的鉴别,还包括黄连的鉴别、黄柏的鉴别、冰片的鉴别、乙醇含量的检测、黄芩含量的测定和黄连和黄柏含量的测定,这种抗感染药物的检测方法,采用气相色谱仪对复方三黄酊的乙醇含量进行测定,同时采用薄层色谱和高效液相色谱仪进行各组份的鉴别和含量测定。测定准确,切实保证了制剂的质量,改变了药品质量无标准的现状,确保药物有效成分在合格范围,从而保证了患者用药安全、有效。

权利要求书

权利要求书
1.  一种抗感染药物的检测方法,包括黄芩的鉴别,其特征在于,所述的抗感染药物是由如下方法制备的,原料药物的配比为,黄连 90—110重量份、 黄柏90—110重量份、黄芩90—110重量份、冰片4—6重量份;按配比分别称取各原料药物,将黄连、黄柏、黄芩研成粗粉后,按每100g粗粉加入体积百分比浓度为50%的乙醇溶液250ml-300ml的比例,向粗粉中加入体积百分比浓度为50%的乙醇溶液,并搅拌均匀,使粗粉充分膨胀,然后将膨胀后的粗粉装入渗漉筒内,按每100g粗粉加入体积百分比浓度为50%的乙醇溶液450-500ml的比例,缓缓加入体积百分比浓度为50%的乙醇溶液,待粗粉内的空气排出,并有18—22ml的乙醇溶液从渗漉筒上的放料阀流出后,关闭放料阀、盖上渗漉筒,浸渍46—50小时,用渗漉法缓慢渗漉,收集初漉液和续滤液,静置、滤过后成滤液,加入冰片,制成混合液,用体积百分比浓度为50%的乙醇溶液,将每100g粗粉获得的滤液加入冰片制成的混合液的体积调整至1000ml,搅拌均匀,分装,制成抗感染药物;
所述的检测方法是,
(1)、黄连的鉴别
供试品溶液的制备:取上述方法制备的抗感染药物10ml,滤过,滤液挥干,残渣加甲醇1ml使其溶解,作为供试品溶液;
对照药材溶液的制备:取黄连对照药材(购自中国药品生物制品检定所)0.1g,加甲醇10ml,超声处理30分钟,滤过,滤液浓缩至2ml,作为对照药材溶液;
对照品溶液的制备:取盐酸小檗碱对照品(购自中国药品生物制品检定所)5.0mg,加甲醇10ml,制成每1ml含0.5mg的溶液,作为对照品溶液;
薄层板:硅胶G薄层板(TLC Silica gel 60,50 Glass plates 10×20cm,德国默克公司生产);
展开剂:甲苯-异丙醇-乙酸乙酯-甲醇-水(6:1.5:3:1.5:0.3),置于氨蒸气饱和的展开缸中;
点样量:吸取上述溶液各2μl;
展开条件:温度 26 ℃、相对湿度 62%;
检视:紫外灯(365nm)下;
结果:供试品色谱中,在与对照品色谱和对照药材色谱相应的位置上,显相同的黄色荧光斑点;
(2)、黄柏的鉴别
供试品溶液的制备:取上述方法制备的抗感染药物10ml,滤过,滤液挥干,残渣加体积百分比浓度为1%的醋酸甲醇溶液1ml使其溶解,作为供试品溶液;
对照药材溶液的制备:取黄柏对照药材(购自中国药品生物制品检定所)0.2g,加体积百分比浓度为1%的醋酸甲醇溶液20ml,超声处理20分钟,滤过,滤液浓缩至2ml作为对照药材溶液;
薄层板:硅胶G薄层板(TLC Silica gel 60,50 Glass plates 10×20cm,德国默克公司生产);
展开剂:三氯甲烷-甲醇-水(30:15:4)下层溶液,置于氨蒸气饱和的展开缸中;
点样量:吸取供试品溶液、对照药材溶液各2μl;
展开条件:温度 26 ℃、相对湿度 62%;
检视:紫外灯(365nm)下 ;
结果:供试品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上,显相同的黄色荧光斑点;
(3)冰片的鉴别
供试品溶液的制备:取上述方法制备的抗感染药物10ml,滤过,滤液挥干,残渣加乙酸乙酯1ml使其溶解,作为供试品溶液;
对照品溶液的制备:取冰片对照品(购自中国药品生物制品检定所)5mg,加乙酸乙酯10ml制成每1ml含0.5mg的溶液作为对照品溶液;
薄层板:硅胶G薄层板(TLC Silica gel 60,50 Glass plates 10×20cm,德国默克公司生产);
展开剂:苯-乙酸乙酯(19:1);
点样量:吸取上述溶液各5μl;
