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重组猪ΒSUB2/SUB肾上腺素能受体蛋白的制备及应用.pdf

摘要
申请专利号:

CN201410258292.9

申请日:

2014.06.11

公开号:

CN103980359A

公开日:

2014.08.13

当前法律状态:

驳回

有效性:

无权

法律详情: 发明专利申请公布后的驳回IPC(主分类):C07K 14/72申请公布日:20140813|||实质审查的生效IPC(主分类):C07K 14/72申请日:20140611|||公开
IPC分类号: C07K14/72; C12N15/12; C12N15/85; C12N5/10; G01N33/68 主分类号: C07K14/72
申请人: 中国农业科学院农业质量标准与检测技术研究所
发明人: 王静; 王健; 王淼; 金茂俊; 佘永新; 杜欣蔚; 刘媛; 金芬; 邵华; 王珊珊
地址: 100080 北京市海淀区中关村南大街12号
优先权:
专利代理机构: 北京超凡志成知识产权代理事务所(普通合伙) 11371 代理人: 吴开磊
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法律状态
申请(专利)号:

CN201410258292.9

授权太阳城集团号:

||||||

法律状态太阳城集团日:

太阳城集团2018.03.20|||2014.09.10|||2014.08.13

法律状态类型:

太阳城集团发明专利申请公布后的驳回|||实质审查的生效|||公开

摘要

本发明属于生物工程领域,特别是涉及一种重组猪β2肾上腺素能受体蛋白的制备方法,及其在β2激动剂类药物快速检测中的应用。经分离纯化的该一种重组猪β2肾上腺素能受体蛋白,其具有β2激动剂结合活性,SDS-PAGE电泳显示重组蛋白分子量约为48kDa,纯度达到80%以上。该重组蛋白可特异性吸附β2激动剂类药物,经竞争性ELISA方法检测,不同浓度的三种β2激动剂类药物标品对反应均有抑制。本发明通过分子生物学手段高效表达与β2类激动剂能够特异结合的β2AR受体,可代替传统抗体用于β2类激动剂药物的快速筛查,实现对该类药物的多残留检测和未知物筛查,具有很好的应用前景。

权利要求书

权利要求书
1.  经分离纯化的一种重组猪β2肾上腺素能受体蛋白,其特征在于,其具有β2激动剂结合活性,SDS-PAGE电泳显示重组蛋白分子量约为48kDa,纯度达到80%以上。

2.  重组猪β2肾上腺素能受体蛋白,其特征在于,其具有以下条件之一:
1)SEQ ID No.1所示的氨基酸序列;
2)SEQ ID No.1所示的氨基酸序列经一个或几个氨基酸残基的取代、缺失或添加且具有相同活性的由SEQ ID No.1衍生的蛋白质。

3.  编码权利要求1所述的重组猪β2肾上腺素能受体蛋白的基因。

4.  如权利要求3所述的基因,其特征在于,其具有以下条件之一:
1)SEQ ID No.2所示的核苷酸序列;
2)SEQ ID No.2所示的核苷酸序列经取代、缺失和/或添加一个或几个核苷酸,编码相同活性蛋白质的核苷酸序列。

5.  含有权利要求3或4任意一项所述基因的质粒。

6.  含有权利要求5所述质粒的宿主细胞。

7.  根据权利要求6所述的质粒,其特征在于,所述质粒为pTriEx-1.1 Hygro-Ssβ2AR。

8.  权利要求7所述的质粒在大肠杆菌、昆虫细胞和哺乳动物细胞中表达的重组蛋白。

9.  根据权利要求8所述的质粒在HEK293细胞中表达制备重组蛋白的方法,其特征在于,包括以下步骤:
将核苷酸序列为SEQ ID No.2的基因片段定向克隆到pTriEx-1.1Hygro表达载体中;将该重组表达质粒瞬时转染HEK293细胞,37℃、5% CO2的培养箱中培养48h~96h,表达重组蛋白;将表达后的蛋白经初步分离、纯化后制得重组蛋白。

10.  重组猪β2肾上腺素能受体蛋白或其编码基因在动物饲料和食品中β2激动剂类药物快速检测中的应用。

关 键 词:
重组 SUB2 SUB 肾上腺素 受体 蛋白 制备 应用
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