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一种具有解酒功效的中药材及活性因子的高通量筛选方法.pdf

摘要
申请专利号:

太阳城集团CN201410255847.4

申请日:

2014.06.11

公开号:

CN103983598A

公开日:

2014.08.13

当前法律状态:

授权

有效性:

有权

法律详情: 授权|||实质审查的生效IPC(主分类):G01N 21/33申请日:20140611|||公开
IPC分类号: G01N21/33 主分类号: G01N21/33
申请人: 劲牌有限公司
发明人: 刘源才; 赖富丽; 熊瑜; 冯声宝
地址: 435100 湖北省黄石市大冶市大冶大道169号
优先权:
专利代理机构: 黄石市三益专利商标事务所 42109 代理人: 瞿晖
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法律状态
申请(专利)号:

CN201410255847.4

授权太阳城集团号:

||||||

法律状态太阳城集团日:

2016.03.09|||2014.09.10|||2014.08.13

法律状态类型:

授权|||实质审查的生效|||公开

摘要

太阳城集团本发明公开了一种具有解酒功效的中药材及活性因子的高通量筛选方法,是先将待筛选的若干种中药材分别粉碎,再分别用有机溶剂提取40-60分钟,离心分离,得若干上清液;此上清液即作为待测样本溶液;再在微孔板中加入反应体系;将空白对照样品和待测样品一起置于酶标仪中震荡孵育30min后,迅速在每孔中加入0.04~0.2mmol/L的乙醛溶液15μL,摇匀后立即开始测定各样品在340nm处的吸光值;利用酶标仪自带软件记录吸光度值并绘制出空白对应样品及待测样品吸光度值变化曲线;得出样品曲线净面积NetAUC值;本发明方法一次可筛选上百种甚至几百种中药材,快速、准确率高,操作方便。

权利要求书

权利要求书
1.  一种具有解酒功效的中药材及活性因子的高通量筛选方法,其特征在于包括下述步骤:
  a.将待筛选的若干种中药材分别粉碎至20~100目,分别用30%~90%乙醇、甲醇或丙酮中的一种,提取40-60分钟,离心分离,得若干上清液;或将待筛选的若干活性因子分别用30%~90%乙醇、甲醇或丙酮中的一种,提取40-60分钟,离心分离,得若干上清液;此上清液即作为待测样本溶液;
  b.在微孔板中的每个微孔中加入下述反应体系:50-200mmol/L、pH7.8-8.5的磷酸钾缓冲液75-90μL,0.1~0.5mmol/L的二硫苏糖醇10-15μL,0.1~2mg/ml乙醛脱氢酶20-25μL,0.0625~20mmol/L  NAD+溶液30μL;
   c.再在上述其中一个微孔中加入90 mmol/L、pH8.5的磷酸钾缓冲溶液25μL作为空白对照样品,余下微孔中一一加入步骤a.所制备的待测样本溶液25μL,作为待测样品并编号;然后一起置于酶标仪中震荡孵育30min后,迅速在每孔中加入0.04~0.2 mmol/L的乙醛溶液15μL,摇匀后立即开始测定各样品在340nm处的吸光值;
   d.利用酶标仪自带软件记录吸光度值并绘制出空白对照样品及待测样品吸光度值变化曲线;将所得到的待测样品曲线的积分面积减去空白对照样品的曲线积分面积,得出待测样品曲线净面积Net AUC值,此值即为激活率;激活率为正数时证明该样品中所加入的中药材或活性因子具有激活乙醛脱氢酶的能力,也说明该药材或活性因子具有解酒的功效;反之,激活率为负数时,说明该样品中所加入的中药材或活性因子不具备激活或具有抑制乙醛脱氢酶的能力,也说明该药材或活性因子不具有解酒的功效。

2.  根据权利要求1所述的一种具有解酒功效的中药材及活性因子的高通量筛选方法,其特征在于包括下述步骤:
  a.将待筛选的若干种中药材分别粉碎至100目,分别用70%乙醇提取60分钟,离心分离,得若干上清液;或将待筛选的若干活性因子分别用70%乙醇溶解,离心分离,得若干上清液;上述所得的上清液即作为待测样本溶液;
   b.在微孔板中的每个微孔中加入下述反应体系:100mmol/L、pH8.5的磷酸钾缓冲液90μL, 0.5mmol/L的二硫苏糖醇10μL,1mg/ml乙醛脱氢酶25μL,10mmol/L  NAD+溶液30μL;
   c.再在上述其中一个微孔中加入90 mmol/L、pH8.5的磷酸钾缓冲溶液25μL作为空白对照样品,余下微孔中一一加入步骤a.所制得的待测样本溶液25μL,作为待测样品并编号;然后一起置于酶标仪中震荡孵育30min后,迅速在每孔中加入0.1mmol/L的乙醛溶液15μL,摇匀后立即开始测定各样品在340nm处的吸光值;
   d.利用酶标仪自带软件记录吸光度值并绘制出空白对照样品及待测样品吸光度值变化曲线;将所得到的待测样品曲线的积分面积减去空白对照样品的曲线积分面积,得出待测样品曲线净面积Net AUC值,此值即为激活率;激活率为正数时证明该样品中所加入的中药材或活性因子具有激活乙醛脱氢酶的能力,也说明该药材或活性因子具有解酒的功效;反之,激活率为负数时,说明该样品中所加入的中药材或活性因子不具备激活或具有抑制乙醛脱氢酶的能力,也说明该药材或活性因子不具有解酒的功效。

3.  根据权利要求1或2所述的一种具有解酒功效的中药材及活性因子的高通量筛选方法,其特征在于:所述的活性因子是单体化合物或复合物。

关 键 词:
一种 具有 解酒 功效 中药材 活性 因子 通量 筛选 方法
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