展开条件:温度 26 ℃、相对湿度 62%; 
显色剂:将1g香草醛溶于100ml硫酸溶液中获得的香草醛硫酸溶液;检视:日光下; 
结果:供试品色谱中,在与对照品色谱相应的位置上,显相同的暗红色斑点;
(4)乙醇含量的检测
仪器与试药: Agilent6890N气相色谱仪,乙醇和正丙醇为色谱纯;
色谱条件与系统适用性试验:
检测器:火焰离子化检测器,色谱柱:HP-INNOWax  Polyethlene Glycol,产品号:19091N-133,内径:250.00μm,长度:30.0m,液膜厚度:0.25μm;
起始温度为80℃,维持7分钟,再以每分钟10℃的速率升温至110℃;进样口温度:190℃;检测器温度:220℃,理论板数按正丙醇峰计算不低于8000,乙醇峰与正丙醇峰的分离度大于2.0,分流比:20:1;
校正因子的测定:精密量取恒温至20℃的无水乙醇4ml、5ml、6ml,分别置于100ml量瓶中,分别精密加入恒温至20℃的正丙醇(内标物质)5ml,用水稀释至刻度,摇匀,作为对照品溶液;取上述三种溶液1μl,注入液相色谱仪,分别连续进样3次,测定峰面积;经计算,得到校正因子; 
供试品溶液的制备:精密量取恒温至20℃的供试品10ml,置于100ml量瓶中,精密加入恒温至20℃的正丙醇5ml,用水稀释至刻度,摇匀,滤过,取续滤液作为供试品溶液;取1μl续滤液注入气相色谱仪,测定,即得乙醇含量;
(5)黄芩含量的测定
仪器:Agilent1200系列高效液相色谱仪;
色谱柱:Inertex  C18  5u  250×4.6mm,甲醇为色谱纯,黄芩苷对照品(购自中国药品生物制品检定所,供含量测定用,含量以质量百分比浓度计为94.0%);
色谱条件:选用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;甲醇-0.2mol/L磷酸溶液(43∶57)为流动相;检测波长280nm,理论板数以黄芩苷峰计不少于3000,柱温:30℃,流速:1.0m/lmin,进样量:5μl;
对照品溶液的制备:精密称取黄芩苷对照品7.30mg和6.33mg(含量以质量百分比浓度计为94.0%),分别置于100ml量瓶中,加甲醇溶解并稀释至刻度,摇匀,即得(对照品溶液浓度分别为0.0686mg/ml和0.05950mg/ml);
供试品溶液的制备:精密量取上述方法制备的抗感染药物6ml,置于25ml容量瓶中,加入甲醇并稀释至刻度,摇匀,滤过,取续滤液,即得;
测定法:分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5μl,注入液相色谱仪,测定,即得;
(6)黄连和黄柏含量的测定
仪器与试药:Agilent1200系列高效液相色谱仪,色谱柱:Inertex  C18  5u  250×4.6mm,乙腈为色谱纯(德国默克公司生产),盐酸小檗碱对照品(购自中国药品生物制品检定所,供含量测定用,含量以质量百分比浓度计为86.8%);
色谱条件:选用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;乙腈-0.05mol/L磷酸二氢钾(用磷酸调pH值至3.0)(30∶70)为流动相;检测波长:345 nm,理论板数以盐酸小檗碱峰计不少于5000,柱温:30℃,流速:1.0m/lmin;
对照品溶液的制备:精密称取盐酸小檗碱对照品13.08mg和11.41mg(含量以质量百分比浓度计为86.8%),分别置于50ml量瓶中,加甲醇溶解并稀释至刻度,摇匀,精密量取10ml置于100ml量瓶中,加甲醇稀释至刻度摇匀,过滤,即得(对照品溶液浓度为:0.0227mg/ml和0.0198mg/ml);
供试品溶液的制备:精密量取上述方法制备的抗感染药物1.20ml,置于蒸发皿中,水浴蒸干,用甲醇分次溶解转移至50ml容量瓶中,加入甲醇稀释至刻度,摇匀,滤过,取续滤液,即得;
测定法:分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5μl,注入液相色谱仪,测定,即得。

