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聚乙二醇单甲醚大豆磷脂酰乙醇胺衍生物及其制备.pdf

摘要
申请专利号:

太阳城集团CN201310541744.X

申请日:

2013.11.05

公开号:

CN103626993A

公开日:

2014.03.12

当前法律状态:

授权

有效性:

有权

法律详情: 授权|||实质审查的生效IPC(主分类):C08G 65/48申请日:20131105|||公开
IPC分类号: C08G65/48; C08G65/335; C08G65/00; A61K47/34; A61K9/10 主分类号: C08G65/48
申请人: 南京理工大学
发明人: 卫延安; 陈龙
地址: 210094 江苏省南京市孝陵卫200号
优先权:
专利代理机构: 南京理工大学专利中心 32203 代理人: 朱显国
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法律状态
申请(专利)号:

CN201310541744.X

授权太阳城集团号:

||||||

法律状态太阳城集团日:

2016.01.20|||2014.04.09|||2014.03.12

法律状态类型:

授权|||实质审查的生效|||公开

摘要

本发明公开了一种使用天然大豆磷脂制备的药物载体-聚乙二醇单甲醚大豆磷脂酰乙醇胺衍生物(MPEG-SPE)及其制备。包括大豆粉末磷脂的制备,聚乙二醇单甲醚羧基衍生物的制备和MPEG-SPE的制备,对制备的MPEG-SPE性能进行表征,结果表明其在水中形成胶束为100nm左右,其水溶液中的临界胶束浓度为10-6mol/L左右,在水-正己烷体系中的乳化力优于大豆粉末磷脂,适合于制备靶向药物载体。本发明结合了天然大豆磷脂的优点,一方面利用其含有的脑磷脂中存在较多的不饱和脂肪酸,具有软化血管,降低胆固醇和降低血压的功能,使其更有利于人体健康,另一方面利用其原料易得,价格便宜,降低了其生产成本,具有较大的经济效益和社会效益。

权利要求书

权利要求书
1.  一种聚乙二醇单甲醚大豆磷脂酰乙醇胺衍生物,其特征在于结构如下:

其中R1H、R2H代表油酸、亚麻酸、亚油酸、硬脂酸或棕榈酸中任意一种,且R1H、R2H不同时为油酸、硬脂酸或棕榈酸。

2.  根据权利要求1所述的聚乙二醇单甲醚大豆磷脂酰乙醇胺衍生物,其特征在于所述衍生物按以下具体步骤制备:
步骤1,以天然大豆磷脂制备大豆粉末磷脂;
步骤2,以聚乙二醇单甲醚制备聚乙二醇单甲醚羧基衍生物;
步骤3,以聚乙二醇单甲醚羧基衍生物制备聚乙二醇单甲醚酰氯;
步骤4,以大豆粉末磷脂和聚乙二醇单甲醚酰氯为原料,以三氯甲烷为溶剂,以三乙胺为催化剂,制备聚乙二醇单甲醚大豆磷脂酰乙醇胺衍生物,其中以质量比计,大豆粉末磷脂:聚乙二醇单甲醚酰氯=1:1~10:1;反应温度为10℃~80℃;反应太阳城集团为0.5h~10h;
步骤5,反应结束后,除去三氯甲烷和未反应的三乙胺,加入四氢呋喃沉淀出三乙胺的盐酸盐,离心分离,上层液体除去四氢呋喃再加入无水乙醚沉淀出反应产物。

3.  根据权利要求2所述的聚乙二醇单甲醚大豆磷脂酰乙醇胺衍生物,其特征在于步骤1中所述的大豆粉末磷脂采用丙酮萃取法制备;步骤2中所述的聚乙二醇单甲醚羧基衍生物采用琼斯试剂氧化聚乙二醇单甲醚法制备,其中聚乙二醇单甲醚的分子量范围为1200~5000。

