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一种DAB2IP蛋白的ELISA检测方法.pdf

摘要
申请专利号:

CN201410052911.9

申请日:

2014.02.17

公开号:

太阳城集团CN103983784A

公开日:

2014.08.13

当前法律状态:

授权

有效性:

有权

法律详情: 授权|||实质审查的生效IPC(主分类):G01N 33/68申请日:20140217|||公开
IPC分类号: G01N33/68 主分类号: G01N33/68
申请人: 中国科学院福建物质结构研究所
发明人: 吴允昆; 苏银桃; 李生平; 谢佐福; 施方媛; 曾占壮; 赵艳和
地址: 350002 福建省福州市杨桥西路155号
优先权:
专利代理机构: 北京庆峰财智知识产权代理事务所(普通合伙) 11417 代理人: 刘元霞;谢蓉
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法律状态
申请(专利)号:

太阳城集团CN201410052911.9

授权太阳城集团号:

||||||

法律状态太阳城集团日:

太阳城集团2016.03.23|||2014.09.10|||2014.08.13

法律状态类型:

授权|||实质审查的生效|||公开

摘要

本发明公开了一种针对DAB2IP蛋白的ELISA检测方法,该方法采用双抗体夹心ABC法,同时具有高特异性和高灵敏度。所述检测方法具有以下特征:包被DAB2IP单克隆抗体(由保藏号为CCTCC No.C2013148的细胞株分泌,保藏名称为DAB2IPMab1)于ELISA检测板上作为固相抗体,以生物素标记的DAB2IP多克隆抗体作为酶标抗体,使HRP通过与其偶联的Avidin与多克隆抗体上的生物素结合,经TMB显色,在450nm单波长处测定吸收值,可以实现DAB2IP蛋白的定量检测。本发明还提供DAB2IP蛋白检测方法的应用。该方法为DAB2IP蛋白的检测及检测产品的开发奠定了基础。

权利要求书

权利要求书
1.  一种DAB2IP蛋白的检测方法,所述方法包括以包被于ELISA检测板上的DAB2IP单克隆抗体作为固相抗体和标记的DAB2IP多克隆抗体作为酶标抗体进行双抗体夹心法,以定量检测DAB2IP蛋白。

2.  权利要求1的方法,所述DAB2IP单克隆抗体来自抗人肿瘤抑制因子DAB2IP单克隆抗体杂交瘤细胞株,其保藏号为CCTCC No.C2013148。

3.  权利要求1或2的方法,包括所述检测方法:以包被于ELISA检测板上的DAB2IP单克隆抗体作为固相抗体,以生物素标记的DAB2IP多克隆抗体作为酶标抗体,通过显色剂-Avidin与多克隆抗体上的生物素结合使显色剂通过与其偶联的Avidin与多克隆抗体上的生物素结合,经显色,以定量检测DAB2IP蛋白。

4.  权利要求3的方法,所述显色剂是辣根过氧化物酶(HRP),在这种情况下经四甲基联苯胺(TMB)显色,在450nm单波长测定吸收值,以定量检测实现DAB2IP蛋白。

5.  权利要求1或2的方法,所述生物素标记的DAB2IP多克隆抗体是按以下步骤制备的:
将DAB2IP多克隆抗体溶解在PBS缓冲液中(优选浓度2mg/ml),加入生物素(优选生物素为抗体分子数的1-40倍,更优选5-30,还更优选10-20倍),在冰上静置,经纯化得到纯的生物素化抗体。

6.  权利要求1或2的方法,所述单克隆抗体是按以下步骤制备的:将DAB2IP基因重组到改造过的pET32a载体上,该载体同时含有6His tag和TRX tag,并在6His tag和多克隆位点之间含有TEV酶切位点;将重组质粒在大肠杆菌BL21菌株中进行表达,所表达的蛋白为TRX-6His-DAB2IP融合蛋白,经TEV酶切及二次镍柱和分子筛纯化,得到纯化的DAB2IP蛋白;利用该纯化的DAB2IP蛋白免疫小鼠,经细胞融合及亚克隆化得到单克隆抗体杂交瘤细胞株, 由该细胞株分泌产生单克隆抗体。

7.  权利要求1或2的方法,所述多克隆抗体是按以下步骤制备的:利用权利要求6纯化的DAB2IP蛋白免疫新西兰大白兔获得多克隆抗体。

8.  权利要求1或2的方法,所述DAB2IP的定量检测是按以下方法完成的:将DAB2IP标准蛋白进行梯度稀释,然后分别用此方法测定400-700nm,优选450nm单波长时的读数,制作一个标准曲线,再将要测定的样品用此法在相同波长所测得的读数带入标准曲线,得到其实际浓度。

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一种 DAB2IP 蛋白 ELISA 检测 方法
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