说明书

说明书一种抗感染药物的检测方法
技术领域
本发明提供了一种药物的检测方法,尤其是一种抗感染药物的检测方法。
背景技术
急性创伤感染、慢性皮肤溃疡、褥疮、烧烫伤是外科常见的疾病。传统的治疗方法是采取清洁换药,即使用抗菌消毒剂(碘制剂,乙醇,醋酸氯己定等)处理创面,然后无菌包扎;治疗慢性皮肤溃疡即在上述治疗的基础上配合红外线照射。由于抗菌消毒药没有直接抗炎消肿作用,对改善创面红肿、渗出等效果较差。采用复方三黄酊局部湿敷治疗,使药物直接持续地作用于患部,药物以透皮给药的方式迅速渗透,可快速发挥其抗菌消炎、止痛消肿、祛腐生肌功效,并及时缓解分泌物对组织的损害,使患部组织有了体液连续性更新的条件。且随着辅料的更换,将细菌及坏死组织清除,避免了细菌内、外毒素和代谢产物对组织的滞留性破坏,为创面创造了清洁、无菌的良性环境。复方三黄酊具有清热、解毒、抗菌消炎,消肿、祛腐生肌、清凉止痛作用,可加速创面的愈合,具有很好的临床疗效。
 但由于该药物制备周期长,难以控制主要成分的含量,且提取溶媒乙醇的含量难以测定,原质量标准只能对其中一种主要成分黄芩苷进行鉴别;主要成分的含量测定标准没有建立,无法保证药物的质量,因而临床疗效不一。 
发明内容
本发明所要解决的技术问题是,提供一种抗感染药物的检测方法,以有效检测药物的质量,保证疗效。
本发明是这样实现的,一种抗感染药物的检测方法,包括黄芩的鉴别,所述的抗感染药物是由如下方法制备的,原料药物的配比为,黄连 90—110重量份、 黄柏90—110重量份、黄芩90—110重量份、冰片4—6重量份;按配比分别称取各原料药物,将黄连、黄柏、黄芩研成粗粉后,按每100g粗粉加入体积百分比浓度为50%的乙醇溶液250ml-300ml的比例,向粗粉中加入体积百分比浓度为50%的乙醇溶液,并搅拌均匀,使粗粉充分膨胀,然后将膨胀后的粗粉装入渗漉筒内,按每100g粗粉加入体积百分比浓度为50%的乙醇溶液450-500ml的比例,缓缓加入体积百分比浓度为50%的乙醇溶液,待粗粉内的空气排出,并有18—22ml的乙醇溶液从渗漉筒上的放料阀流出后,关闭放料阀、盖上渗漉筒,浸渍46—50小时,用渗漉法缓慢渗漉,收集初漉液和续滤液,静置、滤过后成滤液,加入冰片,制成混合液,用体积百分比浓度为50%的乙醇溶液,将每100g粗粉获得的滤液加入冰片制成的混合液的体积调整至1000ml,搅拌均匀,分装,制成抗感染药物;
所述的检测方法是,
(1)、黄连的鉴别
供试品溶液的制备:取上述方法制备的抗感染药物10ml,滤过,滤液挥干,残渣加甲醇1ml使其溶解,作为供试品溶液;
对照药材溶液的制备:取黄连对照药材(购自中国药品生物制品检定所)0.1g,加甲醇10ml,超声处理30分钟,滤过,滤液浓缩至2ml,作为对照药材溶液;
对照品溶液的制备:取盐酸小檗碱对照品(购自中国药品生物制品检定所)5.0mg,加甲醇10ml,制成每1ml含0.5mg的溶液,作为对照品溶液;
薄层板:硅胶G薄层板(TLC Silica gel 60,50 Glass plates 10×20cm,德国默克公司生产);
展开剂:甲苯-异丙醇-乙酸乙酯-甲醇-水(6:1.5:3:1.5:0.3),置于氨蒸气饱和的展开缸中;
点样量:吸取上述溶液各2μl;
展开条件:温度 26 ℃、相对湿度 62%;
检视:紫外灯(365nm)下;
结果:供试品色谱中,在与对照品色谱和对照药材色谱相应的位置上,显相同的黄色荧光斑点;
(2)、黄柏的鉴别
供试品溶液的制备:取上述方法制备的抗感染药物10ml,滤过,滤液挥干,残渣加体积百分比浓度为1%的醋酸甲醇溶液1ml使其溶解,作为供试品溶液;
对照药材溶液的制备:取黄柏对照药材(购自中国药品生物制品检定所)0.2g,加体积百分比浓度为1%的醋酸甲醇溶液20ml,超声处理20分钟,滤过,滤液浓缩至2ml作为对照药材溶液;