4.  根据权利要求2所述的聚乙二醇单甲醚大豆磷脂酰乙醇胺衍生物,其特征在于步骤3中所述的聚乙二醇单甲醚酰氯采用二氯亚砜和聚乙二醇单甲醚羧基衍生物制备。

5.  根据权利要求2所述的聚乙二醇单甲醚大豆磷脂酰乙醇胺衍生物,其特征在 于步骤4中以物质的量比计,聚乙二醇单甲醚酰氯:三乙胺=1:10~1:40。

6.  根据权利要求2所述的聚乙二醇单甲醚大豆磷脂酰乙醇胺衍生物,其特征在于步骤5中所述的聚乙二醇单甲醚酰氯与四氢呋喃的比=1:30~1:100mmol/ml,所述的聚乙二醇单甲醚酰氯与无水乙醚的比=1:30~1:100mmol/ml。

7.  一种聚乙二醇单甲醚大豆磷脂酰乙醇胺衍生物的制备,其特征在于具体步骤如下:
步骤1、以天然大豆磷脂制备大豆粉末磷脂;
步骤2、以聚乙二醇单甲醚制备聚乙二醇单甲醚羧基衍生物;
步骤3、以聚乙二醇单甲醚羧基衍生物制备聚乙二醇单甲醚酰氯;
步骤4、以大豆粉末磷脂和聚乙二醇单甲醚酰氯为原料,以三氯甲烷为溶剂,以三乙胺为催化剂,制备聚乙二醇单甲醚大豆磷脂酰乙醇胺衍生物,其中以质量比计,大豆粉末磷脂:聚乙二醇单甲醚酰氯=1:1~10:1;反应温度为10℃~80℃;反应太阳城集团为0.5h~10h;
步骤5、反应结束后,除去三氯甲烷和未反应的三乙胺,加入四氢呋喃沉淀出三乙胺的盐酸盐,离心分离,上层液体除去四氢呋喃再加入无水乙醚沉淀出反应产物。

8.  根据权利要求7所述的聚乙二醇单甲醚大豆磷脂酰乙醇胺衍生物的制备,其特征在于步骤1中所述的大豆粉末磷脂采用丙酮萃取法制备;步骤2中所述的聚乙二醇单甲醚羧基衍生物采用琼斯试剂氧化聚乙二醇单甲醚法制备,其中聚乙二醇单甲醚的分子量范围为1200~5000;步骤3中所述的聚乙二醇单甲醚酰氯采用二氯亚砜和聚乙二醇单甲醚羧基衍生物制备。

9.  根据权利要求7所述的聚乙二醇单甲醚大豆磷脂酰乙醇胺衍生物的制备,其特征在于步骤4中以物质的量比计,聚乙二醇单甲醚酰氯:三乙胺=1:10~1:40。

10.  根据权利要求7所述的聚乙二醇单甲醚大豆磷脂酰乙醇胺衍生物的制备,其特征在于步骤5中所述的聚乙二醇单甲醚酰氯与四氢呋喃的比=1:30~1:100mmol/ml,所述的聚乙二醇单甲醚酰氯与无水乙醚的比=1:30~1:100mmol/ml。