薄层板:硅胶G薄层板(TLC Silica gel 60,50 Glass plates 10×20cm,德国默克公司生产);
展开剂:三氯甲烷-甲醇-水(30:15:4)下层溶液,置于氨蒸气饱和的展开缸中;
点样量:吸取供试品溶液、对照药材溶液各2μl;
展开条件:温度 26 ℃、相对湿度 62%;
检视:紫外灯(365nm)下 ;
结果:供试品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上,显相同的黄色荧光斑点;
(3)冰片的鉴别
供试品溶液的制备:取上述方法制备的抗感染药物10ml,滤过,滤液挥干,残渣加乙酸乙酯1ml使其溶解,作为供试品溶液;
对照品溶液的制备:取冰片对照品(购自中国药品生物制品检定所)5mg,加乙酸乙酯10ml制成每1ml含0.5mg的溶液作为对照品溶液;
薄层板:硅胶G薄层板(TLC Silica gel 60,50 Glass plates 10×20cm,德国默克公司生产);
展开剂:苯-乙酸乙酯(19:1);
点样量:吸取上述溶液各5μl;
展开条件:温度 26 ℃、相对湿度 62%; 
显色剂:将1g香草醛溶于100ml硫酸溶液中获得的香草醛硫酸溶液;检视:日光下; 
结果:供试品色谱中,在与对照品色谱相应的位置上,显相同的暗红色斑点;
(4)乙醇含量的检测
仪器与试药: Agilent6890N气相色谱仪,乙醇和正丙醇为色谱纯;
色谱条件与系统适用性试验:
检测器:火焰离子化检测器,色谱柱:HP-INNOWax  Polyethlene Glycol,产品号:19091N-133,内径:250.00μm,长度:30.0m,液膜厚度:0.25μm;
起始温度为80℃,维持7分钟,再以每分钟10℃的速率升温至110℃;进样口温度:190℃;检测器温度:220℃,理论板数按正丙醇峰计算不低于8000,乙醇峰与正丙醇峰的分离度大于2.0,分流比:20:1;
校正因子的测定:精密量取恒温至20℃的无水乙醇4ml、5ml、6ml,分别置于100ml量瓶中,分别精密加入恒温至20℃的正丙醇(内标物质)5ml,用水稀释至刻度,摇匀,作为对照品溶液;取上述三种溶液1μl,注入液相色谱仪,分别连续进样3次,测定峰面积;经计算,得到校正因子; 
供试品溶液的制备:精密量取恒温至20℃的供试品10ml,置于100ml量瓶中,精密加入恒温至20℃的正丙醇5ml,用水稀释至刻度,摇匀,滤过,取续滤液作为供试品溶液;取1μl续滤液注入气相色谱仪,测定,即得乙醇含量;
(5)黄芩含量的测定
仪器:Agilent1200系列高效液相色谱仪;
色谱柱:Inertex  C18  5u  250×4.6mm,甲醇为色谱纯,黄芩苷对照品(购自中国药品生物制品检定所,供含量测定用,含量以质量百分比浓度计为94.0%);
色谱条件:选用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;甲醇-0.2mol/L磷酸溶液(43∶57)为流动相;检测波长280nm,理论板数以黄芩苷峰计不少于3000,柱温:30℃,流速:1.0m/lmin,进样量:5μl;
对照品溶液的制备:精密称取黄芩苷对照品7.30mg和6.33mg(含量以质量百分比浓度计为94.0%),分别置于100ml量瓶中,加甲醇溶解并稀释至刻度,摇匀,即得(对照品溶液浓度分别为0.0686mg/ml和0.05950mg/ml);
供试品溶液的制备:精密量取上述方法制备的抗感染药物6ml,置于25ml容量瓶中,加入甲醇并稀释至刻度,摇匀,滤过,取续滤液,即得;
测定法:分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5μl,注入液相色谱仪,测定,即得;
(6)黄连和黄柏含量的测定
仪器与试药:Agilent1200系列高效液相色谱仪,色谱柱:Inertex  C18  5u  250×4.6mm,乙腈为色谱纯(德国默克公司生产),盐酸小檗碱对照品(购自中国药品生物制品检定所,供含量测定用,含量以质量百分比浓度计为86.8%);
色谱条件:选用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;乙腈-0.05mol/L磷酸二氢钾(用磷酸调pH值至3.0)(30∶70)为流动相;检测波长:345 nm,理论板数以盐酸小檗碱峰计不少于5000,柱温:30℃,流速:1.0m/lmin;
对照品溶液的制备:精密称取盐酸小檗碱对照品13.08mg和11.41mg(含量以质量百分比浓度计为86.8%),分别置于50ml量瓶中,加甲醇溶解并稀释至刻度,摇匀,精密量取10ml置于100ml量瓶中,加甲醇稀释至刻度摇匀,过滤,即得(对照品溶液浓度为:0.0227mg/ml和0.0198mg/ml);
供试品溶液的制备:精密量取上述方法制备的抗感染药物1.20ml,置于蒸发皿中,水浴蒸干,用甲醇分次溶解转移至50ml容量瓶中,加入甲醇稀释至刻度,摇匀,滤过,取续滤液,即得;
测定法:分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5μl,注入液相色谱仪,测定,即得。
这种抗感染药物的检测方法,采用气相色谱仪对复方三黄酊的乙醇含量进行测定,同时采用薄层色谱和高效液相色谱仪进行各组份的鉴别和含量测定。测定准确,切实保证了制剂的质量,改变了药品质量无标准的现状,确保药物有效成分在合格范围,从而保证了患者用药安全、有效。
附图说明
图1是黄连薄层色谱图。图中,2、3为供试品,1为黄连对照药材,4为盐酸小檗碱。
图2是黄柏薄层色谱图。图中,1为黄柏对照药材;2、3、4为供试品。
图3是冰片薄层色谱图。图中,1为供试品;2为冰片对照品。
图4是乙醇含量对照品溶液气相色谱图。
图5是供试品溶液气相色谱图。
图6是黄芩苷对照品HPLC色谱图。
图7是供试品HPLC色谱图。
图8是黄芩苷标准曲线图。
图9是盐酸小檗碱对照品HPLC色谱图。
图10是供试品HPLC色谱图。
图11是盐酸小檗碱标准曲线图。
具体实施方式
下面进一步说明本发明。
在抗感染药物的制备中,黄连、黄柏、黄芩研成的粗粉的粗细度为过10目筛。
在抗感染药物的制备中,渗漉速度等其他操作工艺与现有的单渗漉法相同,不再详述。
在抗感染药物的制备中,“按每100g粗粉加入体积百分比浓度为50%的乙醇溶液450-500ml的比例,缓缓加入体积百分比浓度为50%的乙醇溶液,”中,粗粉的重量以加入乙醇溶液前计。同样,“用体积百分比浓度为50%的乙醇溶液将每100g粗粉获得的滤液加入冰片制成的混合液的体积调整至1000ml,”粗粉的重量也以加入乙醇溶液前计。
所述的色谱柱HP-INNOWax Polyethlene Glycol,为HP-INNOWAX(Crosslinkws Polyethlene Glycol交链聚乙二醇)。Agilent6890N气相色谱仪又称为安捷伦6890N气相色谱仪。
黄芩的鉴别方法是,取上述方法制备的抗感染药物5ml,蒸干,残渣加甲醇1ml 使其溶解,作为供试品溶液。另取黄芩苷对照品,加甲醇制成每1ml含1mg的溶液,作为对照品溶液。按照薄层色谱法(中国药典2010年版一部附录Ⅵ B)试验,吸取上述两种溶液各3μl,分别点于同一聚酰胺薄膜上,以醋酸为展开剂,展开,取出,晾干,喷以将1g三氯化铁溶于100ml乙醇溶液中获得的三氯化铁乙醇溶液。供试品色谱中,在与对照品色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点。
在乙醇含量的检测、黄芩含量的测定、黄连和黄柏含量的测定中,按选定的色谱条件进行试验,色谱峰分离条件好。
在进行所述的乙醇含量的检测中,校正因子的测定时,实际测定对照品溶液的峰面积及校正因子得到表1所示结果。
表1  乙醇含量测定对照品溶液的峰面积及校正因子