说明书

说明书聚乙二醇单甲醚大豆磷脂酰乙醇胺衍生物及其制备
技术领域
本发明涉及一种聚乙二醇单甲醚大豆磷脂酰乙醇胺衍生物药物辅料及其制备方法,属于医药化学领域。
背景技术
聚乙二醇单甲醚(二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺(脑磷脂)衍生物(MPEG-DSPE)是两亲性聚合物,他在水中可形成聚合物胶束,这种胶束是一种核-壳结构,尺寸在100-200nm。其通常是用于包覆疏水性药物,以增加疏水性药物在人体血液中的溶解度从而发挥药效。由于形成的这种小尺寸聚合物胶束外部是聚乙二醇分子链段,其可以在胶束外表面形成交错覆盖的致密构象云,形成较厚的立体位阻层,阻碍了人体血液内高密度脂蛋白的攻击和细胞的吞噬从而延长了药物在体内的存留太阳城集团,使其不至于在达到病变部位之前被消耗。同时这种纳米胶束利用肿瘤、炎症或高血压血管等损伤部位的毛细血管的通透性高于正常血管,同时淋巴排泄能力减弱,具有生物兼容的大分子、药物载体和分子聚集体在体内循环过程中更容易通过病理部位的血管进入组织内并聚集的效应(EPR效应)而具有被动靶向作用,从而使其在抗癌靶向药物中得到广泛的应用。
目前抗癌靶向药物价格普遍较高,这与药物本身的原料来源和制备方法有重要关系,因此选择低成本的原料和简便的制备方法较为重要。目前报道的制备MPEG-DSPE的方法大致分为两大类,一类是直接使用聚乙二醇或聚乙二醇单甲醚与二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺(脑磷脂)在羰基二咪唑的作用下缩合制备(转化率26%)(Noriyuki Maeda,Yoshito Takeuchi,Miki Takada,et al.Synthesis of angiogenesis-targeted peptide and hydrophobized polyethylene glycol conjugate.Bioorganic&Medicinal Chemistry Letters,2004,14:1015-1017),另一类为将聚乙二醇或聚乙二醇单甲醚的羟基转化为羧基再转为有较高活性的中间体活性酯,然后与二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺的氨基反应形成酰胺键(Shih-Kwang Wu,Ting-Gung Chang,Chin-Lu,et al.Solid Phase Method For Synthesis Peptide-Spacer-Lipid Conjugates,Conjugates Synthesized Thereby And Targeted Liposomes Containing The Same[P].US:0229017A1,2003-12-11)。这些制备方法都是使用高纯度的二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺(脑磷脂)为原料,二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺(脑磷脂)的分子量较大且结构比较复杂,其通常采用柱层析和全合成方法制备,反应步鄹较多,反应困难,产率较低,因此较纯净的二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺(脑 磷脂)的价格非常昂贵(阿拉丁的最新报价为3000元/25mg)。
发明内容
本发明的原理是:大豆磷脂主要由磷脂酰胆碱(卵磷脂)和磷脂酰乙醇胺(脑磷脂)组成,它是加工大豆油的一种副产物,价廉易得,其中的脑磷脂中的脂肪酸主要由油酸,亚油酸,棕榈酸,硬脂酸和亚麻酸组成,存在较多的不饱和脂肪酸,具有软化血管,降低胆固醇和降低血压的功能。用其作为原料制备的聚乙二醇单甲醚大豆磷脂酰乙醇胺衍生物(MPEG-SPE)不仅成本低于聚乙二醇单甲醚(二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺(脑磷脂)衍生物(MPEG-DSPE)而且更有利于人类心血管的健康。
因此本发明针对现有的MPEG-DSPE制备所用脑磷脂原料难得,价格昂贵的特点。提供一种使用价格较便宜的天然大豆磷脂制备聚乙二醇单甲醚大豆磷脂酰乙醇胺衍生物药物辅料的方法。
本发明的另一个目的是提供一种聚乙二醇单甲醚大豆磷脂酰乙醇胺衍生物。
实现本发明目的的技术解决方案是:一种聚乙二醇单甲醚大豆磷脂酰乙醇胺衍生物,其结构如下:

实现本发明另一目的的技术解决方案为:一种聚乙二醇单甲醚大豆磷脂酰乙醇胺衍生物的制备,具体步骤如下:
步骤1:以天然大豆磷脂制备大豆粉末磷脂;
步骤2:以聚乙二醇单甲醚制备聚乙二醇单甲醚羧基衍生物;
步骤3:以聚乙二醇单甲醚羧基衍生物制备聚乙二醇单甲醚酰氯;
步骤4:以大豆粉末磷脂和聚乙二醇单甲醚酰氯为原料,以三氯甲烷为溶剂,以三乙胺为催化剂,制备聚乙二醇单甲醚大豆磷脂酰乙醇胺衍生物,反应条件为m(大豆粉末磷脂):m(聚乙二醇单甲醚酰氯)=1:1~10:1;反应温度为10℃~80℃;反应太阳城集团为0.5h~10h;
步骤5:反应结束后,除去三氯甲烷和未反应的三乙胺,加入四氢呋喃沉淀出三乙胺的盐酸盐,离心分离,上层液体除去四氢呋喃再加入无水乙醚沉淀出反应产物。
步骤1中所述的大豆粉末磷脂采用丙酮萃取法制备。
步骤2中所述的聚乙二醇单甲醚羧基衍生物采用琼斯试剂氧化聚乙二醇单甲醚法制备,其中聚乙二醇单甲醚的分子量范围为1200~5000。
步骤3中所述的聚乙二醇单甲醚酰氯采用二氯亚砜和聚乙二醇单甲醚羧基衍生物制备。
步骤4中所述的聚乙二醇单甲醚酰氯与三乙胺的物质的量比为:n(聚乙二醇单甲醚酰氯):n(三乙胺)=1:10~1:40。
步骤5中所述的聚乙二醇单甲醚酰氯的物质的量与四氢呋喃体积之比为:n(聚乙二醇单甲醚酰氯(mmol)):v(四氢呋喃(ml))=1:30~1:100,所述的聚乙二醇单甲醚酰氯的物质的量与无水乙醚体积之比为n(聚乙二醇单甲醚酰氯(mmol)):v(无水乙醚(ml))=1:30~1:100。
与现有的MPEG-DSPE药物辅料相比较,本发明结合了天然大豆磷脂的优点,一方面利用其含有的脑磷脂中存在较多的不饱和脂肪酸,具有软化血管,降低胆固醇和降低血压的功能,使其更有利于人体健康,另一方面利用其原料易得,价格便宜,降低了其生产成本,具有较大的经济效益和社会效益。通过以上方法制备的MPEG-SPE的技术效果为:通过TEM观察了MPEG-SPE在水中形成胶束的大小,结果表明,其在水溶液中形成的胶束平均粒径为100nm左右。通过荧光探针技术研究了MPEG-SPE的临界聚集浓度用以表征产物的热力学稳定性,结果表明其在水溶液中的临界胶束浓度为10-6mol/L左右,形成胶束的热力学稳定性优于小分子胶束。通过乳化力来表征MPEG-SPE的动力学稳定性,结果表明其的动力学稳定性优于大豆粉末磷脂,适合于制备靶向药物载体。
附图说明
图1为本发明MPEG-SPE制备工艺流程图。
图2为本发明实施例1的MPEG2000-SPE浓度对I384/I373比值的影响图。
具体实施方式
实施例1
图1中,第一步,称取12g大豆磷脂加入到100ml丙酮中,搅拌至固体出现,减压抽滤,滤饼加入到2支20ml离心管中,分别加入10ml丙酮,在4000r/min的转速下离心2min,倒出液体,重复多次上述过程,直至离心管中液体无色时,取出离心管中固体,放入真空干燥箱中室温干燥24h。
第二步,称取5g mPEG2000加入盛有100mL丙酮溶液的500mL烧瓶中,在25℃下磁力搅拌直到mPEG全部溶解。然后加入4.25mL琼斯试剂,反应24h。反应结束后,加入异丙醇淬灭,抽滤,滤液加入50mL蒸馏水,旋蒸除去体系中的丙酮(尽量除尽),剩余溶液中加入一定量的碳酸氢钾,直至体系中无气泡产生为止,蒸干体系中的水,用三氯甲烷对残留物进行充分的萃取,抽滤,滤液旋蒸除去三氯甲烷,而后再向残余物中加入10%的盐酸溶液直至体系pH为1,蒸出水和氯化氢气体,残余物中有氯化钠析出,此时再用三氯甲烷萃取,抽滤,滤液旋蒸除去氯仿,得到产物,冷却后得到白色固体产物。产率:4.90g(98%)。酸值:实际值,0.497mmol羧基/g;理论值,0.500mmol羧基/g。IR:1735cm-1(羰基特征峰),3480cm-1(-OH的伸缩振动峰),1100cm-1(C—O—C的伸缩振动峰)。1HNMR(DMSO d6):δH3.24(-O-CH3),4.01(—O—CH2—COOH的次甲基),3.31-3.58(重复单元—CH2—CH2—O—),12.55(—COOH)。