在进行所述的乙醇含量的检测中,取1μl注入气相色谱仪,进行实际测定时,测定6批样品,得到表2所示结果。
 表2  6批样品乙醇含量测定结果 

 根据配方及工艺流程,6批含量测定在47.9%~53.8%,结果平均值为51.7%,因此确定乙醇含量为45.0%~55.0%为合格标准。
在黄芩含量的测定中,可进行方法学考察。
 1、线性关系的考察
对照品溶液的制备:精密称取黄芩苷对照品7.30mg,置100ml量瓶中,加甲醇溶解并稀释至刻度,摇匀,作为对照品溶液(对照品溶液浓度为:0.06862mg/ml)。
分别精密吸取上述黄芩苷对照品溶液1μl、2μl、4μl、6μl、8μl,10μl注入液相色谱仪,分别测定峰面积积分值。以对照品的进样量为横坐标,峰面积积分值为纵坐标,进行线性回归,得回归方程为y = 3652.55866 x -2.06597 ,相关系数r2=1。结果见表3及图8。
表3黄芩苷线性关系考察结果

试验结果表明,黄芩苷在 0.06862μg ~ 0.6862μg之间进样量与峰面积积分值呈良好的线性关系。
2、仪器精密度试验
精密吸取黄芩苷对照品溶液(浓度0.06862mg/ml)5μl,注入液相色谱仪,连续进样6次,按上述测定方法进行测定,计算RSD。结果见表4。
 表4 仪器精密度试验结果

 试验结果显示仪器精密度良好。
3、黄芩苷对照品稳定性试验
精密吸黄芩苷对照品溶液(浓度0.06862mg/ml)5μl,注入液相色谱仪,每隔一段太阳城集团进样一次,测定黄芩苷的峰面积积分值,共考察12小时,计算RSD,以观察样品溶液在检测过程中待测成分的稳定性。结果见表5。
表5 稳定性试验结果

试验结果表明供试品溶液在12小时内稳定性良好,能够满足测定需要。
 4 、重复性试验
取上述方法制备的抗感染药物(生产单位:滨州医学院附属医院;批号:20120508),按照供试品溶液的制备方法,平行制备6份样品,按上述方法和条件进行测定,计算每份的含量。结果见表6。 
表6重复性试验结果 