第三步,称取2g CmPEG2000加入到10ml二氯甲烷中,再向反应体系中加入20ml二氯亚砜,回流反应6h。减压蒸馏,加入无水乙醚沉淀,抽滤,得到白色固体。
第四步,称取6.0g大豆粉末磷脂溶解到30ml三氯甲烷中,移入到150ml的三口烧瓶中,加入25mmol的三乙胺,磁力搅拌,升温到45,℃将2g聚乙二醇单甲醚2000酰氯溶解到20ml三氯甲烷中,使用滴液漏斗逐滴加入到三口烧瓶中。反应4h。
第五步,反应结束后,旋蒸除去三氯甲烷和未反应的三乙胺。而后加入30ml四氢呋喃沉淀出三乙胺的盐酸盐,离心分离,上层液体除去四氢呋喃再加入20ml无水乙醚沉淀出未反应的聚乙二醇单甲醚2000酰氯和反应产物,分别用10ml无水乙醚洗涤三次,干燥称重。IR:1650cm-1(—C(O)NH—的羰基伸缩振动峰),1533cm-1(—C(O)NH—的氨基面内弯曲振动峰),1100cm-1(C—O—C伸缩振动峰).
实施例2
第一步,同上
第二步,称取6g mPEG1200加入盛有100mL丙酮溶液的500mL烧瓶中,在25℃下磁力搅拌直到mPEG全部溶解。然后加入8.5mL琼斯试剂,反应24h。后处理方法同上。产率:5.61g(93.5%)。酸值:实际值,0.830mmol羧基/g;理论值,0.833mmol羧基/g。IR:1744cm-1(羰基特征峰),3486cm-1(-OH的伸缩振动峰),1088cm-1(C—O—C的伸缩振动峰)。1HNMR(DMSO d6):δH3.23(-O-CH3),4.01(—O—CH2—COOH的次甲基),3.33-3.50(重复单元—CH2—CH2—O—),12.54(—COOH)。
第三步,称取2g CmPEG1200加入到10ml二氯甲烷中,再向反应体系中加入30ml二氯亚砜,回流反应6h。减压蒸馏得到产物。
第四步,称取12.0g大豆粉末磷脂溶解到30ml三氯甲烷中,移入到150ml的三口烧瓶中,加入10mmol的三乙胺,磁力搅拌,升温到10,℃将1.2g聚乙二醇单甲醚1200酰氯溶解到20ml三氯甲烷中,使用滴液漏斗逐滴加入到三口烧瓶中。反应0.5h。
第五步,反应结束后,旋蒸除去三氯甲烷和未反应的三乙胺。而后加入30ml四氢呋喃沉淀出三乙胺的盐酸盐,离心分离,上层液体除去四氢呋喃,冷却至10℃以下,再加入15ml无水乙醚沉淀出未反应的聚乙二醇单甲醚1200酰氯和反应产物,分别用5ml无水乙醚洗涤三次,干燥称重。IR:1653cm-1(—C(O)NH—的羰基伸缩振动峰),1537cm-1(—C(O)NH—的氨基面内弯曲振动峰),1090cm-1(C—O—C伸缩振动峰).
实施例3
第一步,同上
第二步,称取5g mPEG5000加入盛有100mL丙酮溶液的500mL烧瓶中,在25℃下磁力搅拌直到mPEG全部溶解。然后加入1.7mL琼斯试剂,反应24h。后处理方法同上。产率:4.91g(98.2%)。酸值:实际值,0.196mmol羧基/g;理论值,0.200mmol羧基/g。IR:1732cm-1(羰基特征峰),3480cm-1(-OH的伸缩振动峰),1106cm-1(C—O—C的伸缩振动峰)。1HNMR(DMSO d6):δH3.22(-O-CH3),4.01(—O—CH2—COOH的次甲基),3.33-3.51(重复单元—CH2—CH2—O—)n,12.54(—COOH)。
第三步,称取5g CmPEG5000加入到10ml二氯甲烷中,再向反应体系中加入30ml二氯亚砜,回流反应6h。减压蒸馏,加入无水乙醚沉淀,抽滤,得到白色固体。
第四步,称取5g大豆粉末磷脂溶解到30ml三氯甲烷中,移入到150ml的三口烧瓶中, 加入40mmol的三乙胺,磁力搅拌,升温到80,℃将5g聚乙二醇单甲醚5000酰氯溶解到20ml三氯甲烷中,使用滴液漏斗逐滴加入到三口烧瓶中。反应10h。
第五步,反应结束后,旋蒸除去三氯甲烷和未反应的三乙胺。而后加入100ml四氢呋喃沉淀出三乙胺的盐酸盐,离心分离,上层液体旋蒸除去四氢呋喃再加入70ml无水乙醚沉淀出未反应的聚乙二醇单甲醚5000酰氯和反应产物,分别用10ml无水乙醚洗涤三次。干燥称重。IR:1655cm-1(—C(O)NH—的羰基伸缩振动峰),1533cm-1(—C(O)NH—的氨基面内弯曲振动峰),1106cm-1(C—O—C伸缩振动峰).
对实施例1制备的聚乙二醇单甲醚大豆磷脂酰乙醇胺衍生物进行了性能表征,其结果如下:
1.MPEG2000-SPE的胶束粒径:
MPEG2000-SPE是一种聚合物表面活性剂,当其在水中浓度大于临界胶束浓度时可形成以疏水链端为核,亲水链端为核的纳米胶束,可以用来运输药物,当其达到一定的纳米尺寸时具有靶向特性。本部分采用透射电子显微镜测定MPEG2000-SPE的胶束粒径,方法如下:称取一定量的MPEG2000-SPE溶解于水中,常温放置3h,使得MPEG2000-SPE在水中形成稳定的胶束,沾到铜网上,铜网在室温下干燥后,在透射电镜上观察胶束的大小。实验结果表明,MPEG2000-SPE的胶束呈球形,平均粒径在100nm左右,粒子较均匀。
2.MPEG2000-SPE的热力学稳定性研究:
MPEG2000-SPE在水溶液中可形成胶束,胶束热力学的稳定性指的是聚合物胶束向单体解聚时的浓度,即临界胶束浓度(CMC)也成临界聚集浓度(CAC)。本部分采用灵敏度较高的荧光探针技术来测定MPEG2000-SPE的CAC。方法如下:首先制备1×10-7,2×10-7,3×10-7,5×10-7,7×10-7,1×10-6,2×10-6,3×10-6,5×10-6,1×10-5,2×10-5,3×10-5,5×10-5,7×10-5,10×10-5,15×10-5mol/L浓度的MPEG-SPE溶液,再配置2×10-4mol/L的芘的丙酮溶液,而后取0.1ml芘的丙酮溶液加入10ml容量瓶中,常温下使丙酮挥发掉,用移液枪分别移取10ml上述配置的MPEG2000-SPE溶液加入到容量瓶中,多次震荡后再超声30min。然后在335nm下测定一系列不同浓度的MPEG-SPE溶液在373nm和384nm下的荧光强度,以MPEG2000-SPE浓度的对数为X轴,I384/I373的值为Y轴作图,从图中找出达到CAC时的浓度,如图2所示,当x=-5.69时,I384/I373的值发生突变,说明此时已到达CAC,临界胶束浓度为2×10-6mol/L,远远小于小分子的临界胶束浓度10-3mol/L,因此MPEG-SPE的热力学稳定性优于小分子胶束。
3.MPEG2000-SPE的胶束动力学稳定性研究:
聚合物胶束的稳定性通常由热力学稳定性和动力学稳定性评价,其中动力学稳定性是指胶束分解为单体的速度,我们设计由正己烷和水形成的乳状液体系,根据乳状液分离一定体积的液体来表征胶束分解为单体的速度,同等条件下与大豆粉末磷脂进行对比。操作如下:用50ml的蒸馏水溶解0.05g试样,置于100ml的具塞量筒内,量取50ml的正己烷,塞上盖子猛烈振动至充分乳化后,立即计时测定水-油相分开10ml所耗费的太阳城集团。实验结果如表1所示:MPEG2000-SPE分开10ml所用太阳城集团为183s远远大于大豆粉末磷脂所用太阳城集团6s,并且当MPEG-SPE的乳液分出41ml体积后油-水将不再分离,量筒上部呈现稳定的凝胶状态。因此MPEG-SPE的动力学稳定性优于大豆粉末磷脂。
表1不同物质的油水两相分开体积与所用太阳城集团(s)之间的关系

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聚乙二醇 甲醚 大豆磷脂 乙醇胺 衍生物 及其 制备
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