试验结果表明测定方法的重复性良好。
5、加样回收率试验 
取已测知黄芩苷含量的样品(生产单位:滨州医学院附属医院;批号:20120508,黄芩苷含量0.351mg/ml )3.00ml,共取6份,置25ml容量瓶中,精密加入黄芩苷对照品储备液(浓度为0.111mg/ml)10.00ml,加入甲醇至刻度,摇匀,滤过,取续滤液,即得。按上述测定方法进行测定,计算回收率。结果见表7。
 表7 加样回收率试验结果
 
试验结果表明测定方法的回收率良好。              
6、样品测定                            
按上述测定方法和条件,对已生产的6批样品进行了测定,测定结果见表8。
 表8  黄芩苷含量测定结果

根据6批样品测定结果,含黄芩以黄芩苷计不少于0.30mg/ml为合格标准。
在黄连和黄柏含量的测定中,也可进行方法学考察。
1、线性关系的考察
对照品溶液的制备:精密称取盐酸小檗碱对照品11.41mg,置50ml量瓶中,加甲醇溶解并稀释至刻度,摇匀,精密量取10ml,置100ml量瓶中,加甲醇稀释至刻度摇匀,滤过(对照品溶液浓度为:0.0198mg/ml)作为对照品溶液。
分别精密吸取上述黄芩苷对照品溶液1μl、2μl、4μl、6μl、8μl,10μl注入液相色谱仪,分别测定峰面积积分值。以对照品的进样量为横坐标,峰面积积分值为纵坐标,进行线性回归,得回归方程为y = 10487.18694 x-9.51589 ,相关系数r2=0.99994。结果见表9及图11。
 表9盐酸小檗碱线性关系考察结果

试验结果表明,盐酸小檗碱在 0.0198~ 0.198μg之间的进样量与峰面积积分值呈良好的线性关系。
2、仪器精密度试验
精密吸取盐酸小檗碱对照品溶液(浓度0.0198mg/ml)5μl,注入液相色谱仪,连续进样6次,按上述测定方法进行测定,计算RSD。结果见表10。
  表10 仪器精密度试验结果 
  
 试验结果显示仪器精密度良好。
3、盐酸小檗碱对照品稳定性试验
精密吸取盐酸小檗碱对照品溶液(浓度0.0227mg/ml)5μl,注入液相色谱仪,每隔一段太阳城集团进样一次,测定盐酸小檗碱的峰面积积分值,共考察12小时,计算RSD,以观察样品溶液在检测过程中待测成分的稳定性。结果见表11。 
表11 稳定性试验结果

 试验结果表明供试品溶液在12小时内稳定性良好,能够满足测定需要。
4、重复性试验
取取上述方法制备的抗感染药物(生产单位:滨州医学院附属医院;批号:20120508),按照供试品溶液的制备方法,平行制备6份样品,按上述方法和条件进行测定,计算每份的含量。结果见表12。 
 表12 重复性实验结果

 试验结果表明测定方法的重复性良好。
5、加样回收率试验 
取已测知盐酸小檗碱含量的样品(生产单位:滨州医学院附属医院;批号:20111128,黄芩苷含量0.452mg/ml )0.500ml,共取6份,置50ml容量瓶中,精密加入盐酸小檗碱对照品溶液(浓度为0.198mg/ml)2.00ml,加入甲醇至刻度,摇匀,滤过,取续滤液,即得。按上述测定方法进行测定,计算回收率。结果见表13。 
 表13 加样回收率试验结果

试验结果表明测定方法的回收率良好。              
6、样品测定                            
按上述测定方法和条件,对已生产的6批样品进行了测定,测定结果见表14。
 表14 盐酸小檗碱含量测定结果

据6批样品测定结果,含黄连和黄柏以盐酸小檗碱计不少于0.40mg/ml为合格标准。

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